Nutrigenomik, bidang nutrisi dan biologi molekuler yang baru lahir memainkan peran penting dalam

memahami pengaruh komponen makanan bioaktif pada struktur, integritas dan fungsi genom. Dalam
penelitian ini, efek komparatif vitamin C (Vit C) dan jus jeruk lokal Nigeria pada tingkat ekspresi gen

superoksida dismutase (sod), reseptor faktor nekrosis tumor (tnfr), protein p53 (p53), reseptor estrogen
(esr) dan gen reseptor progesteron (pgr) dievaluasi pada jaringan neuron tikus. 5 ml / Kg berat badan
baru jus jeruk yang diekstrak dan 20 mg / Kg berat badan Vit C diberikan secara oral ke tikus Sprague
Dawley didistribusikan ke jeruk, vitamin C dan kelompok kontrol, masing-masing. Ekspresi sod, tnfr, p53,
esr dan pgr gen diukur dengan PCR kuantifikasi relatif menggunakan SYBR green chemistry. Data
dianalisis dengan menggunakan Applied Biosystems SDS software 1.4 dan Graphpad prisma 5.0.
Peningkatan signifikan sebesar 57,01 ± 6,37 kali lipat (P <0,01)

Dalam gen tnfr diamati pada jus jeruk yang diberikan kelompok pria dibandingkan dengan vitamin C
(2,53 ± 0,74 perubahan lipat) dan kelompok kontrol. Gen lain yang diteliti (sod, p53, pgr dan esr) juga
menunjukkan perbedaan pola ekspresi tetapi perbedaan rata-rata antara kelompok uji tidak signifikan
(P> 0,05). Jeruk Jus telah terbukti memiliki kemampuan untuk meningkatkan tingkat ekspresi mRNA
yang signifikan pada gen tnfr di jaringan neuron otak tikus jantan. Kenaikan ini mungkin dimediasi oleh
komponen bioaktif lainnya di jus jeruk bukan vitamin C.

Dua puluh (20) tikus Sprague-Dawley (156,68 ± 4,72 g), terdiri dari 10 ekor

jantan dan 10 ekor betina dikumpulkan dari fasilitas hewani

College of Medicine, Universitas Lagos, Nigeria, dan ditangani

berdasarkan pedoman / kebijakan etika fasilitas hewani.

Hewan diberi makan tikus chow dan air ad-libitum. Berdasarkan

perawatan dan rejimen dosis, hewan dibagi menjadi enam

kelompok tiga hewan masing-masing seperti yang dirangkum dalam Tabel 1.

Administrasi dilakukan tiga kali sehari selama tujuh hari

HASIL DAN DISKUSI

Jeruk, buah sitrus dan salah satu yang paling melimpah dan Buah terjangkau dikonsumsi oleh
setiap populasi di seluruh seluruh dunia telah terbukti mencegah stres oksidatif dan memodulasi
ekspresi gen yang bisa memicu apoptosis (Fatemeh et al., 2009). Dalam penelitian ini, Pemberian jus
jeruk menyebabkan tidak signifikan (P> 0,05) meningkat pada tingkat ekspresi mRNA p53 (laki-laki dan
perempuan) dibandingkan dengan kelompok vitamin C (Gambar 2a dan 2b). Pada tikus jantan, 57,01 ±
6,37 kali lipat Kenaikan signifikan (P <0,05) diamati (Gambar 1a) ditingkat ekspresi gen tnfr oranye
kelompok yang dikelola Ini meningkat dalam ungkapan p53 dan tnfr dapat meningkatkan apoptosis.
Manipulasi dari fungsi apoptosis dari gen ini merupakan a Target yang menarik untuk terapi kanker
(Kane dan Citron,2009; Martin, 2010). Sebaliknya, ekspresi berlebihan gen apoptosis menghasilkan
kematian sel neuron di gangguan neurodegenerative, dan memiliki kelainan efek pada tubuh (Shacka
dan Roth, 2005; Morrison dan Kinoshita, 2000).

Studi telah mengungkapkan bahwa salah satu mekanisme oleh Buah dan sayuran mana yang
mencegah stres oksidatif adalah perubahan dalam tingkat ekspresi gen yang ada terlibat dalam generasi
dan penghapusan reaktif spesies oksigen Misalnya, jus apel dan nya komponen polifenol telah terbukti
memodulasi ekspresi unsur respon antioksidan (Solayan et al., 2011). Jus promegranate mengurangi
aktivasi gen sensitif redoks (ELK-1 dan p-JUN) dan peningkatan oksida nitrat oksida ekstraselular (eNOS)

ekspresi (De-Nigris et al., 2005). Superoksida dismutase (sod) adalah anggota enzim antioksidan,

keluarga superoksida dismutase yang mengkatalisis secara spontan menipiskan anion superoksida ke

hidrogen peroksida dan oksigen. Jeruk diberikan kelompok (tikus jantan dan betina) menunjukkan tidak
signifikan (P> 0,05) meningkat dalam tingkat ekspresi sod (Gambar 1c dan 1d). Solayan dkk. (2011)
mengamati bahwa jus apel Memodifikasi gen unsur respon antioksidan namun Gen sod1 dan sod2 tidak
terpengaruh atau tidak diatur.

Estrogen menunjukkan anti-inflamasinya dan efek neuroprotektif di otak melalui reseptor

estrogen α dan β (Sarvari et al., 2011). Dalam penelitian ini, gen esr menunjukkan peningkatan progresif
yang tidak signifikan (P> 0,05) dalam perubahan lipat dari tikus diberikan vitamin C ke tikus

jus jeruk yang diberikan (Gambar 2d). Kemampuan vitamin C untuk mengubah ekspresi gen telah terjadi

ditunjukkan oleh berbagai penelitian. Shin dkk.(2004) menerbitkan serangkaian gen yang merespons

asam askorbat pengobatan sel induk embrio. Kebanyakan gen yang diekspresikan milik keluarga gen
yang terlibat dalam neurogenesis, maturasi dan neurotrans-mission. Reseptor progesteron (PR) sangat
terdesak di seluruh otak dan dapat ditemukan di setiap neuronal jenis sel. Oleh karena itu, memiliki
beberapa fungsi non-reproduksi dalam sistem saraf pusat untuk mengaturnya kognisi, mood, radang,
fungsi mitokondria, neurogenesis dan regenerasi (Brinton et al., 2008). Ekspresi mRNA reseptor
progesteron dalam hal ini studi menunjukkan peningkatan lipat (P> 0,05) yang tidak signifikan

kelompok jus jeruk (58,34 ± 21,32) dibandingkan dengan kelompok vitamin C (5,06 x 10-4

± 2,69 x 10-4).
Hasil

Asam askorbat total plasma

Vitamin C hadir dalam plasma dan jaringan terutama di dalamnya

mengurangi keadaan, yaitu, askorbat. Namun, bisa dibalikkan

dioksidasi menjadi DHA. Kedua bentuk tersebut telah diukur dalam plasma,

menunjukkan bahwa sebagian besar vitamin C hadir di

mengurangi bentuk askorbat, sementara DHA terdeteksi dengan sangat baik

kecil sampai jumlah yang dapat diabaikan (data tidak ditunjukkan). Seperti yang ditunjukkan pada

Gambar 1, pemberian vitamin C hampir dua kali lipat rata-rata

Konsentrasi asam askorbat plasma dari mean baseline

konsentrasi 49,4 ± 9,6 sampai 95,8 ± 14 lM pada akhir tahun

5 hari masa suplementasi.

Efek vitamin C pada ekspresi gen: microarray

hasil

Data microarray menunjukkan bahwa suplementasi vitamin C 5 hari

menginduksi ekspresi diferensial hanya 1 gen,

calnexin (CANX), yang diregulasi dengan nilai FC

1,13 (p \ 0,05, Tabel 1).

Biasanya, studi ekspresi gen, asumsikan nilai FC

lebih tinggi dari 1 sebagai indikasi '' bonafide '' biologis

perbedaan. Di sisi lain, kita dapat berhipotesis bahwa dengan tidak adanya kondisi kekurangan,
tambahan asupan a

mikronutrien biasanya dikonsumsi, hanya menginduksi menit

variasi ekspresi gen pada skala kuantitatif,

mungkin menghasilkan efek biologis yang signifikan selama a

jendela besar waktu (Sanderson et al 2008.; Swali et al.

2011). Oleh karena itu kami telah menurunkan ambang ke 0,5 log

unit, untuk mengkarakterisasi perubahan kuantitatif kecil,

Meski secara statistik signifikan, itu bisa dipertimbangkan

indikasi efek biologis yang terkait dengan vitamin C

suplementasi pada subyek sehat. Penerapan ini

kriteria mengarah pada identifikasi 39 gen yang dimodulasi

dengan suplemen vitamin C, termasuk 9 pseudogen

ditandai dengan kurangnya fungsi pada tingkat protein.

Analisis pengayaan proses biologi (BP) menunjukkan

16 dari 39 gen (sekitar 40%) terutama

milik BP terkait dengan biosintesis kompleks ribonukleoprotein,

terjemahan, pengolahan RNA, dan kromatin

jalur organisasi (Tabel 1).

nalisis qPCR

qPCR adalah metode yang paling sensitif dan dapat direproduksi

mengukur tingkat ekspresi gen Beberapa penelitian melaporkan a

Kesepakatan yang baik antara data microarray dan qPCR, dengan

koefisien korelasi berkisar antara 0,69 sampai 0,80 (Dallas

et al. 2005; Gyorffy dkk. 2009). Namun, korelasi

koefisien menurun dengan penurunan tingkat

perubahan ekspresi gen. Biasanya, satu kali lipat

perubahan (dinyatakan sebagai perbedaan dalam log2) dilaporkan sebagai

'' Cutoff '' untuk korelasi yang baik antara microarray dan

Data qPCR (Morey et al. 2006; Dallas et al. 2005).

Seperti disebutkan di atas, setting ambang FC di 0.5

memungkinkan identifikasi 39 gen yang dimodulasi secara in vivo

A A. Analisis qPCR digunakan untuk mengkonfirmasi modulasi

ekspresi 6 gen (CANX, FAU, EIF3D, NPM1,

IK, dan EIF4G2) diidentifikasi oleh microarray.

Seperti ditunjukkan pada Tabel 1, sebuah ekspresi diferensial hanya 2

gen, dari subset 6 gen yang dianalisis, telah dikonfirmasi

secara statistik signifikan dengan nilai p lebih rendah dari 0,05

(FAU dan CANX).

FAU adalah gen yang mengkodekan protein fusi yang terdiri dari fouli protein seperti ubiquitin di ujung
N dan protein ribosom S30 pada ujung C (Pickard et al.2011). Calnexin adalah anggota keluarga
molekuler pendamping, membantu perakitan protein dan / atau retensi dalam retikulum endoplasma
protein tak berdinding subunit (Wu et al 2006). Secara khusus, ekspresi FC FAU (0,66) yang diperoleh
microarray dikonfirmasi oleh qPCR; di sisi lain, nilai ekspresi diferensial diperoleh gen CANX dengan
qPCR (0,53) lebih rendah dibandingkan dengan hasil yang didapat oleh microarray (1.13).

Dua transkrip varians mengkodekan untuk calnexin yang sama protein telah dijelaskan (kode refseq =
NM_001746.3 CANX (1); NM_001024649.1 CANX (2)). Sejak gen array probeset tidak memungkinkan
untuk membedakan ekspresi dari dua varian, kami menggunakan dua rangkaian primer yang berbeda
perintah untuk membedakan ekspresi dari dua varian dengan qPCR. Setelah penyempurnaan teknis ini,
kami bisa melakukannya mengidentifikasi upregulasi yang signifikan dari isoform CANX (2) sedangkan
varian CANX (1) yang mewakili terpanjang 4,953 bp transkrip tidak dimodulasi secara signifikan oleh
suplementasi vitamin C. Pengamatan ini menunjukkan hal itu jumlah gen yang dimodulasi secara
signifikan oleh AA adalah bahkan lebih rendah dari yang disediakan oleh analisis microarray dan
suplemen vitamin C yang sehat, bergizi baik Subjek dikaitkan dengan efek yang sangat sederhana
ekspresi gen di bawah kondisi fisiologis normal.

Suplemen vitamin C memodulasi ekspresi gen respon inflamasi pada PBMNC diobati dengan LPS

Untuk menilai efek suplementasi vitamin C pada respon sel terhadap stimulus inflamasi, PBMNCs

Terisolasi sebelum dan sesudah suplementasi vitamin C diinkubasi dengan adanya plasma autologous
10% (mengandung 49,4 ± 9,6 dan 95,8 ± 14 lM 0 askorbat dalam baseline dan plasma tambahan) dengan
atau tanpa LPS selama 5 jam. Seperti disebutkan di atas, kehadiran Plasma autologous 10% selama
inkubasi PBMNC dengan LPS ditetapkan agar memiliki efek kombinasi konsentrasi mapan sel-sel dari
vitamin C seluler dengan konsentrasi AA plasmatik. Pada akhir perawatan, Ekspresi sekitar 90 gen secara
bersamaan dinilai oleh qPCR menggunakan sistem stellarrayTM. Menetapkan ambang batas

BC ± 1 dan p \ 0,05, pengobatan LPS ditemukan terkait dengan modulasi signifikan dari 22 gen, dibagi

oleh PBMNC yang dikumpulkan sebelum dan sesudah suplementasi vitamin C

(Meja 2). Di sisi lain, tujuh gen secara signifikan diregulasi oleh LPS hanya di PBMNC yang diisolasi

sebelum suplementasi vitamin C (CFLAR, MAP2K3, MAP3K8, MYD88, TICAM1, TNF-a, dan TRADD).

Apalagi setelah suplementasi AA, upregulasi RELB gen secara signifikan dihambat oleh 1,43 kali lipat. Di

Di sisi lain, 6 gen secara signifikan diregulasi oleh LPS hanya di PBMNC yang diisolasi setelah
suplementasi AA, (TNFRSF11A, MAP3K7IP1, MAPK14, PPP1R13L, TIRAP, dan ZAP70) (Tabel 2). Sebagian
besar gen berbeda diatur oleh LPS di PBMNC, terisolasi sebelum dan sesudah Suplementasi AA, terlibat
dalam reseptor seperti tol
 Efek suplementasi vitamin C pada sitokin Pelepasan di PBMNC ditantang dengan LPS

Untuk mempelajari efek suplementasi vitamin C pada pelepasan sitokin yang diinduksi oleh LPS,
pelepasan 12 Sitokin berbeda diukur dalam medium yang dikumpulkan di akhir inkubasi. Hasil kami
menunjukkan bahwa LPS mengaktifkan sintesis dan pelepasan sitokin IL1A, IL1B, IL6, IL-8, dan TNF-a,
keduanya diisolasi PBMNC sebelum dan sesudah suplementasi vitamin C (Gambar 2, 3). SEBUAH
pelepasan sitokin IL-10 yang signifikan dibandingkan dengan Kontrol dikaitkan dengan perawatan LPS
hanya di PBMNC diisolasi setelah suplementasi AA (Gambar 3). Di sisi lain tangan, sitokin IL2, IL4, IL12,
IL17A, dan GM-CSF tidak dilepaskan di media pada akhir inkubasi dengan LPS keduanya dilengkapi
PBMNC tambahan dan baseline

Sebagai kesimpulan, penelitian kami menunjukkan bahwa suplementasi vitamin C

pada subyek sehat, tidak dipilih menurut

profil genetik spesifik yang mempengaruhi vitamin tinggi

kebutuhan, mengkonsumsi jumlah vitamin C yang cukup, dan

Oleh karena itu memiliki konsentrasi plasma vitamin C yang memuaskan,

tidak terkait dengan perubahan gen yang signifikan

profil ekspresi. Ini mungkin juga berlaku untuk sebuah angka

molekul bioaktif baik milik keluarga

mikronutrien mapan (vitamin dan mineral) atau ke

kurang ditandai keluarga dari apa yang disebut molekul bioaktif

(mis., polifenol). Di bawah gizi memuaskan ini

status, ’’ juga suplementasi penting (seperti

1 g suplementasi vitamin C) tidak segera terbukti

dan ‘‘ buffered ’dalam fisiologi homeostatik

keseimbangan. Berbeda, mengikuti 'hit' kedua 'seperti

yang dipertimbangkan di bagian ex vivo dari penelitian kami adalah

dari rangsangan stimulus LPS, mampu memicu a

ledakan kritis ke keadaan fisiologis normal, semakin tinggi

Ketersediaan asam askorbat muncul, dan hasilnya signifikan

modulasi respon sel (Muller dan Kersten

2003).