ABSTRAK

Hormon steroid estrogen dan progesteron mengatur banyak peristiwa biologis termasuk perkembangan
reproduksi, perkembangan diferensiasi sel dan apoptosis. Hormon-hormon ini dan turunannya digunakan
dalam pil kontrasepsi dan dalam pengobatan infertilitas dan gejala menopause. Mereka juga memainkan
peran dalam banyak penyakit seperti kanker payudara dan endometrium dan osteoporosis. Hormon-
hormon ini membutuhkan protein intraseluler spesifik yang disebut reseptor, yang mengikatnya. Selain itu,
satu set protein pengatur disebut coregulators, yang selanjutnya dibagi menjadi coactivators, corepressors
dan cointegrators, diperlukan sebelum transkripsi gen target baik diaktifkan atau dibungkam. Namun,
mekanisme rinci tentang bagaimana respon hormon steroid dicapai dan diatur, belum diketahui. Kanker
payudara adalah kanker paling umum di kalangan wanita Finlandia; sekitar 3.800 kanker payudara baru
didiagnosis di Finlandia pada tahun 2003. Antiestrogen Tamoxifen dan toremifene adalah obat sintetis,
yang digunakan dalam pengobatan penyakit ini. Tingkat reseptor estrogen dan progesteron diukur dalam
sampel kanker payudara untuk mengidentifikasi pasien yang akan mendapat manfaat dari obat-obatan ini.
Sayangnya, banyak pasien gagal mendapatkan manfaat dari pengobatan antiestrogen setelah respon awal
meskipun reseptor-positif dan obat akhirnya dapat merangsang pertumbuhan tumor, yang merupakan
masalah penting secara klinis.
Penelitian ini dilakukan untuk mempelajari ekspresi dan regulasi hormonal reseptor hormon steroid dan
koregulator baik dalam murine normal dan sel kanker payudara manusia. Selain itu, model kultur sel
kanker payudara endokrin dan hormon-independen di tegakkan. dan pertanyaan tentang bagaimana dan
mengapa sel kanker payudara menjadi resistan terhadap obat dipelajari. Menurut hasil, baik progesterone
receptor (PR) dan coactivatornya, GRIP1, keduanya diekspresikan secara luas dalam jaringan murine dan
pola ekspresi spesifik sel. Urogenital, gastrointestinal, endokrinologis, imunologi dan organ
kardiovaskular, saluran pernapasan dan kulit berisi PR dan progestrone juga dapat mengatur aliran darah
di beberapa organ. Hampir semua sel yang mengekspresikan PR juga mengekspresikan GRIP1. Otot lurik
dan sel kelenjar tiroid tidak mengekspresikan PR atau GRIP1. PR diekspresikan hanya dalam inti sel, dan
meskipun GRIP1 diekspresikan secara dominan dalam inti, ekspresi sitoplasma juga terlihat. Ekspresi PR
adalah estrogen-dependent dan -regulated di beberapa jaringan dan sel-sel kanker payudara, sementara
ekspresi GRIP1 atau lokalisasi subselularnya tidak tergantung pada estrogen. Penurunan ekspresi PR dan
G protein-coupled receptor 30 (GPR30), yang merupakan anggota dari keluarga besar reseptor permukaan
sel, dan peningkatan ekspresi coactivator AIB1 terlihat pada sel kanker payudara antiestrogen-resisten.
Toremifene tidak mengatur reseptor hormon atau reseptor steroid apa pun yang dipelajari, tetapi selain
sebagai inhibitor kompetitif estradiol dalam mengikat reseptor estrogen, toremifene juga dapat bertindak
melalui reseptor membran GPR30. GPR30 juga bisa menjadi penanda baru yang potensial untuk
memprediksi respons terhadap terapi antiestrogen. Selanjutnya, perkembangan hormon-independen dalam
sel kanker payudara dikaitkan dengan perubahan dalam kadar reseptor hormon steroid dan coregulator.
Singkatnya, informasi baru tentang ekspresi sel-spesifik reseptor hormon steroid dan coregulators dan
tentang regulasi hormon mereka dalam sel-sel kanker normal dan payudara diperoleh dalam penelitian ini.
Selanjutnya, beberapa data baru tentang perkembangan resistensi antiestrogen dan mekanisme baru yang
potensial dari aksi toremifene ditemukan.
PENDAHULUAN

Hormon steroid estrogen dan progesteron mengatur banyak peristiwa biologis termasuk perilaku,
reproduksi, perkembangan, diferensiasi sel dan apoptosis. Mereka juga berperan dalam tumorigenesis
kanker payudara dan banyak penyakit lainnya. Hormon-hormon ini memerlukan protein intraseluler
spesifik (yaitu reseptor), yang mengikat mereka, serta satu set protein pengatur yang disebut coregulators
(yaitu coactivators, corepressors dan cointegrators). Pada akhirnya, transkripsi gen target diaktifkan atau
dibungkam. Namun, pengetahuan kita tentang ekspresi sel-dan jaringan-spesifik dan regulasi hormon
reseptor hormon steroid dan coregulators mereka sangat terbatas. Hormon steroid juga mampu
menghasilkan respon cepat, non-transkripsi, yang diduga terjadi melalui reseptor permukaan sel seperti
reseptor G protein-coupled. Selanjutnya, crosstalk antara jalur reseptor hormon steroid dan jalur transduksi
sinyal lainnya seperti faktor pertumbuhan dan jalur sinyal kinase MAP ada. Baik yang "klasik" (atau
transkripsi) dan jalur-jalur non-transkripsi ini berkumpul pada siklus sel dan akhirnya mempromosikan
atau menghambat pembelahan sel. Antagonis hormon steroid, seperti antiestrogens tamoxifen dan
toremifene, adalah agen farmasi sintetis yang mampu menghambat tindakan hormon alami serumpun.
Antiestrogen digunakan dalam pengobatan kanker payudara. Sayangnya, tumor payudara mendapatkan
resistensi terhadap pengobatan setelah beberapa waktu dan akhirnya pertumbuhan tumor bahkan
dirangsang oleh obat-obatan ini. Meskipun studi ekstensif, alasan untuk fenomena ini tidak diketahui.
Selain itu, reseptor G protein-coupled yang memberi isyarat baik pada resistensi antiestrogen dan dalam
kemandirian hormon membutuhkan penelitian lebih lanjut. Dengan demikian, pekerjaan ini dilakukan
untuk mempelajari masalah ini dan beberapa wawasan baru ke dalam mekanisme kerja hormon steroid dan
antiestrogen yang diberikan.

STEROID HORMONES DAN PENERIMA HORMON STEROID

1.1 hormon steroid Androgen, estrogen, progestin, glukokortikoid, dan mineralokortikoid adalah hormon
steroid, yang disekresikan oleh sel endokrin dari gonad, plasenta dan korteks adrenal ke dalam aliran darah
dan membawa sinyal ke sel target yang didistribusikan ke seluruh tubuh manusia. Karena mereka lipofilik,
mereka memasuki sel dan inti sel terutama dengan menyebar melalui plasma dan membran nuklir. Selain
beberapa jenis molekul pensinyalan yang ada seperti protein, peptida kecil, asam amino (aa), retinoid,
turunan asam lemak, nukleotida dan gas terlarut NO dan CO2, hormon-hormon ini memungkinkan sel
untuk berkomunikasi satu sama lain dan untuk mempengaruhi pertumbuhan, perkembangan, perbedaan,
dan kematian satu sama lain. Estrogen dan progestin, hormon yang paling banyak dipelajari dari estradiol
(E2) dan progesteron (Gbr. 1), memiliki banyak efek fisiologis selama kehidupan wanita. Estrogen
mengerahkan efeknya hampir secara eksklusif di beberapa organ target tertentu. Mereka bertanggung
jawab untuk perkembangan organ seks dan figur feminin saat pubertas dan untuk proliferasi cepat sel-sel
stroma dan epitel endometrium selama fase folikuler (estrogen) dari siklus menstruasi. Mereka juga
memiliki efek pada pertumbuhan duktus serta penumpukan lemak dan pertumbuhan sistem lobuloalveolar
di kelenjar susu (ditinjau dalam Topper dan Freeman 1980). Percepatan pertumbuhan saat pubertas dan
lenyapnya pertumbuhan dengan menyatukan epiphyses dengan poros tulang panjang juga disebabkan oleh
estrogen. Efek bersih estrogen selama masa subur adalah melambatnya tingkat kehilangan massa tulang
(ditinjau dalam Graham dan Clarke 1997), tetapi selama periode klimakterik, produksi estrogen dengan
cepat berkurang yang menyebabkan gejala menopause berulang dan mempengaruhi wanita untuk
osteoporosis dan tulang. fraktur karena aktivitas osteoblastik yang berkurang di tulang.
Selain estrogen, progesteron memiliki peran penting selama perkembangan wanita dan fungsi reproduksi
(Ulasan dalam Graham dan Clarke 1997). Kebutuhan progesteron untuk pembentukan struktur
lobuloalveolar di kelenjar susu selama kehamilan sangat dikenal (ditinjau dalam Topper dan Freeman
1980). Progesteron hadir pada tingkat rendah sepanjang siklus menstruasi, tetapi begitu tingkat progesteron
meningkat cukup tinggi, luteinisasi terjadi. Progesteron memfasilitasi luteinising hormone (LH) meningkat
dan menginduksi pengembangan pembengkakan dan sekresi endometrium yang ditandai selama fase luteal
dari siklus menstruasi dan dengan demikian mempersiapkan rahim untuk implantasi ovum yang dibuahi
dengan menginduksi ekspresi gen dari banyak protein endometrium (misalnya pinopoda, integrin, mucin,
sitokin dan faktor pertumbuhan) penting pada saat pemberian informasi (ditinjau dalam Lessey 2003).
Progesterone mempertahankan kehamilan dengan mempromosikan pertumbuhan uterus dan mengurangi
kontraksi uterus. Namun, jika korpus luteum tidak menghadapi sinyal embryonic human chrorionic
gonadotropin (hCG) bahwa kehamilan telah dimulai, apoptosis mulai mengarah ke menstruasi dan siklus
menstruasi yang baru. Penurunan tiba-tiba progesteron yang bersirkulasi berhubungan dengan onset
persalinan bersamaan, peningkatan sekresi prolaktin dan onset laktasi. Progesteron juga tampak
memodulasi remodeling tulang bersama dengan estrogen dalam perlindungan terhadap keropos tulang.
1.2 reseptor hormon steroid Hormon steroid memerlukan protein reseptor spesifik, yang terletak terutama
di dalam inti sel dan di mana hormon mengikat setelah menyebar di seluruh membran plasma.
Perbandingan urutan aa protein-protein ini dengan satu sama lain telah mengungkapkan bahwa mereka
secara struktural dan evolusioner terkait, yang telah dideduksi dari tingkat konservasi yang tinggi dalam
domain pengikatan DNA mereka (DBDs) dan dalam domain ligan-ikatan yang kurang lestari (LBDs) )
(Ogawa et al. 1998). Dengan demikian, mereka merupakan reseptor hormon steroid superfamili dan juga
disebut faktor transkripsi bergantung ligand, karena mereka mempengaruhi transkripsi sel target mereka.
1.2.1 Reseptor estrogen Adanya reseptor estrogen manusia intranuklear (ER) ditemukan pada tahun 1966
(Toft dan Gorski 1966, ditinjau dalam Herynk dan Fuqua 2004). Itu dikloning dan urutan aa lengkap
diterbitkan pada pertengahan 1980-an (Walter et al. 1985, Green et al. 1986, Greene et al. 1986). Hingga
tahun 1995, diperkirakan hanya ada satu ER, yang bertanggung jawab untuk memediasi semua efek
estrogen dan antiestrogen. Namun, reseptor estrogen kedua, ER, dikloning dari prostat tikus pada tahun
1995 dan sedikit kemudian juga dari jaringan manusia dan tikus (Kuiper et al. 1996, Mosselman dkk. 1996,
Tremblay et al. 1997). ER pertama atau "klasik" sekarang disebut ER. Reseptor manusia dikodekan oleh
dua gen terpisah, alfa dan beta (ER dan ER), pada kromosom 6q dan 14q masing-masing. ER dan ER
berbagi arsitektur struktural umum (Gambar 2). Fungsi aktivasi terminal NH2-1 (AF-1) terletak di domain
A / B, terlibat dalam interaksi protein-protein dan memodulasi transkripsi ligan-independen dari gen target.
Pusat DBD terdiri dari domain C dan terdiri dari dua struktur jari seng yang berbeda di mana reseptor
berinteraksi dengan asam deoksiribonukleat (DNA). Ini juga memainkan peran penting dalam dimerisasi
reseptor. Daerah engsel atau domain D berisi urutan untuk dimerisasi reseptor (Kumar dan Chambon 1988,
Ogawa et al. 1998) dan domain lokalisasi nuklir antara DNA dan domain ikatan ligan (aa 256-303), yang
berisi tiga Lysine / Arginine-rich motif, yang memiliki peran dalam lokalisasi nuklir (Picard et al. 1990,
Ylikomi et al. 1992). Selain itu, sinyal lokalisasi estrogen-inducible telah ditemukan dalam LBD (Ylikomi
et al. 1992). Ligand-binding domain (LBD) terletak terutama di domain E-terminal C dan berisi fungsi
aktivasi tergantung ligan-2 (AF-2). Domain F-COOH-terminal telah terbukti memiliki peran dalam
modulasi besarnya transkripsi gen oleh estrogen dan antiestrogen dan menentukan efektivitas
penghambatan antiestrogen (Montano et al. 1995). Protein ER lebih kecil dari ER dan urutan proteinnya
menunjukkan homologi yang cukup dalam DNA (96%) dan ikatan ligand (58%) domain, tetapi ada
perbedaan besar dalam A / B, engsel dan domain-F protein-protein ini (Mosselman et al. 1996, ditinjau
dalam Shupnik 2004).
Meskipun struktur keseluruhan ER dan ER cukup mirip dan ligan mengikat afinitas untuk kedua subtipe
reseptor cukup mirip untuk ligan fisiologis, ada perbedaan dalam fungsi mereka (Kuiper et al. 1997,
ditinjau dalam Nilsson et al. 2001 ). ER dan ER telah ditunjukkan untuk merespon secara berbeda
terhadap ligan pada elemen respons AP1. Misalnya, E2 diaktifkan transkripsi, ketika ER dikomplekskan,
sementara transkripsi dihambat, ketika ER hadir (Paech et al. 1997). Ada juga perbedaan reseptor-selektif
dalam tanggapan terhadap agonis dan antagonis estrogen sintetis. Agonis parsial / antagonis tamoxifen, 4-
hydroxy-tamoxifen (4-OHT) dan raloxifene serta antagonis murni ICI 164,384 menunjukkan aktivitas
estrogenik selektif ERS yang rendah tetapi signifikan, sementara mereka hanya menampilkan efek
antagonis melalui ER (Barkhem et al. 1998). Penjelasan yang mungkin untuk perbedaan ini mungkin
adalah kurangnya bagian AF-1 dalam ER dan volume dan bentuk ligan yang mengikat ligan. Selain itu,
jenis residu aa yang melapisi rongga mungkin berbeda. Van Den Bemd dkk. (1999) mengamati bahwa
ER dan ER merespon terhadap antiestrogen murni ICI 164,384 dan ICI 182,780 dengan perubahan
konformasi yang berbeda: ER berubah menjadi bentuk yang kurang stabil, lebih sensitif terhadap
protease, sementara ER berubah menjadi lebih stabil, lebih sedikit protease sensitif. konformasi. Efek
yang jelas ini tidak diamati dengan E2 dan tamoxifen (Van Den Bemd et al. 1999).

1.2.2 Peran fisiologis ER pada tikus Studi dengan ER dan ER KO (KO) tikus telah lebih lanjut
menegaskan bahwa ERs memainkan peran penting dalam perkembangan normal, fungsi reproduksi dan
fisiologi tulang skeletal. Tikus heterozigot, yang hanya mengandung satu salinan tipe liar (WT) ER, telah
ditemukan subur dan mereka tidak menunjukkan perbedaan yang jelas dalam fenotip bila dibandingkan
dengan fenotip WT (ditinjau dalam Korach 1994). Mereka memiliki sekitar setengah dari jumlah ER bila
dibandingkan dengan WT dan dengan demikian alel WT yang tersisa tidak diekspresikan pada tingkat
yang lebih tinggi untuk mengkompensasi hilangnya alel lain (ditinjau dalam Korach 1994). Seperti pada
tikus heterozigot, fenotip eksternal tikus mutan homozigot ER-terganggu adalah normal (Lubahn et al.
1993). Namun, baik pria dan wanita tidak subur dan tidak ada perilaku seksual terlihat pada wanita (Lubahn
et al. 1993, ditinjau dalam Korach 1994). Betina mutan memiliki ovarium cystic haemorrhagic dan tidak
ada korpora lutea fungsional, meskipun granulosa dan sel teka hadir, menunjukkan bahwa folikel
pengembangan penangkapan sebelum pembentukan folikel ovulasi (Lubahn et al. 1993, ditinjau dalam
Korach 1994). Tingkat basal uterus PR messenger ribonucleic acid (mRNA) sebanding dengan yang ada
pada hewan WT, tetapi tidak ada rangsangan setelah pengobatan estrogen (Couse et al. 1995). Tidak ada
peningkatan ekspresi gen target estrogen laktoferin atau glukosa-6-fosfat dehidrogenase terlihat pada tikus
mutan (Couse et al. 1995). Kadar estradiol serum yang bersirkulasi adalah sekitar 10 kali lipat lebih besar
dan tingkat progesteron tampaknya lebih rendah daripada yang ada pada pasangan WT-nya (Couse et al.
1995). Wanita memiliki uteri hipoplasia yang tidak merespon baik terapi estrogen atau antiestrogen dan
sitologi vagina juga tidak berubah (Lubahn et al. 1993, diulas dalam Korach 1994). Tikus betina dewasa
memiliki kelenjar susu yang belum berkembang dengan hanya duktus vestigial yang ada di puting (ditinjau
dalam Korach 1994). Selanjutnya, kepadatan tulang tikus ERKO hingga 25% lebih rendah daripada tikus
WT (ditinjau dalam Korach 1994). Epidermal growth factor receptor (EGFR), induksi autofosforilasi dan
c-Fos (c-Fos adalah gen yang diregulasi oleh EGF) tidak berubah pada tikus ERKO, menunjukkan bahwa
jalur pensinyalan EGFR masih utuh dalam utokolus uterus tikus (Curtis et al. 1996b). Namun, tikus ERKO
tidak menunjukkan peningkatan sintesis DNA setelah pengobatan EGF dibandingkan dengan kontrol
plasebo dan WT uteri (Curtis et al. 1996b). Selanjutnya, pesan PR meningkat setelah pengobatan EGF dan
antiestrogen ICI 182,780 mampu memblokir induksi ini pada hewan WT, tetapi tidak pada tikus ERKO
(Curtis et al. 1996b). Hasil ini menegaskan bahwa efek EGF yang menyerupai estrogen pada uterus tikus
memerlukan ER dan jalur pensinyalan ER dan EGFR saling bercakap-cakap: EGF memulai kaskade
fosforilasi, yang mengaktifkan ER, mungkin melalui fosforilasi ER, terlepas dari keberadaan estrogen.
(Curtis et al. 1996b). Tikus mutan homozigot tidak memiliki fenotip ER yang berbeda dari tikus yang
kurang ER (Krege et al. 1998). Tikus-tikus ini bertahan hingga dewasa dan tidak menunjukkan kelainan
yang jelas (Krege et al. 1998). Namun, ER - / - wanita berovulasi kurang efisien dan ada lebih banyak
folikel atretik awal dan korpus lutea lebih sedikit bila dibandingkan dengan ovarium WT, menunjukkan
penangkapan parsial dari perkembangan folikel dan pematangan folikel yang kurang sering (Krege et al.
1998). ER - / - tikus memiliki jumlah yang lebih sedikit secara signifikan dan jumlah anak anjing per
litter secara signifikan lebih rendah (yaitu berkurangnya kesuburan), tetapi tidak ada penurunan dalam
perilaku seksual, histologi kelenjar susu atau laktasi terlihat (Krege et al. 1998). Singkatnya, ER tidak
penting untuk kelangsungan hidup tetapi mereka memainkan peran dalam perilaku, pembentukan tulang
dan dalam pematangan seksual dan kesuburan perempuan dan laki-laki.

1.2.3 Reseptor progesteron Keberadaan reseptor progesteron mamalia (PR) ditemukan pada akhir 1960-an
dan awal 1970-an (ditinjau dalam O'Malley et al. 1969, Milgrom et al. 1970). Itu diklon pada tahun 1986
oleh tiga laboratorium (Conneely et al. 1986, Jeltsch et al. 1986, Loosfelt et al. 1986). Ada dua isoform
reseptor, PRA dan PRB, yang muncul dari gen yang sama dengan transkripsi pada dua promotor yang
berbeda, sehingga menimbulkan dua mRNA berbeda dan inisiasi terjemahan pada dua alternatif Kodon
AUG (Horwitz dan Alexander 1983, Lessey et al. 1983 , Kastner et al. 1990). Kedua isoform PR secara
fungsional berbeda. Secara umum, PRB secara transkripsi lebih aktif daripada PRA (Tora et al. 1988, Wen
et al. 1994, Tung et al. 2001) dan menurut data ekspresi gen microarray, sebagian besar gen target PR
diatur terutama melalui PRB (Richer et. al. 2002). Selanjutnya, PRA dapat bertindak sebagai represor
dominan PRB aktivasi gen reporter progestin-sensitif (Vegeto et al. 1993, Giangrande et al. 1997). PRB
berisi peregangan N-terminal tambahan 164 aas, yang juga disebut sebagai segmen B-upstream (BUS) dan
yang berisi domain aktivasi otonom tambahan (AF-3), yang dapat memberikan pengikatan spesifik situs
diferensial untuk koaktivator tertentu atau protein aksesori nuklir (Sartorius et al. 1994, Giangrande et al.
1997, Giangrande dkk. 2000, Tung et al. 2001, diulas dalam Conneely et al. 2002). Kedua isoform dapat
mengikat baik pada DNA dan hormon, tetapi masing-masing memiliki set gen target yang unik, dengan
sedikit tumpang tindih (Tora et al. 1988, ditinjau dalam Conneely et al. 2002, Richer et al. 2002). Isoform
ketiga, PR yang terpotong secara terputus yang disebut PRC, juga telah dikarakterisasi (Wei dan Miner
1994). Ini dihasilkan oleh inisiasi terjemahan alternatif pada metionin 595 (Met595), mampu mengikat
progestin dan dapat meningkatkan aktivitas transkripsi PRA dan PRB, tetapi ditemukan tidak aktif dengan
sendirinya (Wei et al. 1996). Beberapa domain (ditunjuk A ke F) dalam PR telah dilokalisasi dan dicirikan
(Gbr. 3). Wilayah A / B yang tidak dilestarikan mengandung fungsi aktivasi transkripsi konstitutif AF-1
dan AF-3. DBD terkandung dalam wilayah C dan LBD dalam wilayah E. Selain mengikat ligan, LBD
mampu mengikat protein heat-shock 90 (Hsp90) (Tetel et al. 1997). Daerah engsel (wilayah D), urutan
yang kurang dilestarikan antara LBD dan DBD, memainkan peran setidaknya dalam dimerisasi reseptor,
lokalisasi nuklir, pengikatan ligan dan interaksi dengan koregulator (Jackson et al. 1997, Tetel et al. 1997)
. Tiga sinyal lokalisasi nuklir konstitutif (NLS), satu di daerah engsel dan dua di DBD, menjelaskan
pengangkutan aktif PR dari sitoplasma ke dalam nukleus, tetapi reseptor mampu secara pasif menyebar
kembali ke sitoplasma (Guiochon-Mantel et al. 1991, Ylikomi dkk. 1992). Sebuah NLS hormon-induksi
keempat yang lemah terletak di dalam LBD PR ayam (Ylikomi et al. 1992). Namun, telah disarankan
bahwa ekstensi N-terminal yang ada dalam PRB juga memiliki peran dalam nukleosida-nukleoseluler,
karena meskipun NLSs yang dapat dibedakan dan domain interaksi pendamping yang identik, bentuk A
telah ditemukan terutama berupa bentuk-bentuk inti dan B antara sitoplasma dan kompartemen nuklir
tanpa adanya ligan, tetapi penambahan hormon menghasilkan translokasi nuklir lengkap (Lim et al. 1999).
Sebaliknya, lokalisasi nuklir progestin telah terbukti independen dari serine 294 (Ser294) fosforilasi dan
mitogen-activated protein kinase (MAPKs) (ditinjau dalam Lange 2004). Sebuah domain represor telah
diidentifikasi dalam PR manusia yang hadir dalam kedua isoform, tetapi secara fungsional hanya aktif
dalam PRA (Giangrande et al. 1997). Domain asam N-terminal 140-amino ini diperlukan tetapi tidak
cukup untuk transrepresi aktivitas transkripsi ER (Giangrande et al. 1997).
1.2.4 Peran fisiologis PR pada tikus Untuk menentukan fungsi terpisah dari isoform PR dan progesteron
in vivo, ablasi selektif dari gen PR dan isoform terpisah pada tikus telah ditetapkan. PR knockout (PRKO)
tikus betina, di mana kedua isoform PR secara fungsional ablated, mengalami embriogenesis tampaknya
normal dan dikembangkan ke negara dewasa, tetapi mereka tidak subur (Lydon et al. 1995).

PRB PRA

NH2 A/B C D E COOH

AF-3 AF-1 AF-2

 Figure 3. Structure of PR isoforms A and B. Different domains of the proteins (A-E) are shown. AF-
1, AF-2 and AF-3, activation functions 1-3. Modified from Kastner et al. 1990 and Sartorius et al.
1994.

Kelainan fungsional pada uterus (hiperplasia, peradangan, tidak adanya respon terhadap stimulasi desidua
sebagai respon terhadap progesteron dan pengobatan estrogen), ovarium (blok ovulasi lengkap, tidak
adanya korpus luteum), kelenjar susu (struktur duktus yang lebih mendasar dengan dikotomus yang tidak
terlalu luas) dan sisi lateral bercabang dan tidak adanya perkembangan lobuloalveolar pada akhir setiap
saluran) dan otak diamati (Lydon et al. 1995). Ketika tikus diuji untuk perilaku seksual, baik WT dan
wanita heterozigot menunjukkan tingkat tinggi lordosis, sementara tikus PR null homozigot menunjukkan
sangat dilemahkan atau bahkan kehilangan lordosis quotients (Lydon et al. 1995, Mani et al. 1996). Baik
progesteron dan neurotransmitter dopamine tidak mampu memfasilitasi perilaku seksual pada tikus mutan
PR null, sementara serotonin jelas memfasilitasi lordosis, menunjukkan bahwa tikus ini masih mampu
menunjukkan lordosis dan bahwa respon mediator serotonin tidak memerlukan PR intraseluler sementara
progesteron- dan tanggapan yang dimediasi dopamin lakukan (Mani et al. 1996). Kurangnya lonjakan
preovulasi gonadotropin endovulasi yang disebabkan oleh bau tikus jantan atau E2 telah diamati pada tikus
PRKO, menunjukkan bahwa anovulasi hewan ini mungkin tidak semata-mata karena kelainan di dalam
ovarium itu sendiri (Chappell et al. 1997, Chappell et al. 1999). PR juga telah ditunjukkan untuk
memfasilitasi inisiasi tumorigenesis di payudara dan ovarium (Lydon et al. 1999, Madinah et al. 2003).
Ablasi selektif PRA menghasilkan tikus betina yang infertil dan di mana infertilitas dikaitkan dengan
implantasi uterus yang rusak (Mulac-Jericevic et al. 2000). Sebaliknya, PRB knockout (PRBKO) tikus
betina subur dan menghasilkan hidup, meskipun pertumbuhan terhambat keturunan, tetapi penurunan yang
ditandai dalam sidebranching duktal dan pengembangan lobulus alveolar serta menurunkan kepadatan
alveolar selama kehamilan diamati (Mulac-Jericevic et al. . 2003). Peningkatan jumlah sel apoptosis juga
diamati (Mulac-Jericevic et al. 2003). Dengan demikian, dalam kelenjar susu, PRB tampaknya cukup
untuk menimbulkan proliferasi normal dan diferensiasi epitel susu dalam menanggapi progesteron dan
PRA cukup untuk memediasi kegiatan ovulasi dari progesteron dan untuk menimbulkan efek
antiproliferatif progesteron pada hiperplasia yang diinduksi E2 di uterus (Mulac-Jericevic dkk. 2000,
Mulac-Jericevic dkk. 2003). Singkatnya, temuan ini menegaskan bahwa PR memainkan peran penting
dalam perilaku seksual, ovulasi, luteinisasi, implantasi dan dalam perkembangan kelenjar mamma pada
lobuloalveolar dan mereka mendukung peran progesteron sebagai koordinator pleiotropik dari beragam
peristiwa reproduksi.

1.2.5 Ekspresi PR dan ER spesifik dan jaringan spesifik ER mRNA telah ditemukan pada ovarium tikus,
uterus (konsentrasi terbesar), saluran telur, kelenjar susu, jantung, aorta, hati, ginjal, limpa, otot rangka dan
sumsum tulang (Couse et al. 1997). Dengan demikian, ER memiliki pola ekspresi yang luas, sedangkan
ER memiliki pola yang lebih terfokus dengan tingkat tinggi pada ovarium tikus betina, paru-paru dan
hipotalamus (Couse et al. 1997). Rendahnya tingkat ER transkrip telah terdeteksi pada uterus tikus, leher
rahim, vagina, saluran telur dan jantung, tetapi kelenjar susu, ginjal dan aorta negatif ketika dipelajari oleh
uji perlindungan RNase (Couse et al. 1997). Ekspresi ER yang dipelajari oleh blotting Utara tidak
mengungkapkan ekspresi di jantung, tetapi ginjal negatif seperti pada penelitian sebelumnya (Tremblay et
al. 1997). Pada manusia, transkrip ER telah terdeteksi di ovarium, thymus dan sangat samar di limpa,
tetapi usus kecil, usus besar, leukosit, jantung, otak, plasenta, paru-paru, hati, otot rangka, ginjal dan
pankreas dilaporkan negatif. (Mosselman et al. 1996). Namun, ada kemungkinan bahwa sensitivitas
analisis blot Northern tidak cukup untuk mendeteksi ekspresi ER di beberapa jaringan, karena reseptor
dinyatakan dalam limfosit darah perifer ketika dipelajari oleh PCR tetapi tidak ketika dipelajari oleh blot
Northern (Mosselman et al. 1996 ). Protein ER telah ditunjukkan untuk diekspresikan pada sebagian kecil
sel epitel lumen tetapi tidak sama sekali di salah satu jenis sel lain dari kelenjar mamalia manusia normal
(ditinjau dalam Anderson dan Clarke 2004). Sel ER positif tersebar relatif merata di seluruh epitel
(ditinjau dalam Anderson dan Clarke 2004). Tidak seperti pada payudara manusia, ER dapat dideteksi
pada sel-sel stroma tikus dan adiposit dan pada epitel tikus (dekat dengan membran basal) dan sel-sel
stroma (Shim et al. 1999, ditinjau dalam Anderson dan Clarke 2004). Sebaliknya, ER hadir di sebagian
besar sel epitel lingitel dan mioepitel serta fibroblast dan jenis sel stroma lainnya (ditinjau dalam Anderson
dan Clarke 2004). Distribusi luas ini sangat tidak informatif, jika dibandingkan dengan pola ekspresi ER
yang lebih terbatas terkait fungsi ER pada payudara manusia normal. PR dinyatakan dalam organ
responsif progesteron seperti uterus, ovarium, vagina, otak dan jaringan payudara normal dan neoplastik
(ditinjau dalam Graham dan Clarke 1997). Selain itu, telah dideteksi pada jaringan lain dan tipe sel seperti
endotel vaskular, thymus, paru-paru, pankreas dan sel-sel garis osteoblas, di mana fungsinya kurang
diketahui (ditinjau dalam Graham dan Clarke 1997). Dalam uterus, tingkat PR lebih tinggi pada fase
proliferatif (luteal) dari siklus mentrual dan mereka berkurang pada epitelium kelenjar dan luminal sekitar
waktu implantasi, tetapi ekspresi PR stroma tetap ada (ditinjau dalam Lessey 2003). Pada payudara
manusia, PR diekspresikan pada sebagian kecil sel yang tersebar di seluruh epitelium luminal, tetapi tidak
pada sel-sel mioepitel atau stroma (ditinjau dalam Anderson dan Clarke 2004). Pada tikus dan kelenjar
susu tikus, PR juga diekspresikan dalam sel-sel epitel luminal saja (Silberstein et al. 1996, Shim et al.
1999), dan pada tikus itu telah terbukti dilokalisasikan ke sel-sel yang mengekspresikan ER (Shim et al.
1999). Namun, ekspresi PR pada sel-sel epitel payudara luminal tidak statis tetapi mengalami perubahan
dinamis dalam distribusi dengan pencapaian kematangan seksual (ditinjau dalam Ismail et al. 2003).
Pengobatan dengan estrogen menghasilkan peningkatan sel PR-positif dalam epitelium (Shim et al. 1999).
Selanjutnya, sebagian besar sel epitel, yang mengalami proliferasi sebagai respon terhadap progesteron,
adalah PR-negatif dan terkait erat dengan sel-sel PR-positif, yang dengan demikian memediasi sinyal
proliferatif progesteron melalui mekanisme parakrin ke sel-sel PR-negatif yang responsif disandingkan (
ditinjau dalam Ismail et al. 2003). Ada fluktuasi yang luas dalam rasio PRA: PRB di uterus selama siklus
menstruasi normal (Mangal et al. 1997, Mote et al. 1999). Konsentrasi PRA relatif konstan, tetapi PRB
Konsentrasi bervariasi (Mangal et al. 1997). Selain itu, penggunaan kontrasepsi oral mengubah rasio
ekspresi (Mangal et al. 1997). PRA abnormal: rasio PRB telah ditunjukkan pada penyakit ganas seperti
kanker payudara (Graham et al. 1995). Dengan demikian, telah disarankan bahwa respon terhadap
progesteron serta terapi endokrin dalam jaringan normal dan kanker masing-masing dapat dimodulasi oleh
ekspresi diferensial dari dua isoform ini.
1.2.6 reseptor hormon steroid dan penyakit manusia Ada beberapa mutasi alami ER yang menghasilkan
urutan protein yang berubah dan penyakit tertentu. Mutasi ER telah ditemukan pada sampel kanker
payudara primer dan lesi metastatik, meskipun mutasi ini relatif jarang (ditinjau dalam Herynk dan Fuqua
2004). Selain kanker payudara, mutasi ER juga telah ditunjukkan pada kanker endometrium, eritematosis
lupus sistemik dan penyakit kejiwaan seperti penyakit bipolar, psikosis puerperal dan alkoholisme (ditinjau
dalam Herynk dan Fuqua 2004). Juga telah dikemukakan bahwa defek ER mungkin bertanggung jawab
untuk beberapa masalah ketidaksuburan wanita, tetapi sejauh ini tidak ada bukti yang diberikan. Seorang
pasien laki-laki telah dilaporkan kekurangan ER fungsional karena mutasi homozigot dari reseptor
(Smith et al. 1994). Dia memiliki usia tulang yang rendah, pertumbuhan linier terus berlanjut sampai
dewasa karena epifisis yang tidak tertutup dan osteoporosis berat. Selain itu, ia memiliki sindrom
insensitivitas estrogen, gangguan toleransi glukosa, hiperinsulinemia dan acantosis aksila bilateral
nigrikan, yang merupakan penanda resistensi insulin pada kulit. Telah dipikirkan sebelumnya bahwa
pertumbuhan pubertas dan pematangan epifisis pada laki-laki diinduksi oleh androgen, tetapi fenotipe pria
ini menegaskan bahwa estrogen memiliki peran penting dalam pertumbuhan pubertas, pematangan epifisis
dan dalam mineralisasi kerangka pada kedua jenis kelamin. Berbeda dengan banyak mutasi ER yang
diketahui, relatif sedikit terjadi mutasi titik-titik ER telah diidentifikasi sejauh ini (ditinjau dalam Herynk
dan Fuqua 2004). Telah dikemukakan bahwa mutasi PR merugikan manusia selama perkembangan
embriologis. PR yang bermutasi dapat berpartisipasi dalam karsinogenesis ovarium, karena hubungan
antara alel PR termutasi dan peningkatan risiko untuk kanker ovarium nonfamilial telah ditunjukkan
(Agoulnik et al. 2004). Selain itu, mutasi di wilayah promotor PR telah dikaitkan dengan peningkatan
risiko kanker endometrium dan payudara (De Vivo et al. 2002, De Vivo et al. 2003). Retardasi mental,
autisme dan epilepsi, yang dimulai pada anak usia dini, adalah karakteristik sindrom Angelman dan
Angelman sindrom-terkait protein E6-AP telah terbukti berinteraksi dengan dan mengaktifkan aktivitas
transkripsi PR (Nawaz et al. 1999, Veiga dan Toralles 2002). PR mRNA dan tingkat protein telah terbukti
meningkat pada leiomioma uterus manusia bila dibandingkan dengan miometrium uterus normal (Brandon
et al. 1993). Selain itu, pengukuran tingkat PR telah memberikan peningkatan akurasi dalam memprediksi
respon terhadap terapi hormonal pada kanker payudara, dan kehadirannya sendiri atau bersama dengan ER
telah dilaporkan berkorelasi dengan respon yang lebih baik terhadap terapi endokrin dan kelangsungan
hidup yang lebih lama (Clark et al. 1983, McGuire dan Clark 1983, Rydén dkk 1988, Ravdin dkk 1992,
Allred dkk 1998, Bryant dkk 1998, Fernö dkk, 2000, Chebil et al., 2003). Singkatnya, temuan ini
menunjukkan bahwa bahkan tidak adanya ER sama sekali tidak mematikan tetapi dapat mengakibatkan
sejumlah penyakit yang berbeda. Sebaliknya, mutasi PR tampaknya lebih merugikan manusia karena tidak
ada mutasi germ-line yang tampak pada populasi manusia sejauh ini, tetapi mereka telah terbukti memiliki
peran dalam tumorigenesis. Relevansi klinis mutasi ER masih harus ditemukan.

BAB 3
3.1 Keterlibatan protein pendamping dan dimerisasi reseptor Hal ini umumnya berpikir bahwa reseptor
steroid tak terlarut, terutama PR, reseptor glukokortikoid (GR) dan reseptor mineralokortikoid, ada dalam
kompleks heteromer yang besar dengan Hsps dan komponen lain dari mesin pendamping molekul (Smith
1993, ditinjau dalam Cheung dan Smith 2000). Kompleks protein 3 Hsps dan 2 cochaperone, juga disebut
mesin pendamping Hsp90 / Hsp70, dianggap sebagai persyaratan minimal untuk membangun reseptor
yang mampu mengikat hormon mereka masing-masing dengan afinitas dan efisiensi tinggi (ditinjau ulang
di Cheung). dan Smith 2000, ditinjau dalam Pratt and Toft 2003). Empat anggota kompleks membuka
sumbatan yang mengikat steroid pada reseptor dalam proses tergantung ATP sehingga dapat diakses oleh
hormon (ditinjau dalam Pratt dan Toft 2003). Akhirnya, protein kelima (p23), berinteraksi dengan Hsp90
dan menstabilkan seluruh kompleks (ditinjau dalam Pratt dan Toft 2003). Selain itu, pendamping dapat
membantu dengan pelipatan awal polipeptida reseptor yang baru lahir dan mereka mempengaruhi shuttling
reseptor antara kompartemen seluler (ditinjau dalam Cheung dan Smith 2000). Mereka juga diyakini
berfungsi untuk mempertahankan reseptor dalam konformasi yang tepat dalam ketiadaan hormon dan
untuk melindungi LBD dari interaksi yang tidak sesuai dan untuk menghambat pengikatan koregulator ke
reseptor hormon steroid (ditinjau dalam Murdoch dan Gorski 1991, ditinjau dalam Cheung dan Smith
2000). Akhirnya, setelah pengikatan hormon, reseptor dilepaskan dari kompleks heteromer dan
membentuk konformasi baru (Smith 1993). Dimerisasi dianggap penting untuk fungsi reseptor hormon
steroid, karena mutasi yang mengganggu hasil dimerisasi reseptor di hampir reseptor nonaktif transkripsi
(Sheeler et al. 2003). Umumnya, reseptor hormon steroid dianggap mengikat DNA sebagai homodimer
yang diinduksi ligan. ER dan ER membentuk terutama homodimer tetapi mampu membentuk
heterodimer juga (Kumar dan Chambon 1988, Ogawa et al. 1998). Pembentukan heterodimer antara
isoform PR juga ada di vivo, tetapi mereka tidak mengikat secara efisien untuk unsur respon progesteron
dan dengan demikian tampak tidak aktif (Leonhardt et al. 1998). Heterodimerisasi antara reseptor steroid
yang berbeda juga telah dilaporkan (ditinjau dalam Murdoch dan Gorski 1991).
3.2 Perubahan konformasi Setelah ikatan hormon dalam inti LBD, konformasi reseptor berubah.
Perubahan konformasi ini memungkinkan dimerisasi dan pengikatan DNA dari reseptor, interaksi dengan
koaktivator dan akhirnya modulasi transkripsi gen target (Tsai dan O'Malley 1994). Struktur tiga dimensi
ER dan ER LBD sangat mirip: domain berbentuk baji kompak ini terdiri dari 12 -heliks disusun
menjadi tiga lapisan anti-paralel (ditinjau dalam Pike et al. 2000). Ligan terperangkap ke dalam struktur
seperti bola hampa dan permukaan LBD dari reseptor sekarang dapat berinteraksi dengan protein
koaktivator. Situs rekrutmen koaktivator itu sendiri terdiri dari alur hidrofobik yang dangkal yang dibentuk
oleh residu antara heliks 3-5 dan helix 12 dan ketiga leusin motif LxxLL bersentuhan dengan LBD,
sedangkan dua residu X spacer tidak membuat interaksi dan proyek jauh dari LBD (ditinjau dalam Pike et
al. 2000). Namun, untuk peptida kotak III tikus TIF2, motif pengikatannya adalah LxxYL daripada
konsensus LxxLL (ditinjau dalam Pike et al. 2000). Struktur kristal ER terikat ke ligan yang berbeda telah
mengungkapkan bahwa ligan berbagai ukuran dan bentuk menginduksi spektrum negara konformasi
reseptor, dan bahwa keadaan ini kemudian ditafsirkan untuk menghasilkan ekspresi gen target yang diatur
secara diferensial (Brzozowski et al. 1997, Shiau et al. 1998, ditinjau dalam Nilsson et al. 2001). Struktur
tiga dimensi dari PR LBD yang terikat dengan progesteron telah mengungkapkan bahwa keseluruhan
lipatan PR mirip dengan yang ditemukan di ER (Tanenbaum dkk. 1998, Williams dan Sigler 1998).
Antarmuka ini terutama terdiri dari heliks 11 dan 12 serta ekor ekstensi C-terminal 12-residu yang penting
untuk pengikatan hormon, sedangkan heliks 7-10 adalah kontributor utama dalam antarmuka ER LBD
(Tanenbaum et al. 1998, Williams dan Sigler 1998). Selanjutnya, estradiol-terikat ER LBD adalah dimer
dalam larutan, sedangkan progesteron-terikat LBD PR elas sebagai monomer dalam kromatografi gel-
eksklusi (Tanenbaum et al. 1998).
3.3 Gen target estrogen dan progesteron Pada akhirnya, reseptor berikatan dengan urutan DNA tertentu.
ER berikatan dengan estrogen-response element (ERE) dan PR berikatan dengan progesterone response
element (PRE). ERE adalah pengulangan palindromic terbalik (5'-GGTCAxxxTGACC-3 '), di mana x
adalah nukleotida (ditinjau dalam Herynk dan Fuqua 2004). Interaksi reseptor dengan anggota kompleks
preinitiation menyebabkan stimulasi transkripsi dari gen di sekitar elemen respons. Ekspresi proto-
onkogen c-Fos dan c-Myc adalah salah satu perubahan paling awal yang terlihat di rahim setelah injeksi
tunggal jumlah estrogen fisiologis (Weisz dan Bresciani 1988, Huet-Hudson et al. 1989). Sebuah fenomena
yang disebut estrogen priming telah terbukti meningkatkan tingkat PR di berbagai organ (Korach et al.
1985, Aronica dan Katzenellenbogen 1991). Dalam uterus tikus WT, transkrip PR tampak diregulasi 24
jam setelah pengobatan estrogen dan respon ini diblokir dengan pretreatment hewan dengan antiestrogen
ICI 164.384 (Couse et al. 1995). pS2 awalnya dicirikan sebagai gen, yang diregulasi oleh estradiol dalam
sel MCF-7 dan peningkatan yang pasti atas tingkat basal terlihat tiga jam setelah pemaparan, mencapai
dataran tinggi setelah 24 jam (Masiakowski dkk. 1982, Brown et al. 1984). Cathepsin D dan 1-antitrypsin
juga diregulasi dan HER-2 diturunkan oleh estradiol dalam sel MCF-7 / S9 (Jensen et al. 2003). Pengaturan
transkripsi protein sekresi epitelial laktoferin uterus dan gen glukosa-6- fosfat dehidrogenase diketahui
berada di bawah kendali kompleks estrogen-ER di uterus dan mereka telah digunakan sebagai penanda
untuk tindakan estrogen (Korach et al. 1985, Liu dan Teng 1992, ditinjau dalam Conneely et al. 2002).
Peningkatan 350 kali lipat mRNA laktoferin dan peningkatan 2,5 kali lipat glukosa-6-fosfat dehidrogenase
mRNA terlihat pada uterus tikus setelah dosis tunggal estradiol (Couse et al. 1995). Namun, tidak ada
pengaturan laktoferin atau glukosa-6- fosfat dehidrogenase mRNA yang terlihat ketika ER tidak ada
(Couse et al. 1995). Estrogen juga menginduksi sintesis IGF-1 dalam uterus tikus (Murphy et al. 1987,
Kapur et al. 1992). Ini meningkatkan sekresi mitogen mengubah faktor pertumbuhan- (TGF-) dan
menurunkan sekresi TGF- penghambatan dalam sel kanker payudara, sedangkan antiestrogen dan
penarikan estrogen menginduksi respon terbalik (Bates et al. 1988, Knabbe et al. 1987). Progesteron
dikenal untuk mengatur ekspresi banyak faktor pertumbuhan termasuk faktor pertumbuhan epidermis
pengikat heparin (HB-EGF), IGF-1 dan tumor necrosis factor-alpha (TNF-) pada sel stroma uterus
(Kapur et al. 1992, Zhang et al. 1994, ditinjau dalam Hunt et al. 1996). Selain itu, reseptor faktor
pertumbuhan seperti EGFR (Dai dan Ogle 1999) dan reseptor TNF (ditinjau dalam Hunt et al. 1996)
diinduksi oleh progesteron dalam sel stroma dan endometrium masing-masing. Selain itu, ekspresi anggota
keluarga Stat telah terbukti diatur oleh progesteron dalam sel kanker payudara (Richer et al. 1998) dan
ekspresi laktoferin, kalsitonin, histidin dekarboksilase dan amphiregulin meningkat pada epitelium uterus
sebagai tanggapan terhadap progesteron (Ulasan dalam Conneely et al. 2002). Selain itu, progestin telah
terbukti mampu menstimulasi aktivasi cepat jalur pensinyalan MAPK pada sel kanker payudara dengan
cara yang bergantung pada PR, tetapi aktivasi ini juga membutuhkan keberadaan ER ligan-bebas
(Migliaccio et al. 1998). . Telah dikemukakan bahwa progesterone bekerja dengan dua jalur yang berbeda
di rahim, baik secara langsung pada epitel endometrium atau secara tidak langsung melalui sel-sel stroma,
yang meningkatkan produksi faktor parakrin stroma yang mempengaruhi sel-sel epitel oleh progesteron
(ditinjau dalam Lessey 2003). Setelah injeksi progesteron, akumulasi ekspresi c-Myc pada nukleus sel
stroma uterus tikus terlihat (Huet-Hudson et al. 1989). Efek antiproliferatif progesteron pada endometrium
diduga dimediasi oleh down-regulation ER dan dengan demikian sensitivitas uterus terhadap tindakan
estrogen selanjutnya berkurang (Hsueh et al. 1975, Bhakoo dan Katzenellenbogen 1977). Progesteron juga
menurunkan reseptornya sendiri (Milgrom et al. 1973), dan meningkatkan aktivitas endometrium estradiol
dehidrogenase, yang menyebabkan peningkatan metabolisme estradiol menjadi estrone yang kurang
efektif (Tseng dan Gurpide 1975).

3.4 Pengaturan siklus sel oleh estrogen dan progesteron

Konsep siklus sel diperkenalkan pada 1960-an. Tanggapan rangsangan ekstraselular termasuk hormon
steroid, faktor pertumbuhan dan mitogen lainnya berkumpul di titik akhir ini dan memungkinkan crosstalk
antara jalur sinyal yang berbeda. Bagian melalui siklus dikendalikan oleh cyclin- dependent kinase (CDK)
kompleks, yang terdiri dari subunit siklik regulasi (enam siklometer yang disebutkan sejauh ini: A, B, D1,
D2, D3 dan E) dan subunit CDK katalitik (a kinase). Suksesi kinase diekspresikan bersamaan dengan
suksesi siklon ketika sel melewati siklus. Setelah aktivasi cyclin-CDK oleh fosforilasi, faktor transkripsi
diaktifkan oleh penghapusan inhibitor faktor transkripsi, yang pada gilirannya menghasilkan transkripsi
gen (yaitu gen siklin dan kinase berikutnya) yang diperlukan untuk langkah siklus sel berikutnya. Siklus
didorong ke satu arah hanya karena ireversibilitas degradasi protein. Gambaran tentang siklus sel dan efek
estrogen dan progesteron di atasnya diringkas dalam Gambar 6.
Figure 6. Summary of regulation of cell cycle by estrogen and progestins. G1, G1 phase; R, restriction
point; S, synthesis; G2, G2 phase; M, mitosis; E2, estradiol; P, progesterone; MPA, medroxyprogesterone
acetate; CDK, cyclin-dependent kinase; p21 and p27, CDK inhibitors p21 and p27; pRB, retinoblastoma
gene product; p107, pRB-related protein.
Pengaturan siklus sel oleh estrogen Ekspresi proto-onkogen yang membatasi laju c-Fos dan c-Myc adalah
salah satu respons terdeteksi paling awal untuk estrogen (Travers dan Knowler 1987, Weisz dan Bresciani
1988). Faktor lain yang penting adalah pengaturan ekspresi siklon, CDK dan inhibitor CDK. Aktivasi
transkripsional dari cyclin D1 terlihat dalam 2-4 jam dan pembentukan pembentukan kompleks cyclin aktif
D1-CDK4 yang mengandung inhibitor CDK p21 terlihat (Prall et al. 1997, ditinjau dalam Sutherland et al.
1998). Aktivitas Cyclin E-CDK2 juga terlihat dalam beberapa jam pertama respon estrogenik (Planas-
Silva dan Weinberg 1997, Prall et al. 1997, ditinjau dalam Sutherland et al. 1998). Sebuah jaringan kinase
dan fosfatase serta protein penghambat (misalnya p16INK4, p21 dan p27) diketahui mempengaruhi
aktivitas CDK, tetapi sedikit atau tidak ada perubahan dalam tingkat inhibitor CDK p21 dan p27 sebelum
masuk ke fase S oleh estrogen telah ditampilkan (ditinjau dalam Sutherland et al. 1998). Secara umum,
kontrol proliferasi sel mamalia oleh hormon steroid terjadi sebagian besar selama fase G1 dari siklus sel
dan dengan demikian studi telah difokuskan pada faktor utama yang mengontrol perkembangan G1.
Beberapa penulis telah menyelidiki efek estrogen pada entri dan progresi siklus sel (ditinjau dalam
Sutherland et al. 1998). E2 memodulasi peristiwa yang terjadi sebelum sintesis DNA dan telah
menunjukkan bahwa sel kanker payudara adalah yang paling sensitif terhadap estrogen pada fase G1 awal,
segera setelah mitosis (Leung dan Potter 1987). Selanjutnya, estrogen meningkatkan proporsi sel-sel yang
mensintesis DNA dengan merekrut sel-sel fase G0 ke dalam siklus sel dan dengan mengurangi durasi fase
G1 (ditinjau dalam Sutherland et al. 1998). Ketika sel-sel kanker payudara T-47D ditumbuhkan dalam
medium bebas serum, 17-estradiol saja gagal menghasilkan efek yang signifikan pada perkembangan sel
sel, tetapi peningkatan yang bergantung pada konsentrasi terlihat pada fraksi fase S ketika insulin
ditambahkan (Sutherland et. al. 1992). Dengan demikian, sel-sel jelas membutuhkan faktor pertumbuhan
lain, terutama insulin / IGF-1, untuk secara maksimal merangsang siklus sel dalam kondisi bebas-serum
atau pertumbuhan-faktor-kondisi in vitro. Perhatian baru-baru ini telah difokuskan pada pengaturan
peristiwa siklus sel kritis yang menentukan masuk ke dalam, perkembangan melalui dan keluar dari siklus
sel (ditinjau dalam Sutherland et al. 1998). Beberapa substrat kunci untuk kontrol perkembangan siklus sel
termasuk produk gen retinoblastoma pRB dan p107 telah diidentifikasi (Beijersbergen et al. 1995, ditinjau
dalam Weinberg 1995). Sebelum berkembang melalui G1, inaktivasi protein pRB dan p107 oleh fosforilasi
diperlukan dan kejadian ini dipicu oleh estrogen (Beijersbergen et al. 1995, ditinjau dalam Weinberg 1995,
Planas-Silva dan Weinberg 1997, Prall et al. 1997).
3.4.2 Pengaturan siklus sel oleh progestin Efek progesteron pada siklus sel tampaknya lebih spesifik sel-
jenis daripada efek estrogen. Sementara 10 sampai 13 hari estradiol topikal pada fase folikular siklus
menstruasi meningkatkan jumlah siklus normal sel-sel epitel payudara wanita premenopause, progesteron
menurunkan fraksi pertumbuhan sel-sel epitel payudara normal (Chang et al. 1995) dan dengan demikian
dominan efek pengobatan progestin tampaknya menjadi penghambatan perkembangan siklus sel baik di
sel epitel payudara normal dan sel kanker payudara. Ini telah terbukti berhubungan dengan penurunan
fosforilasi pRB dan p107 dan penurunan aktivitas cyclin D1-CDK4, cyclin D3-CDK4 dan cyclin E-CDK2
(Musgrove et al. 1998, ditinjau dalam Sutherland et al. 1998). Selain itu, peningkatan ekspresi inhibitor
CDK p21 dan p27 dan hubungan mereka yang meningkat dengan kompleks yang tersisa mengikuti
pengobatan progestin (Musgrove et al. 1998, ditinjau dalam Sutherland et al. 1998). Perawatan sel kanker
payudara T-47D dengan progestin menghasilkan efek biphasic: peningkatan awal fraksi fase S diikuti oleh
penangkapan siklus sel (Sutherland et al. 1992, Musgrove et al.1991
Daripada masuknya sel T-47D nonproliferasi ke dalam siklus sel, hasil stimulasi dari peningkatan
sementara laju perkembangan sel-sel aktif bersepeda sudah dalam fase G1 (Musgrove et al. 1991).
Perawatan progesteron sel T-47D menginduksi down-regulation aktivitas reverse transcriptase dan
telomerase telomerase manusia, tetapi regulasi ini terutama tidak langsung dan terkait dengan efek hormon
pada akumulasi sel dalam fase G0 / G1 (Lebeau et al. 2002). ekspresi mRNA EGF dan TGF meningkat
pada sel-sel kanker payudara ini dalam waktu tiga jam dari progestin (ORG 2058) pengobatan, tetapi ketika
sel-sel diobati dengan faktor-faktor pertumbuhan ini, peningkatan persentase fase S terdeteksi hanya 15
jam setelah, menunjukkan bahwa tindakan dari kedua faktor pertumbuhan ini memediasi respon cepat
progestin yang terlihat pada sel kanker payudara (Musgrove et al. 1991). Sebaliknya, progestin up -
regulated c-Myc proto-oncogene transcript (jelas dalam 15 menit), dan induksi ini sepenuhnya dibatalkan
oleh pengobatan simultan dengan antiprogestin RU 486, menunjukkan bahwa c-Myc dapat berpartisipasi
dalam regulasi siklus sel oleh progestin ( Musgrove et al. 1991). Semua efek ini dianggap dimediasi melalui
PR. Cyclin D1 adalah salah satu molekul pengatur utama dari siklus sel dan diekspresikan secara luas di
sebagian besar tipe sel (diulas dalam Lange 2004). Pengobatan dengan progesteron mengarah ke up-
regulasi (ditinjau pada Lange 2004) dan sebenarnya gen target umum dari banyak faktor pertumbuhan dan
hormon lainnya juga (ditinjau dalam Fu et al. 2004). Jones dkk. (2000) mempelajari efek progestin
medroxyprogesterone acetate sintetis (MPA) pada sel stroma uterus normal tikus dan menemukan
peningkatan yang signifikan dalam jumlah sel yang memasuki fase S setelah pengobatan dengan MPA
ditambah fibroblast growth factors (FGF) dibandingkan dengan FGF saja. Mereka juga menunjukkan
bahwa progesteron memberikan efek langsung pada transit melalui fase G1 dari siklus sel dan bahwa
akumulasi temporal mRNA cyclin D1 tergantung pada progesteron dan FGF dan bahwa akumulasi ini
berkurang oleh antiprogestin. Peningkatan sementara ekspresi c-Myc dan cyclin D1, peningkatan
kompleks c1lin D1-CDK4 dan dalam aktivitasnya serta peningkatan jumlah relatif pRB, target yang diduga
dari aktivitas cyclin D1 / CDK, telah ditunjukkan pada stimulasi yang diinduksi progestin. perkembangan
siklus sel (Musgrove et al. 1993, ditinjau dalam Sutherland et al. 1998). Induksi cepat ekspresi cyclin D1
dan c-Myc dapat dibantah oleh antiprogestin (Musgrove et al. 1993). Sel-sel memasuki S-fase sekitar 8
jam setelah pengobatan progestin (Musgrove et al. 1991). Studi tikus mutan Cyclin D1-null menunjukkan
bahwa cyclin D1 diperlukan untuk proliferasi lobuloalveolar kelenjar susu selama kehamilan dan menyusui
(Fantl et al. 1995, Sicinski et al. 1995) dan dengan demikian tindakan cyclin D1 sangat penting untuk
progesterone-driven epitel mammae proliferasi. Defek proliferasi sel epitel mamaria yang terlihat selama
kehamilan pada hewan defisien D1 siklin tidak dapat dikaitkan dengan defisiensi hormon steroid yang
beredar atau tidak adanya ER, karena kadar estrogen, progesteron dan ERs normal dan dengan demikian
merupakan defek. dalam respon hormon adalah mungkin (Sicinski et al. 1995), dan insufisiensi hipofisis
dan defisiensi prolaktin yang dihasilkan dapat menjelaskan kegagalan untuk laktat (Fantl et al. 1995).
Dengan demikian, proliferasi kelenjar susu yang diinduksi oleh steroid selama kehamilan dapat didorong
oleh siklin D1. Singkatnya, estrogen dan progesteron memiliki sejumlah target yang mengatur siklus sel,
dan dengan demikian efek mitogenik hormon-hormon ini. Setidaknya c-Myc, pRB, p107, cyclin D1- dan
cyclin E-CDK kompleks serta penghambat CDK p21 dan p27, memainkan peran penting dalam aksi
hormon steroid. Selain itu, efek estrogen dan progesteron pada siklus sel dan perkembangannya tampaknya
sangat berlawanan.
4.2 Faktor pertumbuhan, pensinyalan kinase dan transactivation
reseptor Faktor-faktor pertumbuhan seperti EGF dan IGF dikenal untuk merangsang aktivitas ER dengan
cara ligan-independen melalui aktivasi kaskade protein kinase berurutan yang disebut sebagai jalur MAPK
dan melalui prosphorylation langsung ER (Aronica dan Katzenellenbogen 1993, Kato et al.) 1995, ditinjau
dalam Kato et al. 1998). Sinyal ekstraseluler yang ditransduksi melalui reseptor G-protein-coupled dan
reseptor faktor pertumbuhan mengaktifkan G-protein Ras kecil, yang merupakan saklar kunci dalam
pensinyalan seluler (ditinjau dalam Pouyssegur et al. 2002). Salah satu jalur utama yang diaktifkan oleh
Ras adalah jalur MAPK (ditinjau dalam Pouyssegur et al. 2002). Ras merekrut serine / threonine kinase
Raf ke membran sel, Raf memfosforilasi dan mengaktifkan MEK, yang pada gilirannya mengaktifkan
kinase sinyal-diatur ekstraseluler ERK1 dan ERK2 (ditinjau dalam Pouyssegur et al. 2002). Selain itu,
faktor pertumbuhan merangsang aktivitas transkripsi ER via melalui jalur kinase Akt (protein kinase B) /
phosphatidylinositol-3 (Akt / PI-3), yang merupakan jalur faktor pertumbuhan penting lainnya dalam sel
(ditinjau dalam Shupnik 2004). Kebalikannya juga terjadi, karena ER-ligan yang teraktivasi dapat
mengatur jalur Akt / PI-3 kinase dan MAPK (ditinjau dalam Clarke et al. 2004). Pada akhirnya, aktivasi
kinase Akt / PI-3 dan kaskade pensinyalan MAPK mengarah ke fosforilasi ER dan PR (ditinjau dalam
Clarke et al. 2004).
4.2.1 Transactivation ER
Rat uterine ERs dapat diaktifkan oleh IGF-1 dan pengobatan meningkatkan fosforilasi reseptor (Aronica
dan Katzenellenbogen 1993). Protein kinase inhibitor mengurangi peningkatan fosforilasi oleh IGF-1
(Aronica dan Katzenellenbogen 1993). Hasil ini menunjukkan bahwa fosforilasi terlibat dalam aktivasi ER
ligan-independen. Estrogen sendiri juga mampu mengaktifkan kaskade MAPK di banyak jenis sel yang
berbeda (Migliaccio et al. 1996, Endoh et al. 1997, Watters et al. 1997). Ada bukti bahwa reseptor hormon
steroid adalah fosfoprotein dan fosforilasi yang terlibat setidaknya dalam pengaturan aktivasi transkripsi
dan pengikatan DNA reseptor (ditinjau dalam Weigel 1996). ER Manusia menjadi terfosforilasi di hadapan
estrogen dan antiestrogen 4-OHT dan ICI 164.384, tetapi fosforilasi antiestrogen yang diinduksi kurang
efisien (Ali et al. 1993). Fosforilasi Ser118, salah satu situs utama fosforilasi hormon dalam AF-1 ER,
diinduksi oleh ikatan hormon dan juga merupakan target langsung untuk fosforilasi oleh MAPK (Kato et
al. 1995, ditinjau dalam Weigel 1996, Joel et al. 1998, ditinjau dalam Clarke et al. 2004). Fosforilasi
mengarah pada perekrutan kopolimer p68 / p72, yang mengaktifkan transkripsi secara ligan-independen
(ditinjau dalam Clarke et al. 2004). Selain itu, target MAPK coactivators seperti p160 dan CBP untuk
fosforilasi, yang mengarah ke peningkatan aktivitas mereka (ditinjau dalam Clarke et al. 2004). MAPK
juga memfosforilasi ER 'manusia dan tikus, dan dengan demikian crosstalk terjadi tidak hanya melalui
ER, tetapi juga melalui ER (Tremblay et al. 1997, ditinjau dalam Kato et al. 1998). Alignment dari tikus,
tikus dan manusia ER urutan aa menunjukkan bahwa Ser60 dilestarikan di semua spesies dan Ser60 ER
telah ditemukan menjadi target potensial untuk fosforilasi oleh jalur MAPK (Tremblay et al. 1997). Dua
residu serin tambahan yang terletak di posisi 106 dan 124 ER juga telah diidentifikasi sebagai lokasi
fosforilasi MAPK (Tremblay et al. 1999). Ser106 sesuai dengan Ser118 dalam ER manusia dan fosforilasi
kedua posisi meningkatkan interaksi ER dengan SRC-1 (Tremblay et al. 1999).
4.2.2 Trans transivasi Selain mekanisme sinyal transkripsi klasik yang dimediasi oleh PR, keberadaan
jalur sinyal PR non transkriptional telah dilaporkan (ditinjau dalam Leonhardt et al. 2003). Misalnya,
progestin sintetis R5020 telah terbukti mampu menstimulasi aktivasi jalur sinyal MAPK yang cepat dan
dapat dipulihkan pada sel kanker payudara dalam suatu PR-dependent.
6 KANKER PAYUDARA HORMONE-DEPENDENT
Kanker payudara adalah kanker yang paling umum di antara wanita Finlandia dan insidennya telah
meningkat setiap tahun. Sekitar 3.800 kanker payudara baru didiagnosis di Finlandia pada tahun 2003 dan
kejadian penyakit ini adalah 84,3 dalam 100.000 (Finlandia Cancer Registry 2003). Secara umum, risiko
seumur hidup kanker payudara adalah 1 sampai 10 (ditinjau dalam Clamp et al. 2003) dan prognosis
penyakit baik - sekitar 80% pasien di Finlandia hidup lima tahun setelah diagnosis (www.cancerregistry
.fi). Tingkat ketahanan hidup yang sama telah dilaporkan dari Swiss, misalnya, di mana kelangsungan
hidup relatif 5 tahun berdasarkan usia pada wanita yang didiagnosis antara 1993 hingga 1997 adalah 81%
(Fisch et al. 2005).
6.1 Faktor risiko untuk kanker payudara
Data epidemiologis dengan jelas mengungkapkan bahwa kejadian kanker payudara tidak hanya meningkat
dengan bertambahnya usia, tetapi tingkat peningkatan tertinggi terjadi selama tahun-tahun reproduksi
antara menarche dan menopause, menunjukkan bahwa paparan payudara terhadap progesteron dan
estrogen pada khususnya, merupakan faktor etiologi utama. penyakit ini (ditinjau dalam Bernstein 2002,
ditinjau dalam Clamp et al. 2003). Menopause buatan (histerektomi dan ooforektomi bilateral) sebelum
usia 40, menarche lambat dan menopause dini secara efektif meminimalkan paparan epitel susu untuk
steroid ovarium dan dengan demikian risiko kanker payudara (Feinleib 1968, Trichopoulos et al. 1972,
ditinjau dalam Anderson 2002, Ulasan dalam Clamp et al. 2003). Hipotesis yang berlaku yang mendasari
temuan ini adalah bahwa semakin besar jumlah kali bahwa epitel payudara mengalami proliferasi siklikal
antara menarche dan menopause, semakin besar kemungkinan inisiasi dan promosi kanker dan semakin
besar risiko kanker payudara (ditinjau dalam Clarke et al. 2004). Usia ≥30 tahun pada kelahiran pertama,
nulliparitas dan kurangnya atau durasi menyusui yang pendek juga telah terbukti meningkatkan risiko
kanker (ditinjau dalam Anderson 2002, Collaborative Group on Hormonal Factors dalam Breast Cancer
2002, ditinjau di Bernstein 2002, ditinjau dalam Clamp et al. 2003). Peningkatan risiko kanker payudara
pada wanita pascamenopause yang obesitas dapat dikaitkan dengan kadar estrogen sirkulasi yang lebih
tinggi pada wanita ini karena dua alasan. Pertama, jaringan adiposa mampu mengubah prekursor androgen
androstenedione menjadi estrone dan kedua, kegemukan sangat terkait dengan produksi SHBG yang lebih
rendah yang mengarah ke peningkatan kadar estrogen bebas aktif yang non-SHBG (ditinjau dalam
Bernstein 2002). Namun, analisis pada kadar hormon yang bersirkulasi dan risiko kanker otak telah
menunjukkan hasil yang tidak konsisten. Meskipun kadar estrogen yang bersirkulasi lebih tinggi memang
terbukti berhubungan dengan peningkatan risiko kanker payudara (Modugno et al. 2005), ada juga
penelitian di mana kadar serum estrone atau estradiol tidak terkait dengan peningkatan risiko (Kaaks et al.
2005) . Selanjutnya, ketika tingkat konsentrasi serum steroid seks telah diukur di antara wanita
premenopause, peningkatan kadar androgen dikaitkan dengan peningkatan risiko kanker payudara dan
peningkatan kadar progesteron dikaitkan dengan penurunan risiko (Kaaks et al. 2005). Baik in situ dan
tingkat kanker payudara invasif bervariasi menurut kelompok etnis: wanita kulit putih non-Hispanik di
Amerika Serikat memiliki tingkat tertinggi, sedangkan mereka lebih rendah untuk wanita kulit putih Asia,
hitam dan Hispanik (ditinjau dalam Bernstein 2002). Alasan untuk perbedaan ini dapat, setidaknya
sebagian, menjadi variasi baik dalam ukuran keluarga dan dalam durasi menyusui (Kelompok Kolaborasi
pada Faktor Hormonal dalam Kanker Payudara 2002). Peningkatan kadar estrogen plasma baik sebelum
dan sesudah menopause telah dilaporkan pada pasien kanker payudara pascamenopause ketika
dibandingkan dengan individu yang sehat dan payudara padat mamografi berhubungan dengan kejadian
kanker yang lebih tinggi (ditinjau dalam Bernstein 2002, ditinjau dalam Clamp et al. 2002, ditinjau ulang).
dalam Clamp et al. 2003). Peningkatan kepadatan mineral tulang telah terbukti secara signifikan terkait
dengan peningkatan risiko dan sebaliknya, wanita dengan fraktur osteoporosis telah terbukti memiliki
risiko rendah kanker payudara (Ulasan dalam Clamp et al. 2002, ditinjau dalam Clamp et al. 2003 ).
Akhirnya, fisik yang berat
aktivitas dapat menunda menarche dan bahkan aktivitas fisik yang sedang selama masa remaja dapat
menyebabkan siklus menstruasi anovulatori, keduanya mengurangi kumulatif (yaitu waktu hidup) paparan
hormon steroid dan dengan demikian risiko kanker payudara. Hasil studi mengenai risiko kanker payudara
yang terkait dengan penggunaan kontrasepsi oral, terapi penggantian hormon pascamenopause (yang akan
dibahas kemudian), kadar androgen serum atau kadar SHBG yang beredar, tidak konsisten (ditinjau dalam
Bernstein 2002).
6.2 reseptor hormon steroid pada kanker payudara
Studi histologi telah menunjukkan bahwa sebagian besar kanker payudara tampaknya berasal dari unit
duktus lobular terminal (ditinjau dalam Anderson 2002), yang merupakan unit anatomi dan fungsional
utama dari payudara manusia. Selain itu, sebagian besar tumor payudara telah terbukti mengekspresikan
reseptor untuk estrogen dan progesteron, yang lebih menekankan pentingnya hormon-hormon ini dalam
perkembangan penyakit ini. Peningkatan ekspresi ER per per se adalah faktor risiko untuk kanker payudara
(Ulasan dalam Anderson 2002, ditinjau dalam Clarke et al. 2004). Fenomena ini sudah terlihat pada tahap
awal tumorigenesis dan ekspresi meningkat lebih jauh dengan meningkatnya atypia (Ulasan dalam
Anderson 2002, ditinjau dalam Clarke et al. 2004). Berbeda dengan ER, tingkat ER menurun dalam
transisi dari jaringan normal ke ganas (Ulasan dalam Anderson 2002, ditinjau dalam Clarke et al. 2004).
Kedua pengamatan ini konsisten dengan gagasan bahwa ER secara negatif memodulasi efek ER
(ditinjau dalam Anderson 2002). Pada kelenjar susu normal, disosiasi antara sintesis reseptor hormon
steroid dan proliferasi sel ada, yang berarti bahwa sel ER dan sel PR-positif sering ditemukan berdekatan
dengan sel yang berproliferasi (ditinjau dalam Ismail et al. 2003, ditinjau dalam Clarke et al. 2004).
Biasanya, sel-sel positif reseptor ini menstimulasi proliferasi oleh sekresi parakrin faktor pertumbuhan
sebagai respon terhadap hormon, tetapi pemisahan ini terganggu pada sel tumor dan dapat menghasilkan
baik pada loop faktor pertumbuhan autokrin atau estrogen yang bekerja melalui ER yang secara langsung
mendorong masuk ke dalam siklus sel dan pertumbuhan akhirnya tidak terkendali (ditinjau dalam Clarke
et al. 2004). Rasio PRA dan PRB telah dilaporkan berubah selama perkembangan dari payudara normal
ke jaringan ganas (Ulasan dalam Anderson 2002). Rasio diubah sedemikian rupa sehingga pada payudara
normal, PRA dan PRB disintesis dalam jumlah yang sama, sementara PRA mendominasi pada hiperplasia
duktus atipikal, karsinoma duktal in situ (DCIS) dan pada tumor invasif (ditinjau dalam Clarke et al. 2004).
Tikus PRKO yang diterapi karsinogen menunjukkan penurunan yang signifikan dalam insiden tumor
mamaria dibandingkan dengan tikus WT (Lydon et al. 1999, ditinjau dalam Ismail et al. 2003, Madinah et
al. 2003). Mendasari insiden yang lebih rendah adalah penurunan yang signifikan dalam indeks proliferasi
epitel (Lydon et al. 1999, ditinjau dalam Ismail et al. 2003). Dengan demikian, hasil ini menyiratkan bahwa
peningkatan jalur proliferasi PR-dimediasi serta perubahan rasio isoform PR adalah penting dalam
tumorigenesis, setidaknya dalam kelenjar susu hewan pengerat.
6.3 Terapi penggantian hormon dan risiko kanker payudara
Terapi penggantian hormon pascamenopause (HRT) sangat mengurangi gejala menopause seperti
berkeringat, hot flushes dan atrofi vagina. Selanjutnya, penggunaan estrogen (baik dengan atau tanpa
progestin) mempertahankan massa tulang dan mengurangi risiko patah tulang (The Writing Group untuk
PEPI 1996, Torgerson dan Bell-Syer 2001a, Torgerson dan Bell-Syer 2001b, Rossouw et al. 2002 ).
Awalnya, hanya estrogen yang digunakan, tetapi ketika terbukti menyebabkan peningkatan yang
substansial dalam risiko kanker endometrium (ditinjau dalam Grady dkk. 1995, Pike dan Ross 2000),
progestin ditambahkan untuk mencoba menghilangkan risiko ini. Pada awalnya, progestin ditambahkan
secara berurutan, tetapi untuk menghindari perdarahan teratur dan efek samping negatif lainnya dan untuk
lebih melindungi mereka yang berisiko terhadap perkembangan karsinoma endometrium, rejimen terapi
penggantian estrogen-progestin kombinasi terus menerus dikembangkan.
PROLIFERASI KANKER PAYUDARA
Untuk mempelajari efek perawatan hormon yang berbeda, sel-sel itu disepuh pada pelat 96-well dan
dibiarkan menempel selama 48 jam sebelum memulai perawatan yang berbeda. Untuk menghilangkan efek
hormonal yang tersisa pada hasil, sel-sel ditumbuhkan tanpa hormon satu bagian ditambah 2 hari sebelum
onset perawatan.
4.1 Pertumbuhan sel basal Sel MCF-7 asli, sel LE dan sel yang tahan MPA berkembang biak dengan buruk
di hadapan kendaraan saja. Seperti yang diharapkan, sel-sel yang tahan estrogen dan independen tahan
terhadap toremifen tumbuh sangat cepat di hadapan kendaraan. Namun, ketika proliferasi sel-sel estrogen-
independen dibandingkan dengan proliferasi sel resisten yang sedikit berkurang, perbedaan yang signifikan
diamati (p <0,001).
4.2 Pengaruh estrogen Sel MCF-7 asli, sel LE dan sel yang tahan MPA berkembang biak dengan sangat
cepat dengan adanya estradiol bila dibandingkan dengan proliferasi sederhana di hadapan kendaraan saja.
Tidak ada perbedaan antara proliferasi sel asli MCF-7 dan sel LE dengan adanya estrogen (p = 0,998),
tetapi respon estrogenik secara signifikan menurun pada sel yang tahan MPA, jika dibandingkan dengan
MCF-7 asli dan LE sel (p <0,001). 1 nM E2 juga menghasilkan peningkatan yang signifikan dalam tingkat
proliferasi sel-sel yang tahan terhadap toremifen dan estrogen-independen (p <0,001), menunjukkan bahwa
mereka masih responsif terhadap estrogen.
4.3 Efek progestin Efek progestin terhadap pertumbuhan sel dipelajari di sel MCF-7, LE, dan MPA-
resistant asli. 1-100 nM MPA menghambat pertumbuhan sel MCF-7 asli dengan cara yang bergantung
pada dosis di hadapan estradiol dan penghilangan estradiol mengakibatkan penurunan pertumbuhan sel
secara signifikan (p <0,001). Sebaliknya, sel-sel yang tahan MPA berkembang biak dengan sangat cepat
di hadapan MPA terlepas dari konsentrasinya. Anehnya, tidak ada penghambatan progestin pada proliferasi
sel dalam sel LE, tetapi sebaliknya, pertumbuhan mereka menyerupai pertumbuhan sel-sel yang tahan
MPA. Dengan demikian, apakah resistensi progestin pada sel yang tahan MPA adalah karena pengobatan
MPA atau karena budaya jangka panjang sel-sel ini tetap tidak terselesaikan. Penghapusan estradiol
menghasilkan hambatan pertumbuhan yang signifikan di kedua sel MPA-resisten dan LE (p <0,001)

4.4 Pengaruh antiestrogen Akhirnya, efek antiestrogen pada proliferasi sel asli MCF-7, sel-sel yang tahan
terhadap-toremifen dan estrogen-independen dipelajari. Tingkat proliferasi sel-sel estrogen-independen
secara signifikan terhambat di hadapan 1 μM toremifene bila dibandingkan dengan kendaraan (p <0,001),
sedangkan ada peningkatan proliferasi sel antiestrogen-resistant cells (p <0,001). Penghambatan
pertumbuhan dalam sel-sel EI tergantung dosis, tetapi sel TR tumbuh sangat cepat dan sel MCF-7 asli
sangat sederhana di hadapan konsentrasi toremifene mulai dari 0,1 hingga 2 μM. Menariknya,
menggabungkan 1 nM estradiol dengan toremifene benar-benar membatalkan efek penghambatan
toremifene dalam sel-sel bebas estrogen (p <0,001) dan pertumbuhan bahkan dirangsang bila dibandingkan
dengan estradiol saja (p <0,001). Estrogen plus toremifene lebih meningkatkan tingkat proliferasi sel-sel
resisten antiestrogen (p <0,001), tetapi efek yang lebih lemah pada proliferasi sel dapat dilihat pada sel
MCF-7 asli (p = 0,01). 5 EKSPRESI DAN PERATURAN HORMONAL OF STEROID HORMONE
RECEPTOR (III) Ekspresi mRNA basal GR, AR, PR, ER dan ER dalam sel MCF-7 asli dan dalam
empat sub-garis bawah dipelajari oleh RPA. Cyclin Ekspresi sebagai penanda sel yang berkembang biak
juga dipelajari. Sel-sel dirawat dengan kendaraan selama 72 jam, setelah RNA diekstraksi. Kelima lini sel
menunjukkan GR, AR, PR, ER, ER dan cyclin A transkrip. Ekspresi PR 5,6 kali lipat lebih rendah pada
sel-sel resisten antiestrogen dan 1,9 kali lipat lebih tinggi pada sel-sel bebas estrogen (p = 0,029 pada
keduanya), tetapi tidak ada perubahan signifikan dalam ekspresi PR pada sel MR atau LE, jika
dibandingkan dengan yang asli. Sel MCF-7. Perlu dicatat bahwa perbedaan ekspresi PR antara sel TR dan
sel kontrol mereka (yaitu sel EI) adalah 8,2 kali lipat. AR dan ER  ekspresi diturunkan di sel MR (1.9
dan 1.6 kali lipat, masing-masing; p = 0,029 di keduanya). Ekspresi AR juga diturunkan 1,6 kali lipat
dalam sel EI bila dibandingkan dengan sel MCF-7 asli. Ekspresi Cyclin A terendah pada sel LE dan
tertinggi pada sel-sel anti-estrogen dan EI (1,8 kali lipat lebih tinggi daripada sel MCF-7 asli, p = 0,029).
Tidak ada perubahan signifikan dalam ekspresi basal GR dan ER. Selanjutnya, regulasi hormon reseptor
hormon steroid dan siklin A diperiksa. Sel-sel diobati dengan 1 nM estradiol atau 1 µM toremifene atau 1
nM estradiol dalam kombinasi dengan 0,1 μM MPA selama 72 jam. 1 nM E2 diinduksi 7,4-25,8-up up-
regulasi PR dan 1,7-5,5 kali lipat ER up-regulasi di semua lima baris sel. Ini juga menginduksi
peningkatan 1,6- hingga 3,5 kali lipat ekspresi siklin A pada sel asli, MR dan LE, tetapi tidak memiliki
efek pada sel-sel yang tahan terhadap toremifen dan EI. ER, GR dan AR tidak naik atau diatur oleh
estradiol. Perlakuan MPA menghasilkan peningkatan yang signifikan (2,6 hingga 4,2 kali lipat) dalam
ekspresi PR di MR, LE dan sel MCF-7 asli. Selain itu, ekspresi ER meningkat 1,7 kali lipat dalam sel
MCF-7 asli. Hanya sel MCF-7 asli yang merespon MPA dengan 2.2-fold down-regulation dari AR dan
cyclin A diregulasi oleh MPA hanya pada sel MR. Perlu dicatat bahwa meskipun toremifene menstimulasi
proliferasi sel-sel resisten antiestrogen, tidak mengatur transkripsi reseptor hormon steroid apa pun, bahkan
gen target estrogen yang diamati PR atau ER, menunjukkan bahwa toremifene tidak memiliki efek
agonistik. di jalur sel ini.