Guía de prácticas de Farmacología y Bioquímica II Escuela de Medicina

PRÁCTICA N° 13 DIURÉTICOS EN COBAYOS

COMPETENCIA:
El estudiante al término de la práctica evidenciara los cambios en forma
comparativa que se producen en el volumen urinario de cobayos, mediante el uso de
fármacos diuréticos.

I. INTRODUCCIÓN

Una de las principales funciones del riñón es mantener la HOMEOSTASIS de los

líquidos y electrolitos en el cuerpo, función que no es superada por ningún otro
grupo de órganos en el cuerpo.
El producto final de la actividad de la NEFRONA
(unidad anátomo funcional del riñón) es la
ORINA. Si bien es cierto que la composición de
la orina es variada, ésta debe estar en íntima
relación con la composición del LIQUIDO
EXTRACELULAR (LEC), ya que la composición de
este último debe encontrarse en rangos muy
estrechos con el fin de favorecer la
supervivencia.

Los DIURÉTICOS son fármacos que estimulan la

EXCRECIÓN RENAL de AGUA y
ELECTRÓLITOS, como consecuencia de su acción sobre el transporte iónico a lo
largo de la nefrona.
Su objetivo fundamental es conseguir un balance negativo de agua, pero los
diuréticos no actúan directamente sobre el agua, sino a través del sodio (diuréticos
natriuréticos) o de la osmolaridad (diuréticos osmóticos).

CLASIFICACIÓN DE LOS DIURÉTICOS

La clasificación que predomina actualmente es la que combina, en lo posible, la
eficacia diurética, con el sitio de acción y con la estructura química.

a) Diuréticos de máxima eficacia. Actúan en los segmentos diluyentes; la

fracción de eliminación de Na+ es superior al 15 %.

1
MsC.Germán Narro Cabezas
Guía de prácticas de Farmacología y Bioquímica II Escuela de Medicina

 Los más importantes son los sulfamoilbenzoatos furosemida, bumetanida

y piretanida, el derivado de la sulfonilurea torasemida (torsemida), el
derivado del ácido fenoxiacético ácido etacrínico y la tiazolidona
etozolina.
Furosemida

Es un diurético de asa (techo alto), actúa interfiriendo en el mecanismo de

intercambio de iones de sodio, potasio y cloro en la rama ascendente gruesa
del asa de Henle. Normalmente este simporte utiliza el gradiente de Na+
generado por la Na+/K+ ATPasa basolateral y permite la reabsorción de Na+
K+ y 2Cl-. Existen canales de K para el reciclado apical de este catión y
canales de Cl basolaterales para la salida de Cl. De esta forma el voltaje de la
membrana apical está determinado por el potencial de equilibrio para el
potasio y es hiperpolarizado y la conductancia para el Cl- de la membrana
basolateral provoca un potencial de equilibrio menor. Como resultado de la
diferencia transepitelial (luz + positiva que el espacio intersticial) se genera
una FUERZA impulsora para el flujo paracelular de cationes hacia el espacio
intersticial. Al inhibirse el simporte no sólo se inhibe la reabsorción de Na+,
K+ y Cl-, sino también la de cationes como Ca++ y Mg++.

La furosemida posee efectos hemodinámicos determinados por la inhibición

de la PG deshidrogenasa (enzima que degrada PGE2), y capacidad inhibidora
de la actividad de la anhidrasa carbónica.

b) Diuréticos de eficacia mediana. Actúan en la porción final del segmento

diluyente cortical y en el primer segmento del túbulo distal; la fracción de
eliminación de Na+ es del 5-10 %.
 Son las benzotiadiazinas (tiazidas e hidrotiazidas): hidroclorotiazida,
altizida, bendroflumetiazida.
Hidroclorotiazida

Los diuréticos tiazídicos aumentan la excreción de sodio, cloruro y agua,

inhibiendo el transporte iónico del sodio a través del epitelio tubular renal. El
mecanismo principal responsable de la diuresis es la inhibición de la
reabsorción del cloro en la porción distal del túbulo. Las tiazidas aumentan
igualmente la excreción de potasio y de bicarbonato y reducen la eliminación
de calcio y de ácido úrico. La hipopotasemia e hipocloremia inducidas por las
tiazidas pueden ocasionar una ligera alcalosis metabólica, aunque la eficacia
diurética no es afectada por el equilibrio ácido-base del paciente. La
hidroclorotiazida no es un antagonista de la aldosterona y sus efectos son
independientes de una inhibición de la anhidrasa carbónica.

c) Diuréticos de eficacia ligera. La fracción de eliminación de Na+ es inferior al 5

%. Su sitio de acción es variable:

2
MsC.Germán Narro Cabezas
Guía de prácticas de Farmacología y Bioquímica II Escuela de Medicina

 Ahorradores de K+: actuán en el último segmento del túbulo distal por

inhibición de la aldosterona: espironolactona y canrenoato de potasio, o
con independencia de la aldosterona: amilorida y triamtereno.
 Inhibidores de la anhidrasa carbónica: acetazolamida y diclorfenamida
 Agentes osmóticos: actúan en el túbulo proximal: manitol e isosorbida.
Espironolactona

Es un antagonista farmacológico específico de la aldosterona, que actúa

principalmente mediante un mecanismo competitivo de unión a los receptores
de la zona de intercambio Na+/K+ dependiente de aldosterona localizados en
el túbulo renal distal. La espironolactona actúa como un diurético ahorrador
de potasio, provocando un aumento de la excreción de sodio y agua y
manteniendo los niveles de potasio y magnesio. También posee un efecto
antiandrogénico, probablemente por un antagonismo periférico de los
andrógenos.

Fuente. Goodman & Gilman. Manual de Farmacología y terapéutica, 2°ed. 2007.

3
MsC.Germán Narro Cabezas
Guía de prácticas de Farmacología y Bioquímica II Escuela de Medicina

I. PARTE EXPERIMENTAL:

1.1. MATERIAL:
 BIOLOGICO:
 4 Cavia porcellus (cobayos).

 REACTIVOS:
 Furosemida ----------- CONTROL POSITIVO
 Hidroclorotiazida 25 mg ----------- CONTROL POSITIVO
 Espironolactona 25 mg ----------- CONTROL POSITIVO
 Solución fisiológica (NaCl 0.9 %)-------- CONTROL NEGATIVO

 EQUIPOS:
 Jaulas Metabólicas
 Tubos de ensayo
 Probetas
 Pipetas
 Goteros
 Gradillas
 OTROS:

 Agua destilada
 Guantes “M” y “S”
 Agujas descartables

4
MsC.Germán Narro Cabezas
Guía de prácticas de Farmacología y Bioquímica II Escuela de Medicina

1.2. MÉTODO:
Fundamento del método.
El estudio de estos fármacos, se basa en determinar la diurésis y/o eliminación de
electrolitos en animales de experimentación. Para este fin, se recomienda utilizar
COBAYOS debido a que su patrón de excreción urinaria es más regular. Se debe
señalar que, el método sólo mide diuresis y es cualitativo.
El método que emplearemos consiste básicamente en someter a los animales de
experimentación a una sobrecarga salina seguido de la medición del volumen
urinario excretado. Después, se administrara un diurético, se mide el volumen y
pH urinario.

EXPERIMENTO N° 1 (Cobayo con FUROSEMIDA).

 Dejar al animal en un estado de ayuno por un lapso de tiempo de 12 horas.
 Administrar al animal suero fisiológico isotónico en dosis de 10 ml. por vía
oral.
 Colocar al animal en la jaula recolectora y recolectar la orina en un lapso
de 60 minutos. De nuevo administrar suero salino isotónico en dosis de 10
ml por vía oral y dejar trascurrir 30 minutos y administrar FUROSEMIDA
en dosis de 20 mg/kg vía intraperitoneal.
 Colocar al animal en una jaula metálica. Controlar la diuresis al recolectar
la orina y medir su volumen por un lapso de tiempo de 60 minutos.

EXPERIMENTO N° 2 (Cobayo con HIDROCLOROTIAZIDA).

 Dejar al animal en un estado de ayuno por un lapso de tiempo de 12 horas.
 Administrar al animal suero fisiológico isotónico en dosis de 10 ml por vía
oral.
 Colocar al animal en la jaula recolectora y recolectar la orina en un lapso
de 60 minutos. De nuevo administrar suero salino isotónico en dosis de 10
ml por vía oral y dejar trascurrir 30 minutos y administrar
HIDROCLOROTIAZIDA en dosis de 20 mg/kg vía intraperitoneal.
 Colocar al animal en una jaula metálica. Controlar la diuresis al recolectar
la orina por un lapso de tiempo de 60 minutos.

EXPERIMENTO N° 3 (Cobayo con ESPIRONOLACTONA).

 Dejar al animal en un estado de ayuno por un lapso de tiempo de 12 horas.
 Administrar al animal suero fisiológico isotónico en dosis de 10 ml. por vía
oral.

5
MsC.Germán Narro Cabezas
 Guía de prácticas de Farmacología y Bioquímica II Escuela de Medicina

 Colocar al animal en la jaula recolectora y recolectar la orina en un lapso

de 60 minutos. De nuevo administrar suero salino isotónico en dosis de 10
ml por vía oral y dejar trascurrir 30 minutos y administrar
ESPIRONOLACTONA en dosis de 20 mg/kg vía intraperitoneal.
 Colocar al animal en una jaula metálica. Controlar la diuresis al recolectar
la orina y medir su volumen por un lapso de tiempo de 60 minutos.

1.3. PROCEDIMIENTO:

 Triturar las tabletas de 25 mg de Hidroclorotiazida y Espironolactona en

2,5 mL de agua destilada y vaciar en tubos de ensayo independientes
rotulando el nombre del fármaco (Cada mL de esta dilución contiene 10 mg
del fármaco)
 Pesar a los cobayos
 Calcular la dosis a administrar a cada cobayo a razón de 10 mg/kg de
cobayo. En caso de no contar con el peso administrar 10 mg de cada
diurético a cada uno de los cobayos.
 Administrar al cobayo 1 Hidroclorotiazida a dosis de 10 mg por kg de peso
vía intraperitoneal. Colocarlo en su jaula y ubicarla dentro del embudo.
Recolectar la orina por 60 minutos.
 Administrar al cobayo 2 Furosemida a dosis de 10 mg por kg de peso via
intraperitoneal. Colocarlo en su jaula y ubicarla dentro del embudo.
Recolectar la orina por 60 minutos.
 Administrar al cobayo 3 Espironolactona a dosis de 10 mg por kg de peso
via intraperitoneal. Colocarlo en su jaula y ubicarla dentro del embudo.
Recolectar la orina por 60 minutos.
 Medir los volúmenes de orina producidos con cada diurético con la
probeta.
 Efectuar una comparación de los resultados de diuresis obtenidos

II. RESULTADOS
Anotar los resultados en la tabla siguiente:
Control negativo(suero fisiológico) Control positivo
Parámetros
0-15 min 30 min 60 min 0-15 min 30min 60 min
Diurético F H E F H E F H E
Volumen (mL)
pH
F: FUROSEMIDA, H: HIDROCLOROTIAZIDA, E: ESPIRONOLACTONA.

6
MsC.Germán Narro Cabezas
Guía de prácticas de Farmacología y Bioquímica II Escuela de Medicina

volumen total excretado

𝐸𝑥𝑐𝑟𝑒𝑐𝑖ó𝑛 𝑈𝑟𝑖𝑛𝑎𝑟𝑖𝑎 𝐶𝑂𝑁𝑇𝑅𝑂𝐿 𝑃𝑂𝑆𝐼𝑇𝐼𝑉𝑂 = 𝑥 100
volumen total administrado

volumen total excretado

𝐸𝑥𝑐𝑟𝑒𝑐𝑖ó𝑛 𝑈𝑟𝑖𝑛𝑎𝑟𝑖𝑎 𝐶𝑂𝑁𝑇𝑅𝑂𝐿 𝑁𝐸𝐺𝐴𝑇𝐼𝑉𝑂 = 𝑥 100
volumen total administrado

Excrecion urinaria control positivo

𝐴𝑐𝑐𝑖ó𝑛 𝐷𝑖𝑢𝑟é𝑡𝑖𝑐𝑎 = 𝑥 100
Excrecion urinaria control negativo

Con los resultados obtenidos, realice las siguientes graficas volumen Vs tiempo (Control
negativo y positivo), acción diurética Vs tiempo.

Volumen Vs tiempo Acción diurética Vs tiempo

GRAFICA 1 GRAFICA 2

III. DISCUSION ( Sea claro y conciso)

IV. CONCLUSIONES

V. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS CONSULTADAS: (Ordénalas según

formato Vancouver)
-------------------------------------------------------------------------------------

-------------------------------------------------------------------------------------

-------------------------------------------------------------------------------------

-------------------------------------------------------------------------------------

-------------------------------------------------------------------------------------

7
MsC.Germán Narro Cabezas
Guía de prácticas de Farmacología y Bioquímica II Escuela de Medicina

VI. CUESTIONARIO

1. Molécula química de la Hidroclorotiazida y Espironolactona así como su

mecanismo de acción.
2. Explique la patogénesis del edema.
3. Indague que diuréticos se prescriben en Hipertensión Arterial.
4. Indica los factores fisicoquímicos involucrados en la acción de los diuréticos en
general.

8
MsC.Germán Narro Cabezas