FACULTAD DE QUIMICA

UNIVERSIDAD DE MURCIA

DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR B

e INMUNOLOGIA

CLASES PRÁCTICAS
BIOLOGIA MOLECULAR DE SISTEMAS
(4o Curso de la Grado en Bioquímica)

CURSO ACADEMICO 2018-19

PROBLEMAS DE BIOQUÍMICA INDUSTRIAL

1. Un cultivo bacteriano crece en un medio con glucosa como sustrato

limitante, con una concentración de 3 g/L. La densidad óptica D.O. a 420 nm
se medio con respecto al tiempo según la tabla anexa. El mismo cultivo
bacteriano se cultivo en un medio con lactosa y glucosa, respectivamente, a la
misma concentración, 3 g/L. Sabiendo que la D.O. es lineal con respecto a la
concentración bacteriana y que una D.O.=0.175 corresponde a 0.1 mg/mL de
cultivo, calcular:
a) µmáx y µ instantánea.
b) El tiempo de retardo bacteriano.
c) El tiempo de duplicación de la población e Yo.
d) Discutir en cada caso las graficas x frente a tiempo y calcular la kd
(constante de muerte celular)

Tiempo (h) D.O. (caso 1) D.O. (caso 2)

0 0,06 0,06
0,5 0,08 0,06
1,0 0,11 0,06
1,5 0,14 0,07
2,0 0,20 0,10
2,5 0,26 0,13
3,0 0,37 0,18
3,5 0,49 0,26
4,0 0,70 0,32
4,5 0,88 0,43
5,0 1,04 0,48
5,5 1,04 0,50
6,0 0,90 0,52
 6,5 0,80 0,60
7,0 0,70 0,84
7,5 0,50 1,00
8,0 0,45 1,00

2. En un reactor contínuo con agitación (CSTR) se cultiva un microorganismo

que sigue una cinética tipo Monod y posee una µmax=0,5 h -1 con una ks=2
g/L.
a) Si el cultivo está en estado estacionario y no se considera el término de
metabolismo endógeno, calcular el coeficiente de dilución D que producirá un
máximo de producción de células, conociendo que So=50 g/L y que Yx/s=1.
b) Si consideramos que no hay entrada de células en el sistema, calcular la
producción de éstas y la concentración de sustrato que saldría en el efluente
del reactor.
c) Sabiendo que la conversión de sustrato en células es de la forma:
So-S
C(%)=--------------- x 100
So
Calcular el coeficiente de dilución que daría una conversión de un 95%
3. Sabiendo que un cultivo bacteriano en presencia de un inhibidor responde a
una cinética del tipo:

µmax . S
µ = ---------------------------
Ks + S + i . Ks/Ki

donde i (concentración de inhibidor)=0,05 g/L, Ki(constante de inhibición)=0,01

g/L, So=10 g/L, Xo=0 g/L, µmax=0,5 h -1, Ks=1 g/L y Yx/s=0,1, responder a los
siguientes apartados.
a) Construir la grafica X y S frente a D en presencia del inhibidor y en su
ausencia.
b) Repetir en el caso en que la concentración de inhibidor aumenta con X en
una relación
X
i = ------------
10
X.D
c) Calcular la razón ____________
(X-D). i

en la que (X-D) . i es la velocidad de producción de células en presencia del

inhibidor.
4) En un reactor discontinuo Candida pseudotropicalis crece sobre glucosa
como sustrato limitante a pH 5,5 y temperatura de 29 oC, siendo los valores de
crecimiento los que se exponen a continuación:
Tiempo (h) X (mg/L) S (mg/L)
2 119 9500
3 178 9500
4 251 9300
4,63 447 9000
5,38 531 8500
6,13 944 8000
6,88 1413 7300
7,50 2239 6400
8,25 3163 5100
8,75 3981 3500
9,38 4732 1300
9,88 5623 200
10,88 5623 100

Examine los resultados y determine los parámetros cinéticos suponiendo una

cinética tipo Monod.
a) Calcular Yo.
b) Calcular µmax a partir de la regresión lineal Ln X frente a t.
c) Evaluar la hipótesis de µmáx=µmax para Ks/So<< 1.

5. Un cultivo celular de Streptomyces natalensis transformado con un plásmido

que sobreexpresa una proteína de interés, se coloca en un reactor donde es
subcultivada durante 29 días. Al cabo de dicho periodo, la fracción de células
que poseen plásmido es de 0.66. La velocidad específica de las células que no
poseen plásmido a la temperatura de trabajo es de 0.035 h-1, mientras que las
de las que lo contienen es de 0.022 h-1. Si todas las células contenían
originariamente el plásmido, calcular la probabilidad de pérdida del mismo.

6. Una línea celular de Atropa belladonna se obtiene mediante transformación

genética de células obtenidas de la planta, mediante el uso de Agrobacterium
rhizogenes. Se obtienen los siguientes valores tras el cultivo de la mencionada
línea en un reactor discontinuo de tipo agitación por burbuja utilizando un
medio rico en glucosa.
Tiempo (h-1) Concentración de Concentración de
células (g.L-1) glucosa (g.L-1)
0 0.64 30
5 1.95 27.4
10 4.21 23.6
15 5.54 21.0
20 6.98 18.4
25 9.50 14.8
30 10.3 13.3
35 12.0 9.7
 40 12.7 8.0
45 13.1 6.8
50 13.5 5.7
55 13.7 5.1

a) Representar µ como una función del tiempo de cultivo. ¿Cuándo se

alcanza la µmax?.
b) Representar la velocidad específica de consumo del azúcar frente al
tiempo.
c) ¿Cual es el coeficiente de producción de biomasa a partir de glucosa?.
¿Es un valor constante?.

7. Escherichia coli transformada se utiliza para producir una hormona de

crecimiento recombinante porcina. La bacteria se cultiva aeróbicamente en
un reactor discontinuo, con glucosa como sustrato limitante. Las
concentraciones de células y sustrato se midieron a lo largo del tiempo. Los
resultados se muestran a continuación.
Tiempo (h-1) Concentración de Concentración de
células (Kg.m-3) glucosa (Kg.m-3)
0 0.20 25.0
0.33 0.21 24.8
0.5 0.22 24.8
0.75 0.32 24.6
1.0 0.47 24.3
1.5 1.00 23.3
2.0 2.10 20.7
2.5 4.42 15.7
2.8 6.90 10.2
3.0 9.40 5.2
3.1 10.90 1.65
 3.2 11.60 0.2
3.5 11.70 0
3.7 11.60 0

a) Representar µ frente al tiempo.

b) ¿Cuál es el valor de µmax?.
c) ¿Cual es el coeficiente de producción de biomasa a partir de glucosa?.
¿Es un valor constante?.

8. Una línea celular de hibridoma usa glucosa como fuente de carbono para
producir el factor IX de la coagulación en un proceso continuo. El factor de
producción de células a partir del sustrato es de 0.006 g.g-1, el coeficiente de
producción de producto a partir de células fue de 7.7 g.g-1. Por otro lado el
coeficiente de mantenimiento celular fue de 2.2 g.g-1.h-1, y la velocidad
específica de formación de producto debido al mantenimiento fue de 1.1 h-1,
mientras que la velocidad específica de crecimiento fue de 0.003h-1. Las
células se colocaron en un reactor continuo con agitación de 60 m3. La
alimentación contenía 12 g.L-1 de glucosa; la Ks para la célula era de 0.2 g.L-1.
¿Qué caudal es necesario para alcanzar un estado estacionario con una
concentración de 1.5 g.L-1?. En estas condiciones ¿Cuál es la densidad
celular?, y la concentración de la proteína producto?.

9. Un mutante auxotrofo de Enterobacter aerogenes, capaz de sobreproducir

treonina. se ha aislado y mejorado mediante evolución dirigida. Se está
estudiando la cinética y los parámetros de producción y consumo en un reactor
continuo de 2 L, con 10 g.L-1 de glucosa en la alimentación. Se determinaron
los niveles de crecimiento celular y concentración de sustrato en los distintos
estados estacionarios obtenidos a los caudales que a continuación se
presentan.
 Caudal (L.h-1) Concentración de Concentración de
células (g.L-1) sustrato (g.L-1)
1.0 3.15 0.010
1.4 3.22 0.038
1.6 3.27 0.071
1.7 3.26 0.066
1.8 3.21 0.095
1.9 3.10 0.470

Determinar la velocidad específica máxima de crecimiento, la constante de

saturación y el coeficiente de producción de células a partir de sustrato
verdadero.

10. Un proceso de producción de un metabolito secundario se realiza en

proceso en dos etapas, cada una de ellas realizada en un reactor continuo. En
el primero se producen las células y en el segundo, colocado en serie, se
realiza el proceso de producción propiamente dicho. El volumen de cada
reactor es de 0.5 m3. El micelio celular crece en el primer reactor sobre un
sustrato limitante de 10 g.L-1. La cinética y los parámetros de crecimiento y de
producción son los siguientes:

Yxs = 0.5 Kg.Kg-1

Yps = 0.85 Kg.Kg-1

qp = 0.16 Kg.Kg-1. h-1

ms = 0.025 Kg.Kg-1
Ks = 1.0 Kg. m-3

µmax= 0.12 h-1

Asumiendo que la síntesis de producto es despreciable en el primer reactor y,

que el crecimiento es despreciable en el segundo reactor:

a) Determinar la concentración de células y sustrato que entran en el

segundo reactor.

b) ¿Cuál es la conversión en sustrato?.

c) ¿Cuál es la concentración final de producto?.