Escuela de Microbiología y Parasitología

INFORME 4: Actividad microbiana sobre sustratos especiales

(colorantes y detergentes)
CURSO: FISIOLOGIA MICROBIANA
PROFESORES: Susana Gutiérrez, Fernando Merino
HORARIO: Miércoles y viernes 2:00-4:00 pm
ALUMNO:
 Vásquez Cruzado, Fabrizio 16100052
CORREO: fabrimar2009@hotmail.com

2018

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I. INTRODUCCION
El desarrollo industrial y aumento de la población mundial durante este siglo, a
parte de los contaminantes convencionales, han producido una serie de
compuestos cuyas consecuencias eran desconocidas y que la sociedad no
prestaba atención. Se trata de los xenobióticos, sustancias químicas sintéticas
que no han existido nunca de manera natural, como por ejemplo solventes,
PBC’s, detergentes, tintes, explosivos, etc. que son completamente resistentes a
la biodegradación. Los hidrocarburos, aunque no son xenobióticos, por sus largas
cadenas y las emisiones accidentales también ocasionan serios problemas en el
medio ambiente. La razón por la cual los compuestos xenobióticos son muy
resistentes a la biodegradación se debe a que poseen:
- Sustituciones inusuales como cloros y otros alógenos.
- Anillos aromáticos muy densos
- Uniones o secuencias de unión como carbonos terciarios y cuaternarios.
- Son moléculas muy grandes, como polietileno u otros plásticos
Es probable que en la naturaleza no haya organismos capaces de utilizarlos, sin
embargo, diferentes compuestos xenobióticos son susceptibles al ataque
microbiano. Su existencia tiene un significado evolutivo considerable, ya que
estos compuestos son muy recientes y no existían en la tierra hace 50 o 100 años,
por tanto, el estudio de la tasa de metabolización de estos compuestos nos
puede dar una idea de la velocidad de la evolución genética de los
microorganismos. Además, podría apoyar a estudios sobre biorremediación de
ambientes contaminados con estos xenobióticos.

II. RESULTADOS:
1. Navy blue
Se hicieron lecturas de absorbancias a 620 nm
a) Pseudomona aeruginosa:
Se tomó la absorbancia del sobrenadante al inicio de la prueba en
una dilución de 1/20 y al final de la prueba con una dilución de
1/2
Lectura Dilución Absorbancia
A0 1/20 0.24
Af 1/2 0.113
El porcentaje de decoloración será:
(0.24 × 20) − (0.113 × 2)
%= × 100 = 95%
(0.24 × 20)

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 b) Levadura:
Se procedió de la misma manera que en Pseudomona aeruginosa
con la excepción de que la dilución al momento de hacer la lectura
final fue de 1/4
Lectura Dilución Absorbancia
A0 1/20 0.140
Af 1/4 0.184
El porcentaje de decoloración será:
(0.140 × 20) − (0.184 × 4)
%= × 100 = 73%
(0.140 × 20)

c) Hongo:
Se registraron las absorbancias al igual que con Pseudomona
aeruginosa

Lectura Dilución Absorbancia

A0 1/20 0.140
Af 1/2 0.032
El porcentaje de decoloración será:
(0.140 × 20) − (0.032 × 2)
%= × 100 = 97%
(0.140 × 20)

2. Red MC-2R
a) Pseudomona aeruginosa
Se tomaron las absorbancias como en el experimento con Navy
blue.
Lectura Dilución Absorbancia
A0 1/20 0.093
Af 1/4 0.448
El porcentaje de decoloración será:
(0.093 × 20) − (0.048 × 4)
%= × 100 = 3%
(0.093 × 20)

b) Levadura
Lectura Dilución Absorbancia
A0 1/20 0.093
Af 1/4 0.453
El porcentaje de decoloración será:
(0.093 × 20) − (0.453 × 4)
%= × 100 = 2.5%
(0.093 × 20)

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3. Detergente
a) Consorcio RAV 2: se hizo 3 veces el experimento
Lectura Dilución Absorbancia
A0 1/20 0.090
Af 1/2 0.004

(0.09 × 20) − (0.004 × 2)

% 𝑑𝑒𝑔𝑟𝑎𝑑𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 = × 100 = 99.55%
(0.09 × 20)

Lectura Dilución Absorbancia

A0 1/20 0.090
Af 1/2 0.04

(0.09 × 20) − (0.04 × 2)

% 𝑑𝑒𝑔𝑟𝑎𝑑𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 = × 100 = 91.11%
(0.09 × 20)

Lectura Dilución Absorbancia

A0 1/20 0.090
Af 1/4 0.032

(0.09 × 20) − (0.032 × 2)

% 𝑑𝑒𝑔𝑟𝑎𝑑𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 = × 100 = 96.44%
(0.09 × 20)

b) Consorcio RAV 3: se hizo el experimento 2 veces

Lectura Dilución Absorbancia
A0 1/20 0.090
Af 1/4 0.054

(0.09 × 20) − (0.054 × 2)

% 𝑑𝑒𝑔𝑟𝑎𝑑𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 = × 100 = 85.16%
(0.09 × 20)

Lectura Dilución Absorbancia

A0 1/20 0.090
Af 1/2 0.06

(0.09 × 20) − (0.06 × 2)

% 𝑑𝑒𝑔𝑟𝑎𝑑𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 = × 100 = 93.33%
(0.09 × 20)

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III. DISCUSION DE RESULTADOS:
Un gran numero de distintos tintes químicos son usados para varios propósitos
industriales y una parte significativa aparece en forma de desperdicios los cuales
son desechados al ambiente. Sobre esto, los tintes tipo azo son la más
importante clase de tintes usados en tatuajes, cosméticos, impresiones y en la
industria textil.
Grupo azo

Ejm. De tinte azo: Acid Orange 7

Su resistencia a la biodegradación causa una gran contaminación al ambiente
una vez que estos tintes son liberados al ambiente. Además, algunos tintes tipo
azo son tóxicos y mutagénicos (Holme, 1984).
1. Navy blue:
Es un colorante mayormente usado en la industria textil cuya formula
química es la siguiente:

Analizando las absorbancias entre los 3 microorganismos, el que más

degrado es el hongo. Sin embargo, al momento de hacer la centrifuga del
tubo, se observó que la biomasa junto con el colorante sedimentaba
formando un pellet. Esto provocado por el fenómeno de bioadsorción.
La bioadsorción es un proceso fisicoquímico que ocurre de manera
natural en biomasa el cual permite la entrada de forma pasiva hacia
dentro de la estructura celular (Volesky, Bohumil,1990).

Bioadsorción observada en experimento: la biomasa (pellet) quedó

teñida de azul

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 El hongo dejo que el tinte lo tiña de azul, mas no lo degradó, por lo que
al momento de hacer la lectura del sobrenadante se obtuvo una gran
diferencia. De igual manera ocurrió con la bacteria Pseudomona
aeruginosa y la levadura. La falta de degradación pudo haberse debido a
la complejidad de la molécula del tinte.

2. Red MC-2R
Colorante igualmente usado en la industria textil, cuya formula química
es:

Las bacterias que pueden decolorar en condiciones aerobias necesitan de

una fuente de carbono orgánico ya que no pueden utilizar el tinte como
fuente de crecimiento (Stolz, 2001).
P. aeruginosa puede decolorar tintes comerciales y textiles en presencia
de glucosa bajo condiciones aerobias (Nachiyar and Rajkumar, 2003). Las
bacterias atacan al grupo azo de manera reductiva, usando las aminas
como fuente de carbono y energía para su crecimiento (Anjali Pandey et
al,2006).
La bacteria P. aeruginosa pudo haber aprovechado cantidades menores
de este tinte como fuente de energía y carbono. Aunque se le haya
inoculado en un medio mínimo con poca glucosa, usó esta azúcar para
poder decolorar este tinte.
Lo mismo paso con la levadura, aunque este tenga un metabolismo
anaerobio, pudo decolorar el tinte.

3. Detergente doméstico.
Los detergentes o surfactantes domésticos son materiales acumulables.
todos los surfactantes tienen 2 distintos componentes es sus estructuras
moleculares. Una parte compuesta de cadenas largas de carbohidratos
de naturaleza hidrofóbica. La otra parte de la molécula es soluble al agua
de naturaleza hidrofílica.

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 Ejm. Molécula surfactante
La biodegradación de surfactantes toma lugar en zonas de aguas
residuales en plantas de tratamientos y en ecosistemas naturales como
ríos y mares. Los microorganismos desarrollaron un sistema enzimático
para dar inicio a la degradación de estos surfactantes por la mitad
mineral, el cual puede degradar mediante beta oxidación. Sin embargo,
debido a la naturaleza anfifilica del surfactante se espera el desarrollo de
los consorcios. Los consorcios pueden ser construidos en base a la
relación comensal y sinérgica. En caso al comensalismo, un
microorganismo es beneficiado mientras el otro no es afectado. Y en lo
sinérgico, las habilidades de ambos microorganismos cooperarían en la
biodegradación del surfactante (Van Ginkel, C. G., 1996).
El detergente usado en esta practica fue el de la marca Ace, cuyo
componente principal es el dodecilbenceno sulfonato de sodio o LAS por
sus siglas en inglés:

La labor de varios autores ha dado como resultados la posible ruta

metabólica a través de la cual los microorganismos aerobios degradan y
mineralizan los LAS (Hammerton. 1956; Huddleston. 1963; Divo. 1980). El
primer paso es la conversión oxidativa de uno de los grupos metilos de
las cadenas alquílica en un grupo carboxílico. Luego ocurre el
acortamiento oxidativo de la cadena alquílica en 2 unidades de átomos
de carbono. Siguiente a esto se lleva a cabo la escisión oxidativa del anillo.
Por ultimo se da la ruptura del enlace carbono azufre con la liberación del
grupo sulfonato. El proceso esta representado en la siguiente figura:

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 Posible ruta metabolica del detergente
En el caso de los consorcios Rav 2 y 3, ambos presentaban
enterobacterias y Bacillus subtilis, esta última, a pesar de ser aerobia,
produce sustancias surfactantes mas no las hidroliza. Se puede asumir
que este proceso fue llevado a cabo por las enterobacterias. Resultando
así en un porcentaje de degradación de entre un 85 y 99% para ambos
consorcios.

IV. CONCLUSIONES:
- La biodegradación de xenobióticos, como tintes o detergentes, pude llevarse
a cabo gracias a microorganismos capaces de metabolizarlos, sin embargo,
no pueden utilizarlos como única fuente de carbono o energía, por lo que
necesitan de fuentes de carbono orgánicas o inorgánicas, además del
xenobiótico, para crecer.
- Estudios sobre la hidrolisis o degradación de tintes y detergentes apoyarían
a proyectos futuros de biorremediación. Como una característica principal de
estos compuestos es la de ser recalcitrantes, serian una pieza clave en la
recuperación de ambientes contaminados con estos compuestos.

V. CUESTIONARIO:
1. ¿Qué es un colorante? ¿a que se debe su capacidad tintoria?
- Un colorante es una sustancia capaz de teñir fibras animales y
vegetales. Estas sustancias son capaces de absorber determinadas
longitudes de onda, se fijan en otras sustancias y las dotan de color
de manera estable ante la luz. Para que un tinte pueda dar color,
necesita tener en su molécula grupos funcionales cromóforos, que
hacen que la molécula absorba en la región visible del espectro
electromagnético.
2. ¿Qué clase de colorantes se usan en la industria textil?
- Colorantes tipo azo, diazo y antraquinonas

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 3. ¿Cómo optimizaría el proceso de degradación de colorantes? Tome en
cuenta todas las fases del bioproceso
- Se podría trabajar en cultivos con el tinte a estudiar a distintas
concentraciones si el objetivo es ver la degradación del colorante. Si
la concentración es menor, hay más probabilidad que el
microorganismo degrade este colorante, con tal que la concentración
de tinte sea mayor a la de la fuente de carbono, ya que lo que se
busca es la metabolización del tinte por el estrés.
- Se podrían agregar inductores como fuentes de carbono,
aminoácido, etc.

VI. BIBLIOGRAFIA:
- Irene Estela Pérez-Aradros, Agentes xenobióticos y su degradación
microbiológica.
- Volesky, Bohumil (1990). Biosorption of Heavy Metals. Florida: CRC Press
- Stolz, A., 2001. Basic and applied aspects in the microbial degradation of azo
dyes. Applied Microbiology and Biotechnology 56, 69–80.
- Nachiyar, C.V., Rajkumar, G.S., 2005. Purification and characterization of an oxygen
insensitive azoreductase from Pseudomonas aeruginosa. Enzyme and Microbial
Technology 36, 503–509
- Anjali Pandey, Poonam Singh, Leela Iyengar, 2006. Bacterial decolorization and
degradation of azo dyes. International Biodeterioration & Biodegradation 59 (2007)
73–84
- Holme, I., 1984. Developments in the chemistry and technology of organic dyes. In:
Griffiths, J. (Ed.), Ecological Aspects of Colour Chemistry. Society of Chemistry
Industry, Oxford, pp. 111–128.
- Van Ginkel, C. G. (1996). Complete degradation of xenobiotic surfactants by
consortia of aerobic microorganisms. Biodegradation, 7(2), 151–164.
- Hammerton, C. (1956). Synthetic detergents and water supplies. Part II. The
Chemical constitution of anionic surface surface active compounds and their
susceptibility biochemical oxidation. Proceedings of the Society for Water
Treatment and Examination 5: 145-174
- Huddleston, R. y Allred, R. (1963). Microbial oxidation of sulphonates
alkylbenzenes. Dev. Ind. Microbial. 4: 24-38.
- Cedeño Vinces, K. y Valverde Mina, M. (2017). Análisis del grado de
biodegradabilidad de dos surfactantes comerciales: dodecil benceno
sulfonato de sodio y nonil fenol 9 moles. Universidad de Guayaquil