EKSTRAK PROPOLIS LEBAH (​​Trigona sp​) SEBAGAI

PREVENTIF TERHADAP EKSPRESI TNF- α DAN

GAMBARAN HISTOPATOLOGI JANTUNG
PADA TIKUS PUTIH (​​Rattus norvegicus​)
DENGAN PAPARAN ASAP ROKOK

SKRIPSI

Oleh
DIAH VITA WIJAYANTI
125130101111025

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER HEWAN

FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN
UNIVERSITAS BRAWIJAYA
MALANG
2017

1
2
EKSTRAK PROPOLIS LEBAH (​​Trigona sp)​ SEBAGAI
PREVENTIF TERHADAP EKSPRESI TNF- α DAN
GAMBARAN HISTOPATOLOGI JANTUNG
PADA TIKUS PUTIH (​​Rattus norvegicus​)
DENGAN PAPARAN ASAP ROKOK

SKRIPSI

Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar

Sarjana Kedokteran Hewan

Oleh
DIAH VITA WIJAYANTI
125130101111025

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER HEWAN

FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN
UNIVERSITAS BRAWIJAYA
MALANG
2017

3
4
 LEMBAR PENGESAHAN SKRIPSI

Ekstrak Propolis Lebah (​​Trigona sp​) sebagai Preventif Terhadap Ekspresi

TNF-α dan Gambaran Histopatologi Jantung pada Tikus Putih (​​Rattus
norvegicus)​ dengan Paparan Asap Rokok

Oleh:
DIAH VITA WIJAYANTI
125130101111025

Setelah dipertahankan di depan Majelis Penguji

pada Tanggal 8 Desember 2017
dan dinyatakan memenuhi syarat untuk memperoleh gelar
Sarjana Kedokteran Hewan

Pembimbing I Pembimbing II

Dr.drh. Djoko Winarso, MS drh. Herlina Pratiwi, M. Si

​NIP. 19530605 198403 1 001 ​ ​ ​ ​NIP. 19870518 201012 2 010

Mengetahui,
Dekan Fakultas Kedokteran Hewan
Universitas Brawijaya

Prof. Dr. Aulanni’am, drh., DES

NIP. 19600903 198802 2 001

5
 LEMBAR PERNYATAAN

Saya yang bertanda tangan di bawah ini:

Nama : Diah Vita Wijayanti

NIM : 125130101111025
Program Studi : Pendidikan Dokter Hewan
Penulis Skripsi berjudul:

“Ekstrak Propolis Lebah (​Trigona sp​) sebagai Preventif Terhadap Ekspresi TNF-α
dan Gambaran Histopatologi Jantung pada Tikus Putih (​Rattus norvegicus​)
dengan Paparan Asap Rokok​”

Dengan ini menyatakan bahwa:

1. Isi dari skripsi yang saya buat adalah benar-benar karya saya sendiri dan tidak
menjiplak karya orang lain, selain nama-nama yang termaktub diisi dan tertulis
di daftar pustaka dalam skripsi ini.
2. Apabila dikemudian hari ternyata skripsi yang saya tulis terbukti hasil jiplakan,
maka saya akan bersedia menanggung segala resiko yang akan saya terima.
Demikian pernyataan ini dibuat dengan segala kesadaran.

Malang, 8 Desember 2017

Yang menyatakan,

(Diah Vita Wijayanti)

NIM. 125130101111025

6
Ekstrak Propolis Lebah (​​Trigona sp​) sebagai Preventif Terhadap
Ekspresi Tnf- α dan Gambaran Histopatologi Jantung
pada Tikus Putih (​​Rattus norvegicus​)
dengan Paparan Asap Rokok

ABSTRAK

Asap rokok dapat menurunkan level antioksidan, meningkatkan pelepasan

radikal superoksida, dan menyebabkan nekrosis akibat stimulasi dari TNF-α.
Jantung merupakan organ penting dalam tubuh karena fungsinya sebagai sistem
kardiovaskuler. Ekstrak etanol propolis lebah ​Trigona sp diketahui mengandung
Caffeic Acid Phenethyl Ester (CAPE) yang bekerja sebagai antioksidan. Penelitian
ini bertujuan untuk mengetahui histopatologi jantung dan ekspresi TNF-α pada
tikus (​Rattus norvegicus​) hasil paparan asap rokok yang diberi ekstrak propolis
lebah ​Trigona sp sebagai preventif. Hewan coba yang digunakan adalah tikus
putih strain Wistar. Tikus dibagi menjadi lima kelompok yaitu kelompok kontrol
negatif (K-), kelompok kontrol positif (K+), kelompok tikus P1, P2, P3 yang
masing-masing diberi ekstrak etanol propolis lebah ​Trigona sp 10mg/200g/hari,
20mg/200g/hari, 30mg/200g/hari kemudian diberi paparan asap rokok 2
batang/hari selama 14 hari. Pengukuran ekspresi TNF-α menggunakan uji
Imunohistokimia, analisa data dilakukan secara kuantitatif menggunakan uji ​One
Way ​ANOVA dan dilanjutkan dengan uji ​Tukey (​ P<0,05). Histopatologi jantung
menggunakan pewarnaan ​Hematoxylin Eosin (HE). Hasil gambaran histopatologi
organ jantung dianalisa secara deskriptif. Hasil penelitian menunjukkan ekstrak
propolis lebah ​Trigona sp secara signifikan (P<0,05) mencegah peningkatan
ekspresi TNF-α pada tikus yang terpapar asap rokok, dengan dosis terbaik untuk
mencegah peningkatan ekspresi TNF-α adalah 30mg/200g/hari. Terapi ekstrak
etanol propolis lebah ​Trigona sp mencegah kerusakan kondisi histopatologi sel
otot jantung. Kesimpulan dari penelitian, ekstrak etanol propolis lebah ​Trigona sp
mampu mencegah peningkatan ekspresi TNF-α dan dapat mencegah kerusakan
otot jantung pada tikus yang dipapar asap rokok.

Kata Kunci: Asap Rokok, Histopatologi Jantung, Propolis, TNF-α

7
 Propolis Extract Bee (​​Trigona sp)​ as Preventation of TNF-α
Expression and The Description of Heart Histopathology
on The White Rat (​​Rattus norvegicus)​ Exposured
with Cigarette Smoke

ABSTRAC

Cigarette smoke could reduce antioxidant levels, increase the release of

superoxide radical, and emerge the necrosis because of the stimulation of TNF- α.
Heart is premier organ in the body, it is included into the cardiovascular
system.The ethanol extract of propolis bee ​Trigona sp is known to contain Caffeic
Acid Phenethyl Ester (CAPE) which acts as an antioxidant. This research was
aims to determine the histopathology of heart and expression of TNF-α in rat
(​Rattus norvegicus​) exposure to cigarette smoke extracted with ​Trigona sp extract
as preventive. The experimental animal used was Wistar strain white rat. The
study consisted to five groups in which contained of negative control (K-),
positive control (K+), groups of rats P1, P2, P3 were given ethanol extract of
propolis bee ​Trigona sp 10mg/200g/day, 20mg/200g/day, 30mg/200g/day and
those were exposed to cigarettes smoke as much 2 cigarettes/day within 14 days.
The measurement of expression TNF-α used Immunohistochemistry tests,
quantitative data analysis performed was used One Way ANOVA followed by
Tukey's test (P <0.05). Histopathology of heart used Hematoxylin Eosin staining
(HE). The results of overview heart organ histopathology were analysed
descriptively. The results showed that ​Trigona sp extract significantly (P<0.05)
prevented the increase of TNF-α expression in rat exposed to cigarette smoke, the
best dose to prevent the increase of TNF-α expression was 30mg/200g/day. The
therapy using ethanol extract of propolis bee ​Trigona sp prevents the damage
histopathological condition of heart muscle cells. The conclusions from the
research, ethanol extract of propolis bee ​Trigona sp is able to prevent the increase
of TNF-α expression and can prevent the damage of heart muscle in rat exposed
to cigarette smoke.

Keywords: Cigarette Smoke, Heart Histopathology, Propolis, TNF-α

8
 KATA PENGANTAR

Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa atas
berkat dan anugerah-Nya sehingga Skripsi yang berjudul “​Ekstrak Propolis Lebah
(​Trigona sp)​ sebagai Preventif Terhadap Ekspresi TNF-α dan Gambaran
Histopatologi Jantung pada Tikus Putih (​Rattus norvegicus​) dengan Paparan Asap
Rokok” ini dapat terselesaikan.
Dengan penuh rasa hormat penulis mengucapkan terimakasih kepada
pihak yang secara langsung maupun tidak langsung telah membantu dalam
penyususnan Skripsi ini. Ucapan terima kasih penulis sampaikan kepada:
1. Dr.drh. Djoko Winarso, MS selaku dosen pembimbing I atas segala bantuan,
kesempatan, bimbingan, arahan serta dukungan yang diberikan kepada penulis.
2. drh. Herlina Pratiwi, M. Si selaku dosen pembimbing II atas segala bantuan,
kesempatan, bimbingan, arahan serta dukungan yang diberikan kepada penulis.
3. drh. M. Arfan Lesmana, M. Sc ​selaku dosen penguji I atas saran, masukan,
koreksi serta perbaikan yang diberikan kepada penulis.
4. drh. Yudit Oktanella, M.Si selaku dosen penguji II atas saran, masukan,
koreksi serta perbaikan yang diberikan kepada penulis.
5. Prof. Dr. Aulanni’am, drh. DES ​selaku Dekan Fakultas Kedokteran Hewan
Universitas Brawijaya.
6. Drh. Dyah Ayu Oktavianie, M.Biotech selaku Wakil Dekan 1 bidang
akademik Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Brawijaya.
7. Para dosen yang telah membimbing dan memberikan ilmu selama
menjalankan studi di Program Studi Kedokteran Hewan Universitas
Brawijaya.

9
8. Bapak Suparno, Ibu Siti Fatehah serta saudara saya tercinta Andi Winata
Budi, Yeni Wulandari dan Rizky Ibnan Maulana untuk doa, kasih sayang,
dukungan serta pengorbanan baik moril maupun materi selama ini.
9. Terima kasih sahabat satu penelitian Trigona Sweet yaitu Eli, Retno, Fitri dan
Wijaya atas kerjasama dan waktunya selama penelitian ini berlangsung.
10. Teman-teman seperjuangan keluarga besar angkatan 2012 FKH UB
khususnya kelas B atas cinta, persahabatan, semangat, inspirasi, keceriaan dan
mimpi- mimpi yang luar biasa.
11. Sahabat Baik Upakarti, Retno, Ayu, Diah yang telah memberikan semangat
kepada penulis.
12. Semua pihak lain yang telah membantu penulis dalam penyelesaian penulisan
Skripsi ini yang tidak mengkin penulis sebutkan satu persatu.
Penulis sadar bahwa Skripsi ini jauh dari sempurna oleh sebab itu kritik
dan saran yang konstruktif dari semua pihak sangat diharapkan demi
penyempurnaan selanjutnya.

Malang, 8 Desember 2017

Penulis

10
 DAFTAR ISI

Halaman
HALAMAN JUDUL i
HALAMAN PENGESAHAN ii
HALAMAN PERNYATAAN iii
ABSTRAK iv
KATA PENGANTAR vi
DAFTAR ISI viii
DAFTAR GAMBAR xi
DAFTAR LAMPIRAN xii
DAFTAR ISTILAH DAN LAMBANG xiii
BAB 1. PENDAHULUAN 1
1.1 Latar Belakang 1
1.2 Rumusan Masalah 3
1.3 Batasan Masalah 3
1.4 Tujuan Penelitian 5
1.5 Manfaat Penelitian 5
BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA 6
2.1 Asap Rokok.... 6
2.2 Propolis Lebah ​Trigona sp. 8
2.2.1 Kandungan Kimia Propolis 9
2.2.2 Manfaat Propolis 12
2.3 Hewan Coba Tikus (​Rattus norvegicus)​ ..................................12
2.4 Jantung 14
2.4.1 Anatomi Jantung 14
2.4.2 Histologi Jantung 16
2.5 Tumor Necrosis Factor Alpha​ (TNF-α) 19
BAB 3. KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS PENELITIAN 21
3.1 Kerangka Konsep 21
3.2 Hipotesis Penelitian 23
BAB 4. METODE PENELITIAN 25

11
 4.1 Waktu dan Tempat Penelitian 25
4.2 Materi Penelitian 25
4.2.1 Bahan Penelitian 25
4.2.2 Alat Penelitian 25
4.3 Sampel Penelitian 26
4.4 Rancangan Penelitian 27
4.5 Variabel Penelitian 28
4.6 Tahapan Penelitian 28
4.6.1 Persiapan Hewan Coba 28
4.6.2 Pembuatan Ekstrak Etanol Propolis​. 29
4.6.3 Uji Fitokimia Etanol Propolis Lebah ​Trigona sp 30
4.6.4 Dosis Ekstrak Propolis Trigona sp 30
4.6.5 Pemberian Ekstrak Etanol Propolis 30
4.6.6 Paparan Asap Rokok 31
4.6.7 Pengambilan Organ Jantung .32
4.6.8 Pembuatan Preparat Histopatologi Jantung.................32
4.6.9 Pengukuran Ekspresi TNF-α....................................... 34
4.6.10 Analisis Data ...............................................................34
BAB 5. HASIL DAN PEMBAHASAN 36
5.1 Efek Pemberian Ekstrak Etanol Propolis​ ​Lebah ​Trigona sp  
​terhadap EkspresiTNF-α Jantung 36
5.2 Histopatologi Jantung Tikus Putih (​Rattus novergicus​) Setelah 
​Pemberian Ekstrak Propolis dan Dipapar Asap Rokok 43
BAB 6. PENUTUP 49
6.1 Kesimpulan 49
6.1 Saran 49
DAFTAR PUSTAKA 50
LAMPIRAN 56

12
 DAFTAR TABEL

Tabel Halaman
2.1
Komposisi Kimia Propolis ….​11
4.1​ ​Rancangan Kelompok Penelitian 28
5.1​ ​ ​Ekspresi TNF-α jantung tikus perlakuan 39

13
 DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman

2.1 Propolis​ Trigona sp 9

2.2 Tikus (​Rattus norvegicus​). 13
2.3 Anatomi jantung ..............................................................................................15
2.4 Histologi jantung 18
2.5 Histopatologi jantung.......................................................................................19
5.1 Ekspresi ​Tumor Necrosis Factor-α ​ (TNF-α) pada jantung tikus (​Rattus
norvegicus)​ ......................................................................................................37
5.2 Histopatologi jantung) pada jantung tikus (​Rattusnorvegicus​) dengan
pewarnaan HE..................................................................................................44

14
 DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman
1. Sertifikat Laik Etik……
57
2. Hasil Analisa LCMS Ekstrak Etanol Propolis ​Trigona sp.​ .............................
58
3. Dosis Perhitungan Pemberian Ekstrak Etanol Propolis ​Trigona sp​………..
59
4. Pembuatan Sedian Propolis Konsentrasi 30% dengan Volume 150 mL…..
60
5. Kerangka Operasional……………………………………………………..
61
6. Pembuatan Gambaran Histopatologi Jaringan
62
7. Pewarnaan ​Hematoxylen-Eosin ​(HE)...
63
8. Metode Immunohistokimia Ekspresi TNF-α
64
9. Perhitungan Ekspresi TNF-α
65
10. Data Dan Uji Statistik Ekspresi TNF-α
67
11. Dokumentasi Penelitian
76

15
 DAFTAR ISTILAH DAN LAMBANG

Simbol/Singkatan Keterangan

o​
C Derajat Celcius
% Persen
AOAC Association of Analytical Communities
ANOVA Analysis of Varience
BB Berat Badan
CAPE Caffeic Acid Phenethyl Ester
DNA Deoxyribose Nucleic Acid
CO Karbon monoksida
Cm sentimeter
EEP Ekstrak Etanol Propolis
g gram
GATS Global Adult Tobacco Survey
GSH Glutathione

16
HE Hematoxyline Eosin
IL Interleukin
IHK Imunohistokimia
Kg Kilogram
LD Letal Dosis
mg miligram
mL mililiter
NO Nitrogen monoksida
-OH Hidroksil
PAH Poliaromatik Hidrokarbon
PBS Phosphate Buffer Saline
PO Peroral
PUFA Poly Unsaturated Fatty Acid
RAL Rancangan Acak Lengkap
RSB Reducting Sample Buffer
ROS Reaktif Oksigen Spesies
TNF-α Tumor Nekrosis Faktor Alfa

17