SISTEMA DE LA GESTION DE REGIONAL MAGDALENA

LA CALIDAD Fecha:
CENTRO ACUICOLA Y AGROINDUSTRIAL DE GAIRA Edición 1
PROCEDIMIENTOS OPERATIVOS ESTANDAR Página 3 de 3
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS LMA 04

Técnica de Recuento de Hongos y Levaduras

1. Objetivo
Detectar el número de Unidades Formadoras de Colonias de hongos y levaduras en Alimentos.

2. Alcance
Laboratorio de microbiología de alimentos de la Planta de Procesamientos de Alimentos de Gaira.

3. Responsabilidad
Será responsabilidad de los aprendices e instructor encargados del Laboratorio de Microbiología de Alimentos.

4. Frecuencia
El recuento de hongos y levaduras se realizará cada vez que la legislación requiera dicho análisis, según el tipo de alimento.

5. Contenido

5.1 Fundamento
Los hongos y levaduras tienen algunas características similares a las bacterias cuando contaminan los alimentos, tales como
la capacidad de alteración y la producción de metabolitos tóxicos. Los hongos se ponen en evidencia en condiciones
desfavorables para el crecimiento bacteriano como: pH bajo, alto contenido de sales y azucares, bajo contenido de
humedad y baja temperatura de almacenamiento.

5.2 Requisitos generales

 Antes de incubar, debemos asegurarnos que las cajas de petri estén bien rotulada y debe contener la máxima
información posible.

5.3 Procedimiento para el análisis de recuento de mesófilos

1. Colocarse la indumentaria correspondiente (bata, gorro, tapa boca y polainas) antes de iniciar el análisis.
2. Esterilizar la cabina de flujo laminar una hora antes de iniciar con el análisis.
3. Alistar los materiales
4. Preparar la muestra y las diluciones de los alimentos como se ha recomendado en el POE de Preparación y dilución de
los homogenizados de las muestras de alimentos.
5. Teniendo en cuenta que el Recuento de hongos y levaduras se siembra en profundidad debemos hacer lo siguiente:
6. Adicionar 1 ml de la dilución seleccionada en una de las cajas de petri estériles.
7. Adicionar 15ml de Agar OGY, PDA o SABOURAUD.
8. Homogenizar 5 veces en el sentido contrario de las manecillas del reloj, 5 veces en el sentido de las manecillas del reloj,
5 veces hacia arriba y 5 hacia
9. Repetir este proceso con cada una de las cajas de petri inoculadas
10. Hacer control de esterilidad del medio de cultivo incubando una caja de petri que contenga 15 ml de Agar OGY, PDA o
SABOURAUD.
11. Hacer control de esterilidad del agua peptonada al 0.1% incubando 1 ml de agua peptonada y Agar OGY, PDA o
SABOURAUD.
12. Esperar que el agar solidifique
13. Rotular con el nombre de la técnica, No. De la muestra, responsable, fecha de análisis, fecha de lectura y dilución
sembrada.
14. Invertir las placas
15. Incubarlas a 27° C durante 5 – 7 días
16. Contar las colonias de cada caja.

66 Seguridad del operario:

Bata, gorro, tapabocas, polainas y guantes estériles

7. Materiales:
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Técnica de Recuento de Hongos y Levaduras

4 Cajas de petri estériles 4 pipetas de 1 mL 1 Cabina de flujo laminar

4 Tubos de 13x150 con 9 ml de agua peptonada al 0.1% 1 Pipeta de 10 mL 1 Incubadora a 28°C
1 Frasco Tapa rosca con 45 mL de agua peptonada al 0.1% 1 Pipeteador 1 Balanza electrónica
Agar PDA, SABOURAUD o OGY. 1 Gradilla Pinzas o cuchillos estériles

86 Anexo:
Composición y Preparacion Agar Oxitetraciclina Glucosa Extracto de levadura (OGY):
Formula típica g/L
Extracto de Levadura 5
Glucosa 20
Agar 12
Añadir 18,5 g a 500 mL de agua destilada y llevar a ebullición hasta disolución completa. Esterilizar en autoclave a 115°C, durante 10 minutos. Enfriar a 50°C y agregar asépticamente el contenido de un vial de Suplemento
Oxitetraciclina o un vial de Suplemento Cloranfenicol, reconstituido según se indica. (Ajustar el pH que se requiera). Mezcla y distribuir en placas petri estériles. El suplemento De Cloranfenicol se puede añadir antes de la
esterilización.

66666s666ó6 6 6r666r666ó6 666r 6666ur6u66

Formula típica g/L
Peptona 10
Glucosa 40
Agar 15
Añadir 65 g a 1.000 mL de agua destilada y llevar a ebullición hasta disolución completa. Esterilizar en autoclave a 115°C, durante 15 minutos.

Composición y preparación Agar Potato Dextrosa (PDA):

Formula típica g/L
Extracto de papa 4
Glucosa 20
Agar 15
Añadir 39 g a 1.000 mL de agua destilada y llevar a ebullición hasta disolución completa. Esterilizar en autoclave a 115°C, durante 15 minutos.