ECOLOGÍA MICROBIANA
Medios de cultivo
cultivo puro o axenico cultivo que contiene una única clase de microorganismos
Macronutrientes se requieren en grandes cantidades micronutrientes se necesitan en menor cantidad trazas
Los macronutrientes más importantes son el carbono 50% y el nitrógeno 12%
Otros elementos esenciales en menores cantidades son el fósforo para la síntesis de ácidos nucleicos y fosfolípidos
el azufre en la cisteína y metionina en las vitaminas y en los sulfatos o sulfuros el potasio es una enzima el magnesio
como estabilizador de los ribosomas la membrana celular y los ácidos nucleicos el calcio para el crecimiento
termorresistencia de las endosporas el sodio para microorganismos marinos
Algunos elementos traza son el hierro Qué es un elemento clave en los citocromos y las proteínas implicadas en
el transporte de electrones que contienen hierro y azufre. Los micronutrientes desempeñan un papel estructural
en varias enzimas
Factores de crecimiento: Son compuestos orgánicos que se necesitan en pequeñas cantidades ejemplo vitaminas
aminoácidos purinas y pirimidinas
Micronutrientes : Boro cromo cobalto cobre hierro manganeso molibdeno níquel selenio tungsteno vanadio y zinc
Medios de cultivo son las soluciones de nutrientes utilizadas para cultivar microorganismos en el laboratorio
Condiciones del medio de cultivo:
o Temperatura optima/idea: (según la especie microbiana => psicrófilas <20ºC; mesófilas 18-45ºC;
termófilas > 45ºC; las bacterias patógenas del hombre 35-37ºC)
o Grado de humedad (cantidad de agua que necesita para crecer)
o pH adecuado: pH acido => Tiobacilos (cerca a 0); pH alcalino => bacilos ureasa positivo/ Proteus (en torno
a 8) y Vibrio cholerae (pH 9) ( acidos hongos, bacterias neutros a ligeramente alcalinos)
o Presencia o ausencia de oxigeno: aerobias y anaerobias
o Nutrientes y factores de crecimiento
Clasificación por su Estado: 1)Medios líquidos, 2)Medios sólidos: llevan un agente solidificante (Agar)
concentración del 1,5%., 3) Medios semisólidos: agar a una concentración del 0,7%.
Clasificación por su Composición:
o Medios sintéticos: químicamente definidos. Llevan fuente de carbono, fuente de nitrógeno, sales (iones :P, K,
Mg, Fe, Ca...)
o Medios complejos: emplean hidrolizados de productos animales o vegetales como caseína carne soja extracto
de levadura que no están definidas químicamente
Clasificación por por su función:
o Medios de enriquecimiento: : favorecen el crecimiento de un tipo de microorganismo para su aislamiento,
medio complejo al que se le añade nutrientes adicionales como suero o sangre (heterótrofos exigentes).
Ejemplo: adicción de sangre, suero o extractos de tejidos de animales y plantas.
o Medios selectivos: compuestos que inhiben selectivamente el crecimiento de algunos microorganismos pero
no el de otros. Es de gran utilidad para el aislamiento de microorganismos a partir de una población microbiana
mixta.
o Medios diferenciales: Aquel al que se le añade un colorante para permitir la diferenciación de reacciones
químicas particulares que ocurren durante el crecimiento, son útiles para distinguir especies bacterianas. Ej:
Agar sangre diferencia hemolíticos de no hemolíticos; McConkey diferencia lactosa (+) de lactosa (-).
o Medios de mantenimiento: Suelen ser distintos a los de crecimiento óptimo ya que el crecimiento rápido y
prolífico suele ocasionar la muerte rápida de las células. Ejemplo: al añadir glucosa y utilizarla los
microorganismos producen ácidos, acidificándose el medio por lo que es preferible no utilizar glucosa en los
medios de mantenimiento.
o medio enriquecido: caldo o agar nutritivo ricos por las peptonas que contienen
Técnica aséptica de esterilización de medios de cultivo: calor húmedo autoclave
Agar :polisacárido derivado de las algas rojas
Medios de cultivo de algas: medio Miguel, medio yashima, medio de guillar F/2, medio de guillar-stein para
organismos fotosintéticos sales minerales y microelementos pH de 7 a 9
Medios de cultivo para hongos: PDA y Saboread, necesita almidones y pH ácido
Medios de cultivo para protozoarios: requiere hospederos, sangre o suero (cultivos celulares artificiales,
embriones animales y animales de experimentación)
Medios de cultivo para bacterias: Agar nutritivo
Agar EMB : (eosina, azul de metileno, “eosin-methylen blue”, Agar de Levine) Es un medio diferencial y selectivo
para aislar y detectar enterobacterias en muestras mixtas. Los colorantes de anilina (eosina y azul de metileno)
inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas y a las Gram negativas exigentes. También se combinan
precipitando a pH ácido, actuando como indicadores de producción de ácidos (Los productores más débiles de
ácidos, forman colonias de color violeta). El medio incluye lactosa, lo que permite la diferenciación de los
fermentadores de lactosa (Escherichia coli, producen colonias de color negro verdoso con brillo metálico) de los
no fermentadores (transparentes).
Agar nutritivo: Medio sólido que se prepara añadiendo agar a un caldo nutritivo. Utilizado para propósitos
generales, para el aislamiento y recuento de microorganismos con escasos requerimientos nutricionales. Su uso
está descripto en procedimientos para el análisis de alimentos, aguas y otros materiales de importancia sanitaria.
No selectivo, en el cual la pluripeptona y el extracto de carne constituyen la fuente de carbono, nitrógeno y
aportan nutrientes para el desarrollo bacteriano. El agregado de cloruro de sodio mantiene el balance osmótico y
el agar es el agente solidificante.
Agar salino manitol (SM, MS “mannitol saline”, Medio de Chapman) Es un medio selectivo para estafilococos
debido a la alta concentración de cloruro sódico (75 g/L). Incorpora manitol como fuente de carbono y rojo fenol
como indicador, lo que permite identificar los estafilococos patógenos fermentan el manitol y producen colonias
amarillas. Y los estafilococos no patógenos no lo fermentan y producen colonias de color rosa.
Agar sangre (AS ó BA, blood agar) Medio muy rico que permite el crecimiento de todos los microorganismos con
importancia clínica excepto el de los más exigentes. Se prepara añadiendo un 5% de sangre desfibrinada (oveja,
caballo, conejo, etc.) a un agar base rico (agar Columbia, por ejemplo).Se considera un medio diferencial las
colonias se determina el tipo de hemólisis que poseen: alfa, beta o gamma. observarla contra la luz. La hemólisis
de tipo alfa es una hemólisis incompleta, caracterizada por la destrucción parcial de la membrana de los eritrocitos
y pérdida de algo de hemoglobina en el agar (coloración verdosa alrededor de la colonia). La beta-hemólisis se
caracteriza por la destrucción total de la membrana (un halo transparente alrededor de la colonia). Cuando los
microorganismos no producen ningún tipo de hemólisis se dice que son gamma-hemolíticos.
Agar SS (Salmonella-Shigella) Lleva sales biliares, citrato sódico y férrico, tiosulfato y el colorante verde brillante.
El carácter diferencial se basa en la fermentación de la lactosa. Incorpora rojo neutro. Las colonias lactosa positivas
son de color rojo, mientras que las lactosa negativas son transparentes (Shigella). Las colonias de Salmonella son
transparentes con el centro negro. En el medio de cultivo la pluripeptona y el extracto de carne aportan los
nutrientes para el desarrollo microbiano. Las sales biliares y el verde brillante inhiben el desarrollo de una amplia
variedad de bacterias Gram positivas, de la mayoría de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp. La
lactosa es el hidrato de carbono fermentable. El tiosulfato de sodiopermite la formación de SH2 que se evidencia
por la formación de sulfuro de hierro. El rojo neutro es el indicador de pH y el agar es el agente solidificante.
C (cetrimida-agar) Medio utilizado para el aislamiento selectivo de Pseudomonas aeruginosa y de otras especies
del género. Es éste un medio muy semejante al King A, en el cual la peptona de gelatina aporta los nutrientes para
el desarrollo microbiano. el cloruro de magnesio y el sulfato de potasio promueven la formación de piocianina,
pioverdina, piomelanina y fluoresceína de P. aeruginosa. La cetrimida es un detergente catiónico que actúa como
agente inhibidor, libera el nitrógeno y el fósforo de las células de casi toda la flora acompañante, aunque inhibe
también algunas especies de Pseudomonas. El agar es el agente solidificante. La presencia de un color verde-
azulado corresponde a producción de piocianina, mientras que un color verde corresponde a la producción de
pioverdina y un color rosa claro, rojizo o marrón oscuro corresponde a la producción de piorrubina. Examinar las
placas bajo luz ultravioneta, ya que la producción de fluoresceína se observa de color amarillo verdoso brillante
El Agar Papa Dextrosa (Potato Dextrose Agar, PDA, por sus siglas en inglés) es un medio de propósito general para
levaduras y mohos que puede ser suplementado con ácidos o antibióticos para inhibir el crecimiento bacteriano.
Es recomendado para uso con métodos de conteo en placa para alimentos, productos lácteos4-6 y pruebas
realizadas en cosméticos.7 El Agar Papa Dextrosa (PDA) puede ser usado para el cultivo de levaduras y mohos
clínicamente significativos. 8 La base (infusión de papa) nutricionalmente rica, estimula la esporulación de los
mohos y la producción de pigmentos en algunos dermatofitos Las levaduras crecerán como colonias desde un
color crema a un color blanco. Los mohos crecerán como colonias filamentosas de variados colores