Amerika Jurnal Penelitian Mikrobiologi , 2013 , Vol .

1 , No 1 , 10-15
Tersedia online di http://pubs.sciepub.com/ajmr/1/1/3
DOI : 10.12691/ajmr-1-1-3
Biodegradasi Dimethylformamide Menggunakan Bacillus Subtilis R. Vidhya1 , * , AJ
Thatheyus2 1PG Departemen Imunologi dan Mikrobiologi , The American College ,
Madurai , India 2PG dan Departemen Riset Zoologi , The American College , Madurai , India
* Sesuai penulis : vidvirgo @ gmail . com diterima 26 Desember 2012 ; Revisi 2 Februari
2013 , yang diterima 28 Februari 2013 Abstrak penelitian ini menyelidiki potensi bakteri
yang dipilih , alami isolat Bacillus subtilis yang diisolasi dari limbah industri tekstil ( TPT
bakteri diadaptasi limbah ) dan isolat ditemukan lebih efisien dalam DMF merendahkan
berdasarkan penilaian parameter fisiko-kimia seperti pH , kekeruhan, karbon dioksida dan
amonia dilepaskan selama proses degradasi . Degradasi DMF telah menyebabkan akumulasi
amonia dan dimetilamin berkontribusi terhadap peningkatan pH medium 7,0-9,2 .
Peningkatan kekeruhan dan biomassa juga diamati selama perawatan . Pelepasan maksimum
karbon dioksida dan amonia ditemukan selama degradasi 100μl DMF . Analisis HPLC untuk
200μl degradasi DMF oleh isolat menunjukkan puncak dengan waktu retensi yang berbeda .
Demikian hasil menunjukkan bahwa isolat mampu mendegradasi DMF ditemukan dalam
limbah industri tekstil .
Kata kunci : dimetilformamida , limbah , bacillus subtilis tekstil , degradasi , HPLC 1 .
pengantar
Industrialisasi sangat penting bagi perekonomian suatu negara karena berfungsi sebagai
kendaraan untuk pembangunan. Meningkatnya permintaan untuk air dan pasokan berkurang
telah membuat pengobatan dan penggunaan kembali limbah industri pilihan yang menarik .
Namun, ada masalah terkait yang timbul dari pengenalan produk limbah industri ke
lingkungan . Banyak dari produk ini bermasalah karena ketekunan ( biodegradabilitas rendah)
dan / atau toksisitas . Industri tekstil merupakan salah satu dari banyak industri yang
memanfaatkan volume besar air dalam proses manufaktur . Industri tekstil menghasilkan
limbah yang mengandung beberapa jenis bahan kimia seperti dispersan , agen meratakan ,
asam, alkali , operator dan berbagai pewarna [ 2 ] . Limbah tekstil menjadi perhatian karena
mereka mewarnai saluran air dan akhirnya badan air . Mereka juga mengurangi kualitas air .
Di banyak kota Nigeria , pabrik-pabrik jutaan debit harian tekstil liter limbah yang tidak
diobati dalam bentuk air limbah menjadi masyarakat yang akhirnya mengalir ke sungai
kosong [ 14 ] .
Menjadi pelarut organik serbaguna , N , N - dimetilformamida ( DMF ) secara luas digunakan
dalam beberapa aplikasi industri . Hal ini terutama digunakan sebagai pelarut dalam produksi
produk poliuretan dan serat akrilik . Ini adalah cairan tak berwarna dengan bau amina samar .
Produsen menggunakan DMF sebagai pelarut dalam berbagai aplikasi, termasuk pelapis
tekstil , produksi komponen elektronik dan produk farmasi [ 16 ] . Karena sebagian besar
DMF dilepaskan ke dalam limbah setelah pulih zat terlarut , itu dianggap sebagai salah satu
bahan kimia yang paling umum ditemukan dalam limbah industri [ 21 ] . Mengingat laporan
didirikan pada tanggal terjadinya secara luas dan dampak negatifnya terhadap lingkungan dan
kesehatan , DMF dianggap menjadi ancaman yang meningkat baik untuk lingkungan dan
manusia [ 13 ] .
DMF adalah produk kemungkinan degradasi fotokimia dimetilamin dan trimetilamina
[ 15,20 ] . Keduanya sering terjadi bahan alami dan juga digunakan dalam aplikasi industri .
DMF tidak terjadi secara alami . Ada beberapa data mengenai tingkat lingkungan atau
pemaparan dari populasi umum untuk DMF . Konsentrasi di udara dalam kisaran 0.02-
0.12mg/m3 telah ditemukan di daerah perumahan, dekat lokasi industri . DMF dilepaskan ke
lingkungan melalui berbagai cara . Ketika dipancarkan ke udara , sebagian besar DMF dirilis
tetap di kompartemen itu, mana yang terdegradasi oleh reaksi kimia dengan radikal hidroksil .
Rilis tidak langsung dari DMF ke udara, seperti transfer dari media lingkungan lainnya ,
hanya memainkan peran kecil dalam mempertahankan tingkat DMF di atmosfer . Ketika
DMF dilepaskan ke dalam air , akan merusak ada dan tidak pindah ke media lain .
Kontaminasi tanah dengan DMF dapat terjadi melalui tumpahan atau kebocoran selama
produksi , transportasi , penyimpanan, atau penggunaan . Ketika dilepaskan ke tanah,
sebagian besar DMF tetap dalam tanah mungkin dalam air pori tanah sampai terdegradasi
oleh reaksi biologi dan kimia . Jika DMF mencapai tanah , degradasi anaerob yang akan
lambat [ 4,6 ] .
Toksisitas DMF telah dipelajari di banyak spesies , dengan berbagai rute administrasi dengan
hasil yang umumnya sama [ 9,12 ] . Hepatotoksisitas telah dilaporkan di sebagian besar
spesies yang dipelajari , termasuk manusia , mengikuti baik yang akut maupun sub paparan
kronis [ 11,17 ] . Toksisitas DMF paparan inhalasi berikut telah cukup baik ditandai . Tikus
selamat satu paparan 4 - jam untuk
Amerika Jurnal Penelitian Mikrobiologi , 2013 , Vol . 1 , No 1 11
uap jenuh DMF , dengan konsentrasi nominal sekitar 5000 ppm [ 18 ] . Potensi
carcinogenicity DMF baru telah dievaluasi . Itu ditentukan bahwa DMF mungkin
karsinogenik bagi manusia ( Grup 2B ) , berdasarkan temuan dari studi epidemiologi dari
risiko kelebihan untuk kanker sel germinal testis dan kanker rongga bukal para pekerja yang
terpapar occupationally untuk DMF dan bahan lainnya . Studi yang tersedia di
karsinogenisitas DMF pada hewan dianggap tidak memadai untuk membuat evaluasi [ 10 ] .
Dibandingkan dengan metode kimia / fisik, proses biologi telah menerima bunga lebih karena
efektivitas biaya mereka , produksi lumpur lebih rendah dan ramah lingkungan . Peningkatan
kemampuan mikroorganisme untuk mendegradasi polutan dapat dicapai melalui modifikasi
lingkungan atau organisme . Kemampuan mikroorganisme untuk mendegradasi dan
memetabolisme berbagai senyawa telah dikenal dan dimanfaatkan dalam berbagai proses
biotreatment . Biotreatment ini menawarkan alternatif yang lebih murah dan ramah
lingkungan untuk menghilangkan polutan dalam limbah tekstil [ 19 ] . Salah satu polutan
tersebut ditemukan dalam industri tekstil limbah adalah dimetilformamida . Di mana-mana
sifat bakteri membuat mereka alat berharga dalam biotreatment limbah . Diusulkan bahwa
biodegradasi hasil DMF dengan mengikuti dua jalur yang berbeda . Salah satu dari mereka
( jalur I) dimediasi oleh kehadiran novel enzim N , N - dimethylformamidase ( DMFase )
yang mengkonversi DMF ke dimetilamin dan format. Kedua intermediet katabolik
selanjutnya didegradasi untuk membentuk amonia dan karbon dioksida . Pada jalur kedua
( jalur II ) , DMF adalah terdegradasi oleh diulang demethylations oksidatif mengarah ke
generasi formamida . Formamida adalah lebih dihidrolisis menjadi amonia dan format [ 8 ] .
Dalam penelitian ini upaya telah dilakukan untuk mengisolasi strain bakteri , yang mampu
DMF merendahkan dan untuk mengidentifikasi dan menentukan efisiensi degradasi dengan
menganalisis parameter yang berbeda seperti pH , kekeruhan, biomassa , produksi CO2 dan
produksi amonia. 2 . Bahan dan Metode 2.1 Pengumpulan Sampel tanah Sampel
dikumpulkan dalam botol topi sekrup steril dari lokasi yang terkontaminasi dengan limbah
industri tekstil yang mengandung dimetilformamida di Dindigul . 2.2 Isolasi Bakteri
Pendegradasi DMF
Sampel tanah yang diambil adalah serial diencerkan dan 0.1ml dari 10-6 pengenceran diambil
dan tersebar di medium minimal MM1 mengandung 50μl DMF sebagai sumber karbon
tunggal . Pelat diinkubasi pada suhu 37 ° C selama seminggu . Karakteristik fisiko-kimia
DMF diberikan dalam Tabel 1 dan struktur yang digambarkan dalam Gambar 1 . 2.3
Identifikasi Bakteri Pendegradasi DMF
Dari strain bakteri yang berbeda yang tumbuh pada piring agar-agar , satu strain terpilih .
Pewarnaan Gram dan tes biokimia seperti MR - VP , pemanfaatan sitrat , oksidase , katalase ,
produksi indol , urease , Triple Sugar agar Besi dan tes reduksi nitrat dilakukan untuk
identifikasi tentatif ketegangan . Isolat diidentifikasi sebagai Bacillus subtilis . 2.4 Degradasi
Efisiensi bakteri isolat diinokulasikan pada kaldu minimal mengandung konsentrasi yang
berbeda DMF seperti 50 , 100 , 150 dan 200μl . Termos diinkubasi pada suhu kamar selama
sepuluh hari dan degradasi itu dikonfirmasi dengan menganalisis kepadatan optik , pH ,
biomassa , karbon dioksida dan amonia produksi. Parameter yang disebutkan di atas diukur
setiap 48 jam selama 10 hari . 2,5 PH pH sampel ditentukan setelah 4 , 6 , 8 dan 10 hari
inkubasi menggunakan pH meter . 2.6 Biomassa Metode Turbidometric Estimasi diikuti
untuk mengkonfirmasikan peningkatan biomassa dengan mengukur kekeruhan pada 600nm .
Sampel biodegradasi diambil dan disentrifugasi . Biomassa pellet diambil dan biomassa
basah dihitung . Setelah pengeringan dalam oven udara panas , biomassa kering ditentukan .
2.7 Estimasi Karbon Dioksida
Estimasi karbon dioksida dilakukan dengan mengadaptasi metode yang diusulkan oleh Eaton
dkk . ( 1995) [ 5 ] . 2,8 Amonia Estimasi
Dua sampai tiga tetes Reagen Nessler yang ditambahkan ke salah satu ml sampel dan
perubahan warna tercatat . Konsentrasi amonia kemudian diperkirakan menggunakan
colorimeter [ 1 ] . 2.9 High Performance Liquid Chromatography ( HPLC )
Sampel yang mengandung medium minimal , mengisolasi dan DMF 200μl diambil pada hari
ke-0 , 4 hari dan 10 hari menjadi sasaran analisis HPLC di CECRI , Karaikudi ( Model :
Shimadzu , Jepang ) . Rincian tentang kondisi standar di mana analisis dilakukan diberikan
dalam Tabel 1 . Tabel 1 . Kromatografi cair kinerja tinggi
model
Shimadzu , JAPAN
Tahap stasioner
SILICA GEL ( fase Terbalik )
fase gerak
100 % metanol
kolom utama
Analytical - Shim -Pack CLC - OCTA desil silan ( ODS - C18 ) [ 4,6 mm ID 25cm ]
kolom penjaga
Shim - Pack G - BPO [ 4mm ID 1cm ]
detektor
spektrofotometer UV
Tingkat aliran
1ml/minute
Tekanan kepala kolom
125 kg/cm2
Injeksi per sampel
20μl
panjang gelombang
254 nm
12 Amerika Jurnal Penelitian Mikrobiologi , 2013 , Vol . 1 , No 1
3 . Analisis Statistik Dua way ANOVA dilakukan untuk parameter seperti kepadatan optik ,
pH , biomassa , karbon dioksida dan amonia diproduksi dengan menggunakan Microsoft
Excel . Variabilitas dianggap signifikan hanya jika nilai statistik lebih besar dari nilai
ditabulasikan pada P kurang dari atau sama dengan 0,05 . 4 . Hasil dan Pembahasan
DMF telah disebut pelarut universal organik dan secara luas digunakan di mana tingkat
rendah penguapan diperlukan [ 7 ] . Struktur DMF ditunjukkan pada Gambar 1 . Tingkat
keseluruhan degradasi kimia di permukaan air diharapkan menjadi sangat lambat sehingga
biodegradasi secara luas disukai untuk DMF eliminasi dari lingkungan . Biodegradasi paruh
telah diukur dalam kisaran 18-36 jam [ 3 ]
Strain bakteri yang diisolasi dari tanah diidentifikasi sebagai batang gram negatif . Kemudian
isolat sementara diidentifikasi sebagai B. subtilis atas dasar hasil yang diperoleh dalam tes
biokimia ( Tabel 2 ) . Isolat , B. subtilis ( Piring 1 ) mampu tumbuh pada agar minimal
mengandung berbagai konsentrasi DMF . Gambar 1 . Struktur dimetilformamida Tabel 2 .
Tes biokimia untuk Identifikasi Isolat B. subtilis
( + = Reaksi positif , - = reaksi negatif )
Gambar 2 mengilustrasikan perubahan pH ditentukan setelah 4 , 6 , 8 dan 10 hari pengobatan
dengan B. subtilis . PH medium itu ditemukan akan meningkat dari hari ke-8 selama
degradasi oleh B. subtilis . Peningkatan bertahap dalam pH menunjukkan degradasi DMF .
Selama degradasi DMF , pH ditemukan meningkat secara bertahap dari 4 hari ke hari ke-10
dari pengobatan . Peningkatan pH mungkin karena pelepasan konstan dimetilamina dan
amonia ke dalam medium . Sebuah novel bakteri galur Ochrobactrum sp . DGVK1 telah
diisolasi dari tanah yang mampu menghasilkan dimethylformamidase untuk menurunkan
DMF di mana degradasi DMF menyaksikan seiring bertambahnya pertumbuhan budaya dan
pH medium 7-9,2 [ 22 ] . Piring 1 . Pertumbuhan B. subtilis dalam medium minimal
mengandung 200μl Perubahan dimetilformamida dalam kekeruhan media selama hari-hari
pengobatan sepuluh DMF oleh B. subtilis diilustrasikan pada Gambar 3 . Tampaknya menjadi
berfluktuasi namun pertumbuhan maksimum bakteri diamati setelah hari keenam dan
kedelapan pengobatan . Gambar 4 menggambarkan perubahan biomassa B. subtilis selama
masa studi . Peningkatan kekeruhan dan biomassa selama masa pengobatan menunjukkan
pertumbuhan bakteri akibat penggunaan DMF sebagai sumber karbon dan nitrogen .
Pertumbuhan bakteri diamati meningkat sampai hari ke-8 pengobatan dan menurun setelah
itu. Hal ini menunjukkan penurunan DMF meningkat sebagai periode inkubasi meningkat .
Penurunan biomassa mungkin karena pembentukan produk terdegradasi seperti dimetilamina
dan amonia . Gambar 2 . Perubahan pH medium selama degradasi DMF oleh B.subtilis
S.No.
uji
Respon organisme
1.
pewarnaan gram
+
2.
metil Merah
+
3.
Voges Proskauer
+
4.
Simmons citrate agar
+
5.
oksidase
-
6.
katalase
+
7.
indole
-
8.
urease
-
9.
Tiga Gula Agar besi
+
10 .
reduksi nitrat
-
Amerika Jurnal Penelitian Mikrobiologi , 2013 , Vol . 1 , No 1 13
Gambar 3. Perubahan kekeruhan selama degradasi DMF oleh B.subtilis Pembebasan karbon
dioksida selama degradasi DMF dapat digunakan sebagai indikasi untuk aktivitas bakteri
dalam medium pertumbuhan. Pelepasan maksimum karbon dioksida ditemukan selama
degradasi 100μl DMF oleh B. subtilis . Ini jelas menunjukkan bahwa B. subtilis ditemukan
untuk menurunkan DMF lebih efisien . Biodegradasi DMF mengakibatkan produksi karbon
dioksida yang ditemukan meningkat secara linear dengan meningkatnya konsentrasi DMF .
Jumlah karbon dioksida yang dilepaskan selama hari-hari pengobatan sepuluh DMF oleh B.
subtilis ditunjukkan pada Gambar 5 . Figure.4 . Perubahan biomassa ( g kering berat / l )
selama degradasi DMF oleh B.subtilis Rilis amonia akibat biodegradasi DMF oleh B. subtilis
dipamerkan pada Gambar 6 . Konsentrasi amonia dibebaskan ditemukan meningkatkan
sampai 10 hari pengobatan berbagai konsentrasi DMF oleh B. subtilis . Pelepasan maksimum
amonia diamati selama 10 hari pengobatan DMF oleh B. subtilis . Kadar amonia selama
sepuluh hari pengobatan oleh B. subtilis meningkat secara linear dan konsentrasi tertinggi
terjadi dalam kasus 200μl DMF . Gambar 5. Karbon dioksida dilepaskan selama degradasi
DMF oleh B.subtilis analisis HPLC 200μl DMF sebelum dan setelah pengobatan dengan B.
subtilis ditunjukkan pada Gambar 7 , 8 dan 9 . Gambar 7 menunjukkan analisis HPLC untuk
200μl DMF pada hari 0 pengobatan. Puncak diamati di sini yang hilang dalam analisis HPLC
konsentrasi sama DMF pada hari ke-4 dan ke-10 degradasi oleh B. subtilis ( Gambar 8 dan
Gambar 9 ) . Ada beberapa puncak baru dengan waktu retensi yang berbeda menunjukkan
pembentukan intermediet . Gambar 6 . Amonia dilepaskan selama degradasi DMF oleh
B.subtilis analisis HPLC untuk 200μl degradasi DMF oleh isolat menunjukkan puncak
dengan waktu retensi yang berbeda . Laporan menunjukkan perbedaan waktu retensi antara
kontrol dan sampel biodegradasi . Puncak yang diperoleh pada hari ke-10 pengobatan
berbeda dalam waktu retensi mereka dari orang-orang pada 4 hari pengobatan menunjukkan
mineralisasi DMF ke intermediet baru . Ada pembentukan beberapa intermediet serta
hilangnya senyawa .
Gambar 7. Laporan analisis HPLC untuk 200μl dimetilformamida ( 0 hari )
14 American Journal of Riset Mikrobiologi , 2013 , Vol . 1 , No 1
Tabel 3 menunjukkan analisis dua arah varians untuk faktor seperti pH , kekeruhan,
biomassa , karbon dioksida dan amonia dengan variabel , masa pengobatan dan konsentrasi
DMF . Pada Tabel 3 di mana analisis dua arah varians hasil yang diberikan, faktor kekeruhan ,
CO2 dan produksi amonia dipamerkan variabel variasi yang signifikan secara statistik karena
masa pengobatan variabel dan konsentrasi dimetilformamida . Pada pH faktor dan biomassa ,
variasi karena masa pengobatan tidak signifikan secara statistik saat mereka signifikan untuk
konsentrasi dimetilformamida . Berdasarkan penilaian dari parameter yang berbeda , isolat B.
subtilis ditemukan lebih efektif dalam DMF merendahkan.
Gambar 8 . HPLC analisis laporan for200μl dimetilformamida diobati dengan Bacillu subtilis
( 4 hari)
Gambar 9 . HPLC analisis laporan for200μl dimetilformamida diobati dengan Bacillu subtilis
( hari ke 10 )
5 . kesimpulan
Ekstensif menggunakan DMF sebagai pelarut organik serbaguna dalam berbagai proses
membuat jalan ke lingkungan . Meskipun tidak ada laporan tentang rilis kebetulan DMF , rute
utama kontaminasi DMF adalah melalui pelepasan DMF menjadi limbah industri . Sebagai
biodegradasi adalah rute utama DMF merendahkan , beberapa upaya telah dilakukan untuk
mengisolasi strain yang cocok yang tumbuh menggunakan DMF sebagai satu-satunya sumber
karbon dan nitrogen . Namun, hanya sejumlah strain bakteri telah ditunjukkan untuk
memanfaatkan DMF sebagai sumber karbon dan nitrogen . Dari penilaian berbagai
parameter , dapat disimpulkan bahwa B. subtilis efisien dapat menurunkan DMF dan tentu
saja membentuk dasar bagi generasi strategi bioremediasi baru untuk penghapusan efektif
DMF dari limbah industri . Tabel 3 . Analisis dua arah varians untuk faktor dengan variabel ,
masa pengobatan dan konsentrasi DMF untuk P. aeruginosa
faktor
Sumber variasi
df
MS
Dihitung nilai F
Tabel nilai F
Tingkat Signifikansi pada tingkat 5 %
pH
masa pengobatan
3
0.027292
1.686695
3.862548
tidak signifikan
konsentrasi
12
0.302292
18,6824
3.862548
penting
kekeruhan
masa pengobatan
3
0,00495
13.5
3.862548
penting
konsentrasi
12
0,00195
5.318182
3.862548
penting
biomassa
masa pengobatan
3
0.000769
0.936131
3.862548
tidak signifikan
konsentrasi
12
0.006095
7.414234
3.862548
penting
karbon dioksida
masa pengobatan
3
124.025
21,70588
3.862548
penting
konsentrasi
12
107.891,7
18,88235
3.862548
penting
amonia
masa pengobatan
3
0.013306
16,97166
3.862548
penting
konsentrasi
12
0,01096
13,91054
3.862548
penting
Pengakuan Para penulis mengucapkan terima kasih kepada pihak berwenang dari American
College , Madurai untuk fasilitas dan dorongan .