Basis Struktural Berbagi Reseptor Dengan Interleukin 17 Sitokin

16/4/2018 Basis struktural berbagi reseptor dengan interleukin 17 sitokin
Nat Immunol. Author manuscript; available in PMC 2010 Jun 1. PMCID : PMC2783927
Published in final edited form as: NIHMSID: NIHMS146774
Nat Immunol. Desember 2009; 10 (12): 1245–1251. PMID: 19838198
Diterbitkan online 2009 Okt 18. doi: 10.1038 / ni.1813
Basis struktural berbagi reseptor dengan interleukin 17 sitokin

Lauren K. Ely , 1 Suzanne Fischer , 1 dan K. Christopher Garcia 1
1
Howard Hughes Medical Institute, Departemen Fisiologi Molekuler dan Seluler, dan Biologi Struktural, Fakultas Kedokteran
Universitas Stanford, Stanford, CA 94305, AS
1
Korespondensi ke: K. Christopher Garcia , kcgarcia@stanford.edu
Pemberitahuan hak cipta
Pengguna dapat melihat, mencetak, menyalin, mengunduh dan teks dan data-menambang konten dalam dokumen-dokumen tersebut,
untuk tujuan penelitian akademis, selalu tunduk pada Ketentuan penggunaan sepenuhnya:
http://www.nature.com/authors/editorial_policies /license.html#terms
Versi editan final penerbit dari artikel ini tersedia di Nat Immunol
Lihat artikel lain di PMC yang mengutip artikel yang diterbitkan.
Abstrak Pergi ke:
T helper tipe 17 (T H-17) sel, bersama-sama dengan sitokin efektor mereka termasuk interleukin 17
(IL-17) anggota keluarga, muncul sebagai mediator kunci dari gangguan inflamasi dan autoimun
kronis. Di sini kami menyajikan struktur kristal dari kompleks 1: 2 IL-17RA yang terikat pada IL-17F.
Cara pembentukan kompleks adalah unik untuk sitokin, dan melibatkan dua domain tipe fibronektin
IL-17RA yang melibatkan IL-17 dalam alur antara IL-17 homodimer interface dalam mode knob-and-
hole. Kejadian pengikatan reseptor pertama ke IL-17 cytokines memodulasi afinitas dan spesifisitas
dari peristiwa pengikatan reseptor kedua, dengan demikian mempromosikan heterodimerik
dibandingkan pembentukan kompleks homodimerik. IL-17RA menggunakan strategi pengenalan
umum untuk mengikat beberapa anggota keluarga IL-17, yang memungkinkannya untuk berpotensi
bertindak sebagai reseptor bersama dalam berbagai kompleks sinyal yang berbeda.
pengantar Pergi ke:
Sel T naif dirangsang untuk berdiferensiasi menjadi sel efektor khusus terutama melalui reaksi dari
sitokin yang disekresikan. Sel T helper (T H ) biasanya dianggap jatuh ke dalam salah satu dari dua
garis keturunan sel efektor; Sel T H -1 dan T H- 2 memodulasi imunitas sel T seluler dan humoral,
masing-masing, berdasarkan profil ekspresi sitokin mereka 1 . Pekerjaan yang lebih baru dijelaskan sel
T H- 17, garis keturunan ketiga sel efektor T H yang berbeda dari, dan bahkan bertentangan dengan
produk dari T H -1 dan T H -2 garis keturunan 2 , 3. Dinamakan setelah 'signature' cytokine interleukin
17 (IL-17), subset sel T H ini tampaknya telah berevolusi sebagai lengan sistem imun adaptif khusus
untuk meningkatkan perlindungan tuan rumah terhadap bakteri ekstraseluler dan beberapa jamur,
karena mikroba ini tidak secara efektif dikendalikan oleh T H -1 atau T H -2 tanggapan 4 , 5 . Berbagai
sumber jaringan sitokin yang menginduksi diferensiasi dan mengatur homeostasis dari T H-17 sel, yaitu
IL-23, IL-6, dan mengubah growth factor-β (TGF-β, bersama dengan kehadiran reseptor IL-17 pada sel
hematopoietik dan non-hematopoietik, telah menyoroti hubungan rumit yang ada antara adaptif dan
bawaan sel-sel kekebalan. Sedangkan lingkup penuh T H fungsi efektor sel -17 masih muncul, respon
inflamasi yang kuat dipromosikan oleh T H -17 sel telah dikaitkan dengan patogenesis sejumlah
gangguan autoimun dan inflamasi yang sebelumnya dikaitkan dengan T H -1 atau T H- 2 sel termasuk
rheumatoid arthritis, multiple sclerosis dan psoriasis 4. Dengan demikian, penargetan T H-17 sel untuk
pengobatan gangguan autoimun dan inflamasi, baik secara langsung melalui blokade IL-17, atau secara
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2783927/ 1/16
tidak langsung melalui penghambatan IL-23, saat ini sedang dikejar secara klinis. Namun, keunikan
struktural dari sistem IL-17, dikombinasikan dengan kelangkaan informasi biokimia dan struktural
pada interaksi reseptor, adalah penghalang arus untuk pengembangan mekanisme atau antagonis
berbasis struktur. Keluarga IL-17 terdiri dari enam sitokin dan lima reseptor, dan pasangan ligan-
reseptor tidak sepenuhnya bekerja untuk semua anggota 6. Atas dasar struktur kristal IL-17F, enam IL-
17 sitokin terkait struktural (IL-17A IL-17F) diperkirakan untuk membentuk lipatan homodimerik (atau
lipatan heterodimerik dalam kasus IL-17A-F) homolog untuk itu dari faktor pertumbuhan systeine-
simpul seperti faktor pertumbuhan saraf (NGF) 7 , 8 . T H -17 sel yang diturunkan IL-17A dan IL-17F
berbagi homologi terbesar dalam keluarga (50%) dan mengharuskan kedua IL-17RA (
http://www.signaling-gateway.org/molecule/query?afcsid= A001253 ) dan IL-17RC untuk memberi
isyarat 9 , 10 . Sementara telah ditunjukkan bahwa fibroblas, sel epitel dan sel endotel coexpress baik
IL-17RA dan IL-17RC, sel T tidak mengekspresikan IL-17RC, dan hanya mengekspresikan IL-17RA
11. Sampai saat ini, diperkirakan limfosit tidak responsif terhadap IL-17; namun, Flavell dan rekan
kerjanya melaporkan bahwa sel T memang dapat secara langsung merespon IL-17 12 .
Kelima reseptor IL-17 (IL-17RA IL-17RE) tidak homolog dengan reseptor yang dikenal, dan
menunjukkan perbedaan urutan antara satu sama lain. Semua tampak mengandung domain
ekstraseluler yang terdiri dari domain tipe-III (FnIII) fibronektin, dan domain SEF / IL-17R (SEFIR)
sitoplasma yang menunjukkan homologi longgar pada domain Toll / IL-1R (TLR) 13 , 14 . Reseptor
IL-17 memediasi peristiwa pensinyalan yang berbeda dari yang dipicu oleh reseptor yang lebih dikenal
luas untuk tipe I empat cytokin helix 15 , 16. Seperti stimulasi TLR, stimulasi reseptor IL-17
menghasilkan aktivasi NF-κB dan mitogen-activated protein kinase (MAPK). Namun, pensinyalan
reseptor IL-17 tidak menggunakan sekumpulan molekul adaptor proksimal membran yang sama
dengan pensinyalan TLR; IL-17R membutuhkan Act1 adaptor yang juga mengandung domain SEFIR
17 - 19 . Sifat-sifat pemberian sinyal yang unik dari reseptor IL-17 memungkinkan sel-sel T H- 17
bertindak sebagai jembatan antara sel imun bawaan dan adaptif.
Secara mekanis, fluoresensi transfer energi resonansi (FRET) studi telah menyarankan bahwa IL-17RA
mungkin ada sebagai dimer preformed pada permukaan sel yang mengalami perubahan konformasi
pada IL-17 yang mengikat untuk membentuk kompleks sinyal heterodimer dengan IL-17RC. Namun,
dasar molekuler untuk bagaimana homodimeric IL-17 sitokin akan memasangkan dengan dua reseptor
yang berbeda tetap tidak diketahui 14 , 20 .
Hasil Pergi ke:
Struktur IL-17RA terikat pada IL-17F

Kami menentukan struktur kristal IL-17RA yang terikat pada IL-17F pada resolusi 3,3 dengan
menggunakan penggantian isomorfik tunggal dengan fase hamburan anomali (SIRAS) ( Tabel 1 ).
Kami menyatakan IL-17F dari baculovirus, dan IL-17RA extracellular domain (ECD) menggunakan
293S GnTI-sel. Untuk memfasilitasi kristalisasi, kompleks itu dimetilasi, dan ECD reseptor glikosilasi
berat 'dicukur' dengan endoglikosidase H sebelum kristalisasi untuk meningkatkan homogenitas,
meninggalkan satu residu GlcNAc di masing-masing situs glikosilasi Asn-linked ( Gbr. 1).). Secara
biokimia, kompleks yang dicukur dan tidak dicukur berperilaku identik (data tidak ditampilkan).
Dengan filtrasi gel, campuran IL-17F atau IL-17A dengan IL-17RA ECD menghasilkan ko-elusi
kompleks dengan 2: 2 (2 reseptor + 1 IL-17 dimer) dan 1: 2 (1 reseptor + 1 IL- 17 dimer) stoikiometri,
dengan spesies utama menjadi 1: 2. 2: 2 hanya terdeteksi pada konsentrasi protein tinggi, sedangkan
pada konsentrasi yang lebih rendah, 1: 2 mendominasi bahkan dengan adanya IL-17RA yang
berlebihan. Kristal mengandung satu IL-17RA yang terikat dengan satu IL-17F homodimer ( Gbr. 1 ).
Sebagaimana dibahas di bawah ini, kompleks pensinyalan 'parsial' ini mungkin, pada kenyataannya,
merupakan bentuk biologis yang relevan dari kompleks IL-17RA-IL-17F dan IL-17RA-IL-17A.
Gambar 1
Struktur kompleks IL-17RA-IL-17F. Diagram pita IL-17RA berwarna kuning yang terikat pada IL-17F
(rantai A, biru; rantai B, cyan), glycans N-linked ditampilkan dalam representasi bola dan tongkat. IL-
17RA terdiri dari dua domain fibronektin tipe III (D1 dan D2) yang dihubungkan oleh penghubung helikal
pendek. Panel sebelah kanan menunjukkan komplek yang diputar sebesar 60 ° di sekitar sumbu y.
Tabel 1
Pengumpulan data dan statistik perbaikan
Bawaan 1 K 2 PtCl 4 SeMet Bawaan 2

Pengumpulan data
Kelompok ruang angkasa P4 1 2 1 2 P4 1 2 1 2 P4 1 2 1 2 P4 1 2 1 2
Dimensi sel
a, b, c (Å) 171.6, 171,7, 171,4, 170,7,
171.6, 84.3 171,7, 83,6 171,4, 82,3 170,7, 81,9
Panjang gelombang (Å) 1,00 1,07 0,978 1,03
Resolusi (Å) 3.4, 3.4, 3.9 4.5 3.8 3.3
Kelengkapan (%) 100 (100) 99,9 (100) 100 (100) 99,2 (99,9)
Redundansi 7.8 (8.0) 15,0 (15,5) 15.4 (15.6) 6.3 (6.4)
R gabung 0,10 (0,47) 0,10 (0,39) 0,12 (0,48) 0,15 (0,45)
I / σI 15,6 (3,8) 19,7 (6,8) 12,7 (7,0) 7.6 (3.2)
Statistik perbaikan
Rentang resolusi (Å) 40–3,3
Tidak. Refleksi (total / uji) 18479/948
Bawaan 1 K PtCl SeMet Bawaan 2

R faktor / R gratis (%) 22,7 / 25,3
Atom tidak
Protein 3779
Karbohidrat 98
Kalsium 1
Penyimpangan RMS
Panjang ikatan (Å) 0,009
Sudut Bond (°) 1,36
Nilai B rata-rata (Å 2 ) 111
Plot Ramachandran (paling disukai, diizinkan, 86,2, 13,6,
diizinkan, diizinkan, tidak diizinkan) 0,2, 0,0
Buka di jendela terpisah
Nilai dalam tanda kurung mewakili shell resolusi tertinggi

K 2 PtCl4, turunan logam berat
SeMet, IL-17RA berlabel seledi-metionin
The IL-17RA ectodomain terdiri dari dua modul domain FnIII yang tidak biasa yang disambung oleh
linker asam 18-amino ( Gambar 1 dan Gambar Tambahan. 1 ). Meskipun tidak terlihat dari urutannya,
struktur IL-17RA mengingatkan pada reseptor sitokin hematopoietik yang mengandung tandem β-
sandwich domain; Namun, domain itu sendiri mengandung beberapa penyimpangan substansial dari
lipatan FnIII kanonik, dan cara interaksi ligan sepenuhnya berbeda dari reseptor sitokin lainnya. Residu
2–272 dari 286 residu ektodomain yang diprediksi (dimana residu 1 adalah asam amino pertama dari
peptida matang) dimodelkan ke dalam kerapatan elektron kontinu untuk rantai reseptor dan lima dari
potensial tujuh N-linked glycans jelas divisualisasikan (lihat Tambahan Fig. 2untuk contoh kualitas
peta kerapatan elektron). Domain FnIII pertama (D1) memiliki tambahan 40 asam amino N-terminal
ekstensi yang membentuk lipatan yang unik ( Gambar Tambahan. 1). Rantai ini membuat jepit rambut
seperti dijembatani oleh ikatan disulfida (Cys12-Cys19), dan untaian kedua dari gilirannya membentuk
β-strand (A ′) yang memanjang FnIII β-sheet dan kemudian membungkus di sekitar wajah D1 domain,
disulfide bonding dengan C ′ strand Cys95, sebelum melewati domain untuk memulai untai-untungan
domain FnIII. Daerah penghubung interdomain berisi heliks pendek dan distabilkan oleh ikatan
disulfida internal (Cys154-Cys165). Domain FnIII kedua (D2) memiliki dua ikatan disulfida atipikal,
satu menghubungkan loop C-C ((Cys214) ke loop D – F (Cys245) dan yang kedua dalam loop F-G
(Cys259-Cys263). Kami memperkirakan bahwa ikatan disulfida ketiga ada antara F-G lingkaran
(Cys246) dan C-terminus dari G-strand (Cys272), mirip dengan yang diamati pada sitokin reseptor
kelas II 21Namun ikatan ini tidak terdefinisi dengan baik dalam peta kerapatan elektron saat ini.
Sementara struktur inti IL-17F molekul IL-17RA terikat pada dasarnya tidak berubah dibandingkan
dengan bentuk IL-17F 7 yang tidak lunas., helai dan loop perifer menjalani akomodasi struktural untuk
memfasilitasi pengikatan pada IL-17RA. Konformasi yang diamati dalam struktur IL-17F yang tidak
terlarut tidak dapat dipertahankan dalam keadaan terikat IL-17RA, karena akan menghasilkan
bentrokan sterik dengan daerah kumparan N-terminal dari reseptor. Setiap monomer IL-17F terdiri dari
dua pasang β-lembar anti-paralel (untai 1–4) dengan untai kedua dan keempat yang dihubungkan oleh
dua ikatan disulfida dengan cara yang homolog terhadap protein keluarga sistein-simpul. Ada 50 asam
amino N-terminal perpanjangan dimana residu 29–42 berjalan sejajar dengan helai 3 dan 4 dari
protomer IL-17F yang kedua. Daerah kumparan ini distabilkan oleh banyak interaksi, termasuk
beberapa ikatan hidrogen dengan untai yang berdekatan.Gambar 2A ). 24 asam amino pertama dari
setiap rantai IL-17F, dan residu 105-109 dari loop 3–4 pada satu IL-17F protomer, tidak dapat
dimodelkan. Dalam struktur IL-17F yang tidak terukur Cys17 membentuk ikatan disulfida dengan
Cys107 pada ujung loop 3-4 pada rantai IL-17F yang berdekatan. Ikatan disulfida interchain ini tidak
dimodelkan, tetapi hadir sebagai protein kami berperilaku sebagai dimer disulfide-linked pada SDS-
PAGE (data tidak ditampilkan).
Gambar 2
Ikatan IL-17F ke IL-17RA dimediasi oleh tiga antarmuka yang berbeda. (A) Situs 2, IL-17RA D1 C – C
'loop (kuning) menyisipkan antara daerah kumparan N-terminal dan untai 1 dan 2 dari rantai IL-17F B
(cyan). Koil N-terminal mengalami perubahan konformasi antara konformasi tak terikat (magenta) dan
terikat (cyan). (B) Site 2, representasi permukaan dari knob-in-hole yang saling melengkapi dari ikatan
saku IL-17F. (C) Situs 1, situs pengikatan terminal IL-17RA D1 N-terminal. (D) Situs 3, situs pengikatan
IL-17RA D2. Residu kontak ditampilkan sebagai model tongkat. Garis putus-putus abu-abu
melambangkan ikatan hidrogen dan garis putus-putus berwarna merah muda mewakili jembatan-garam.
Antarmuka pengikat IL-17RA-IL-17F

Modus pengikatan keseluruhan IL-17F ke IL-17RA, di mana kedua domain reseptor FnIII terikat
dalam orientasi 'side-on' dan menggunakan helai tepi untuk dimasukkan ke dalam celah yang terbentuk
pada antarmuka dimeric ligan, tidak seperti sitokin lain. atau kompleks reseptor faktor pertumbuhan.
IL-17RA membentuk antarmuka pengikatan yang luas dengan IL-17F, mengubur ~ 2200 A 2 luas
permukaan; ~ 70% dari area permukaan yang dikubur ini dimediasi oleh domain IL-17RA D1. Ada
tiga situs interaksi utama pada antarmuka pengikatan ( Gbr. 2 ). Situs 1 dibentuk antara perpanjangan
N-terminal IL-17RA (Thr25-Trp31) dan loop 1-2 (Pro60-Tyr63) ditambah wilayah C-terminal untai 3
(Val100, Arg102) dari IL-17F rantai B ; interaksi ini terkubur ~ 330 A 2 ( Gambar 2C). Traplak 1 dari
reseptor dimakamkan di pusat tempat pengikatan ini; O rantai utama membentuk ikatan hidrogen
dengan Arg102 dan rantai samping membentuk ikatan hidrogen dengan Pro60. Dua ikatan hidrogen
tambahan terbentuk antara IL-17RA Thr25 dan Cys26 dan IL-17F Tyr63. Situs 2 adalah fitur
antarmuka yang paling menonjol dari kompleks, dan terdiri dari IL-17RA D1 C ′ C loop (Leu86-
Arg93) yang slot ke dalam saku ikat-dalam diapit oleh ekstensi N-terminal dan untai 2 dari IL -17F
rantai B dan untai 3 dari rantai IL-17F A; interaksi ini mengubur hampir 550 A 2 ( Gambar 2A, B). 8-
asam amino IL-17RA loop ini membentuk interaksi hidrofobik dan polar yang luas dengan kedua
rantai IL-17F termasuk jembatan garam potensial antara IL-17RA Glu92 dan rantai IL-17F B Arg37,
dan ikatan hidrogen antara rantai-utama O IL-17RA Asn89 dan IL-17F rantai A Asn95. Situs 3, yang
meliputi ~ 410 Å 2 dari area permukaan yang dikubur (BSA), dibentuk antara IL-17RA D2 FG loop
(Cys259-Arg265) dan daerah C-terminal dari 3 dan 4 dari IL-17F rantai A, dan ekstensi N-terminal
dari rantai IL-17F B ( Gambar 2D). Situs 3 kaya dalam interaksi bermuatan dengan sembilan ikatan
hidrogen potensial dan jembatan garam antara IL-17RA Asp262 dan rantai IL-17F B Arg47. Secara
keseluruhan antarmuka sangat luas dan terdiri dari banyak kontak tertentu. Diperkirakan bahwa mode
pengikatan analog akan digunakan oleh pasangan IL-17 receptor-cytokine lainnya, diberikan urutan
konservasi residu kontak (dibahas di bawah). Namun, ikatan-jaringan yang lebih besar dan / atau
bentuk komplementaritas dapat digunakan dalam kompleks afinitas yang lebih tinggi.
Pembentukan kompleks reseptor heterodimerik

The stoichiometries kompleks reseptor tetap harus dijelaskan sepenuhnya 6 , tapi asimetris IL-17RA-
IL-17F kompleks petunjuk di preferensi untuk heterodimerisasi dengan kedua, reseptor yang berbeda.
Oleh karena itu kami menyelidiki mekanisme dimana sitokin homodimerik mungkin bisa
mengkoordinasikan dua reseptor yang berbeda. Baik IL-17RA dan IL-17RC dapat berikatan secara
independen dengan IL-17A dan IL-17F, tetapi kedua reseptor diperlukan untuk memberi isyarat 9 , 10 ,
22 . Untuk lebih memahami bagaimana kompleks sinyal terbentuk kami merancang strategi resonansi
permukaan plasmon (SPR) menggunakan protein larut untuk mengukur afinitas dari kedua kompleks
reseptor homodimerik dan heteromer untuk sitokin in vitro.. Sementara yang lain telah melaporkan
afinitas pengikatan IL-17RA dan IL-17RC untuk IL-17A dan IL-17F 7 , 22, kami menganggap penting
untuk menilai afinitas pengikatan dari situs pengikatan reseptor kedua. Strategi ini untuk melumpuhkan
satu reseptor pada chip SPR pada kepadatan kopling rendah untuk meminimalkan kemungkinan homo-
dimerization (misalnya cross-linking) dari reseptor pada chip. IL-17 sitokin dimerik kemudian
ditangkap oleh reseptor ini sehingga masing-masing reseptor akan terikat pada satu ligan IL-17
dimeric, meninggalkan situs pengikatan reseptor kedua yang terbuka dan dapat diakses. Reseptor kedua
selanjutnya melewati kompleks reseptor-sitokin yang telah dibentuk untuk mengukur afinitas dari
peristiwa pengikatan reseptor kedua. Dengan cara ini, kompleks dirangkai secara bertahap dan masing-
masing afinitas pengikatan diukur ( Gbr. 3). IL-17A terikat pada IL-17RA (2.8 ± 0.9 nM) dan IL-17RC
(1.2 ± 0.1 nM) dengan afinitas tinggi. Setelah IL-17A terikat oleh satu molekul IL-17RA, afinitas
pengikatan untuk IL-17RA kedua dikurangi menjadi 3,1 ± 0,5 μM sedangkan afinitas IL-17RC untuk
situs pengikatan kedua adalah 174 ± 3 nM. Jika IL-17A awalnya ditangkap oleh IL-17RC, IL-17RA
kedua terikat dengan IL-17RC-IL-17A kompleks yang ada dengan 162 ± 29 nM afinitas; afinitas
pengikatan IL-17RC yang kedua ke kompleks IL-17RC-IL-17A yang ada hanya 8,0 ± 0,5 μM.

Gambar 3
Majelis dan model kompleks pensinyalan IL-17 heterodimerik. (SEBUAH)Afinitas reseptor-sitokin IL-17
diukur dengan surface plasmon resonance (SPR). IL-17RA, IL-17RB dan IL-17RC diimobilisasikan pada
permukaan chip SPR, dan afinitas pengikatan IL-17A, IL-17F atau IL-25 diukur. Di mana ditunjukkan,
afinitas reseptor kedua yang mengikat ke kompleks reseptor-sitokin yang telah dirakit sebelumnya pada
chip kemudian diukur. Untuk eksperimen kinetik (3 baris teratas), sensor SPR perwakilan ditampilkan
sebagai garis berwarna dan kurva-pas sebagai garis hitam. Waktu dalam detik (s) diplot terhadap respon
(RU, unit resonansi). Konsentrasi yang disuntikkan berada di sebelah kanan dari sensorgram. Untuk
percobaan ekuilibrium (baris keempat), konsentrasi yang disuntikkan (M) diplot terhadap respon
maksimum (RU) untuk eksperimen representatif; kecocokan kurva ditunjukkan sebagai garis hitam dan
konstanta disosiasi (Kd ) ditandai sebagai garis vertikal. Insets menunjukkan representasi kartun dari
peristiwa yang mengikat. IL-17RA berwarna kuning, IL-17RB dalam warna oranye, IL-17RC dalam
magenta, IL-17A dalam warna gelap dan hijau terang, IL-17F dalam warna gelap dan biru muda dan IL-25
dalam warna ungu tua dan ungu muda. K d dilaporkan sebagai rata-rata setidaknya dua percobaan
independen ± standard error dari mean. (B) Model pembentukan kompleks pensinyalan heterodimerik.
Reseptor kedua (magenta) dimodelkan dengan asumsi bahwa kedua reseptor berikatan dengan IL-17F
dalam orientasi yang sama. C-terminal domain (D2) dari reseptor datang ke dekat seperti yang disorot oleh
kotak (lihat Gambar Tambahan. 3 untuk lebih jelasnya).
Pola serupa diamati untuk IL-17F, yang memiliki afinitas yang lebih tinggi untuk IL-17RC (4,4 ± 0,2
nM) dibandingkan dengan IL-17RA (292 ± 19 nM). Mengingat afinitas divergen, sepertinya IL-17F
awalnya akan ditangkap oleh IL-17RC; sekali terikat, afinitas IL-17RA untuk kompleks IL-17RC-IL-
17F adalah 23,8 ± 3 μM. Sebaliknya, afinitas pengikatan IL-17RA dan IL-17RC untuk preformed IL-
17RA-IL-17F dan IL-17RC-IL-17F kompleks, masing-masing, sangat lemah sehingga tidak dapat
dihitung secara akurat selama rentang konsentrasi yang digunakan. untuk eksperimen ini. Dengan
demikian, temuan ini jelas menunjukkan bahwa keterlibatan IL-17RA atau IL-17RC oleh IL-17A atau
IL-17F mendorong preferensi untuk situs pengikatan reseptor kedua untuk melibatkan reseptor yang
berbeda dan dengan demikian membentuk kompleks reseptor heterodimerik.
IL-17RA telah terlibat dalam IL-17E (juga dikenal sebagai IL-25) signaling bersama dengan IL-17RB
23 . IL-25 mempromosikan respons inflamasi Th2 dan berbagi sekitar ~ 20% identitas dengan IL-17A
dan IL-17F. Mengikat percobaan telah menunjukkan bahwa sementara IL-25 mengikat IL-17RB
dengan afinitas tinggi, ia tidak memiliki afinitas yang jelas untuk IL-17RA 23 - 25 . Kami berhipotesis
bahwa IL-17RA hanya dapat mengikat IL-25 setelah IL-25 ditangkap oleh IL-17RB. Untuk menguji
hipotesis ini, kami mengimobilisasi IL-17RB pada chip SPR, menangkap IL-25 dan mengukur afinitas
IL-17RA untuk kompleks IL-17RB-IL-25. Mendukung hipotesis kami, IL-17RA terikat pada IL-17RB-
IL-25 kompleks dengan 14,1 ± 2,4 μM afinitas ( Gambar. 3). Pada konsentrasi hingga 50 μM, tidak ada
interaksi yang dapat diamati antara IL-17RA dan IL-25, atau antara IL-17RB-IL-25 kompleks dan
molekul IL-17RB kedua. Bersama dengan data pengikatan IL-17A dan IL-17F, hasil ini menunjukkan
bahwa pembentukan kompleks heteromer dapat dimediasi oleh allostery dan / atau interaksi antara
reseptor.
Untuk membahas konsep ini lebih jauh, kami memodelkan molekul IL-17RA kedua untuk membentuk
kompleks reseptor-sitokin 2: 2 hipotetik ( Gambar 3B ). Dengan asumsi bahwa reseptor kedua
mengikat dengan cara yang identik dengan yang pertama, basis IL-17RA D2 akan sangat dekat dengan
D2 IL-17RA kedua ( Gambar 3B , kotak putus-putus). Dalam kasus dua molekul IL-17RA yang terikat
pada IL-17F, His212 pada loop C-C of dari satu IL-17RA akan berbenturan dengan IL-17RA His212
kedua ( Gambar. S3). Situs interaksi potensial ini memungkinkan reseptor untuk mengatur
pasangannya. Bentrokan sterik dapat menyebabkan berkurangnya afinitas untuk reseptor identik kedua,
atau interaksi reseptor-reseptor yang menguntungkan dapat menstabilkan kompleks reseptor heteromer.
Kami tidak mengesampingkan kemungkinan bahwa kompleks reseptor homodimerik dapat terbentuk
pada sel-sel dalam kondisi tertentu, namun, data kami berpendapat bahwa heterodimer reseptor
kemungkinan akan menjadi spesies pemberi sinyal dominan (lihat Diskusi).
IL-17RA sebagai reseptor umum

IL-17RA mengikat IL-17A dengan ~ 100 kali lipat afinitas yang lebih tinggi daripada IL-17F. IL-17A
dan IL-17F berbagi ~ 50% identitas, dan memetakan residu yang diawetkan ke struktur IL-17F
mengungkapkan cincin berbentuk tapal kuda dari residu variabel di sekitar kantung yang mengikat
reseptor ( Gambar 4 ). Sebagian besar interaksi loop IL-17RA C′-C terbentuk dengan residu yang
berbeda antara IL-17A dan IL-17F sedangkan daerah N-terminal dan interaksi IL-17RA D2 F-G
melibatkan residu yang dilestarikan. Kami melaporkan di sini bahwa wilayah ekstraseluler IL-17RA
juga dapat berikatan dengan IL-17RB-IL-25 kompleks, dan baru-baru ini menunjukkan bahwa IL-
17RD dapat berinteraksi dengan IL-17RA untuk memediasi IL-17A signaling 26. Mengingat asosiasi
IL-17RA dengan anggota keluarga IL-17 yang beragam ini, kami berspekulasi bahwa IL-17RA dapat
bertindak sebagai reseptor bersama yang analog dengan yang digunakan dalam kompleks reseptor
sitokin kelas I 27 . Untuk menyelidiki kemungkinan ini, kami memetakan residu yang dikonservasi di
antara semua anggota keluarga IL-17 ke permukaan IL-17F. Menganalisis lokasi residu ini di kompleks
IL-17RA-IL-17F, tampaknya masuk akal bahwa IL-17RA kontak residu dilestarikan dengan wilayah
N-terminal domain D1 dan loop F-G dari domain D2 ( Gambar 4C ). Sebaliknya, IL-17RA dapat
memodulasi spesifisitas untuk setiap sitokin dengan menghubungi residu sitokin non-lestari dengan
loop C-C ( Gambar 4C).). Secara kolektif, kemudian, IL-17RA tampaknya menggunakan strategi
reaktivitas silang berdasarkan subkumpulan kontak yang dilestarikan, di antara latar belakang kontak
yang berbeda, dengan beberapa IL-17 cytokines yang berbeda. Ini mirip dengan strategi yang
digunakan oleh reseptor p75 bersama untuk mengenali ligan neurotropin 28 yang berbeda , dan
berlawanan dengan mekanisme yang digunakan untuk reaktivitas silang dengan, misalnya, rantai gp130
dan γ c , yang membentuk interaksi molekul yang sangat berbeda dengan berbagai sitokin empat-heliks
27 .

Gambar 4
Mengikat antarmuka dan menyimpan residu IL-17. Representasi permukaan IL-17F dalam warna putih
dengan IL-17RA dalam format pita berwarna kuning. (A) Residu kontak IL-17RA-IL-17F yang disorot
dalam cyan. (B) Residu yang dilestarikan di antara IL-17A dan IL-17F dipetakan ke dalam struktur IL-
17F; residu identik berwarna magenta dan substitusi konservatif dalam warna merah muda. (C) Residu
yang identik di antara 4, 5 atau 6 anggota keluarga IL-17 cytokine berwarna magenta dan substitusi
konservatif di seluruh enam sitokin dalam warna merah muda. (D)Alignment IL-17 sitokin manusia.
Residu yang membentuk kontak dalam struktur IL-17RA-IL-17F disorot oleh kotak hitam pada urutan IL-
17F dan di cyan di bawah penjajaran. Residu yang identik dalam 4, 5 atau 6 sitokin disorot dalam
magenta; mereka yang identik di semua 6 sitokin juga ditandai dengan '*'; kelompok yang dilestarikan
berwarna merah muda dan ditandai dengan ':'.
Mode pengikatan reseptor dari faktor pertumbuhan cysteine-knot

Beberapa struktur kristal untuk reseptor-sistein-simpul faktor pertumbuhan ligan kompleks, seperti
faktor pertumbuhan saraf (NGF) 28 - 30 , faktor pertumbuhan endotel vaskular (VEGF) 31 , dua sel
glas yang diturunkan dari faktor neurotropik (GDNF) anggota keluarga 32 , dan yang lain; struktur ini
dapat berfungsi sebagai perbandingan instruktif dengan mode ligan engagement melalui IL-17RA (
Gambar 5 ). Dalam kompleks NGF terikat pada reseptor neurotropin p75 (p75NTR, anggota keluarga
reseptor kematian) 28 , 30 , reseptor tidak memiliki kesamaan struktural dengan IL-17RA; Namun,
seperti IL-17RA, p75NTR melibatkan NGF dalam alur cekung pada antarmuka ligan dimer (
Gambar. 5B). Dalam TrkA kompleks dengan NGF 29 , 33 , sebuah imunoglobulin (Ig) -domain di
TrkA, yang secara struktural terkait dengan domain FnIII IL-17RA, digunakan untuk mengikat ligan.
Namun, domain-Ig dari TrkA mengikat end-on ke wajah datar di 'pelana' NGF yang dibentuk oleh
NGF β-sheet; dengan demikian mode pengikatan berbeda ( Gambar 5C ). Menariknya, kompleks NGF-
p75NTR telah dilaporkan sebagai kompleks 1: 2 dan 2: 2 yang dapat mewakili sebagian dan lengkap
dari kompleks sinyal p75 homodimerik, masing-masing 28 , 30. Namun, dalam hal ini, ligan NGF
homodimerik melibatkan dua molekul p75 identik, dan dengan demikian tidak memerlukan mekanisme
struktural untuk ligan dimerik simetris untuk heterodimerisasi dua reseptor yang berbeda.
Gambar 5
Kompleks reseptor IL-17RA-IL-17F dibandingkan dengan kompleks reseptor faktor pertumbuhan

cysteine-knot homodimer. (A) IL-17RA-IL-17F, (B) P75NTR-NGF dan (C) TrkA-NGF ditampilkan
sebagai model pita dengan reseptor berwarna kuning dan sitokin dan faktor pertumbuhan biru dan cyan.
Diskusi Pergi ke:
IL-17 sitokin keluarga adalah mediator sentral dari kondisi inflamasi dan autoimun kronis. Di sini kami
melaporkan struktur kristal IL-17RA yang terikat pada IL-17F, menerangi kedua antarmuka pengikatan
reseptor dan mekanisme potensial dimana keluarga IL-17 dari sitokin homodimerik dapat
mengoordinasikan dua reseptor yang berbeda. Struktur kami mengungkapkan IL-17RA yang terikat
pada IL-17F cytokine dimer, meninggalkan kedua antarmuka reseptor pengikat potensial bebas untuk
melibatkan reseptor kedua. Studi biokimia menunjukkan bahwa kompleks heteromer dapat dibentuk
kembali secara in vitro dan bahwa pengikatan reseptor pertama memodulasi afinitas yang kedua.
Meskipun kami menunjukkan di sini bahwa IL-17F membentuk kompleks pensinyalan heterodimerik
menggunakan IL-17RA sebagai reseptor bersama, kemungkinan tetap bahwa, pada prinsipnya,
kompleks reseptor homodimerik dapat terbentuk dalam kondisi tertentu 34 , 35 . Afinitas reseptor
diferensial yang ditunjukkan oleh data pengikatan kami menunjukkan bahwa di bawah kondisi di mana
satu jenis reseptor akan sangat diekspresikan relatif terhadap yang lain, pasangan pensinyalan
homodimerik dapat dibentuk. Dengan cara ini, sel-sel mungkin dapat menyetel respons mereka
terhadap IL-17 melalui heterodimerik dibandingkan kompleks reseptor homodimerik menggunakan
mekanisme berbasis aksi massal berdasarkan modulasi dalam ekspresi reseptor relatif, seperti yang
telah ditunjukkan untuk IL-4 dan IL-13. sistem 36 . Namun, generalitas kompleks homodimerikin vivo
masih diperdebatkan mengingat sel-sel dari tikus defisien IL-17RA-defisien atau IL-17RC tidak
responsif terhadap IL-17A atau IL-17F 9 , 10 . Percobaan berbasis FRET sebelumnya telah menetapkan
bahwa rantai IL-17RA ada sebagai dimer preformed pada permukaan sel 20 . Penambahan sitokin
menyebabkan penurunan efisiensi FRET menunjukkan bahwa rantai IL-17RA baik mengalami
perubahan konformasi yang memisahkan domain intraseluler atau berdisosiasi pada pengikatan.
Ekspresi kedua IL-17RA dan IL-17RC dengan tidak adanya sitokin tidak cukup untuk menginduksi
sinyal, konsisten dengan gagasan bahwa sitokin yang memunculkan perubahan yang diperlukan untuk
sinyal 9. Mengingat bahwa baik IL-17RA dan IL-17RC diperlukan untuk menandakan tampaknya
masuk akal bahwa ikatan sitokin membebankan pasangan reseptor yang diperlukan. Berbagai
kedekatan antara reseptor IL-17 dan sitokin lebih lanjut memperparah kebutuhan ini untuk memodulasi
pasangan reseptor. Data kami menunjukkan bahwa pasangan dapat ditentukan oleh interaksi antara
membran proksimal domain (D2) dari reseptor. Untuk reseptor-reseptor yang serupa, ini dapat
mewakili gaya repulsif dalam konformasi terikat yang mengurangi afinitas untuk reseptor kedua seperti
itu. Gaffen dan rekan melaporkan bahwa murine IL-17RA D2 sebenarnya memediasi interaksi
homotypic 14. Kami belum mengamati adanya pembentukan dimer dengan protein IL-17RA
ekstraseluler kami (data tidak ditampilkan) meskipun tingkat konservasi yang tinggi antara daerah
ekstraseluler IL-17RA murin dan manusia. Karena domain SEFIR di wilayah intraseluler reseptor IL-
17 dan adaptor adaptor Act1 diprediksi akan dimerisasi 13 , tampaknya masuk akal bahwa domain
intraseluler dapat memediasi preassembly rantai reseptor sementara ikatan sitokin membebankan
pasangan reseptor yang tepat untuk pemberian sinyal.
IL-17RA sangat penting untuk IL-17A, IL-17F dan IL-25 signaling 9 , 23 . Baru-baru ini, IL-17RA
juga telah terlibat dalam IL-17RD signaling, meskipun ligan untuk interaksi ini masih belum diketahui
26 . Dengan adanya tren yang muncul ini, bersama dengan pengamatan kami bahwa residu kontak IL-
17RA di situs 1 dan situs 3 antarmuka yang mengikat agak dilestarikan di antara anggota keluarga IL-
17 cytokine, kami mengusulkan IL-17RA dapat bertindak sebagai reseptor bersama untuk IL-17RA.
-17 keluarga. Reseptor bersama seperti gp130 dan rantai are c adalah ciri dari banyak reseptor-reseptor
cytokine kompleks 27. Reseptor-reseptor umum ini berikatan dengan susunan kompleks-kompleks
reseptor-sitokin multimerik, seringkali dengan cara yang dimediasi oleh afinitasnya terhadap kompleks
reseptor α-resepin sitokin daripada afinitas pengikatan langsung untuk sitokin itu sendiri. IL-17RA
dapat mewakili anggota terbaru dari keluarga reseptor bersama, melayani berlaku sebagai 'γ c rantai'
dari keluarga IL-17R, dan menambahkan twist baru dengan paradigma di mana bersama-reseptor situs
pengikatan menggunakan dilestarikan ' titik jangkar 'untuk melibatkan ligan varian.
Metode Pergi ke:
Ekspresi protein dan pemurnian

Peptida sinyal asli dan wilayah ekstraseluler IL-17RA manusia (residu 1–286) dikloning ke dalam
vektor ekspresi BacMam pVLAD6 37. Protein rekombinan diekspresikan secara sementara dalam
suspensi 293 GnTI-sel yang ditumbuhkan dalam media Pro293 (Lonza) yang disuplementasi dengan
1% serum janin anak sapi (FBS) dan 10 mM Na butirat pada 37 ° C. Panjang penuh IL-17F dengan
heksa C-terminal. Tagnya diklon ke dalam vektor ekspresi pAcGP67-A (BD Biosciences) dan protein
yang disekresikan oleh sel serangga High Five yang tumbuh di media Serangga Xpress (Lonza) pada
27 ° C. Supernatan yang mengandung IL-17RA dan IL-17F protein dicampur dan dipekatkan sebelum
pemurnian ni-afinitas. Protein IL-17RA dideplikosilasi melalui pengobatan endoglikosidase-H dan tag
pemurnian IL-17RA dan IL-17F dibelah menggunakan protease 3C dan carboxypeptidase A (Sigma-
Aldrich). Kompleks protein menjadi sasaran reduktif lisin metilasi menggunakan dimethylamine-
borane kompleks dan formaldehida seperti yang dijelaskan oleh Walteret al . 38 . Kompleks IL-17RA-
IL-17F dimurnikan lebih lanjut menggunakan kolom pengecualian ukuran Superdex 200 (GE
Healthcare) yang disetimbangkan dalam 10 mM Hepes pH 7,4 dan 150 mM NaCl. Pecahan yang
mengandung kompleks IL-17RA-IL-17F terkonsentrasi pada ~ 15 mg / ml untuk percobaan kristalisasi.
Selono-methione (SeMet) berlabel IL-17RA protein disiapkan seperti yang dijelaskan dengan
modifikasi berikut 39. Sel-sel GnTI yang tidak terproteksi 293 dibiakkan di media DMEM yang
dilengkapi FBS (Invitrogen). Media ditukar setelah pencucian salin fosfat tunggal, untuk Met dan Cys-
free DMEM (Invitrogen) yang dilengkapi dengan 40 mg / l L-Cys, 45 mg / l selenon-L-Met, 2% FBS,
L-glutamat , Na piruvat, IL-17RA BacMam virus dan 10 mM Na butirat. Ekspresi diizinkan untuk
dilanjutkan selama 72 jam. Supernatan protein IL-17RA-SeMet dicampur dengan IL-17F dan
dimurnikan seperti dijelaskan di atas. Untuk percobaan yang mengikat, protein diekspresikan dan
dimurnikan secara esensial seperti yang dijelaskan di atas. The IL-17RA, IL-17RB dan IL-17RC
domain ekstraseluler diekspresikan oleh 293s GnTI-sel dengan dan tanpa tag ligase C-terminal BirA.
IL-17RC diekspresikan dengan tambahan label C-terminal Fc yang dibelah oleh protease-3C sebelum
kromatografi eksklusi ukuran. IL-17A, IL-17F dan IL-25 cytokines diekspresikan oleh High Five cells
dengan C-terminal hexa-tag-Nya. Protein secara enymatically biotinylated menggunakan BirA ligase
dan dimurnikan melalui kromatografi eksklusi ukuran.
Kristalisasi dan pengumpulan data x-ray

Kompleks IL-17RA-IL-17F awalnya tumbuh melalui difusi uap tergantung-jatuh pada 10% PEG6000
dan 0,1 M obat pH 9,0. Dioptimalkan asli dan SeMet protein kompleks kristal yang tumbuh di
PEG6000 (4-14%) dan 0,1 M CAPSO buffer (pH 9.1-9.3) dengan 20 mM CaCl 2 atau 10 mM CaCl 2
dan 1,5% w / v trimetilamina N-oksida dihidrat ditambahkan langsung ke drop protein-precipitant.
Derivatif logam berat disiapkan dengan merendam kristal dalam larutan juga dilengkapi dengan 0,5
mM K 2 PtCl 4 dan 2% etilena glikol selama 6 jam. Kristal adalah cryo-protected sebelum
pengumpulan data dalam larutan sumur ditambah 20-25% etilena glikol dan didinginkan sampai 100 K.
Kristal milik kelompok ruang P4 1 2 12 dan memiliki dimensi sel satuan ~ 171, 171, 83 Å. Kumpulan
data asli awal dikumpulkan di Stanford Synchrotron Radiation Lightsource (SSRL) beamline 9-2
(Stanford, CA). Dataset Pt-derivatif dan SeMet dikumpulkan di SSRL beamline 11-1. Dataset asli
resolusi tinggi dikumpulkan pada garis pencerahan Advanced Photon Source (APS) ID-23D (Argonne,
IL). Semua data diindeks dan diintegrasikan menggunakan program Mosflm 40 dan diskalakan dengan
SCALA dari suite CCP4 41 . Difraksi adalah anisotropik dan set data asli awal juga mengalami
pemotongan ellipsoidal dan skala anisotropik menggunakan server anisotropi difraksi 42 yang
membuat kumpulan data berskala 3,4, 3,4 dan 3,9 Å.
Penentuan dan penyempurnaan struktur

Solusi pengganti molekuler untuk IL-17F homodimer tunggal ditentukan dengan menggunakan
program Phaser 43 dengan struktur IL-17F 2,85 Å yang ditentukan sebelumnya sebagai model (PDB
ID 1JPY) 7 . Peta awal menunjukkan kepadatan tambahan pada satu sisi IL-17F dimer yang menerangi
situs pengikatan untuk IL-17RA. Fase dihitung menggunakan turunan K 2 PtCl 4 melalui penggantian
isomorf tunggal dengan hamburan anomali (SIRAS) dalam program Sharp 44 . Peta modifikasi
densitas dihitung dengan asumsi pelarut 71% dan termasuk model parsial dari penggantian molekul IL-
17F untuk 10 dari 20 putaran. Model parsial rantai utama IL-17RA secara manual dibangun ke dalam
peta ini menggunakan program Coot 45.
Posisi residu IL-17RA Met dihitung melalui Fast Fourier Transform (FFT) untuk menghasilkan peta
perbedaan anomali menggunakan program FFT di suite CCP4. Karena dataset SeMet tidak isomorf
dengan dataset asli dan sinyal terlalu lemah untuk menemukan lokasi melalui metode penghitungan
anomali tunggal (SAD), model yang dibangun sebagian digunakan sebagai model pengganti molekuler
untuk dataset SeMet dan fase terhitung yang digunakan. untuk menemukan puncak selenonium. Tiga
dari enam residu SeMet yang potensial terletak, sesuai dengan IL-17RA Met159, Met166 dan Met218.
Posisi-posisi Met ini, di samping situs-situs glikosilasi dan ikatan disulfida yang diprediksi Asn-linked
digunakan untuk mendaftarkan polipeptida dalam densitas dan melengkapi pembuatan model IL-17RA
awal.46 berpotongan dengan pembuatan model manual di Coot. Putaran awal dari pembuatan model
menggunakan B -factor yang diasah σ A- weighted bertahap-gabungan peta dihitung oleh program CNS
47 . Model terakhir disempurnakan menjadi 3,3 Å dengan faktor R dan R bebas dari 22,7% dan 25,3%
masing-masing. Ada satu kompleks IL-17RA-IL-17F di unit asimetris. Model ini termasuk dimethyl-
lysine pada posisi 43 rantai IL-17RA, lima situs N-Acetylglucosamine (GlcNAc) pada rantai IL-17RA,
satu situs dengan dua residu GlcNAc pada rantai IL-17F B dan ion kalsium . Program PROCHECK 48
dan WHAT_CHECK 49digunakan untuk menilai geometri model akhir. Program suite CCP4 Kontak
dan Areaimol digunakan untuk menentukan kontak antarmuka dan area permukaan terkubur masing-
masing. Semua figur struktural dihasilkan menggunakan program Pymol 50 .
Pengukuran afinitas
Afinitas mengikat dihitung melalui resonansi permukaan plasmon (SPR) pada Biacore T100 (GE
Healthcare). Reseptor IL-17 biotinylated digabungkan ke streptavidin terimobilisasi pada chip SA atau
CM4-sensor (GE Healthcare). Sebuah protein, biotinylated tidak relevan ditangkap pada kepadatan
immobilisasi setara untuk mengontrol aliran sel. Untuk mengukur interaksi pengikatan reseptor kedua,
sitokin pertama kali ditangkap ke reseptor terimobilisasi, diikuti oleh injeksi reseptor kedua. Densitas
kopling rendah (200–400 RU) dan konsentrasi sitokin berlebih digunakan untuk mengoptimalkan
jumlah homodimer sitokin yang terikat pada satu reseptor tunggal. Permukaan diregenerasi
menggunakan 3 M MgCl 2antara setiap siklus. Untuk eksperimen kinetik, laju alir 50 µl / mnt
digunakan. Data dianalisis menggunakan perangkat lunak evaluasi Biacore T100 Versi 2.0 (GE
Healthcare). Affinities dilaporkan sebagai rata-rata setidaknya dua percobaan independen ± standard
error of mean (sem).
Materi tambahan Pergi ke:
Klik di sini untuk melihat. (5,6 Jt, dokumen)
Ucapan terima kasih Pergi ke:
Kami berterima kasih kepada S. Juo untuk bantuan dengan pengumpulan data dan penentuan struktur,
E. Ozkan untuk diskusi yang bermanfaat dan D. Gorman untuk reagen cDNA. Kami berterima kasih
kepada staf beamline di Stanford Synchrotron Radiation Lightsource, Advanced Light Source dan
Advanced Photon Source untuk bantuan dengan pengumpulan data. LKE adalah rekan CJ Martin yang
didukung oleh National Health and Medical Research Council of Australia. KCG didukung oleh NIH
(AI51321) dan Howard Hughes Medical Institute.
Catatan kaki Pergi ke:
Nomor aksesi
Koordinat dan faktor struktur telah disimpan di Bank Data Protein ( www.rcsb.org ) di bawah nomor aksesi 3JVF.
Kontribusi penulis
Eksperimen LKE dan KCG dirancang, LKE dan SF melakukan eksperimen, LKE dan KCG menganalisis data dan
menulis manuskrip.
Konflik kepentingan
KCG menyatakan kepentingan keuangan yang bersaing, dan berencana untuk mengajukan paten untuk
menggunakan informasi yang diperoleh dari struktur kristal ini untuk merancang antagonis IL-17.
Referensi Pergi ke:
1. Mosmann TR, Coffman RL. TH1 dan TH2 sel: pola yang berbeda dari sekresi limfokin
menyebabkan sifat fungsional yang berbeda. Annu Rev Immunol. 1989; 7 : 145–173. [ PubMed ]
2. Harrington LE, dkk. Sel T efektor CD4 + penghasil Interleukin 17 mengembangkan melalui garis
keturunan yang berbeda dari tipe T helper 1 dan 2 garis keturunan. Nat Immunol. 2005; 6 : 1123–1132.
[ PubMed ]
3. Park H, et al. Garis keturunan yang berbeda dari sel T CD4 mengatur peradangan jaringan dengan
memproduksi interleukin 17. Nat Immunol. 2005; 6 : 1133–1141. [ Artikel gratis PMC ] [ PubMed ]
4. Korn T, Bettelli E, Oukka M, Kuchroo VK. Sel IL-17 dan Th17. Annu Rev Immunol. 2009; 27 :
485–517. [ PubMed ]
5. Weaver CT, Hatton RD, Mangan PR, Harrington LE. IL-17 sitokin keluarga dan keragaman yang
meluas dari garis keturunan sel T efektor. Annu Rev Immunol. 2007; 25 : 821–852. [ PubMed ]
6. Gaffen SL. Struktur dan sinyal di keluarga reseptor IL-17. Nat Rev Immunol. 2009
[ Artikel gratis PMC ] [ PubMed ]
7. Hymowitz SG, dkk. IL-17 mengadopsi lipatan simpul cystine: struktur dan aktivitas sitokin baru, IL-
17F, dan implikasi untuk pengikatan reseptor. EMBO J. 2001; 20 : 5332–5341. [ Artikel gratis PMC ]
[ PubMed ]
8. Wright JF, dkk. Identifikasi heterodimer 17F / 17A interleukin pada sel CD4 + T manusia yang
diaktifkan. J Biol Chem. 2007; 282 : 13447–13455. [ PubMed ]
9. Toy D, dkk. Terdepan: interleukin 17 sinyal melalui kompleks reseptor heteromer. J Immunol. 2006;
177 : 36–39. [ PubMed ]
10. Zheng Y, dkk. Interleukin-22 memediasi pertahanan inang awal terhadap pelekatan dan
memperbaiki bakteri patogen. Nat Med. 2008; 14 : 282–289. [ PubMed ]
11. Ishigame H, dkk. Peran diferensial interleukin-17A dan -17F dalam pertahanan tuan rumah
terhadap infeksi bakteri mucoepithelial dan respon alergi. Kekebalan. 2009; 30 : 108–119. [ PubMed ]
12. O’Connor W, Jr, et al. A protective function for interleukin 17A in T cell-mediated intestinal
inflammation. Nat Immunol. 2009;10:603–609. [PMC free article] [PubMed]
13. Novatchkova M, Leibbrandt A, Werzowa J, Neubuser A, Eisenhaber F. The STIR-domain

superfamily in signal transduction, development and immunity. Trends Biochem Sci. 2003;28:226–229.
[PubMed]
14. Kramer JM, et al. Cutting edge: identification of a pre-ligand assembly domain (PLAD) and ligand
binding site in the IL-17 receptor. J Immunol. 2007;179:6379–6383. [PMC free article] [PubMed]
15. Maitra A, et al. Distinct functional motifs within the IL-17 receptor regulate signal transduction and
target gene expression. Proc Natl Acad Sci U S A. 2007;104:7506–7511. [PMC free article] [PubMed]
16. Rochman Y, Spolski R, Leonard WJ. New insights into the regulation of T cells by gamma(c)
family cytokines. Nat Rev Immunol. 2009;9:480–490. [PMC free article] [PubMed]
17. Claudio E, et al. The adaptor protein CIKS/Act1 is essential for IL-25-mediated allergic airway
inflammation. J Immunol. 2009;182:1617–1630. [PMC free article] [PubMed]
18. Chang SH, Park H, Dong C. Act1 adaptor protein is an immediate and essential signaling
component of interleukin-17 receptor. J Biol Chem. 2006;281:35603–35607. [PubMed]
19. Qian Y, et al. The adaptor Act1 is required for interleukin 17-dependent signaling associated with
autoimmune and inflammatory disease. Nat Immunol. 2007;8:247–256. [PubMed]
20. Kramer JM, et al. Evidence for ligand-independent multimerization of the IL-17 receptor. J
Immunol. 2006;176:711–715. [PMC free article] [PubMed]
21. Bazan JF. Structural design and molecular evolution of a cytokine receptor superfamily. Proc Natl
Acad Sci U S A. 1990;87:6934–6938. [PMC free article] [PubMed]
22. Wright JF, et al. The human IL-17F/IL-17A heterodimeric cytokine signals through the IL-
17RA/IL-17RC receptor complex. J Immunol. 2008;181:2799–2805. [PubMed]
23. Rickel EA, et al. Identification of functional roles for both IL-17RB and IL-17RA in mediating IL-
25-induced activities. J Immunol. 2008;181:4299–4310. [PubMed]
24. Shi Y, et al. A novel cytokine receptor-ligand pair. Identification, molecular characterization, and in
vivo immunomodulatory activity. J Biol Chem. 2000;275:19167–19176. [PubMed]
25. Lee J, et al. IL-17E, a novel proinflammatory ligand for the IL-17 receptor homolog IL-17Rh1. J
Biol Chem. 2001;276:1660–1664. [PubMed]
26. Rong Z, et al. IL-17RD (Sef or IL-17RLM) interacts with IL-17 receptor and mediates IL-17
signaling. Cell Res. 2009;19:208–215. [PMC free article] [PubMed]
27. Wang X, Lupardus P, Laporte SL, Garcia KC. Structural biology of shared cytokine receptors.
Annu Rev Immunol. 2009;27:29–60. [PMC free article] [PubMed]
28. He XL, Garcia KC. Structure of nerve growth factor complexed with the shared neurotrophin
receptor p75. Science. 2004;304:870–875. [PubMed]
29. Wehrman T, et al. Structural and mechanistic insights into nerve growth factor interactions with the
TrkA and p75 receptors. Neuron. 2007;53:25–38. [PubMed]
30. Gong Y, Cao P, Yu HJ, Jiang T. Crystal structure of the neurotrophin-3 and p75NTR symmetrical
complex. Nature. 2008;454:789–793. [PubMed]
31. Wiesmann C, et al. Crystal structure at 1.7 A resolution of VEGF in complex with domain 2 of the
Flt-1 receptor. Cell. 1997;91:695–704. [PubMed]
32. Wang X, Baloh RH, Milbrandt J, Garcia KC. Structure of artemin complexed with its receptor
GFRalpha3: convergent recognition of glial cell line-derived neurotrophic factors. Structure.
2006;14:1083–1092. [PubMed]
33. Wiesmann C, Ultsch MH, Bass SH, de Vos AM. Crystal structure of nerve growth factor in
complex with the ligand-binding domain of the TrkA receptor. Nature. 1999;401:184–188. [PubMed]
34. You Z, et al. Interleukin-17 receptor-like gene is a novel antiapoptotic gene highly expressed in
androgen-independent prostate cancer. Cancer Res. 2006;66:175–183. [PubMed]
35. Li TS, Li XN, Chang ZJ, Fu XY, Liu L. Identification and functional characterization of a novel
interleukin 17 receptor: a possible mitogenic activation through ras/mitogen-activated protein kinase
signaling pathway. Cell Signal. 2006;18:1287–1298. [PubMed]
36. LaPorte SL, et al. Molecular and structural basis of cytokine receptor pleiotropy in the interleukin-
4/13 system. Cell. 2008;132:259–272. [PMC free article] [PubMed]
37. Dukkipati A, Park HH, Waghray D, Fischer S, Garcia KC. BacMam system for high-level
expression of recombinant soluble and membrane glycoproteins for structural studies. Protein Expr
Purif. 2008;62:160–170. [PMC free article] [PubMed]
38. Walter TS, et al. Lysine methylation as a routine rescue strategy for protein crystallization.
Structure. 2006;14:1617–1622. [PubMed]
39. Barton WA, Tzvetkova-Robev D, Erdjument-Bromage H, Tempst P, Nikolov DB. Highly efficient
selenomethionine labeling of recombinant proteins produced in mammalian cells. Protein Sci.
2006;15:2008–2013. [PMC free article] [PubMed]
40. Leslie AGW. Recent changes to the MOSFLM package for processing film and image plate data.
Joint CCP4 + ESF-EAMCB Newsletter on Protein Crystallography. 1992;26
41. The CCP4 suite: programs for protein crystallography. Acta Crystallogr D Biol Crystallogr.
1994;50:760–763. [PubMed]
42. Strong M, et al. Toward the structural genomics of complexes: crystal structure of a PE/PPE protein
complex from Mycobacterium tuberculosis. Proc Natl Acad Sci U S A. 2006;103:8060–8065.
[PMC free article] [PubMed]
43. McCoy AJ, et al. Phaser crystallographic software. J Appl Crystallogr. 2007;40:658–674.
[PMC free article] [PubMed]
44. de La Fortelle E, Bricogne G. SHARP: A Maximum-Likelihood Heavy-Atom Parameter

Refinement Program for the MIR and MAD Methods. Methods Enzymol. 1997;276:472–494.
45. Emsley P, Cowtan K. Coot: model-building tools for molecular graphics. Acta Crystallogr D Biol
Crystallogr. 2004;60:2126–2132. [PubMed]
46. Afonine PV, Grosse-Kunstleve RW, Adams PD. The Phenix refinement framework. CCP4
Newsletter. 2005;42
47. Brunger AT. Version 1.2 of the Crystallography and NMR system. Nat Protoc. 2007;2:2728–2733.
[PubMed]
48. Laskowski RA, Moss DS, Thornton JM. Main-chain bond lengths and bond angles in protein
structures. J Mol Biol. 1993;231:1049–1067. [PubMed]
49. Hooft RW, Vriend G, Sander C, Abola EE. Kesalahan dalam struktur protein. Alam. 1996; 381 :
272. [ PubMed ]
50. DeLano WL. DeLano Scientific. San Carlos; CA, AS: 2002. [ PubMed ]

Basis Struktural Berbagi Reseptor Dengan Interleukin 17 Sitokin

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Basis Struktural Berbagi Reseptor Dengan Interleukin 17 Sitokin

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

16/4/2018 Basis struktural berbagi reseptor dengan interleukin 17 sitokin

Basis struktural berbagi reseptor dengan interleukin 17 sitokin

Pemberitahuan hak cipta

Abstrak Pergi ke:

pengantar Pergi ke:

Hasil Pergi ke:

Struktur IL-17RA terikat pada IL-17F

Bawaan 1 K 2 PtCl 4 SeMet Bawaan 2

Bawaan 1 K PtCl SeMet Bawaan 2

Buka di jendela terpisah

Nilai dalam tanda kurung mewakili shell resolusi tertinggi

Antarmuka pengikat IL-17RA-IL-17F

Pembentukan kompleks reseptor heterodimerik

Buka di jendela terpisah

IL-17RA sebagai reseptor umum

Buka di jendela terpisah

Mode pengikatan reseptor dari faktor pertumbuhan cysteine-knot

Kompleks reseptor IL-17RA-IL-17F dibandingkan dengan kompleks reseptor faktor pertumbuhan

Diskusi Pergi ke:

Metode Pergi ke:

Ekspresi protein dan pemurnian

Kristalisasi dan pengumpulan data x-ray

Penentuan dan penyempurnaan struktur

Materi tambahan Pergi ke:

Klik di sini untuk melihat. (5,6 Jt, dokumen)

Ucapan terima kasih Pergi ke:

Catatan kaki Pergi ke:

Referensi Pergi ke:

13. Novatchkova M, Leibbrandt A, Werzowa J, Neubuser A, Eisenhaber F. The STIR-domain

44. de La Fortelle E, Bricogne G. SHARP: A Maximum-Likelihood Heavy-Atom Parameter

Anda mungkin juga menyukai