Journal de microbiologie du Brésil (2010) 41: 805-809

ISSN 1517-8382

MÉCANISME DE L'ACTIVITÉ BACTÉRICIDE DE NITRATE D'ARGENT - A CONCENTRATION MOLECULE

DEPENDANT bifonctionnelle

Sureshbabu Ram Kumar Pandian 1, Venkataraman Deepak 1, Kalimuthu Kalishwaralal 1, Pushpa Viswanathan 2,

Sangiliyandi Gurunathan 1*
1
Département de la biotechnologie, Division de la biologie moléculaire et cellulaire, Kalasalingam Académie de la recherche et de
l'éducation,
Anand Nagar, Krishnankoil-626190, Tamil Nadu, en Inde; 2 Département de la microscopie électronique, (Association des
femmes en Inde) Cancer Institute, Chennai - 600020, Tamil Nadu, en Inde.

Soumis 04 Juin 2009; Retournés aux auteurs pour corrections: 08 Septembre 2009; Approuvé le 18 Février 2010.

ABSTRAIT

Le nitrate d'argent confère des fonctions différentes sur les bactéries en fonction de sa concentration. A
faible concentration, il induit la synthèse de nanoparticules, alors qu'à des concentrations plus élevées, il
induit la mort cellulaire. Bacillus licheniformis a été utilisé comme système modèle. La CMI a été 5 mM,
et il induit la production catalase, la formation de corps apoptotiques et la fragmentation de l'ADN.

Mots clés: nitrate d'argent, de Bacillus licheniformis, la synthèse de nanoparticules, l'apoptose, la fragmentation de l'ADN.

Les bactéries Gram positives sont une cause importante
d'infections graves forme particulièrement les hôpitaux et
obtiennent la résistance à de nombreux antibiotiques (16). Pour
un temps assez long, l'argent a été connu pour conférer une
activité antimicrobienne à des bactéries. Avant l'introduction de
la crème sulfadiazine, solutions diluées de nitrate d'argent ont
été utilisés pour traiter les infections dans le 19 esiècle (10).
antimicrobiens à base d'argent peuvent être efficaces dans le
+
traitement des infections à cause non-toxicité de Ag actif pour
les cellules humaines (4). Fait intéressant, le nitrate d'argent
confère des fonctions différentes pour les bactéries en fonction
de sa concentration. À des concentrations plus élevées, il tue
les bactéries, tandis que, à des concentrations plus basses, il les
amène à synthétiser des nanoparticules d'argent où Bacillus
licheniformis (MTCC1483) est utilisé pour l'analyse. La
biosynthèse des nanoparticules d'argent, comme indiqué dans
notre précédent rapport (7) a eu lieu à une concentration de 1
mM de nitrate d'argent. Ceci a été visualisé par microscopie
électronique à balayage et DRX. La taille des nanoparticules
était ~ 50 nm. En outre, lors de la synthèse de nanoparticules
d'argent les bactéries sont restés en vie et ont repris leur
croissance lorsque l'argent est retiré de son environnement (7).
En outre, les nanoparticules accumulées à l'intérieur des
cellules pendant l'incubation (Fig. 1). Mais, lorsque la
concentration de AgNO3a été augmenté, il induit la mort
cellulaire chez les bactéries. Pour analyser la fonction
antimicrobienne de AgNO3, Les bactéries ont été traitées avec
diverses concentrations de nitrate d'argent et incubées pendant
2 min. Par la suite, 0,1 ml du mélange ont été étalés sur de la
gélose nutritive pour la formation de colonies, où les
composants solubles dans l'agar a neutralisé l'action de l'argent.
Le résultat a montré que MIC de AgNO3était de 5 mm à savoir
la viabilité de l'organisme est complètement inhibée lorsque la
concentration d'argent est de 5 mM. De nombreux mécanismes
ont été proposés pour expliquer le mode d'action bactéricide
des ions d'argent précédemment. Ils sont connus pour inhiber
les protéines en se liant à leurs groupes thiols et les dénaturer
(9, 12) et empêcher la réplication de l'ADN par sa condensation
(12). Un mécanisme à l'étude dans le présent rapport est la
mort cellulaire programmée (apoptose). Habituellement, la
mort cellulaire programmée (PCD) est associée à des
organismes multicellulaires eucaryotes. Récemment, les
systèmes PCD ont été observés chez les bactéries aussi (3).
Par conséquent toelucidate theMechanism, primarilythe

*Auteur correspondant. Adresse mail:Département de la biotechnologie, Kalasalingam Académie de la recherche et de l'éducation, Anand Nagar, Krishnankoil-
626190, Tamil Nadu, Inde .; Email:lvsangs@yahoo.com
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Pandian, SRK et al. L'activité bactéricide de Nitrate
d'argent

Figure 1. Image au microscope électronique à transmission de la section de bactéries traitées avec 1 mM de AgNO 3 contenant des

nanoparticules d'argent accumulées à l'intérieur de la cellule (à 50,000x).

morphologie du AgNO3les cellules traitées ont été contrôlées a été trouvé pour être plus sensibles à la fois la zéolite d'argent
en permanence en microscopie à contraste de phase. Sur et le nitrate d'argent que son parent. Le déclenchement du
l'observation, il est à noter que AgNO3des cellules bactériennes stress oxydatif chez les bactéries est attribuée à des métaux
traitées ont commencé à se rétrécir pour résultat la formation de lourds tels que les ions cadmium (9).
corps apoptotiques caractéristique. Les corps apoptotiques ont Les ions argent sont connus pour inhiber en particulier
été produites lorsque la paroi cellulaire est perméabilisées par contenant un groupe thiol, tels que les enzymes

des ions d'argent. Cela montre que AgNO3peut induire déshydrogénase NADH II dans le système respiratoire, qui est
impliquée en tant que candidat pour le site de production
l'apoptose dans B. licheniformis à une concentration plus
d'espèces réactives de l'oxygène in vivo (12). Par conséquent,
élevée de 5 mM. Les corps apoptotiques sont considérablement
l'inhibition de cette enzyme se traduit par une augmentation de
rétrécis par rapport aux cellules normales et ils sont totalement
la production de radicaux libres. L'augmentation de la
absents dans les populations de cellules non traitées avec du
production de catalase, en présence de ROS pourrait être
nitrate d'argent. La catalase est l'un des capteurs de radicaux
expliqué par la nécessité pour les cellules afin de réduire la
libres connus qui balaye le peroxyde d'hydrogène (2) un radical
concentration de H2O2, Qui est la source de radicaux libres. Il
libre actif connu. Pour vérifier si AgNO3induit la catalase, un
est proposé que les espèces réactives de l'oxygène peuvent
essai a été effectué selon la méthode décrite par Liu et al., 2006
induire des voies apoptotiques chez les bactéries qui pourraient
(10). La production de catalase était maximale au MIC et a
finalement conduire à leur mort. De plus, à des concentrations
diminué par la suite. Lorsque les espèces réactives de l'oxygène
niveaux (ERO) augmentent les cellules subissent l'apoptose (8). élevées de substrat-à-dire H2O2, Catalase s'inactivé (22). Cela

Selon Matsumura et al., 2003 (12), la souche mutée UM1 (kate empêche également la catalase d'agir sur H2O2. L'apoptose est
katG), déficients en catalase, complète lorsque l'ADN se fragmenté qui est observé dans la
plupart des eucaryotes (6). Le même phénomène
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Pandian, SRK et al.
d'argent
est également observée dans B. licheniformis. L'ADN a été
trouvé à subir une fragmentation dans les cellules de nitrate
d'argent traitées. La fragmentation peut être visualisée dans un
gel d'agarose avec du bromure d'éthidium. Pendant le
traitement, la fragmentation de l'ADN peut être visualisée dans
les cellules qui ont été traitées avec une concentration de 5 mM
de AgNO3et ci-dessus. Considérant que, aucune fragmentation
n'a été observée dans les cellules, qui a été traité avec une
concentration moindre de AgNO3 (Données non présentées).
L'induction de l'apoptose peut être confirmée par deux
facteurs, la réduction irrégulière de la taille des cellules et
l'ADN fragmantation. Les cellules de taille réduite sont
appelées cellules rétrécies ou des corps apoptotiques (14) et la
fragmentation de l'ADN est l'étape finale de l'apoptose (1).
Auparavant, il existe des rapports disponibles pour l'induction
de l'apoptose dans des micro-organismes. Dans E. coli, la mort
cellulaire est induite par une toxine - mécanisme - antitoxine
(mazF MAZE). Le gène code pour une toxine mazF stable,
MazF, tandis que Mazé code pour une antitoxine labile, Mazé,
dégradé in vivo par l'ATP-dépendante ClpPA serine protease.
Lorsque l'antitoxine dégrade les cellules subissent la mort (3).
Des fonctions plus intéressantes sont observées dans
Xanthomonas sp. Les bactéries subissent la mort cellulaire
programmée sous la famine. Une activité enzymatique de la
caspase-3-like et des corps apoptotiques sont impliqués dans
cet organisme, mais pas la fragmentation de l'ADN (5). Un
phénomène similaire est également observée dans
Streptomyces sp, où à la fois l'apoptose et une activité de type
nécrose sont observées (15). Mais dans Plasmodium
falciparum, un parasite du paludisme humain, la fragmentation
de l'ADN est observée quand il est traité avec chloroquinone (8,
13). De plus, les antibiotiques induisent également l'apoptose
dans les bactéries et la recherche actuelle se concentre sur les
nouvelles
L'activité bactéricide de Nitrate
antibiotiques induisant une apoptose, (14). Par conséquent, les
ions argent à partir de nitrate d'argent sont capables d'induire
l'apoptose dans des bactéries.
De plus, les mécanismes possibles pour la synthèse
d'argent nanoparticulaire et l'action bactéricide des ions
d'argent sont présentés dans Fig.2. A des concentrations plus
faibles de nitrate d'argent, nitrate réductase respiratoire peut
être impliqué dans la production de nanoparticules (7). Mais à
des concentrations plus élevées de nitrate d'argent inhibe
l'action de protéines par réaction avec les groupes thiol (5) et se
lie également à l'ADN, en arrêtant ainsi sa replication (12). Nos
résultats montrent que la production augmente catalase jusqu'à
MIC et diminue par la suite. La catalase est un piégeur connu
de ROS; Cependant son action protectrice semble être limitée à
de faibles concentrations de nitrate d'argent (en dessous du
MIC). La catalase peut également être inhibée par des
concentrations élevées de son substrat, le peroxyde
d'hydrogène. Par conséquent, le nitrate d'argent peut induire
l'apoptose dans des bactéries à travers de nombreuses façons.
Comme de nombreux organismes développent une
résistance aux médicaments comme methycillin
Staphylococcus aureus résistant, résistant à la pénicilline
Streptococcus pneumoniae qui sont fortement associés à des
infections dans les hôpitaux (11), d'autres molécules ayant une
activité antimicrobienne sont en recherche. La molécule peut
être exploitée complètement si l'on connaît le mécanisme
d'action. On peut en conclure que la formation de cellules
rétrécies et la fragmentation de l'ADN sont induits par de fortes
concentrations de nitrate d'argent dans B. licheniformis.
Cependant, le mécanisme complet derrière la mort cellulaire
est pas claire. Mais on peut conclure que l'apoptose est l'effet
majeur de l'action bactéricide de nitrate d'argent.
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Pandian, SRK et al. L'activité bactéricide de Nitrate
d'argent

Figure 2. Les mécanismes possibles de la dualité des fonctions de nitrate d'argent dans les bactéries. A - Le côté gauche de la
figure montre le mécanisme possible de la synthèse de nanoparticules d'argent à une concentration inférieure qui peut impliquer
l'enzyme de la nitrate réductase. B - La partie droite de la figure montre le mécanisme possible pour l'induction de l'apoptose par le
nitrate d'argent qui peut impliquer l'inactivation des groupes thiol contenant des protéines (par exemple la déshydrogénase NADH
II) et la liaison directe de l'argent à l'ADN arrêtant ainsi la réplication qui certainement conduisant à l'apoptose .

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Pandian, SRK et al. L'activité bactéricide de Nitrate
d'argent

REMERCIEMENTS
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Les auteurs remercient le Conseil d'Etat du Tamil Nadu
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