MEDIOS DE CULTIVO

1. OBJETIVOS
 Conocer los diferentes tipos de medios de cultivo existentes para el crecimiento de
microorganismos en el laboratorio.
 Identificar los diferentes pasos a seguir en la elaboración de un medio de cultivo.

2. INTRODUCCION
En los laboratorios de Microbiología se utiliza una gran variedad de medios de cultivos para
mantener las cepas, aislar o identificar microorganismos con varias finalidades: determinar la
existencia de contaminación de alimentos, medicamentos o cosméticos; diagnosticar alguna
enfermedad, elaboración de vacunas bacterianas, etc.

3. MARCO TEÓRICO
De manera general se denomina “Medio de Cultivo” a cualquier material presente una
adecuada combinación de nutrientes para permitir el crecimiento o el incremento del número de
células de una población microbiana.

El objetivo último del cultivo es variado: antibiograma, identificación, multiplicación. Uno de

los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su
crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material
alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los
microorganismos es el Cultivo. Se han preparado más de 10.000 medios de cultivo diferentes.

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una
serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuado,
así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los
nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo
contaminante.
CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
 SEGÚN SU ESTADO FÍSICO

a) LÍQUIDOS:
Usualmente se denominan caldos ya que contienen los nutrientes de suelos en agua.
Permiten obtener suspensiones con un elevado número de microorganismos. Ej.: caldo
nutritivo.

b) SOLIDOS:
Se pueden preparar a partir de medios líquidos a los cuales se les añaden 1.5 a 2 % de
agentes solidificantes como agar, gelatina o sílica gel. Se utilizan con frecuencia en el
aislamiento y mantenimiento de los microorganismos en el laboratorio. Ej.: Agar
nutritivo.

c) SEMISÓLIDOS:
Se pueden preparar a partir de medios líquidos a los cuales se les añaden 0.1 a 0.3% de
agentes solidificantes como agar, gelatina o sílica gel.

 SEGÚN LA NATURALEZA DE SUS CONSTITUYENTES

a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o

vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composición química no se
conoce exactamente.
b) SINTÉTICOS: son los medios que contienen una composición química definida
cualitativamente y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles.
c) SEMISINTÉTICOS: son los sintéticos a los que se les añaden factores de crecimiento
bajo una forma de un extracto orgánico complejo, como por ejemplo extracto de
levadura.

 SEGÚN SU FORMULACIÓN:

a) Químicamente definidos: se conoce la cantidad exacta de cada uno de los compuestos

que hay en el medio.
b) Complejos: se realizan a partir de extractos naturales (extracto de levadura, sangre,
etc.); no se conoce exactamente cuál es la composición del medio; sin embargo,
presenta la ventaja de que ya están presentes todos o casi todos los elementos que una
célula puede requerir.

 SEGÚN SUS PROPOSITOS DE USO:

a) Medio general: medio en donde crecen todo tipo de microorganismos, excepto los que
necesitan condiciones especiales (por ejemplo, agar CLED).
b) Medio selectivo: permite seleccionar el crecimiento de una especie o grupo
determinado (hongos, bacterias entéricas, protozoos...).
 c) Medio diferencial: permite identificar una especie con otra, ambas en el mismo medio.
Puede ser por su crecimiento, su metabolismo, su respiración, etc. (por ejemplo, medio
de McConkey).
d) Medio de enriquecimiento: contiene los nutrientes necesarios para apoyar el
crecimiento de una amplia variedad de microorganismos, se utiliza para la cosecha de
diferentes tipos de microorganismos en un mismo medio.
e) Medio mínimo: contiene la mínima cantidad de nutrientes posible que permite el
crecimiento de una especie.
f) Medio de transporte: preparado para servir como almacenamiento temporal a
especímenes transportados o en transferencia; mantienen su viabilidad y su
concentración simple.

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

Siempre es recomendable y se incluye como una regla básica la de leer las instrucciones de las
etiquetas de los medios de cultivo, por ello no se recomienda re envasar los medios sino,
mantenerlos en los recipientes originales.

Para lograr una preparación adecuada de los medios de cultivo es recomendable seguir las
siguientes instrucciones:

 PREPARACION DE LA SOLUCION

Los medios de cultivo deben ser mezclados o hidratados en recipientes limpios, libres de
detergente. El agua que se utiliza para su mezclado debe ser destilada o desmineralizada.

Los medios de cultivo que no contienen agar ni gelatinas, (liquidos) pueden ser disueltos en
agua fría o ligeramente caliente. Pero si contienen alguna de las dos sustancias deben ser
calentados hasta ebullición para solubilizar el agar. Nunca sobre calentar porque se puede alterar
su composición.

Los medios que presentan turbidez debido a sus componentes insolubles, deben ser agitados
para homogenizarlos adecuadamente.

 ESTERILIZACION

Se esteriliza por autoclave o por ebullición de acuerdo a las instrucciones para cada preparación.
Cuando se esterilizan volúmenes grandes de medio se debe aumentar el tiempo de esterilización
para permitir la penetración del calor al interior del recipiente.

 SERVIDO DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Una vez estéril los medios de cultivo deben ser enfriados a temperatura promedio de 45° - 55°C
para ser adicionados en los recipientes finales teniendo en cuenta nuevamente las técnicas
asépticas.
4. MATERIALES

 4 Erlenmeyer de 100ml
 8 cajas de Petri
 8 tubos de ensayo
 4 pipeta de 10 ml
 4 probeta de 100ml
 Espátula
 Balanza
 Autoclave, estufa y horno
 Agar nutritivo EMB y caldo nutritivo

5. PROCEDIMIENTO

 Realizar los cálculos respectivos para agar y caldo teniendo en cuenta que para para
cada caja deben servir 15-18 ml de agar y para cada tubo entre 7-10 ml de caldo.
 Ejemplo: Para preparar 8 cajas con agar, multiplique 8 po15 ml = 120ml
 Mida el volumen de agua destilada según sus cálculos.
 Teniendo en cuenta el volumen de agua a utilizar, haga la relación de polvo de agar que
debe pesar de acuerdo a lo especificado en la etiqueta del medio.
 Pese la cantidad del medio necesario de acuerdo a los cálculos.
 Mezcle el polvo con la mitad del volumen de agua medida anteriormente, agite y
adicione el restante de agua
 Lleve a hervir si es necesario
 Esterilizar en el autoclave a 15 lb de presión a 121 °C por 15 min.
 Sirva 15-18 ml aproximadamente de agar en cada caja cuando la temperatura este a 50-
55 °C, tápelas y deje solidificar, Lo mismo con los caldos sirva 7-10 ml en cada tubo y
tápelos.
 Déjelos enfriar y guárdelos en la nevera hasta su utilización.

6. CUESTIONARIO
1.- ¿Qué es Agar, de donde se extrae?

Agar-Agar, es un extracto de color blanco-crema que se obtiene de distintos tipos

de algas rojas, como el Gelidium, y aunque principalmente se
recogen en el Océano Atlántico, también se puede encontrar
en el Mar Cantábrico y Océano Pacífico. Es muy rico en
fibra soluble y minerales, por lo que ayuda a regular el
tránsito intestinal, colesterol, diabetes, y prevenir el
sobrepeso. Debido a su capacidad de absorber agua, se utiliza
en cocina para espesar y gelificar alimentos, ya sean dulces o
salados, sin añadir ningún sabor, como la gelatina.
2.- ¿Qué es gelatina de donde se extrae?

La gelatina es una proteína natural que se obtiene del colágeno procedente de los tejidos
conectivos de animales (la gelatina vegetal se conoce como agar-agar). Para su obtención, se
extraen por hidrólisis las proteínas del colágeno obtenidas de la piel, hueso hervido y molido,
pezuñas, huesos, tendones y vísceras de ganado vacuno, porcino, ovino, equino y avícola.
Es decir, todo lo que no vale de los animales para venderlos en las carnicerías.

3.- ¿Por qué se utiliza agua destilada en la preparación de los medios de cultivo?

Para la preparación de medios, soluciones y tampones, debe utilizarse agua destilada que haya
sido sometida a controles periódicos que aseguren su calidad.

 Requisitos del agua destilada: Se debe llevar un registro actualizado de los mismos

 Conductividad, pH,
 Contaminación microbiana,
 Libre de sustancias bactericidas
 Inhibidoras o interferentes,

4.- Elabore una tabla indicando medio de cultivo, azúcar fermentable, sistema indicador.

MEDIO DE M.O QUE AZÚCAR TIPO DE SISTEMA

CULTIVO CRECE FERMENTAB MEDIO INDICADOR
LE
Agar EMB E.coli Lactosa y/o Medio de Indicadores: eosina y
sacarosa cultivo azul de metileno.
selectivo y
diferencial
Agar E. coli, Lactosa Medio de Indicadores: cristal
MacConkey Citrobacter, cultivo violeta, rojo neutro.
Salmonella, selectivo y
Shigella diferencial
Agar citrato de Klebsiella citrato Medio de Indicadores: azul de
Simons pneumoniae, S. cultivo bromotimol
typhimurium. diferencial

Agar LIA Salmonella spp glucosa Medio de Indicador: citrato de

cultivo hierro y amonio, y el
diferencial tiosulfato de sodio,
purpura de
bromocresol
Agar SS Salmonella y lactosa Medio de Indicadores: rojo de
Shigella. cultivo metilo
diferencial
Agar TSI P. mirabilis, S. Glucosa o Medio de Indicadores: rojo de
typhimurium, sacarosa, lactosa cultivo fenol
S. enteritidis. diferencial
 Agar TCES Vibrio sacarosa Medio de Indicadores: azul de
(Agar Tiosulfato cholerae, cultivo timol y azul de
Citrato Bilis Vibrio selectivo bromotimol
Sacarosa) parahemolyticu
s.
Agar manitol Staphylococcus Manitol Medio de Indicador; rojo de
aureus, cultivo fenol
Staphylococcus selectivo y
epidermidis, diferencial.
Klebsiella
pneumonia.

Agar bilis verde Coliformes Lactosa y Medio Indicadores: rojo de

brillante. totales y sacarosa selectivo fenol
fecales,
Klebsiella
pneumoniae,
Enterobacter
spp.