UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

FACULTAD DE INGENIERÍA

ESCUELA ACADÉMICA
PROFESIONAL DE
INGENIERÍA AGRÓNOMA

AUTORES:

ROJAS GARAY LILIANA

VASQUEZ REYNA DAMARIS

DOCENTE:

ESPEJO VARGAS EDDY

TEMA:

Practica N° 6

“AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS DE SUELO”

NUEVO CHIMBOTE – PERÚ 2018

 I. INTRODUCCIÓN

En la naturaleza, la mayoría de los microorganismos no se encuentran aislados, sino

integrados en poblaciones mixtas. Para llevar a cabo el estudio de estos
microorganismos y de sus propiedades, es necesario separar unos de otros y trabajar con
especies aisladas, obteniendo cultivos axénicos o puros.
Un cultivo axénico o puro es aquel que contiene un sólo tipo de microorganismo y que
procede generalmente de una sola célula; el crecimiento de ésta origina, en medio
sólido, una masa de células fácilmente visible que recibe el nombre de colonia. Para
obtener cultivos puros a partir de una población microbiana mixta, se utilizan las
denominadas técnicas de aislamiento, que fueron desarrolladas durante el siglo XIX.
En un principio, Lister utilizó diluciones seriadas en medio líquido con esta finalidad,
pero la presencia de contaminación, es decir, de microorganismos no deseados, dificultó
el aislamiento. La escuela de Robert Koch introdujo los medios sólidos,
complementados con agar, y las placas de Petri en Bacteriología, permitiendo así la
separación física de las colonias sobre la superficie del medio de cultivo o en el interior
del mismo. El aspecto de las colonias sirve para diferenciar distintas especies
microbianas.
La diversidad y actividad de los microorganismos del suelo son fundamentales para la
fertilidad, el funcionamiento equilibrado y la estabilidad de los agrosistemas. Más
concretamente, algunos microorganismos asociados a las raíces presentan características
que pueden ser beneficiosas para las plantas y tener una aplicación como inoculantes
biológicos respetuosa con el medio natural siendo, por tanto, muy interesantes en un
contexto de agricultura ecológica, bien sea como biofertilizantes o como agentes de
biocontrol.
El fósforo se encuentra en muchos suelos precipitado en forma insoluble, no disponible
para la planta. Existen microorganismos rizosféricos (PhosphateSolubilizing Bacteria)
que solubilizan estos precipitados dejándolos disponibles para su absorción (Rodríguez
y Fraga, 1999) y produciendo una mejora en los cultivos.
A pesar de la presencia de hierro en el suelo, en numerosas ocasiones, las elevadas
concentraciones de carbonato cálcico bloquean su uso por la planta, aunque no su
absorción, provocando una carencia fisiológica (clorosis férrica). Determinados
microorganismos rizosféricos tienen la capacidad de sintetizar compuestos de bajo VII
Congreso SEAE Zaragoza 2006 Nº 43 peso molecular con gran afinidad por el hierro,
sideróforos, que secuestran dicho metal del suelo y lo hacen asimilable para la planta.
Agrobacterium tumefaciens es una bacteria del suelo que provoca tumores vegetales en
numerosos patrones de frutales .
II. OBJETIVOS
 Aislar bacterias productoras de proteasas a partir del suelo del cultivo
de betarraga.

 Seleccionar las colonias productoras de proteasas a través de los

halos que se forma en el agar leche.
  Observar la morfología de las bacterias aisladas a través de la
coloración Gram.
III. MATERIALES Y PROCEDIMIENTO:

Materiales:

 Muestra de Suelo del cultivo de betarraga

 Balanza
 4 tubos de ensayo
 Agar nutritivo
 Placas Petri con agar leche
 Portaobjetos y cubreobjetos
 Microscopio
 Incubadora

Procedimiento:

a) Recolección de la muestra
 Recolectar la muestra de suelo en una bolsa de primer uso, y
transportarlo al laboratorio
b) Preparación de la muestra de suelo
 Homogenizar las muestras
 Retirar las partículas gruesas
 Pesar 10g y colocarlo en un bunker, y contenerlo 90ml de agua de caño
c) Diluciones
 Realizar las diluciones decimales en los tubos de ensayo con agua
destilada
 d) Siembra
 A partir de las ultimas diluciones sacar 0,1 ml y transferir a las placas de
agar leche
 Encubar a 35° por 24 horas

e) Aislamiento y Selección
 Identificar las colonias productoras de proteasas considerando las que
tienen halos transparentes a su alrededor
 Transferir las colonias agar nutritivo Encubar a 35°por 24 horas
Transcurrido el tiempo de incubación realizar una coloración gram para observar
la morfología de las bacterias

IV. RESULTADOS
Bacterias realizadas la coloración Gram

Halos formados en el Agar leche

V. DISCUSIONES
VI. CONCLUSIONES
o Aislamos bacterias productoras de proteasas a partir del suelo del cultivo
de betarraga, en la cual el suelo lo obtuvimos de la Universidad nacional
del Santa .

o Seleccionamos las colonias productoras de proteasas a través de los halos

que se forma en el agar leche., a través de la muestra de suelo del cultivo
de betarraga en la cual sacamos 0,1ml y lo transferimos en el agar leche,
encubamos a 35° por 24 y observamos los resultados

o Observamos la morfología de las bacterias aisladas a través de la

coloración Gram en la cual observamos bacterias gran positivas y de
forma de bacilos.
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
Linkografias:

 https://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtual/pluginfile.php/152380/mod_resource/cont
ent/1/2018%20tp2%20bioq%20y%20lcta.pdf
 https://www.agroecologia.net/recursos/publicaciones/publicaciones-
online/2006/CD%20Congreso%20Zaragoza/Ponencias/43%20Garc
%C3%ADaGalav%C3%ADs%20Com-%20Aislamiento.pdf
 http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/PracticaAislamientoDeMicroorganis
mos_21549.pdf

CUESTONARIO
 1.Hacer un diagrama de flujo

HOMOGENIZARLO Y
RECOLECTAR MUESTRA TRANSPORTAR AL SEPARAR LAS
DE SUELO LABORATORIO PARTÍCULAS GRUESAS

REALIZAR DILUCIONES TRATAMIENTO DE 80°

PESAR 10g Y COLOCAR
POR 10 min
CON 90ml DE AGUA

SACAR 0,1 ml Y
ENCUBAR A 35 ° POR OBSERVAR EL
TRANSFERIR CON AGAR
24h CRECIMIENTO
LECHE
MICROBIANO

TRANSFERIR EL AGAR
ENCUBAR A 35° POR 24h NUTRTIVO IDENTIFICAR LAS
COLONIAS

REALIZAR LA OBSERVAR LA
COLORACION GRAM MORFOLOGIA DE LAS
BACTERIAS