Bagan Kerja ISOLASI ENZIM PROTEASE DARI DAUN PEPAYA

1. Pembuatan Buffer Fosfat pH 7

a. Pembuatan KH2PO4 0,2 M
2,72 g KH2PO4

- Dimasukkan kedalam labu takar 100 mL

- Ditambahkan akuades hingga tanda batas
- Dihomogenkan
KH2PO4 0,2 M

b. Pembuatan K2HPO4 0,2 M

3,48 g K2HPO4

- Dimasukkan kedalam labu takar 100 mL

- Ditambahkan akuades hingga tanda batas
- Dihomogenkan
K2HPO4 0,2 M

c. Pembuatan larutan Buffer Posfat

61 bagian KH2PO4 39 bagian K2HPO4
0,2 M 0,2 M

- Dicampurkan dalam gelas ukur

- Ditambahkan 100 mL akuades
- Dihomogenkan

Buffer fosfat pH 7

2. Pembuatan Buffer Tris-HCl 0,1 M pH 7

1,12 g Tris (hidrosimetil) aminometana

- Dilarutkan dalam 100 mL akuades

Buffer Tris-HCl 0,1 M

- Diatur pHnya dengan HCl 0,2 M hingga pH 7

Buffer Tris-HCl
pH 7
3. Pembuatan larutan standar Tirosin
Tirosin 0,1 g

- Dimasukkan kedalam tabung reaksi

- Ditambahkan hingga 10 mL Buffer Tris-HCl pH 7
- Dihomogenkan

Tirosin 10 mg/mL

- Dipipet 1 mL ke tabung reaksi

- Ditambahkan hingga 10 mL Buffer Tris-HCl pH 7
- Dihomogenkan
Tirosin 1 mg/mL

- Dipipet 0,001; 0,002; 0,004; 0,008; dan 0,016 mL ke tabung reaksi

- Ditambahkan hingga 10 mL Buffer Tris-HCl pH 7
- Dihomogenkan

Tirosin 0,001; 0,002; 0,004; 0,008; dan 0,016 mg/mL

4. Pembuatan kasein 1 % dalam Tris-HCl pH 7

0,1 g kasein

- Dilarutan dalam 10 mL Tris-HCl pH 7

Kasein 1 %

5. Pembuatan TCA 5 %
5 % TCA 9 % CH3COONa 9 % CH3COOH

- Dicukupkaan volumenya hingga 50 mL

dengan akuades

TCA 5 %
 6. Pembuatan Na2CO3 0,5 M
2,659 g Na2CO3

- Dilarutan dalam 50 mL akuades

Kasein 1 %

7. Pembuatan follin ciocalteu 20 %

10 mL follin ciocalteu

- Dilarutan dalam 50 mL akuades

Follin 20 %

8. Isolasi Enzim Protease dari Daun Pepaya

100 g daun pepaya

- Dimasukkan kedalam blender

- Digilimg dengan larutan buffer posfat pH 7 sebanyak 25 mL
- Di biarkan mengendap
- Dipisahkan filtrat dan residu menggunakan kain kasa

Residu Filtrat
(ekstrak kasar enzim)
9. Uji aktivitas Enzim Protease

0,5 mL kasein 5 %

- Diinkubasi pada suhu 35˚C selama 5 menit

- Ditambahkan 0,5 mL sampel (ekstrak kasar enzim)
- Diinkubasi pada suhu 35˚C selama 30 menit
- Ditambahkan 0,5 ml TCA 5%
- Dienapkan
- Dipisahkan supernatan dan residu

Residu Supernatant Blanko Kontrol Standar

- Dipipet sebanyak 1 mL kedalam tabung reaksi yang

berbeda
- Ditambahkan reagen Na2CO3 0,5 M sebanyak 2,5 mL
dan dihomogenkan
- Ditambahkan folin ciocalteu 20% sebanyak 0,5 mL dan
dihomogenkan
- Diinkubasi pada suhu 35˚C selama 30 menit
- Diukur absorbansinya pada λ max (600-700 nm) dengan
spektrofotometer

Data

Catatan:
Kontrol : TCA 5 % setelah penambahan 5 menit
Blanko : Tris-HCl pH 7