MATERIALES Y EQUIPO

 Membranas filtrantes de 0,45 µm de tamaño de poro

 Soporte del filtro con embudo
 Sistema de vacio
 Pipetas estériles de 10 y 1 mL.
 Estufa de cultivo
 Asa de siembra
 Pinzas estériles

METODOLOGÍA
Medio de cultivo selectivo para Coliformes Totales: Caldo Endo, MF

Se utiliza el Caldo Endo para el recuento de coliformes totales. Este es un medio

para el aislamiento selectivo de los coliformes totales pues lleva inhibidores para el
resto de microorganismos. El lauril sulfato y desoxicolato que forman parte de la
fórmula del medio permite crecer a los coliformes lactosa positivo pero inhibe el
crecimiento del resto de bacterias acompañantes. Las colonias lactosa positiva se
colorean de rojo por la liberación de fucsina del sulfato de fucsina. Las colonias
de E. coli y de los coliformes muestran generalmente un brillo metálico.

Se utiliza este medio para la identificación y recuento de coliformes en agua, leche

y otros líquidos mediante filtración sobre membrana. Medio sólido selectivo, que
se prepara en placas para filtración de membrana.

Medio líquido selectivo, que se deposita en placas de cultivo que llevan una
almohadilla absorbente (aproximadamente 2 mL por placa)

Se deposita en placas de
Medio líquido selectivo
cultivo que llevan una
Endo-MF
almohadilla absorbente.

En la placa se coloca
Aproximadamente se
sobre el medio de cultivo
colocan 2 mL de medio
el filtro de membrana
de cultivo por placa.
(una vez filtrada el agua).

Diagrama 1. Medio de cultivo selectivo para Coliformes Totales: Caldo Endo, MF.
Técnica de filtración sobre membrana

Colocar la membrana
Desenvolver el filtro filtrante de 0,45 µm de
Separar el embudo de
de la envoltura con la tamaño de poro sobre el
la base del filtro.
que se ha esterilizado portafiltros de las base del
mismo.

Colocar el embudo sobre la

base, teniendo cuidado de
Filtrar 100 mL de la El manejo de las
no lesionar la membrana y
muestra de agua a membranas se debe
que esta quede bien
través del filtro. Poner realizar con pinzas de
centrada. La membrana
en marcha el sistema punta plana o guantes de
filtrante queda ahora
de vacio. goma para no lesionarlas
situado entre el embudo y
la base-soporte del filtro.

Colocar la membrana sobre la

Una vez filtrada toda
la muestra, parar el
sistema de vacio y
separar el embudo de
la base del filtro.
placa con la almohadilla
absorbente y el caldo Endo, de
Retirar con pinzas
forma progresiva para evitar
estériles o flameadas
que queden burbujas entre la
la membrana filtrante.
membrana y el medio y que
quede asegurado el contacto
entre la membrana y el medio.

En este medio todos los coliformes

crecen formando colonias de color
rojo oscuro con el característico
brillo metálico de Escherichia coli de Colocar la tapa de la placa de
color verde-azulado aunque en los Petri, invertir la placa e
géneros Citrobacter, Klebsiella y incubar en estufa a 37ºC
Enterobacter no es tan intenso como durante 24 horas
en Escherichia y puede pasar
desapercibido.

Los resultados se
expresan en UFC/100
mL

Diagrama 2. Técnica de filtración sobre membrana

CÁLCULOS
Expresión de los resultados

Cuando se obtienen recuentos de más de 200 colonias sobre una misma

membrana pueden dar resultados erróneos debido a la superpoblación, ya que lo
que aparece como una colonia puede ser originado por varias bacterias bajo
condiciones de hacinamiento. En estos casos debemos volver a muestrear el agua
y analizar muestras más diluidas.
Por otra parte, un número de colonias inferior a 10 ó 20 por membrana es poco
fiable como base para establecer cuantitativamente la concentración bacteriana de
la muestra. Por ejemplo, la obtención de 2 colonias a partir del análisis de 1 ml de
un agua, no nos permite afirmar que esa agua contenía 200 colonias en 100 ml.
En estos casos conviene repetir el análisis filtrando un volumen de muestra mayor.

Cuando el recuento de colonias está entre 20-200, los resultados se expresan:

Si hemos analizado una muestra sin diluir: Recuento de colonias = UFC / volumen
de muestra filtrada.
Si hemos analizado una muestra diluida: Recuento de colonias x Factor de
dilución = UFC/ volumen de muestra filtrada.

ANEXOS

ÍNDICE DE DIAGRAMAS

Diagrama 1. Medio de cultivo selectivo para Coliformes Totales: Caldo Endo, MF. ........... 1
Diagrama 2. Técnica de filtración sobre membrana ........................................................... 2