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INDICE

OBJETIVO GENERAL. ___________________________________________________ 3

OBJETIVOS ESPECÍFICOS. ______________________________________________ 3
INTRODUCCIÓN. _______________________________________________________ 4
FUNDAMENTO. _________________________________________________________ 4
MATERIALES, EQUIPOS, SUSTANCIAS. ___________________________________ 5
METODOLOGÍA (PROCEDIMIENTO). _____________________________________ 6
FÓRMULAS A UTILIZAR. _______________________________________________ 19
OBSERVACIONES GENERALES _________________________________________ 19
CÁLCULOS REALIZADOS _______________________________________________ 19
RESULTADOS OBTENIDOS _____________________________________________ 21
CONCLUSIÓN _________________________________________________________ 21

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INSTITUTO TECNOLÓGICO SUPERIOR DE ACAYUCAN

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA
REACTORES QUÍMICOS
PRÁCTICA DE LABORATORIO NÚMERO 4

“PROCESO DE ESFERIFICACIÓN PARA EL ANÁLISIS DE UNA COLUMNA

EMPACADA”

OBJETIVO GENERAL.
Que el alumno adquiera las habilidades y competencias necesarias para la formación de esférulas en
el laboratorio a partir de Alginato de Sodio y Cloruro de Calcio como reactivos; así también pueda
determinar el volumen requerido de esférulas para el llenado en un reactor empacado.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS.
1. Preparar soluciones porcentuales (p/p) y molares para el acondicionamiento de reactivos
utilizado en el proceso de esferificación.
2. Desarrollar el proceso de esferificación a partir de Alginato de sodio y Cloruro de Calcio
como reactivos.
3. Aprender reglas básicas de laboratorio para el cuidado, manejo y uso de materiales y equipos,
así como las medidas de seguridad necesaria al trabajar en un área de laboratorio.
4. Utilizar las TIC y algunos programas (software) computacionales como una herramienta para
la determinación de diámetros y volúmenes promedios de las esférulas generadas (uso de
Excel e ImageJ).
5. Determinar la cantidad y el volumen necesario de esférulas para el llenado de un reactor
empacado.

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INTRODUCCIÓN.
El objetivo de esta práctica es realizar la técnica de microencapsulación con alginato para
aplicaciones del análisis dentro de una columna empacada. El alginato ha sido uno de los polímeros
más empleado en la microencapsulación, esta forma una matriz altamente versátil, biocompatible y
no tóxica para la protección de componentes activos, células o microorganismos sensibles al calor,
pH, oxígeno y luz, entre otros factores ambientales.

El concepto de encapsulación se ha fundamentado en la incorporación de una matriz polimérica, la

cual forma un ambiente capaz de controlar su interacción con el exterior. La técnica de
microencapsulación ha sido descrita como un proceso en donde pequeñas partículas o gotas son
rodeadas por un recubrimiento homogéneo o heterogéneo integrado a las cápsulas con variadas
aplicaciones.

El proceso de formación del gel se inicia a partir de una solución de sal de alginato y una fuente de
calcio externa o interna desde donde el ión calcio se difunde hasta alcanzar la cadena polimérica,
como consecuencia de esta unión se produce un reordenamiento estructural en el espacio resultando
en un material sólido con las características de un gel.

Como ingeniero químico es factible conocer este método de encapsulación y cómo se lleva a cabo
su elaboración para la protección de bacterias y/o microorganismos para su conservación ya que en
las industrias químicas es necesario utilizar estos métodos.

FUNDAMENTO.
El alginato ha sido usado debido a sus múltiples ventajas tanto para el consumo humano como
versatilidad en aplicaciones industriales. Tales aspectos han sido resaltando el efecto prebiótico de
los alginatos de bajo peso molecular. Estas ventajas del alginato y las recientes tendencias
tecnológicas se han fusionado en la técnica de microencapsulación, resultando en un producto final
que permite proteger a los compuestos encapsulados de factores adversos como el calor y la
humedad, mejorando así su estabilidad y biodisponibilidad. El concepto de encapsulación se ha
fundamentado en la incorporación de una matriz polimérica, la cual forma un ambiente capaz de
controlar su interacción con el exterior. La técnica de microencapsulación ha sido descrita como un
proceso en donde pequeñas partículas o gotas son rodeadas por un recubrimiento homogéneo o
heterogéneo integrado a las cápsulas con variadas. aplicaciones.

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MATERIALES, EQUIPOS, SUSTANCIAS.

Material de laboratorio Equipos
2 Vaso de Precipitado de 500 mL 1 Balanza granataria
1 vaso de precipitado de 200 mL 1 Termoagitador
1 probeta de 200 mL 1 Regulador de voltaje
1 probeta de 500 mL
1 espátula
1 agitador de varilla de vidrio
1 Pizeta
1 Matraz aforado de 500 mL
1 colador metálico (en su defecto plástico)

Materiales diversos Sustancias (reactivos)

2 Jeringas del Número 10 Alginato de Sodio
1 Franela Cloruro de Calcio (CaCl2)
Jabón líquido Agua destilada o desionizada
Hojas de color negro y blanco Hielo
Marcador Permanente
Etiquetas o cinta Masking Tape
Papel aluminio
Papel absorbente (servilletas)

Material Adicional Software Requerido

Computadora personal (laptop) Excel ®
ImageJ ®

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METODOLOGÍA (PROCEDIMIENTO).
1. Limpieza del material antes de ser utilizado.
a) Lavar con agua y jabón el material a utilizar (vasos de precipitado, probetas), posteriormente
con agua destilada, dejar secar.
2. Preparación de solución del alginato de Sodio a la concentración porcentual
especificada.
a) Realizar los cálculos necesarios para preparar 200 mL de solución de alginato de sodio a una
concentración porcentual de 1% (p/p), ajustar la concentración de acuerdo con las
indicaciones del docente.

b) Pesar la cantidad requerida de alginato de sodio en una balanza granataria.

c) Llenar el vaso de precipitado de 200 mL a una cantidad aproximada de 100 mL y añadir de

manera gradual el alginato de sodio pesado previamente, utilizar el agitador magnético con
parrilla de calentamiento (termoagitador) para ayudar en este proceso de disolución.

NOTA: No añadir el alginato de sodio en un solo paso, esto generará aglutinamiento en la

solución y por ende dificultará la homogeneidad de la solución.

d) Observar y verificar que la solución de Alginato de Sodio se encuentra de manera

homogénea, apagar el equipo.

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Preparación de solución del cloruro de calcio a la concentración Molar indicada.

a) Realizar los cálculos necesarios para preparar 500 mL de cloruro de calcio a una
concentración de 0.2 M, ajustar la concentración de acuerdo con las indicaciones del docente.

b) Pesar la cantidad requerida de cloruro de calcio en una balanza granataria. Nuevamente, hacer
una caja de papel para el pesado.

c) Llenar el vaso de precipitado de 500 mL a una cantidad aproximada de 250 mL y añadir de

manera gradual el cloruro de calcio pesado previamente, como esta disolución no presenta
inconvenientes de mezclado, puede utilizar una varilla de vidrio para agitar manualmente.

d) Llevar la disolución anterior a un matraz aforado y llenar con agua destilada hasta la línea de
aforo, apoyarse de una pizeta para añadir el agua. Revisar el menisco que este por arriba de
la línea de aforo; tapar el matraz aforado y homogenizar.

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3. Formación de Esférulas. como hasta este momento se cuenta con las soluciones
necesarias para la formación de las esferulas puede seguir los siguientes pasos:
a) En un recipiente extendido, colocar hielo quebrado, y sobre él poner el vaso de precipitado
con la solución de cloruro de calcio, este será el medio en el cual caerán las gotas de sol. De
alginato de sodio.

b) Con una jeringa, estéril y limpia extraer una cierta cantidad de sol. De alginato de sodio y por
goteo se deja caer sobre la solución de CaCl2.

c) Repetir el paso anterior hasta terminar toda la solución de alginato de Sodio.

NOTA: Ensayar el goteo sobre la misma solución de alginato de sodio, obligatoriamente debe ser
goteo y no chorros de solución, si no, no se podrán formar las esferulas, procurar que las gotas caigan
bien formadas en tiempos constantes, esto asegurará una esfericidad regular y diámetros regulares.

d) Con un colador, filtrar la solución de cloruro de calcio sobre otro vaso de precipitado limpio
y seco. Notar que las esferulas quedan retenidas sobre el colador.
e) Una vez separado las esferulas del medio de solución, colocarlas en un medio absorbente
(servilleta) para retirar el exceso de solución que están sobre ellas.

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4. Determinación del diámetro promedio de las esférulas y volumen promedio obtenido

para las cantidades de soluciones preparadas.
a) En una hoja de color obscuro colocar las esférulas, distribuirlas de manera uniforme, y en la
parte inferior colocar una escala de 1 cm como referencia.

b) Tomar una fotografía de la hoja anterior, vista desde arriba verticalmente, tomar varias para
asegurar unas de mayor nitidez.
c) Importar la fotografía a una laptop (preferentemente al escritorio) que cuente con el programa
ImageJ ®.
d) Seguir las instrucciones del docente para poder ejecutar y utilizar el programa para la
determinación de áreas y diámetros promedios (ver punto 6).
e) Con ayuda de Excel y con la fórmula de volumen de una esfera, determinar el volumen que
ocuparía una esférula y el volumen promedio de todas ellas (para más detalle ver paso 6).

5. METODOLOGÍA PROPUESTA PARA EL USO DEL PROGRAMA (SOFTWARE)

IMAGEJ ®.

6.1 Pasos introductorios e Incorporación de la imagen al programa.

a) Instalar el programa ImageJ ® (en caso de no haberlo hecho).

b) Ubicar y abrir el programa instalado. Se mostrará una ventana como la siguiente (es la
ventana principal de ImageJ):

c) Lo primero a realizar es incorporar la imagen al programa (para su estudio), para ello, dar
click en la pestaña File y seleccionar Open, este abrirá una ventana que muestra todos los
archivos disponibles en el equipo.

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d) Seleccionar la imagen guardada en el escritorio tomada anteriormente en el paso 5.b, y

oprimir el botón Abrir. Se mostrará la imagen en el visualizador del programa.

5.2 Ajuste de Escala.

a) En la ventana principal de ImageJ, oprimir el botón Straight (este permite hacer segmentos
de recta para especificar la escala) y llevar el cursor a la imagen visualizada por el programa,
después dando click seleccionamos la escala cuidadosamente que se encuentra colocada en
la imagen.

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b) Seleccionar la pestaña Analyze y oprimir la opción Set Scale, a continuación aparecerá una
ventana como la siguiente:

Esta ventana permite ingresar la distancia en pixeles, la distancia conocida seleccionada con
anterioridad y la unidad de longitud.
c) Colocar la distancia en pixeles en el recuadro Distance in pixels, de otro modo el programa
lo marca de manera automática.
d) Especificar la distancia conocida que se marcó con el segmento de recta realizado en el paso
6.2a, para nuestro caso colocar 1.
e) Ingresar las unidades de longitud en el recuadro Unit Of Length, para esta práctica anotar
“cm”.
f) Seleccionar el botón de Check global y dar OK.

6.3 Delimitar el área de la imagen para su estudio.

Observar la imagen que se está estudiando, en caso de que no esté bien definida, o que tenga
secciones que no permitan visualizarse bien, es necesario realizar estos pasos que a
continuación se describen:

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a) Dar click en el botón Rectangular.

b) Llevar el cursor a la imagen y seleccionar el área de interés para analizar las partículas
(esférulas).
c) Dar click en la pestaña Image, y seleccionar Duplicate, como se muestra a continuación.

NOTA: Verifique que el área que se seleccionó anteriormente se haya duplicado,

generándose otra ventana de imagen, en caso de utilizar toda la imagen, puede omitir los
pasos 6.3.a y 6.3.b, duplicando solo la imagen.
6.4 Procedimiento para obtención de área de las partículas (esférulas).
a) Seleccionar la imagen duplicada en el paso anterior (6.3.c).
b) Ir a la pestaña Image, y en la celda Type, seleccionar 8-bit, esto permitirá al usuario que la
imagen quede ajustada a tipo blanco y negro (para analizar partículas necesariamente ImageJ
trabaja con imágenes a blanco y negro).

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c) Ir a la pestaña Process y dar click en la celda FFT, este abrirá otras opciones, elegir la celda
Bandpass Filter.

d) En la ventana generada del paso anterior (como se muestra), ajustar el valor de los pixeles en
el recuadro Filter large structures down to, se recomienda valores de 30 a 40 pixeles, esto
dependerá del tipo de imagen que se está utilizando. A continuación se observa la ventana de
ajuste.
e) Dar click en el botón OK.

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f) Ir a la pestaña Image y seleccionar el recuadro Adjust posteriormente dar click en Threshold.

Como se muestra a continuación.

g) Se abrirá una ventana como la siguiente:

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h) Esta ventana permitirá al usuario realizar los ajustes necesarios de umbral para determinar el
área más adelante. Se recomienda utilizar Default o Huang, aunque el usuario puede utilizar
el que más se ajuste a su necesidad; para elegir, dar click en la celda de la izquierda.
Puede cambiarse el color de las partículas a analizar dando click en la celda de la derecha. Si
se prefiere, se puede oprimir el botón Auto, este permite elegir el umbral recomendado por
ImageJ.
i) Dar click en el botón Apply.
j) Especificar al programa que se requiere obtener el área de las partículas, por tanto se debe
seguir estos pasos:
k) Seleccionar la pestaña Analyze, dar click en la opción Set Measurements, este abrirá una
ventana como la siguiente:

l) Elegir la opción de Area, activando la casilla check, despues dar click en OK.

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m) Ir a la pestaña Analyze y seccionar la opción (celda) Analyze Particles, como se muestra a

continuación.

n) Verificar que el programa genere una ventana como la siguiente:

Esta ventana permite seleccionar el tamaño de las partículas a considerar, el rango de la

circularidad de las partículas, además las opciones si quiere ver la pantalla de resultados.
o) Para este estudio en el recuadro Show, elegir Overlay.
p) En los botones de check, revisar que estén seleccionados las siguientes opciones: Display
results, Clear results, Add Manager.
q) Dar click en el botón OK.
r) Verificar que se hayan generado dos ventanas, la primera con el encabezado Results, que son
los resultados generados de las áreas de cada partícula enumeradas respectivamente.

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s) Guardar esta información en una hoja de cálculo de Excel, dar click en la pestaña File y
seleccionar la opción Save As, se generará una ventana para ubicar el archivo donde se quiera
guardar en el equipo (PC). Finalmente dar click en Guardar. Como se muestra a
continuación:

t) Verificar que se haya generado una segunda ventana que tiene como encabezado ROI
Manager, en esta ventana se visualiza la lista de partículas enumeradas para poder
inspeccionar tanto en la imagen original como en la duplicada (realizadas en el paso 6.1.d y
6.3.c).

u) Revisar las partículas que considero el programa, evaluar si todas corresponden a las
esférulas, e identificar y descartar las que no son para no considerarla en el estudio de las
áreas, diámetros y volúmenes que se realizarán más adelante.

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v) Hacer uso de la primera imagen generada en el paso 6.1.d (seleccionarla) y con la ventana
ROI Manager, seleccionar cada celda enumerada y visualizar en la imagen si corresponde a
una partícula de interés.
w) Abrir la hoja de Excel generada por el programa, y en otra columna anotar como título
“radio”; haciendo uso de la fórmula para el cálculo de área y despejando el radio, determinar
los radios para cada partícula con las áreas proporcionadas en la hoja de cálculo.

x) Con ayuda de la fórmula para el cálculo de volumen, determinar el volumen para cada
partícula (esférula) con los radios generado en el paso anterior.
y) Con la función SUMA de Excel, obtener el volumen total de las esférulas y con la función
PROM obtener el volumen promedio de las esférulas.

NOTA: Estos datos obtenidos son de gran importancia a la hora de estimar la cantidad de
esférulas necesarias para llenar un reactor empacado, y la cantidad de reactivos a preparar para
su generación.

7 Hacer todas las notaciones, observaciones y recomendaciones necesarias para esta práctica.
8 Entregar el material (lavado previamente), equipo y sustancia de laboratorio utilizado en
el desarrollo de esta práctica.
9 Fin de la práctica de laboratorio.

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FÓRMULAS A UTILIZAR.
Descripción Ecuación
Volumen de una esfera 4
𝑉𝑒 = 𝜋𝑟 3
3
Área de una circunferencia 𝐴𝑐 = 𝜋𝑟 2
Concentración porcentual p/p 𝑔 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜
% 𝑒𝑛 𝑝𝑒𝑠𝑜 = 𝑥100
𝑔 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛
Concentración Molar 𝑛 𝑔
𝑀𝑜𝑙𝑎𝑟𝑖𝑑𝑎𝑑 = =
𝑉 𝑃𝑀 ∙ 𝑉

OBSERVACIONES GENERALES
 Las esferulas se realizaron utilizando dos herramientas diferentes (geringa y recipiente
dosificador).
 Utilizando la jeringa para la generación de las esferulas se obtuvieron esferulas de
menor tamaño con respecto a las formadas con el dosificador.
 Las esferulass tenían una textura gelosa y frágil sin embargo su solidificación es rápida
aunque aún conserva la textura gelosa.
 Se obtuvo un mayor número de esferas por medio de la jeringa que por el dosificador.
 Para determinar el área de cada esferula se utilizó un software, sin embargo para que
pueda realizarse la determinación se debe tomar una foto con una cámara casi
profesional.
 Para su conteo se clasificaron visualmente por tamaño en una superficie de color
contrastante
 Debido a la sensibilidad del software y la calidad de la cámara pueden generarse errores
de lectura.

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CÁLCULOS REALIZADOS

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RESULTADOS OBTENIDOS

CONCLUSIÓN
Las técnicas de microencapsulación con alginato permiten la protección de diferentes principios
activos como proteínas, aminoácidos, vitaminas, extractos, sabores, aromas, microorganismos y
enzimas que en contacto con el medio circundante sufren degradación y pérdida de sus propiedades
nutricionales y benéficas para la salud. El alginato es un material polimérico adecuado para la
microencapsulación por ser biocompatible, no tóxico y degradable.
Diversas investigaciones demostraron que los compuestos encapsulados se encuentran
biodisponibles y por tanto pueden mantener sus actividades funcionales durante el procesamiento y
almacenaje de los alimentos.
Al final logramos obtener esferas de diferentes diámetros y área que se determinó vía software, así
como dominar esta técnica para poder aplicarla en nuestro proyecto en la microencapsulación de
bacterias ligninolíticas con el fin de realizar una decoloración en una columna empacada.

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