Diagnostico de mycobacterium

1. Baciloscopia(observar BAAR)
Coloracion de zihel neelsen
1. Frotis en lamina portaobjetos
2. Fijado al calor suave
3. Decoloracion alcohol acido
4. Lavado
5. Coloracion azul metileno
6. Observacion al microscopio 1000x

Escala semicuantitativa de reporte

-no se observa baar en 100 campos

Pausibacilar de 1 a 9 baar en 100 campos y se repite

+se observan de 10 a 100 baar en 1000 campos

++ se observan de 1 a 10 baar por campo en 50 campo

+++ se observan mas de 10 por campo en 20 campo

Para fines de seguimientos de tratamiento

Otros metodos:

Cultivo pcr sensibilidad

APUNTES

Por ejemplo algunos medios de cultivo contienen sales biliares u otras sustancias como
cristal violeta o verde brillante que inhiben el crecimiento de las bacterias gram +. Estos
medios de cultivo son, entre otros, "agar MacConkey", "agar Eosina- Azul de Metileno" y
"agar Endo

NO existen medios de cultivo que sean totalmente selectivos para un microorganismo.

Por ejemplo no existen medios de cultivo que sean totalmente selectivos para el
crecimiento de Salmonella ya que en los medios que se pueda desarrollar este
microorganismo habitualmente lo hacen también otros miembros de la
familia Enterobacteriaceae a la que pertenece.

AGAR SANGRE En este medio de cultivo podemos diferenciar algunos microorganismos

según el tipo de hemólisis que producen
Microorganismos alfa-hemolíticos: producen una zona de hemólisis pequeña y verdosa
(hemólisis parcial).
Microorganismos beta-hemolíticos: producen una zona de hemólisis amplia y clara
(hemólisis total).
Microorganismos gamma-hemolíticos: no producen hemólisis.

Otros medios diferenciales son los que contienen un determinado azúcar y un indicador de
pH. Podemos distinguir los microorganismos que fermentan el azúcar de los que no lo
hacen porque los primeros provocan una disminución del pH y por lo tanto un cambio de
color del indicador.

Ejemplo de lo anterior: medios de cultivo que tienen lactosa y Rojo Fenol.

Los microorganismos Lactosa negativos dan lugar a colonias de color rojo o rosa.
Los microorganismos Lactosa positivos dan lugar a colonias de color amarillo (por viraje
del indicador)

Un ejemplo es el agar MacConkey.

Es selectivo porque contienen sales biliares que inhiben el crecimiento de los Gram
positivos
Es diferencial porque contiene Lactosa y Rojo Fenol lo que permite diferenciar los
microorganismos que fermentan las Lactosa (lactosa positivos) de los que no lo hacen
(Lactosa negativos).

Tipos de agares

Agar Chocolate (CHOC) es un medio de cultivo enriquecido y no selectivo. Es una

variante del agar sangre. Contiene glóbulos rojos, que han sido lisados por el suave
calentamiento a 56 °C. Este agar se usa para el delicado y exigente crecimiento de bacterias
respiratorias, como por ejemplo Haemophilus influenzae.
Estas bacterias necesitan factores de crecimiento, como el NAD y hemina, componentes
que podemos encontrar dentro de los glóbulos rojos; por lo tanto, un prerrequisito lógico
para el crecimiento es la lisis de los glóbulos rojos. El agar se llama así debido a su
parecido con el chocolate, pero no contiene nada de este.
Debido a que este medio soporta muchos tipos de bacterias, no es muy útil
para coprocultivos.

Streptococcus pneumoniaecreciendo en agar columbia nutrido con sangre de caballo.

Hemólisis alfa. Cepa mucoide aislada de la conjuntiva de un niño de seis semanas de edad.
El agar sangre es una combinación de un agar base (agar nutritivo) con el agregado de 5 %
de sangre ovina, 1también puede usarse sangre humana, para cultivos en una placa de Agar.
El agar sangre aporta muchos factores de enriquecimiento. Se usa también para ver la
capacidad hemolítica de los microorganismos patógenos (que es un factor de virulencia).
Observando los halos hemolíticos alrededor de las colonias se determina el tipo de
hemólisis que posee:2

 alfa: halos verdosos (oxidación de la hemoglobina de los glóbulos rojos a

metahemoglobina en el medio)
 beta: halos incoloros (hemolisis total)
 gamma: inexistencia de halos (sin hemolisis)
Agar MacConkey

Una placa de cultivo de McConkey incubada con E. coli.

El agar MacConkey es un medio de cultivo selectivo y diferencial para bacterias diseñado
para aislar selectivamente bacilos Gram negativos y entéricos (encontrados normalmente en
el tracto intestinal) y diferenciarlos sobre la base de la fermentación de la lactosa.1 El cristal
violeta y las sales biliares inhiben el crecimiento de organismos grampositivos, lo que
permite la selección y el aislamiento de bacterias gramnegativas. Las bacterias entéricas
que tienen la habilidad de fermentar lactosa pueden ser detectadas utilizando
el carbohidrato lactosa y el indicador de pH rojo neutro.2
Los ingredientes necesarios para este medio son los siguientes: sales biliares (medio
inhóspito para el crecimiento de bacterias Gram positivas, excepto Enterococcus y algunas
especies de Staphylococcus), colorante cristal violeta (inhóspito para cierto tipo de bacterias
Gram-positivo), indicador rojo neutro (el cual marca microorganismos que fermenten la
lactosa), lactosa, peptona y cloruro sódico.3

Agar MacConkey con colonias Lac+ (izquierda) y colonias Lac- (derecha).

Sirve como un indicador visual de pH, distinguiendo así las bacterias gram negativas que
pueden fermentar la lactosa (Lac+) y las que no pueden (Lac-).
Lac+[editar]
Al utilizar la lactosa en el medio, las bacterias Lac+ como lo son Escherichia
coli, Enterobacter y Klebsiella producen acidez, lo cual hace que baje el pH de 7,1 ± 0,2 lo
que tiene como consecuencia la aparición de colonias de color rosadas o rojas. Algunas
bacterias en cambio fermentan la lactosa de manera lenta, estas siguen siendo Lac+ por
ejemplo: Serratia y Citrobacter.
Lac-[editar]
Bacterias que no fermenten la lactosa como lo
son Salmonella, Proteus y Shigella utilizaran peptona en su lugar, formando amoníaco, lo
cual incrementa el pH del agar, formando colonias blancas o incoloras.

Agar Manitol salado Permite el crecimiento de bacterias Gram-positivas mientras

inhibe el crecimiento de Gram-negativas. Este medio es importante en el laboratorio
clínico debido a que es capaz de distinguir los microorganismo patogénicos en un
corto periodo de tiempo. Contiene una alta concentración (~7.5%-10%) de sal (NaCl),
haciéndolo selectivo para Staphylococcus (y 'Micrococcaceae) debido su alta
concentración de NaCl es inhibitorio para la mayoría de las bacterias Gram negativas.
Además contiene manitol otro inhibidor de bacterias Gram negativas y un indicador de
pH indicador de fermentación ; rojo de fenol.
Coagulasa-positivo Staphylococcus producen colonias amarillas con zonas amarillas,
mientras que coagulasa-negativo Staphylococcusproducen colonias rojas o
ligeramente rosadas sin cambio alguno al medio. Si un organismo es capaz de
fermentar el manitol, un subproducto ácido es creado que hace que el rojo de fenol
cambie a amarillo. Se usa para el aislamiento selectivo de colonias
de Staphylococcus sospechosas de ser patógenas.

En la práctica hay tres categorías de organismos a los que se puede llamar anaerobios:

 Estrictos u obligados: no pueden vivir o desarrollarse con la presencia de oxígeno.23

 Aerotolerantes: no pueden usar oxígeno para crecer pero toleran su presencia.4
 Facultativos: microorganismos aeróbicos que usan oxígeno si lo hallan, pero pueden desarrollarse
en su ausencia, por medio de procesos de fermentación.