Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

Escuela Académico Profesional de Farmacia y Bioquímica
Laboratorio de Toxicología y Química Legal

CURSO: ANÁLISIS CLÍNICOS II

Determinación de Cutt-off
Determinación de Antígeno de
superficie VHBs Ag

DOCENTE: Dr. Flores Eduardo

INTEGRANTES DEL GRUPO:

 Huayacallán Salazar,Carmen
 Intusca Huayta Jeanette Yrené
 Moloche Diaz , Marianella
 Victoria Tinoco, Lourdes

HORARIO DE PRÁCTICA:
 Día: Jueves
 Hora: 10:00 a.m-2:00 p.m.
 2018

DETERMINACIÓN DE CUTT-OFF
I. FUNDAMENTO DE LA PRUEBA
Los pocillos de la policubeta están recubiertos con antígenos recombinantes derivados de la
región estructural (core) y de la no estructural (NS3, NS4 y NS5) del virus de la hepatitis C. La
muestra diluida se incuba en los pocillos. Si los anticuerpos contra el virus están presentes en la
muestra, éstos se unen a los antígenos del pocillo. El material no unido es removido por lavado.
En el paso siguiente se agrega el conjugado, que consiste en un anticuerpo monoclonal antiIgG
humana conjugado con peroxidasa. Este se une a los complejos antígeno-anticuerpo, formados
previamente. El conjugado no unido se remueve por lavado. Posteriormente, se agrega una
solución conteniendo tetrametilbencidina y peróxido de hidrógeno. Las muestras reactivas
desarrollan color celeste que vira al amarillo cuando se detiene la reacción con ácido sulfúrico1.
O2
Enzima
H2O2 1/2O + H2O Bencidina (THB) color azul …….Amarillo

II. RESULTADOS

Cálculo del valor del corte: C.D = Nc + 0,12

Nc= Promedio Abs Control negativo
Nc= Abs B1 + Abs C1
C.O= 0,030 + 0,12 = 0,150

C.O = (0,081 + 0,077)/2 + 0,012

C.O = 0,07 + 0,12 = 0,199
0,078/0,199 = 0,39< 1

Prueba Negativa: No han sido detectados los anticuerpos VIH -1/2 o antígeno p24
con el kit de ELISA de Wantai Screening VIH (1+2) Ag&Ab.

2
 2018

III. CUESTIONARIO
1.- ¿Qué es y para qué sirve el complejo Avidina-Biotina?
La Interacción Avidina-Biotina 2

La avidina es una glicoproteína que se encuentra en claras de huevo, Cada

subunidad contiene un sitio de unión para biotina o vitamina H, y una modificación de
oligosacárido (ligada a Asn). La proteína tetramérica es altamente básica, con un pI
de aproximadamente 10. La interacción de la biotina con la avidina es una de las
afinidades no covalentes más fuertes conocidas. La estructura nativa tetramérica de la
avidina es resistente a la desnaturalización en condiciones caotrópicas extremas.
Cuando la biotina se une a la avidina, la interacción promueve una estabilidad aún
mayor del complejo. Un complejo de avidina y biotina (ABC) es resistente a la
descomposición en presencia de hasta 8 M deguanidina a pH 5.2. Se requiere un
mínimo de guanidina de 6 a 8 M a pH 1,5 para inducir la disociación completa
del complejo de interacción avidina- biotina.
La fuerza de la interacción no covalente avidina- biotina junto con su resistencia a la
descomposición lo hace extraordinariamente útil en la química de los
bioconjugados. Las moléculas biotiniladas y los conjugados de avidina pueden
"encontrarse" en las condiciones más extremas para unirse y formar complejos. La
bioespecificidad de la interacción es similar al reconocimiento de anticuerpo-antígeno
o receptor-ligando, pero en un nivel mucho más alto con respecto a las constantes de
afinidad. Las variaciones en la sal del tampón, el pH, la presencia de
desnaturalizantes o detergentes y los extremos de temperatura no evitarán que se
produzca la interacción.

El complejo avidina-biotina se ha utilizado para aislamiento (cromatografía de

afinidad), localización (citoquímica de afinidad, citometría celular y tecnología de
transferencia) y diagnóstico (inmunoensayo, histopatología y sondas de
genes). Recientemente, el uso del sistema se ha extendido para incluir otras áreas.

3
 2018

IV. REFERENCIA BIBLIOGRÁFICAS

1. Fundamento de cut off. HCV. Ctado el 28 de octubre del 2018. Disponible en:
http://www.wiener-
lab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum%20espanol/hcv_elisa_3_ge
neracion_sp.pdf.
2. Hermanson Greg T.Interacción Avidina-Biotina Técnicas de bioconjugado
(Tercera edición) , 2013. Disponible en:
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B978012382239000011X

4
 2018

DETERMINACIÓN DE ANTÍGENO SUPERFICIE

VHBs Ag
I. FUNDAMENTO DE LA PRUEBA
Es un inmunoensayo cromatografico de flujo lateral .La prueba casete
consiste en:1) una membrana con un conjugado coloreado de bordoña que
contiene anticuerpos anti-HBsAg conjugados con oro coloidal y un control
de anticuerpo conjugado con oro coloidal,2)una membrana de nitrocelulosa
que contiene líneas de prueba (línea T) y una línea de control(línea C).La
línea T esta precubierata con otro anticuerpo ant-HBsAg y la línea C esta
precubierta con un control de anticuerpo.

II. RESULTADOS

Prueba negativa

III. REFERENCIA BIBLIOGRÁFICAS

1. Fundamento de ANTÍGENO SUPERFICIE VHBs Ag Ctado el 28 de

octubre del 2018. Disponible en: http://www.wiener-
lab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum%20espanol/hcv_
elisa_3_generacion_sp.pdf.

5
2018