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DETERMINACION DE AZUCARES REDUCTORES POR ESPECTROFOTOMETRÍA

(MÉTODO DEL DNS) – PRÁCTICA N° 04

a. Reactivos:

Acido 3,5- Glucosa


dinitrosalcílico (DNS)

B. Materiales y Equipos:

ANALISIS INSTRUMENTAL
Espectrofotómetro Balanza analítica Micro pipeta

Estufa eléctrica Hielo Agua destilada


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(MÉTODO DEL DNS) – PRÁCTICA N° 04

Fiolas Tubos de ensayo Pipeta de 5 ml


rotulados

1.1. Muestra de frutas:

Naranjas Mandarinas
ANALISIS INSTRUMENTAL
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A CONSTRUCCIÓN DE LA CURVA PATRÓN DE GLUCOSA

Preparar un estándar (solución madre) con una


concentración de 2 g/L.

Pesar 0.3 g de Añadir en una fiola Añadir en una fiola


glucosa. de 100 ml. de 100 ml.

ANALISIS INSTRUMENTAL

Aforar con agua Tapar y agitar para Realizar las


destilada. diluir. diluciones
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Rotular 7 tubos de ensayo Agregar a cada tubo 0,5 ml


= 500 uL

# de Vol. Vol.
Tubos Estándar Agua
1 0 500
2 50 400
3 100 300
4 200 200
5 300 100
6 400 50
7 500 0
Realizar las diluciones con concentraciones de 2 – 1.6 - 1.42 –
0.8 - 0.4 -0.2. mg)ml, Agregar 500𝜇 de DNS. ANALISIS INSTRUMENTAL

Colocar los tubos por 5’ en Luego, enfriar en hielo por 3


agua hirviendo. min. Aproximadamente.
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Agregar 5 ml de agua Dejar reposar los tubos por


destilada a todos lo tubos. 15 minutos.

Luego, mezclar en VORTEX Medir la absorbancia en el


por 30 segundos. espectrofotómetro.

B ANÁLISIS DE MUESTRA AGROINDUSTRIAL ANALISIS INSTRUMENTAL

Obtener la muestra Luego, centrifugar la En el caso de


en forma de pulpa o muestra y utilizar el muestra sólida, diluir
jugo, y diluir la sobrenadante. una cantidad en agua
cantidad de muestra. destilada
.

Adicionar 1ml. de la De la muestra diluida, luego someter a


solución DNS, agitar extraer 1 ml en un licuado, filtrar y el
y llevar a ebullición tubo de ensayo. sobrenadante diluir.
por 10 min.
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Previamente construida y el
Enfriar rápidamente y Leer absorbancia a 540
agregar 10 ml. (o 5 ml.) nm. Con este dato resultado se debe expresar
de agua destilada con encontrado insertamos como porcentaje, tomando
previa agitación. en la curva de calibración en consideración la dilución.

Resultados de la construcción de la curva estándar por el método del ácido 3,5-


dinitrosalicilico.

CUADRO N°6: Datos para la construcción de la curva de calibración

N° GLUCOSA (g/l) ABSORBANCIA


0 0 0
1 0,2 0,0714
2 0,4 0,1216
3 0,8 0,2326
4 1,2 0,4316
5 1,6 0,5247
6 2 0,647
Elaboración propia (2015)

GRÁFICA N°5: Curva de calibración

ANALISIS INSTRUMENTAL

GRÁFICA N°4 Con la curva obtenida se realiza una gráfica de


tendencia lineal que se ajusta a los datos, el R2 obtenido para la
ecuación de la recta es de 0.9931. Teniendo en cuenta que el R2
es casi igual a 1, por lo tanto son aceptables.

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