Meselson y Stahl
3. Modelo semiconservativo o
conservador (Figura 2): Esta
teoría fue propuesta por Watson y
Crick, pero fueron Meselson y
Stahl en 1958 quienes le dieron
Figura 2 confirmación experimental,
incubando durante mucho tiempo
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células de la bacteria Escherichia coli en un medio que contenía como fuente de
nitrógeno el 15N (isótopo).
Al cabo de un tiempo todo el ADN microbiano era “pesado” (las bases púricas y
pirimídicas estaban constituidas exclusivamente por 15N). A continuación, algunas de
estas células “pesadas” se pasaron a un medio que contenía nitrógeno ligero ( 14N)
hasta que se duplicara la cantidad de células presentes (media hora
aproximadamente). En este caso se pudo ver que todo el ADN formaba una única
banda, intermedia entre la posición que hubiera ocupado el ADN “pesado” (integrado
exclusivamente por 15N) y el ADN “ligero” (integrado exclusivamente por 14N). El
experimento demostró que la replicación es semiconservadora, dando dos dobles
hélices hijas que contienen, cada una de ellas, una hebra pesada y una hebra liviana
(Figura 2).
Figura 3
Movimiento de la
horquilla de replicación
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dispuestas en sentido antiparalelo (opuesto)? La respuesta la dio Reiji Okazaki
en los años ´60, al encontrar que una de las dos cadenas se sintetiza en piezas
cortas denominadas desde entonces fragmentos de Okazaki. Ello condujo a la
conclusión de que una cadena se sintetiza continuamente y la otra
discontinuamente. La cadena continua o cadena conductora es aquella en la que
la síntesis 5’ 3’ transcurre en la misma dirección que el movimiento de la horquilla
de replicación.
La cadena discontinua o cadena rezagada es aquélla en la que la síntesis 5’ 3’
transcurre en la dirección opuesta a la del movimiento de la horquilla. Los
fragmentos de Okazaki tienen una longitud entre unos pocos centenares y unos
pocos millares de nucleótidos, según el tipo de célula.
Como la síntesis es bidireccional (transcurre hacia ambos lados del punto de
replicación), la síntesis en una cadena es continua hacia un lado y discontinua
hacia el otro.
El ADN es sintetizado por polimerasas, de las cuales existen distintos tipos. La
síntesis del ADN la podemos resumir en tres etapas
Síntesis continua
Actúan las ADN polimerasas para sintetizar las nuevas hebras en sentido 5´-3
´, ya que la lectura se hace en el sentido 3´-5´.
Intervienen las ADN polimerasas I y III, que se encargan de la replicación y
corrección de errores. La que lleva la mayor parte del trabajo es la ADN
polimerasa III
La ADN polimerasa III es incapaz de iniciar la síntesis por sí sola, para esto
necesita un cebador o primer (ARN) que es sintetizado por una ARN
polimerasa (=primasa). Este cebador es eliminado posteriormente.
La cadena 3´-5´(cadena conductora o continua) ya esta lista para ser leída
por la ADN polimerasa III
Síntesis discontinua
En la cadena 5´-3´ no puede ser leída directamente, esto se soluciona
leyendo pequeños fragmentos de ella. Los siguientes puntos resumen el
proceso:
o La primasa sintetiza varios cebadores
o La ADN pol III alarga los fragmentos de cebador incorporando
nucleótidos de 5` a 3` estos fragmentos tienen una longitud
aproximada de 1000 a 2000 nucleótidos y se denominan fragmentos
de Okazaki.
o Posteriormente actúa la ADN polimerasa I que gracias a sus función
exonucleasa, retira los segmentos de ARN o primer, y luego, gracias
a su función polimerasa, rellena los huecos con ADN.
o Finalmente la ADN ligasa sella las uniones entre los fragmentos
independientes
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3ª etapa: Corrección de errores.
La ADN polimerasa I y III, es quien corrige todos los errores cometidos en la
replicación o duplicación, gracias a su actividad exonucleasa. Al proceso se le
denomina corrección de pruebas de la exonucleasa y sirve para incrementar la
fidelidad de la síntesis.
Resumen de la
replicación
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Actividad 1: Crea un mapa conceptual al reverso de la página seleccionando 10
conceptos de la guía como mínimo que permitan resumir la replicación del ADN (15
min.)
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5
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c. ¿Por qué el experimento de Meselson-Stahl permite descartar el modelo de
replicación conservativo?
Explique
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__________________________________________________________d. ¿Por qué
Meselson-Stahl utilizan N pesado y no otro elemento químico en su experimento?
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Actividad 5: ¿Por qué se espera que la síntesis de ADN sea más compleja en
eucariontes que en procariontes?
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b. ¿Cuáles son la moléculas que actúan antes de la ADN polimerasa? ¿Qué
función cumplen?
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PRIMASA
POLIMERASA I
POLIMERASA III
LIGASA
Proteínas que se unen a la
hebra molde para que no
se vuelva a enrollar
HELICASA
GIRASA Y
TOPOISOMERASA
Bueno
Suficiente
Insuficiente
Ausente
Aspecto a Evaluar
7
Muy Bueno
Bueno
Suficiente
Insuficiente
Ausente
Aspecto a Evaluar