UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA DE LOS

ANDES.
54 UNIVERSIDAD
TECNOLÓGICA DE LOS
ANDES
FACULTAD DE INGENIERÍA
ESCUELA PROFESIONAL DE
INGENIERÍA AMBIENTAL Y
RECURSOS NATURALES
CURSO:
Tratamiento y Abastecimiento de
Agua.
DOCENTE:
Anjhela Rosa Callo Mamani.
TEMA:
Tinción Gram en agua potable de la
UTEA, agua contaminada y muestra
bucal
ALUMNA:
Rutshaidba Zuzunaga Vilchez.

ABANCAY – PERÚ 2018

 I. INTRODUCCIÓN
La tinción de Gram es uno de los métodos de tinción más importantes en el laboratorio
bacteriológico y con el que nosotros como estudiantes debemos estar perfectamente
familiarizado. Su utilidad práctica es indiscutible y en el trabajo microscópico de rutina
del Laboratorio, las referencias a la morfología celular bacteriana (cocos, bacilos,
positivos, negativos, etc.) se basan justamente en la tinción de GRAM.
Esta tinción se denominada así por el bacteriólogo danés Christian Gram, quien la
desarrolló en 1844. Sobre la base de su reacción a la tinción de Gram, las bacterias pueden
dividirse en dos grupos, Gram positivas y Gram negativas (en este caso, los términos
positivo y negativo no tiene nada que ver con carga eléctrico, sino simplemente designan
dos grupos morfológicos distintos de bacterias).
Debido a su importancia en taxonomía bacteriana y a que indica diferencias
fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias, describiremos aquí con algún
detalle la tinción de Gram y las interpretaciones que actualmente se hacen sobre el porqué
de su funcionamiento.
Las células Gram positivas, a causa de sus paredes celulares más espesas (tienen más
peptidoglicano y menos lípido), no son permeables al disolvente ya que éste deshidrata la
pared celular y cierra los poros, disminuyendo así el espacio entre las moléculas y
provocando que el de complejo cristal violeta-yodo quede atrapado dentro de la pared
celular.
Para poner de manifiesto las células Gram negativas se utiliza una coloración de contraste.
Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina básica.
Después de la coloración de contraste las células Gram negativas son rojas, mientras que
las Gram positivas permanecen azules.
II. OBJETIVOS
 aplicar una técnica de coloración diferencial para la identificación de bacterias
Gram positivas y Gram negativas en tres diferentes muestras.
 Aprender a desarrollar de manera adecuada la tinción de Gram en tres diferentes
muestras.
 Estudiar las características morfológicas de diferentes géneros de bacterias en tres
diferentes muestras.
 Determinar la reacción Gram positiva y Gram negativa de bacterias en tres
diferentes muestras.
III. MATERIALES

 Mechero de Alcohol

 Pinzas

 Portaobjetos.

 Microscopios
 cubreobjetos

 Goteros

 Agua destilada

 Alcohol
 Muestras

AGUA RÍO MARIÑO

AGUA DEL CAÑO-UTEA

MUESTRA DE ESPUTO

 Colorantes para Tinción

cristal
Violeta

Lugol

Safranina
IV. PROCEDIMIENTO

1. LAVAR LOS PORTAOBJETOS Y CUBREOBJETOS CON AGUA

DESTILADA
 Lavar y Enjuagar con agua destilada
 Secar con un paño que no suelte mota. Se recomienda la tela de pañal.
 Se realiza esta operación con la finalidad de quitar cualquier muestra ajena a la
muestra a estudiar.

2. COLOCAR UNA A DOS GOTAS DE LA MUESTRA A ESTUDIAR EN EL

PORTAOBJETOS Y PROCEDER A LA FIJACIÓN POR CALOR.
 Con la finalidad de Conservar las diferentes características de la muestra fijas en
el portaobjetos.
3. COLOCAR A CADA MUESTRA FIJA 4 GOTAS DEL COLORANTE
INICIAL (CRISTAL VIOLETA); DEJANDO REPOSAR ESTA POR UN
MINUTO.

4. ENJUAGAR CON AGUA DESTILADA LAS MUESTRAS UNA VEZ

CUMPLIDO EL TIEMPO DE REPOSO CON EL CRISTAL VIOLETA.
5. AGREGAR GOTAS DE LUGOL A LA MUESTRA PREVIAMENTE
ENJUAGADA Y DEJAR REPOSAR DURANTE UN MINUTO.
 con la finalidad de retirar el exceso de cristal violeta.

6. ENJUAGAMOS CON ALCOHOL UNA VEZ TRANSCURRIDO EL TIEMPO

DE REPOSO CON EL LUGOL.
 Con la finalidad de retirar por completo los restos de lugol.
 Las bacterias Gram positivas no se decoloran con el alcohol.
7. LAVAR NUEVAMENTE LA MUESTRA CON AGUA DESTILADA.

8. AGREGAR 2 GOTAS DE SAFRANINA A LA MUESTRA PREVIAMENTE

ENJUAGADA CON AGUA DESTILADA.
 Se realiza esta operación con la finalidad de colorear las bacterias Gram negativas.
9. ENJUAGAR NUEVAMENTE CON AGUA DESTILADA PARA RETIRAR
LOS RESTOS DE LA SAFRANINA.

10. SECAR LAS MUESTRAS DE MANERA NATURAL (MEDIO AMBIENTE).

11. UNA VEZ SECAS LAS MUESTRAS EN EL PORTAOBJETO, COLOCAR EL
CUBREOBJETO.

12. LLEVAMOS LAS MUESTRAS BAJO MICROSCOPIO PARA HACER EL

RECONOCIMIENTO DE LAS DIFERENTES BACTERIAS.
 V. RESULTADOS

1. MUESTRA UNO (AGUA DEL GRIFO-UTEA)

La muestra correspondiente al grifo de agua de la UTEA, al ser llevada bajo el

microscopio no muestra presencia de bacterias de ningún tipo según el método Gram.

2. MUESTRA DOS (AGUA DEL RIO MARIÑO)

La muestra correspondiente al agua del Río Mariño al ser llevada bajo el microscopio
muestra presencia de bacterias GRAM positivas en forma de cocos según el método
Gram.
3. MUESTRA TRES (ESPUTO)
La muestra correspondiente al esputo o saliva al ser llevada bajo el microscopio
muestra presencia de bacterias GRAM positivas y bacterias GRAM negativas en
forma de cocos según el método Gram.
VI. CONCLUSIONES
 En la muestra número uno correspondiente al agua de grifo de la universidad
tecnológica de los andes, no se observan ningún tipo de bacteria.
 En la muestra numero dos correspondiente al agua del rio Mariño, podemos
observar bacterias Gram positivas en poca cantidad en forma de cocos.
 En la muestra número tres correspondiente al esputo o saliva, se pudo observar
bacterias Gram positivas y Gram negativas en cantidad.