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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA


ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

A
IC
M
UI
Q
O
EFECTO IN VITRO DEL ZUMO DE Vaccinium corymbosum L. SOBRE
Escherichia coli BI
Y
I A

TESIS I
AC
M

Autores:
R
FA

ADRIANZEN RAMIREZ JILWER JOEL


DE
CA

CHIROQUE SANCHEZ JAIME ANDREE


TE

Asesor:
IO
BL

Dr. Q.F. QUISPE DIAZ IVAN


BI

TRUJILLO- PERU

2017

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PRESENTACION

Señores Miembros del Jurado:

Dando cumplimiento a las disposiciones establecidas en el reglamento de


Grados y Títulos de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad
Nacional de Trujillo, sometemos a consideración y elevado criterio científico el
presente informe de trabajo de investigación:

A
“EFECTO IN VITRO DEL ZUMO DE Vaccinium corymbosum L. SOBRE

IC
M
Escherichia coli”

UI
Es propicia la oportunidad para manifestar mi sincero agradecimiento a los

Q
O
docentes de la Facultad de Farmacia y Bioquímica, quienes en su labor de
educadores nos han orientado durante mi formación profesional.
BI
Y
A

En consecuencia, Señores Miembros del Jurado sometemos el presente


I
AC

trabajo para su respectiva evaluación y veredicto, esperando sea de interés y


M

gran utilidad para la facultad y la sociedad.


R
FA
DE
CA

Trujillo, enero de 2017


TE
IO
BL
BI

____________________________ ______________________________

Adrianzén Ramírez, Jilwer Joel Chiroque Sanchez, Jaime Andree

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JURADO EVALUADOR

Dra. Mantilla Rodríguez Ana Elena

_________________

A
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Presidente

M
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Y
Mg. Ybañez Julca Roberto Osmundo
I A
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FA

_________________
DE

Miembro
CA
TE
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BL
BI

Dr. Quispe Díaz Iván Miguel

_________________
Miembro

iii

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DEDICATORIA

Para mis padres por su apoyo,


consejos, comprensión, amor, ayuda
en los momentos difíciles, y por
ayudarme con los recursos necesarios
para estudiar. Me han dado todo lo que
soy como persona, mis valores, mis
principios, mi carácter, mi empeño, mi

A
IC
perseverancia para lograr mis sueños.

M
UI
ADRIANZEN RAMIREZ JILWER JOEL

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O
BI
Y
I A
AC
R M
FA
DE
CA

Esta tesis se la dedico a Dios quién supo


TE

guiarme por el buen camino, darme


IO

fuerzas para seguir adelante y no


BL
BI

desmayar en los problemas que se


presentaban, enseñándome a encarar las
adversidades sin perder nunca la
dignidad ni desfallecer en el intento.

CHIROQUE SANCHEZ JAIME ANDRE

iv

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AGRADECIMIENTO

Queremos agradecer al Dr. Iván


Miguel Quispe Díaz, por habernos
permitido trabajar en esta
investigación y guiarnos con sus
conocimientos en el desarrollo de la
presente tesis.

A
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M
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O
BI
Y
I A
AC
R M

A los miembros del jurado Dr. Roberto


FA

Ibáñez Julca, Dra. Elena Mantilla


DE

Rodríguez, por los conocimientos


CA

impartidos durante la carrera profesional.


TE
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INDICE

Página

RESUMEN i

A
IC
ABSTRAC ii

M
UI
Q
I. INTRODUCCIÒN 1

O
II. OBJETIVOS BI 7
Y
I A

III. MATERIAL Y METODO 8


AC
M

IV. RESULTADOS 17
R
FA

V. DISCUSIÒN 19
DE

VI. CONCLUSIONES 23
CA
TE

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 24


IO
BL

ANEXOS 29
BI

vi

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RESUMEN

El presente estudio tuvo como objetivo evaluar el efecto del zumo de Vaccinium
corymbosum L. sobre el crecimiento in vitro de la cepa de Escherichia coli. La
cepa empleada fue reactivada en caldo Müller Hinton y se incubó durante 18
horas a 37°C. Luego se tomó una asada de la bacteria y se ajustó con solución
fisiológica al patrón de turbidez de Mac Farland N°0.5 (1.5x10 8 UFC/mL) para la
realización del ensayo se procedió a determinar la concentración mínima
bactericida (CMB) y la concentración mínima inhibitoria (CMI). Los resultados

A
IC
obtenidos muestran un efecto inhibitorio del zumo de Vaccinium corymbosum

M
L. sobre Escherichia coli, por presentar una menor turbidez del medio que

UI
contuvo a Escherichia coli en 50uL al 100%v/v y para la concentración mínima

Q
O
bactericida (CMB) se pudo evidenciar que el zumo de Vaccinium corymbosum
BI
L. difunde sobre la cepa de Escherichia coli, a la concentración de 100% v/v,
Y
evidenciándose un halo de 4 mm de diámetro.
I A
AC

Palabras claves: Vaccinium corymbosum L., Escherichia coli.


R M
FA
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CA
TE
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BI

ii

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ABSTRACT

This study aimed to evaluate the effect of juice Vaccinium corymbosum L. on


the in vitro growth of Escherichia coli strain. The strain used was reactivated in
Müller Hinton broth and incubated for 18 hours at 37 ° C. Then a roast of the
bacteria was taken and adjusted with saline solution turbidity standard Mac
Farland No. 0.5 (1.5x108 CFU / mL) for the conduct of the trial proceeded to
determine the minimum bactericidal concentration (MBC) and the concentration
minimal inhibitory (MIC). The results show an inhibitory effect of juice Vaccinium

A
IC
corymbosum L. on Escherichia coli, have a lower turbidity medium containing

M
Escherichia coli in 50uL 100% v / v for the minimum bactericidal concentration

UI
(MBC) was evident that the juice Vaccinium corymbosum L. spreads on the

Q
O
strain of Escherichia coli, at the concentration of 100% v / v, showing a halo of
4 mm in diameter. BI
Y
A

Key words: Vaccinium corymbosum L., Escherichia coli.


I
AC
R M
FA
DE
CA
TE
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BI

ii

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I. INTRODUCCION

Las infecciones urinarias (IU) se encuentran entre las enfermedades microbianas


más prevalentes1.2. Se estima que globalmente ocurren al menos 150 millones
de casos de infecciones al tracto urinario (ITU) por año 3. En los Estados Unidos,
las IU son responsables de más de 7 millones de visitas médicas al año4. En
torno al 15% de todos los antimicrobianos de prescripción comunitaria en los
Estados Unidos se dispensa por IU, con un coste anual calculado que supera los

A
1 000 millones de dólares4. En el Perú se desconocen cifras exactas de su

IC
M
incidencia.

UI
Q
Más de la mitad de todas las mujeres tiene al menos una ITU, durante su vida y

O
su presentación más común es durante el embarazo. Afecta al 50% de las
BI
mujeres, siendo rara en los hombres de 20 a 50 años 2. En el adulto mayor, la
Y
A

ITU, es la infección bacteriana más común.1


I
AC

Las ITU, son clasificadas de diversas formas: alta o baja, aguda o crónica, no
R M

complicada o complicada, sintomática o asintomática, nueva o recurrente y


FA

comunitaria o nosocomial. 1
DE

En cuanto a su etiología, más del 95% son monomicrobianas, siendo


CA

Escherichia coli el microorganismo implicado con mayor frecuencia (70-80% de


TE

los casos). Menos frecuente puede aparecer Enterococcus faecalis, Proteus


IO

mirabilis, Staphylococcus saprophyticus (casi exclusivo de mujer


BL

premenopáusica), Streptococcus agalactiae, Klebsiella pneumoniae y otros


BI

bacilos Gram negativos. 2

En los últimos años se ha observado en muchos hospitales y clínicas privadas


variaciones significativas en la susceptibilidad microbiana, observándose la
aparición progresiva de resistencia a las cefalosporinas de primera, segunda y
tercera generación, fluoroquinolonas y otros antimicrobianos comúnmente
empleados en el tratamiento empírico de la ITU extra hospitalaria. 3

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La resistencia bacteriana en nuestro medio hospitalario peruano actualmente es


un problema con una serie de bacterias, principalmente las Gram negativas. En
un estudio previo, Escherichia coli tuvo una sensibilidad a ciprofloxacino en el
26% de los casos y a ceftriaxona en el 43%, por lo que los autores no
recomiendan su uso como terapia empírica1. Del mismo modo se encontró una
resistencia menor al 10% para amikacina. 4

En pacientes con ITU complicada (malformaciones, cateterización, falla renal


crónica, inmunosupresión, trasplante renal, hemodiálisis y diálisis peritoneal) e
ITU recurrente la resistencia antibacteriana a ampicilina fue 73%, ceftriaxona

A
11,8%, cefalexina 41,1%, ciprofloxacino 3,8%, gentamicina 43,2%, meropenem

IC
2%, ácido nalidixico 29,3%, nitrofurantoína 13,3%, norfloxacino 11% y

M
UI
trimetoprima-sulfametoxazol 59,5%.5

Q
O
Las tasas de resistencia antibacteriana han sufrido importantes variaciones con
BI
los años, por lo que el tratamiento empírico de la ITU, requiere la constante
Y
actualización de la sensibilidad antibiótica de las principales bacterias causantes
I A
AC

de la zona, país o institución donde se trabajen, en particular de Escherichia


coli, el principal uropatógeno. 6
R M
FA

Aunque los antibióticos son casi siempre efectivos para eliminar la infección de
DE

la vejiga, el tratamiento con antibióticos no necesariamente previene infecciones


recurrentes en la misma persona a menos de que se eliminen las bacterias
CA

contaminantes del colon y del tracto vaginal. La terapia profiláctica con


TE

antibióticos puede ser utilizada también para prevenir recurrencias en mujeres


IO

con ITU. 1
BL
BI

Las infecciones en pacientes hospitalizados son causadas mayoritariamente por


bacterias multirresistentes a los antibacterianos adquiridos en el ambiente
hospitalario. Las infecciones renales son más difíciles de tratar que las
infecciones de la vejiga debido a que algunos antibióticos no llegan adecuadas
concentraciones al tejido renal. 7

El antibacteriano de mayor prescripción para la cistitis aguda es la


nitrofurantoina por vía oral, o una combinación de sulfonamida-trimetoprim,

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asimismo, se pueden utilizar amoxicilina, cefalexina o ciprofloxacina. Cada uno


de estos regímenes curaba del 90 al 95% de cistitis agudas en mujeres, sin
embargo, esto ha cambiado debido a las resistencias desarrolladas por las
bacterias ante estos y otros antimicrobianos. 7

La capacidad de Escherichia coli para adquirir genes de resistencia hace


impredecible determinar su sensibilidad a diferentes antimicrobianos, por tal
motivo es muy recomendable realizar antibiogramas. 7

Hoy en día la medicina natural tiene un auge sin precedentes en todo el mundo,
estos conocimientos populares, son fuentes de estudio en busca de nuevos

A
IC
conocimientos y medicamentos más efectivos con menos efectos secundarios.

M
Según la Organización Mundial de la Salud (OMS), el 80% de la población mundial

UI
Q
recurre a la medicina natural para atender sus necesidades básicas de salud. 8,9

O
BI
En el Perú existen unas 20 000 especies de plantas a las que se les atribuyen
Y
propiedades medicinales, de las cuales 1 109 son plantas medicinales nativas,
I A

utilizadas por los grupos indígenas para cubrir sus necesidades de salud. 10
AC
M

En la actualidad, los medicamentos modernos presentan con más frecuencia, una


R
FA

serie de contraindicaciones y efectos indeseables, lo que no sucedía al usar los


remedios en su forma natural 2. Agregado a esto, gran parte de la población no
DE

pueden acceder a la medicina convencional. En gran parte por sus costos


CA

elevados por lo que recurren a la compra de plantas medicinales. 11


TE

Se han utilizado diversas técnicas microbiológicas para demostrar la actividad


IO

antimicrobiana de plantas frente a microorganismos patógenos para el hombre.


BL

Entre ellas la utilización de extractos, por ejemplo: decoctos e infusiones. 12


BI

Estos antimicrobianos de origen vegetal tienen un potencial terapéutico enorme.


Son eficaces en el tratamiento de enfermedades infecciosas y al mismo tiempo
pueden mitigar muchos de los efectos secundarios que se asocian a menudo
con antimicrobianos sintéticos13.

Se han realizado diversos estudios de los extractos de plantas sobre los efectos
antimicrobianos de muchas bacterias.

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En un reporte sobre la evaluación de la actividad antimicrobiana de extractos


etanólicos y/o aceites esenciales de las especies vegetales, Hesperomeles
ferruginea “pujin”, Myrciantes rhopaloides “arrayán negro” y Passiflora
manicata “flor de la pasión” frente a microorganismos patógenos y
fitopatógenos; al analizar los resultados de los diferentes ensayos señalaron que
el extracto etanólico de Passiflora manicata presentó mayor actividad
antimicrobiana frente a Escherichia Coli, Candida albicans y
bacillus subtilis. 14

En otro estudio, donde se analiza los principios activos de especies mexicanas

A
de Pimpinella anisum “anís” y evaluación de su actividad biológica sobre

IC
microorganismos patógenos, se reportó que la extracción metanólica de

M
UI
Pimpinella anisum, presenta una inhibición porcentual del 75 % sobre

Q
Escherichia coli a una concentración mínima inhibitoria (CMI) de 45.5 mg. 15

O
En el siguiente estudio sobre la BI
actividad antibacteriana in vitro del extracto
Y
etanólico de propolis de Apis mellífera en bacterias aisladas, de pacientes
I A
AC

del centro referencial de la libertad, se reportó que el extracto posee buena


actividad antibacteriana contra Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae,
R M

Pseudomona aeruginosa y Serratia marcescens. En este estudio se


FA

evidenció que para el caso de la Escherichia coli, a una concentración de 23%


DE

presentó un efecto bactericida. 16


CA

El arándano o mora azul (Vaccinium corymbosum L.) es un frutal menor nacido


TE

nativo de Norteamérica, que pertenece a la familia de las Ericáceas, subfamilia


IO

Vacciniaceae, subgénero Cynacoccus y es considerado dentro del grupo de las


BL

frutillas. 17
BI

Es un arbusto pequeño de 0.2 – 0.4 metros de altura, aunque existen variedades


que llegan a medir 2.5 metros. Tanto los tallos como las hojas están cubiertas
por un polvo blanquecino llamado pruina cenicienta, las hojas son persistentes,
con espinas en el pecíolo y nervio medio, verde oscuro en el haz y blancuzco en
el envés. Es un arbusto longevo, de hoja caduca y de madera leñosa. Las flores,
miden de 2 – 3 cm de diámetro y son de color blanco o rosado. 17

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El fruto es una baya casi esférica, que dependiendo de la especie y cultivar


puede variar en tamaño de 0,7-1,8 cm de diámetro y posee un color azul
metálico18. En la base de la planta se encuentra la corona, de donde se forman
los tallos, la cual está conformada por una gran cantidad de raíces superficiales.
El sistema radicular es profundo, puede llegar a profundizar más de un metro
dependiendo del suelo y el subsuelo. 17

El arándano azul, es la cuarta frutilla de interés económico en el mundo, debido


al contenido de antioxidantes y a la resistencia del cultivo a diversas condiciones
ambientales adversas. Sus propiedades antioxidantes se atribuyen al contenido

A
de flavonoides, antocianinas, polifenoles y ácido ascórbico. 19

IC
M
El jugo de arándano es una opción para prevenir la infección de vías urinarias,

UI
cualidad demostrada en diferentes publicaciones recientes, en las que se

Q
O
destaca que su mecanismo de acción radica en el efecto que ejercen las
BI
proantocianidinas, especialmente las de tipo A, en el urotelio, que evitan que
Y
Escherichia coli se adhiera a éste; es así como ejerce su acción
I A
AC

antibacteriana20.
M

Experimentos in vitro han demostrado reducción de la adhesión de Escherichia


R
FA

coli a las células endoteliales cuando las bacterias son preincubadas con 5 a 75
mg de proantocianidinas tipo A. También se ha demostrado in vitro que estas
DE

proantocianidinas modifican la superficie celular de las bacterias al capturar los


CA

lipopolisacáridos de la pared celular y modificar los patrones de unión a las


TE

células epiteliales. 20
IO
BL

Las investigaciones recientes sugieren que el consumo de arándano previene la


BI

adhesión bacteriana de uropatógenos, especialmente Escherichia coli, que es


la causante de 90% de las infecciones de vías urinarias. 20

Existe una creencia generalizada de que el jugo de arándano puede tratar las
infecciones del tracto urinario. No hay evidencia concluyente de ya sea in vitro o
en estudios in vivo para confirmar esto. Sin embargo, hay una fuerte evidencia
in vitro e in vivo que confirma la hipótesis de que las infecciones urinarias se
puede prevenir por la disminución de la adherencia bacteriana a las células
uroepiteliales. 21

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El mecanismo beneficioso históricamente se creía que se debe a los ácidos de


frutas que causan un efecto bacteriostático en la orina. Sin embargo,
recientemente, investigadores reportan que los metabolitos que participan en la
actividad antiadhesiva bacteriana contra cepas susceptibles y resistentes a los
antimicrobianos de Escherichia coli; se debe a las proantocianidinas (PACs)
tipo A.22

En el mundo, los principales países productores son Estados Unidos y Canadá.


Perú se considera como una región no tradicional en la producción de arándanos
junto con otras regiones subtropicales como el norte de Argentina, Chile y

A
España; En nuestro país la producción de arándanos se desarrollan en: Mala,

IC
Cañete, Arequipa, La Libertad, Caraz, Pisco, Cajamarca, Cusco y Lima. 23

M
UI
Cada día se hace más difícil el tratamiento antimicrobiano por la capacidad de

Q
O
dichos microorganismos de crear resistencia, tal fenómeno ha sido considerado
BI
emergente en todo el mundo, especialmente en los hospitales mostrando cifras
Y
anuales en aumento del 25% en el manejo de pacientes.
I A
AC

Los fármacos disponibles actualmente, tienen una toxicidad importante,


M

producen recurrencia o causan resistencia, razón por la cual se está procurando


R
FA

descubrir nuevos agentes antimicrobianos más potentes, pero sobre todo


seguros.
DE
CA

Los consumos de frutas y/o zumo de Vaccinium corymbosum L. es de interés


en este contexto porque comprenden alternativas más seguras y eficaces que
TE

los agentes antimicrobianos producidos sintéticamente, lo cual motiva a que


IO
BL

estos compuestos naturales sirvan como base para el desarrollo de nuevos


BI

agentes antimicrobianos que sean más eficaces que los sintéticos.

En base a los antecedentes se formula el siguiente problema:


¿Cuál es el efecto In Vitro del zumo de Vaccinium corymbosum L. sobre
Escherichia coli?

Postulándose la siguiente hipótesis.


El zumo de Vaccinium corymbosum L. tiene efecto antibacteriano in vitro
sobre Escherichia coli; debido a la presencia de antocianinas.

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II. OBJETIVOS

2.1. Objetivo general:

Evaluar el efecto In Vitro del zumo de Vaccinium corymbosum L. sobre


Escherichia coli

2.2. Objetivos específicos:

A
IC
Determinar la concentración mínima inhibitoria (CMI) del zumo de Vaccinium

M
UI
corymbosum L. sobre Escherichia coli.

Q
O
BI
Determinar la concentración mínima bactericida (CMB) del zumo de Vaccinium
Y
corymbosum L. sobre Escherichia coli.
I A
AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI

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III. MATERIAL Y MÉTODO

3.1. MATERIAL

3. 1.1. Material de estudio


1.5 Kg de frutos de Vaccinium corymbosum L.

A
3.1.2. Material de vidrio

IC
Placas Petri 100x15mm

M
Frasco de vidrio ámbar con tapa de plástico de 100ml

UI
Q
Tubos de ensayo 150x15mm

O
BI
Y
A

3.1.3. Equipos
I
AC

Balanza triple brazo OHAUS 700/800 series


M

Liofilizador LABCONCO 195 (A65412906)


R

Incubadora Memmert
FA

Congeladora Coldex 271lt


DE

Extractor de fruta Imaco.


CA
TE
IO

3.1.4. Reactivos
BL
BI

Tricloruro férrico al 3%, Sigma

Ácido clorhídrico concentrado 37% de pureza Sigma

Magnesio metálico Sigma

Anhídrido acético 98% pureza Sigma

Ácido Acético glacial 99.8% de pureza Sigma

Ácido Sulfúrico 98% de pureza Sigma

Acido benzoico 99.5% de pureza Sigma

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Tolueno 99.5% de pureza Sigma

Diclorometano 98% de pureza Sigma

Hidróxido de sodio al 10% Sigma

Metanol 99.5% pureza Sigma

Etanol de 96°GL Alkofarma

Agua destilada

Agua bidestilada Medifarma

A
IC
M
3.1.5. Material Microbiológico

UI
Q
Escherichia coli ATCC 25992

O
BI
Y
A

3.1.6. Material Farmacológico.


I
AC

Ciproquin (Ciprofloxacino) 200mg/100ml solución inyectable para


M

inyección LT 2F51675 Claris Lifesciences Limited.


R
FA
DE

3.1.7 Medios de cultivo.


CA

Agar Müller Hinton LT 35124 Britania


TE
IO
BL
BI

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3.2. MÉTODOS

3.2.1. Identificación taxonómica.

La especie de Vaccinium fue llevada al Herbariun Trujillense de la


Universidad Nacional de Trujillo, para su identificación taxonómica, esta fue
determinada mediante el código 58493, para su identificación se
registraron los siguientes datos; familia, nombre científico, hábito,
procedencia y altitud.

A
IC
M
UI
3.2.2. Método farmacognóstico

Q
O
3.2.2.1. Obtención de la muestra
BI
Los frutos maduros y frescos de Vaccinium corymbosum L. de entre 12 y
Y
15 mm de diámetro fueron obtenidos del valle de Virú (50 msnm), distrito
I A

de Virú provincia de Virú, departamento La Libertad, latitud sur 08°24' 34",


AC

longitud oeste 78°45' 05" en el mes de abril, del 2016.


R M
FA

3.2.2.2. Preparación de la muestra


DE

Las muestras Vaccinium corymbosum L. fueron lavadas con agua


CA

destilada, se cortó por la mitad retirándose las pepas y se realizó cortes del
pericarpio en rajas de 5 cm de largo y 0,5 cm de ancho. Las muestras fueron
TE

depositadas en bandejas de aluminio en finas capas y se congelaron a -


IO
BL

40°C durante 24 horas antes de su liofilización, a 0,026 bars y a -58°C


BI

durante 48 h. El Vaccinium corymbosum L. liofilizado se trituró para la


obtención de un producto en polvo. La liofilización se realizó en la Escuela
de Ingeniería Industrial, Facultad de Ciencias Agropecuarias de la
Universidad Nacional de Trujillo.

10

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3.2.3. IDENTIFICACION DE METABOLITOS

3.2.3.1. MARCHA FITOQUÍMICA24

Basada en la separación por disolventes de diferente polaridad y la identificación

A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
I A
AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI

11

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3.2.3.1. 1. Extracto acuoso

3.2.3.1. 1.1. Identificación de Flavonoides:


Reacción de Shinoda: Se midió X gotas del zumo de Vaccinium
corymbosum L., lo llevamos a sequedad, después se redisolvió en 1 ml
de metanol y trasvasamos a un tubo de ensayo agregamos limadura de
magnesio metálico más II gotas de HClcc.

3.2.3.1. 1.2. Identificación de Fenoles:

Reacción con Tricloruro férrico: Se midió X gotas del zumo de

A
IC
Vaccinium corymbosum L., en un tubo de ensayo, luego lo llevamos a

M
sequedad, después se redisolvió en 1ml de metanol y se añadió II gotas de

UI
tricloruro férrico al 5% en etanol.

Q
O
3.2.3.1. 1. 3. Identificación de Saponinas: BI
Y
Ensayo de espuma: Se midió XX gotas del zumo de Vaccinium
I A

corymbosum L. Agitamos vigorosamente por 30 segundos y, esperamos


AC

15 en reposo.
R M
FA

3.2.3.1. 1. 4. Identificación de Antocianinas


DE

Ensayo de Rosenhein: Se midió XX gotas del extracto y lo llevamos a


CA

sequedad; se redisolvió el residuo en X gotas de solución de ácido


clorhídrico 2N/1-propanolol, transvasamos a un tubo de ensayo y lo
TE

llevamos a ebullición de 15-30 minutos en baño maría.


IO
BL
BI

3.2.3.1. 2. Extracto diclorometánico.


3.2.3.1. 2.1. Identificación de Quinonas:
Reacción de Borntranger: Se midió X gotas del zumo de Vaccinium
corymbosum en una capsula, luego lo llevamos a sequedad y después se
redisolvió en XX gotas de tolueno, transvasamos a un tubo de ensayo y
agregamos XX gotas de NaOH 10%. Agitamos mezclando las fases y se
dejó en reposo hasta su recuperación.

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25
3.2.4. MÉTODO ANTIBACTERIANO

Se utilizó cultivos de Escherichia Coli, los cuales fueron reactivados


inicialmente en agar Müller Hinton e incubadas a 37º C por 24 horas. Estos
cultivos fueron proporcionados por el Centro Referencial de Salud-Minsa-
Trujillo.

3.2.4.1. DISTRIBUCIÒN DE LOS GRUPOS DE ESTUDIO.

Para determinar la concentración mínima bactericida (CMB), del zumo

A
Vacciniun corymbosun L. se trabajó por triplicado, mediante el método

IC
de Agar en placa, a la concentración de 5%v/v, 25%v/v, 50%v/v y 100%v/v,

M
UI
utilizando agua bidestilada como solvente y blanco y, al al ciprofloxacino

Q
como control.

O
La concentración mínima inhibitoria
BI
(CMI), del zumo Vacciniun
Y
Corymbosun L. se trabajó por triplicado, mediante el método de dilución en
I A
AC

caldo Müller Hinton, a la concentración de 5%v/v, 25%v/v, 50%v/v y


M

100%v/v, utilizando agua bidestilada como solvente y blanco y, al


R

ciprofloxacino como control.


FA
DE

3.2.4.2. Preparación de ciprofloxacino.


CA

Se utilizó 200ul de ciprofloxacino, a la concentración de 2mg/ml como control


TE

positivo para determinar la concentración mínima bactericida y 10ul para la


IO

concentración mínima inhibitoria a la misma concentración.


BL
BI

3.2.4.3. DETERMINACION DE LA CONCENTRACION MINIMA


BACTERICIDA (CMB).

La concentración mínima bactericida (CMB). Es la menor concentración


capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 ml de medio de cultivo, tras
18-24 horas de incubación.

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3.2.4.3.1. Método de difusión de agar en placa

3.2.4.3.1.1. Preparación de la muestra

Para la preparación de la muestra se pesó 50 g de Vaccinium


corymbosum L. fresco, para posteriormente extraer el zumo (2-3 mL) por
medio de un extractor de frutas.

3.2.4.3.1.2. Reactivación del cultivo

La bacteria fue reactivada en caldo de Müller Hinton y se incubó durante 24


horas a 37°C. Luego se tomó una asada de la bacteria y se ajustó con

A
IC
solución fisiológica al patrón turbidez de Mac Farland N°0.5 (1.5x10 8

M
UFC/mL).

UI
Q
O
3.2.4.3.1.3. Sembrado
BI
Y
Se colocó en 6 placas petri, 20 mL de Agar Müller Hinton, luego se sembró
I A

Escherichia coli mediante siembra en superficie. Se tomó un hisopo y se


AC

distribuyó uniformemente girando cada placa 30 grados por 10 veces


R M

aproximadamente. Sobre una de las placas sembradas se realizó 2


FA

perforaciones en las cuales se colocó 200 µL del zumo Vaccinium


DE

corymbosum L. a las diferentes concentraciones de 5% v/v, 25%v/v, 50%


v/v y 100% v/v y en otra placa se realizó 2 perforaciones en las cuales se
CA

colocó como blanco 200µL de agua bidestilada y control al ciprofloxacino


TE

200mg/100 mL en cada perforación. Luego las placas petri se incubaron a


IO

37°C por 24 horas.


BL
BI

Se determinó los diámetros de halo de inhibición del zumo de Vaccinium


corymbosum L. a las concentraciones de 5% v/v, 25% v/v y 50%v/v frente
a Escherichia coli.

Finalmente, se midió el halo de inhibición utilizando una regla milimetrada.

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3.2.4.3.2. DETERMINACION DE LA CONCENTRACION MINIMA INHIBITORIA


(CMI).
La concentración mínima inhibitoria (CMI). Es la menor concentración de
antibiótico capaz de inhibir el crecimiento de 105 bacterias en 1 ml de
medio de cultivo, tras 18-24 horas de incubación.

3.2.4.3.2. Método de Dilución en caldo Muller Hinton


3.2.4.3.2. 1. Preparación de la muestra

A partir del zumo de Vaccinium corymbosum L. se prepararon diluciones

A
a concentraciones de 10µL, 20 µL, 30 µL, 40 µL y 50 µL disueltos en agua

IC
bidestilada.

M
UI
3.2.4.3.2. 2. Reactivaciones de las cepas

Q
O
BI
Las cepas de Escherichia coli fueron reactivadas en caldo Müller Hinton y
Y
se incubó durante 18 horas a 37°C. Luego se tomó una asada de la bacteria
A

y se ajustó con solución fisiológica al patrón de turbidez de Mac Farland


I
AC

N°0.5 (1.5x108 UFC/mL).


R M
FA

3.2.4.3.2. 3. Enfrentamiento con el microorganismo


DE

Se utilizaron tubos de ensayo, en los cuales se colocó 1mL de agar de Müller


CA

Hinton (AMH) y cuando el medio aún estuvo líquido se añadió 10 µL de cada


TE

una de las concentraciones de las diluciones del zumo preparadas


IO

anteriormente, luego en cada tubo de ensayo se colocó 2 µL de la


BL

suspensión de la bacteria y se incubó a 37°C por 24 horas.


BI

Se empleó como control al ciprofloxacino 50µl a una concentración de


2mg/mL y se trabajó bajo las condiciones anteriormente descritas.

Después de 24 horas de incubadas a 37°C, los tubos de ensayo se


examinaron visualmente. Se consideró la concentración mínima inhibitoria a
la menor concentración de la dilución del zumo a la cual el microorganismo
ensayo no presentó desarrollo visible.

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3.3. LECTURA E INTERPRETACIÒN DE RESULTADOS.

La lectura de los resultados del CMB se realizó en aquellas placas donde el


antimicrobiano fue capaz de eliminar completamente el desarrollo bacteriano
o que eliminó al 99,9% de bacterias, comparándolo con el control positivo.

Para la lectura del CMI, se utilizó como criterio la turbidez, para esto se
colocó cruces de acuerdo a la intensidad de turbidez en los diferentes tubos
de ensayo, máximo de cruces fueron 3, este es que presenta mayor turbidez
y cero (0), al que presenta la CMI.

A
IC
La CMI fue interpretada como la concentración de antimicrobiano, contenida

M
UI
en el tubo de la serie que inhibió el crecimiento visible de la bacteria, para lo

Q
cual fue necesario comparar cada uno de los tubos con los controles positivo

O
y negativo. BI
Y
I A

3.4. EVALUACIÓN ESTADÍSTICA 26


AC
M

Se realizó la prueba estadística de ANOVA para hallar la diferencia


R
FA

significativa de la concentración de mínima bactericida a diferentes


concentraciones del zumo de Vaccinium corymbosum L.
DE
CA
TE
IO
BL
BI

16

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IV. RESULTADOS

Tabla 1. ANOVA de la concentración mínima bactericida del zumo de


Vaccinium corymbosum L. frente a Escherichia coli.

Origen de Suma de Grados Promedio F Probabilidad Valor crítico


las cuadrados de de los para F
variaciones libertad cuadrados
Entre 20,16944444 5 4,033888889 0,969231796 0,474148863 3,105875239
grupos
Dentro de 49,94333333 12 4,161944444

A
IC
los grupos

M
UI
Total 70,11277778 17

Q
O
BI
Y
I A

Concentraciòn Vs diámetro de los halos


AC
M
Diametro de Halos (mm)

45
R

50
FA

40
DE

30
20
CA

2 4
10 0 0
TE

0
1
IO

A B C D Ciprofloxacino 2mg/ml
BL
BI

A=5% de zumo de Vaccinium corymbosum L., B=25% de zumo de Vaccinium


corymbosum L., C=50% de zumo de Vaccinium corymbosum L., D=100% de
zumo de Vaccinium corymbosum L.
Fuente: Investigadores

Gràfico 1. Diámetro promedios de los halos de inhibición de crecimiento


bacteriano de Escherichia coli por acción del zumo de Vaccinium
corymbosum L. y Ciprofloxacino.

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Tabla 2. Evaluación de la concentración mínima inhibitoria de Vaccinium


corymbosum L., ciprofloxacino y agua bidestilada frente a Escherichia coli
por dilución en agar.

Muestra Concentración Número de muestra Turbidez

Tubo 1 +++

10 µl Tubo 2 +++

Tubo 3 +++

Tubo 4 +++

A
20 µl Tubo 5 +++

IC
M
Tubo 6 +++

UI
Zumo de Tubo 7 +++

Q
O
Vaccinium 30 µl Tubo 8 +++
corymbosum L. Tubo 9 BI +++
Y
A

Tubo 10 +++
I
AC

40 µl Tubo 11 +++
M

Tubo 12 +++
R
FA

Tubo 13 +
DE

50 µl Tubo 14 +
CA

Tubo 15 +
TE

Tubo 16 0
IO

50µl Tubo 17 0
Ciprofloxacino
BL

2mg/ml Tubo 18 0
BI

Tubo 19 +++

50µl Tubo 20 +++


Agua bidestilada
Tubo 21 +++

Fuente: Investigadores.

Leyenda:

0: Sin turbidez ++: Mediana turbidez


+: Menor turbidez +++: Mayor turbidez

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V. DISCUSION

En la Tabla 1, el análisis estadístico de ANOVA de los promedios de los halos


de inhibición del zumo de Vaccinium corymbosum L. sobre Escherichia coli
se determinó que el valor crítico es 3.1 se acepta la hipótesis nula (Ho: µ= µo
con α = 0.05) con un nivel de confianza de 0.95 y se concluye que existe
diferencia significativa entre las concentraciones evaluadas, y que la
concentración al 100% es más eficiente en relación a las concentraciones de
50%, 25% y 5%.

A
IC
En la Gráfico 1, se observa que el zumo de Vaccinium corymbosum L. a la

M
concentración de 100%v/v, presentó efecto mínima bactericida (4mm) sobre las

UI
cepas de Escherichia coli. Su efecto mínima bactericida se debe a una menor

Q
O
concentración proantocianidinas presentes en el zumo Vaccinium
corymbosum L., estos metabolitos se encuentran en mayor proporción en suBI
Y
piel.24
I A
AC

Las proantocianidinas, son compuestos fenólicos estables que bloquean la


expresión de las fimbrias P de Escherichia coli 22
. Estudios realizados en la
R M

Universidad estatal de New Jersey, USA; determinaron que la actividad


FA

antibacteriana de proantocianidinas incluye, la posible inhibición de las enzimas


DE

bacterianas extracelulares, la privación de los sustratos necesarios para el


CA

crecimiento bacteriano o la acción directa sobre su metabolismo mediante la


TE

inhibición de la fosforilación oxidativa. 25


IO
BL

Asimismo en el misma Gráfico 1, se observa que el zumo de Vaccinium


BI

corymbosum L. a la concentración de 25%v/v, no presentó efecto bactericida


sobre las cepas de Escherichia coli A este porcentaje no hay suficiente
concentración de proantocinidinas que alcancen el sitio de activo o bien, la
estructura de las porinas impida el paso del principio activo al interior de la célula
bacteriana. 25

En una revisión sistemática de ensayos clínicos aleatorizados de la base de


Cochrane, que incluyó a 24 estudios con un total de 4473, reportó en 14 estudios
que el zumo de Vaccinium corymbosum L., es poco eficaz frente a

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Escherichia coli aunque en algunos de los estudios demostraron un pequeño


beneficio para las mujeres con infecciones urinarias recurrentes, pero no hubo
diferencias estadísticamente significativas cuando se incluyeron los resultados
de un estudio mucho más grande. 26

Según el estudio realizado en la Universidad de Cartagena, Colombia;


demuestra que el criprofloxacino presenta actividad bactericida en un 63,9%
sobre las cepas de Escherichia coli 28
. En otro estudio realizado en la
Universidad Privada Cayetano Heredia, Perú; demuestra que estas bacterias
Gram negativas, presentaban sensibilidad a ciprofloxacino en un 44,5% 29
. Por

A
otro lado, en el estudio realizado en la Universidad de Salamanca, España;

IC
determinaron que las cepas Escherichia coli eran susceptibles a ciprofloxacino

M
UI
en 77,2%. 30

Q
O
En el Gráfico 1, se observa que el zumo de Vaccinium corymbosum L. a la
BI
concentración de 5%v/v y 50%v/v, en la primera observamos que las cepas de
Y
Escherichia coli, no presentaron sensibilidad. En la segunda concentración
I A
AC

dichas cepas presentaron efecto mínima bactericida (2mm).


M

La explicación de esto, responde a que las cepas de Echerichia coli, bacteria


R
FA

Gram negativa, presenta dos membranas lipídicas una interna y otra externa,
entre las que se localiza una fina pared celular de peptidoglucano. La membrana
DE

externa protege a las bacterias de varios antibióticos, colorantes y detergentes


CA

que normalmente dañarían la membrana interna o la pared celular de


TE

peptidoglucano, por esto se necesita una mayor concentración de


IO

proantocianidinas en el zumo de Vaccinium corymbosum L. para inhibir dicha


BL

cepa. 30
BI

En la Tabla 2, se observa que en el tubo de ensayo que contenía 50uL de zumo


de Vaccinium corymbosum L. al 100%v/v, se evidenció un mayor efecto
inhibitorio (CMI) por presentar una menor turbidez del medio que contenía la
cepa de Escherichia coli.

En la Tabla 2, se observa que en el tubo de ensayo que contenía 40 uL de zumo


de Vaccinium corymbosun al 100%v/v, se pudo evidenciar un menor efecto

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inhibitorio (CMI) por presentar una mayor turbidez del medio que contenía la
cepa de Escherichia coli.

En la Tabla 2, se observa que en los tubos de ensayo que contenía 30 uL y 20uL


respectivamente del zumo de Vaccinium corymbosun L. al 100%v/v, se pudo
evidenciar que no presentó efecto inhibitorio (CMI) alguno, por presentar una
mayor turbidez del medio que contenía a la cepa Escherichia coli.

Estudios revelaron que de 240-300 mL de zumo de Vaccinium corymbosun L.


podría prevenir la recurrencia de ITU, lo que sugiere que una dosis de <240 mL/
día no proporcionó protección suficiente. La ingesta de zumo Vaccinium

A
IC
corymbosun L. inhibe la adherencia de cepas independientemente de si

M
producen P-fimbrias y fimbrias tipo 1, así como tanto resistente a los antibióticos

UI
y las cepas susceptibles31.

Q
O
BI
Durante el paso inicial en el desarrollo de una infección urinaria, Escherichia
Y
Coli produce fimbrias-pelo así sobresalen de la superficie bacteriana. Estas
A

fimbrias llevan adhesinas que se unen a receptores en las células


I
AC

uroepiteliales31.
R M

El zumo de Vaccinium corymbosun L. contiene las proantocianidinas, que


FA

inhiben las cepas de Escherichia coli adhesinas y muestran una fuerte


DE

actividad inhibidora frente a fimbrias-P. El índice de adherencia (es decir, el


CA

número de bacterias adheridas a cada celda) representa la actividad de una


fracción oligomérica de las proantocianidinas pertenezcan al tipo A, lo que
TE

sugiere que el zumo de Vaccinium corymbosun L. afecta a varios fimbrias, pero


IO
BL

particularmente P-fimbrias. Los presentes resultados confirman la existencia de


BI

un efecto dependiente de la dosis sobre la adherencia in-vitro de Escherichia


Coli a las células epiteliales de la vejiga.31

Al ser dosis dependiente, cuando se aumentó el volumen, se evidencio un mayor


efecto inhibitorio, esto nos hace inferir que si aumentáramos el volumen el efecto
podría ser mejor, también se debe tener en cuenta que el tiempo de tratamiento
es importante para producir el efecto antibacteriano y como profilaxis para tratar
problemas de ITU recurrentes. 31

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Según el estudio del Grupo Cochrane de Riñón Registro Especializado, sugiere


que zumo de Vaccinium corymbosun L. es menos eficaz para la prevención
de ITU recurrente, Aunque algunos estudios pequeños han demostrado un
beneficio menor para las mujeres con IU recurrentes, hubo diferencias
estadísticamente significativas en los resultados, el zumo de Vaccinium
corymbosun L. no se recomienda para la prevención de la ITU. 26

A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
I A
AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI

22

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VI. CONCLUSIONES

Se determinó que la concentración de 50uL al 100%v/v del zumo de Vaccinium


corymbosum L. sobre Escherichia coli, fue el que presentó mayor efecto
inhibitorio.

Se determinó que el zumo de Vaccinium corymbosum L. tiene efecto mínima


bactericida sobre Escherichia coli, a la concentración 100%v/v.

A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
I A
AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI

23

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A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
I A
AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI

28

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ANEXOS

TABLA 1. Identificación cualitativa de los fitoconstituyentes del extracto acuoso


del fruto liofilizado de Vacciniun corymbosum L.

REACCION/
METABOLITO COLORACION PRECIPITADO RESUTADO
PRUEBA

Saponinas Espuma - - Negativo (-)

A
Flavonoides Shinoda Rojo - Positivo (+++)

IC
M
Antocianinas Rosenhein Marrón - Positivo (+++)

UI
Tricloruro

Q
Fenoles Verde oscuro - Positivo (+++)

O
férrico
Fuente: Investigadores. BI
Y
I A
AC
R M

TABLA 2. Identificación cualitativa de los fitoconstituyentes del extracto acuoso


FA

del fruto liofilizado de Vacciniun corymbosum L.


DE
CA

REACCION/
TE

METABOLITO COLORACION PRECIPITADO RESUTADO


PRUEBA
IO
BL

Quinonas Bortranger - - Negativo (-)


BI

Fuente: Investigadores.

29

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DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN MÍNIMA BACTERICIDA (CMB)

FIGURA1: Determinación de la concentración mínima bactericida de cepas


de Echerichia coli frente al Ciprofloxacino como patrón y agua como
blanco.

A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
I A
AC
R M
FA
DE

FIGURA 1
CA
TE
IO
BL

Se observa que el ciprofloxacino a la concentración de 2mg/ml (200ul),


BI

presentó efecto bactericida (50mm) sobre las cepas de Escherichia coli y


no se observó efecto alguno con el blanco (agua)

30

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FIGURA 2: Determinación de la concentración mínima bactericida (CMB) de


Cepas de Echerichia coli frente al zumo de Vaccinium corymbosum L. a la
concentración de 100%v/v y al 25% v/v.

A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
I A
AC
R M
FA
DE

FIGURA 2
CA
TE
IO
BL

Se puede evidenciar que el zumo de Vaccinium corymbosum L. difunde sobre


BI

las cepas de Escherichia coli, a la concentración de 25% v/v no se evidencio


efecto bactericida pero a la concentración de 100% v/v se pudo evidenciar un
halo de 4 mm de diámetro.

31

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FIGURA 3: Determinación de la concentración mínima bactericida de cepas de


Echerichia coli frente al zumo de Vaccinium corymbosum L. a la
concentración de 50%v/v y al 5% v/v

A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
I A
AC
R M
FA
DE

FIGURA 3
CA
TE
IO
BL

Se puede evidenciar que el zumo de Vaccinium corymbosum L. difunde sobre


BI

las cepas de Escherichia coli, a la concentración de 5% v/v no se evidencio


efecto bactericida pero a la concentración de 50% v/v se pudo evidenciar un halo
de 2 mm de diámetro.

32

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DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN MÍNIMA INHIBITORIA (CMI)

FIGURA 4: Determinación de la concentración mínima inhibitoria de caldo


Müller Hinton con cepas de Echerichia coli frente a 50uL de zumo de
Vaccinium corymbosum L. a la concentración de 100%v/v

A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
I A
AC
R M
FA
DE
CA

FIGURA 4
TE
IO
BL
BI

Mayor efecto inhibitorio (CMI) del zumo de Vaccinium corymbosum L. por


presentar una menor turbidez del medio que contenía la cepa de Escherichia
coli.

33

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FIGURA 5: Determinación de la concentración mínima inhibitoria de caldo


Müller Hinton con cepas de Echerichia coli frente a 40uL de zumo de
Vaccinium corymbosum L. a la concentración de 100%v/v

A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
I A
AC
R M
FA
DE
CA

FIGURA 5
TE
IO
BL
BI

Menor efecto inhibitorio (CMI) del zumo de Vaccinium corymbosum por


presentar una mayor turbidez del medio que contenía la cepa de Escherichia
coli.

34

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FIGURA 6: Determinación de la concentración mínima inhibitoria de caldo


Müller Hinton con cepas de Echerichia coli frente a 30uL de zumo de
Vaccinium corymbosum L. a la concentración de 100%v/v

A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
I A
AC
R M
FA
DE

FIGURA 6
CA
TE
IO

Efecto inhibitorio mínimo (CMI) del zumo de Vaccinium corymbosum por


BL

presentar una mayor turbidez del medio que contenía la cepa de Escherichia
BI

coli.

35

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FIGURA 7: Determinación de la concentración mínima inhibitoria de Caldo


Müller Hinton con cepas de Echerichia coli frente a 20uL de zumo de
Vaccinium corymbosum L. a la concentración de 100%v/v

A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
I A
AC
R M
FA

FIGURA 7
DE
CA
TE
IO

No se presencia efecto inhibitorio (CMI) del zumo de Vaccinium corymbosum


BL

L. sobre la cepa de Escherichia coli por presentar un alto grado de turbidez del
BI

medio que contiene la cepa de Escherichia coli.

36

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MARCHA FITOQUÍMICA DE VACCINIUM CORYMBOSUM L.

Flavonoides: Shinoda

Ensayo: (+)

A
Color: rojo

IC
M
UI
Q
Saponinas: Ensayo de la espuma

O
BI
Y
I A
AC
R M
FA
DE

Ensayo: (-)
No se formó espuma.
CA
TE
IO

Quinonas: Borntrager: Extracción diclorometánico.


BL
BI

Ensayo: (-)
No se evidencio el color rojo

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Fenoles: Tricloruro Férrico

Ensayo: (+++)
Color: Verde oscuro

A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
Antocianinas: Rosenhein
I A
AC
R M
FA
DE
CA

Ensayo: (+++)
TE

Color: Rojo
IO
BL
BI

38

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Comparación de antocianidinas presentes en el fruto sin piel, y en la piel


de Vaccinium corymbosum L. “Arándano azul”

Bilberry
(Vaccinium
Corymbosum)

A
IC
Figura 1. Total antocyanins content in bilberry and blueberry cultivarse, Berry and Berry skins

M
UI
Q
O
BI
Tabla 1. Antocyanins content in bilberry and blueberry cultivars berry skins
Y
I A
AC
R M
FA
DE
CA
TE

Tabla 2. Antocyanins content in bilberry and blueberry cultivars berry


IO
BL
BI

39

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Obtención del zumo de Vaccinium Corymbosum L.

Muestras de Vaccinium

A
corymbosum L. aptas

IC
para realizar el trabajo

M
de investigación

UI
Q
O
BI
Y
I A
AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI

Extracción del zumo de Zumo de Vaccinium corymbosum al


Vaccinium corymbosum 25%v/v 50%v/v y 100%v/v

40

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Materiales y equipos microbiológicos

A
IC
M
UI
Q
O
Patrón: Ciproquin Mechero de
(Ciprofloxacino) Asa bacteriológica BI
Placas petri
alcohol
Y
I A
AC
M

Estandarización de la cepa aislada de Eschericia coli


R

Escala de Mc Farland 0.5


FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI

Ajuste con solución fisiológica al patrón turbidez de


Mac Farland N°0.5 (1.5x108 UFC/mL).

41

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Prueba de la Acción antibacteriana del zumo de Vaccinium corymbosum


L. “arándano azul”

Sembrado.

A
IC
M
UI
Q
O
Asada de Echerichia coli
BI
Y
I A

Concentración mínima bactericida (CMB)


AC

Concentración mínima inhibitoria (CMI)


R M
FA
DE

Enfrentamiento.
CA
TE
IO

Enfrentamiento del zumo de


BL

Vaccinium corymbosum L.
frente a Echerichia coli, para
BI

determinar la CMI

Extracción de ul de zumo de
Enfrentamiento del zumo de Vaccinium corymbosum L.
Vaccinium corymbosum L.
frente a Echerichia coli, para
determinar la CMB
42

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Incubación.

A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
Incubación de las placas petri (CMB) y tubos de ensayo (CMI) se incubaron a 37°C por 24 horas.
I A
AC

Lectura de las medidas de los halos de inhibición y de la turbidez de las


M

cepas
R
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI

Lectura de la capacidad
Lectura de la capacidad antibacteriana (CMB) de Zumo de
antibacteriana (CMI) de Zumo de
Vaccinium corymbosum L. Halos de inhibición
Vaccinium corymbosum L. Turbidez

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A
IC
Lectura de la capacidad antibacteriana (CMB y CMI) de Zumo de Vaccinium

M
Corymbosum L.

UI
Q
O
BI
Y
I A
AC

Liofilización de Vaccinium corymbosum L. “Arándano azul”


R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI

Liofilizando el Vaccnium
corymbosum L.

44

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Conservación de Vaccinium corymbosum L. liofilizado.

A
IC
M
UI
Q
O
BI
Conservando el liofilizado de Vaccnium corymbosum L. en bolsas de polietlieno.
Y
I A
AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI

45

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Identificación taxonómica de la planta de Vacciniun corymbosum L. en el


herbario truxillenses de la universidad nacional de Trujillo.

A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
I A
AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI

46

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