METODO DE MICHAELIS MENTEN

Introducción
Los estudios sistemáticos del efecto de la concentración inicial del sustrato sobre
la actividad enzimática comenzaron a realizarse a finales del siglo XIX. Ya en
1882 se introdujo el concepto del complejo enzima-sustrato como intermediario
del proceso de catálisis enzimática. En 1913, Leonor Michaelis (foto de la
izquierda) y Maud Menten (foto de la derecha) desarrollaron esta teoría y
propusieron una ecuación de velocidad que explica el comportamiento cinético
de los enzimas.

Explicación de la ecuación
Para explicar la relación observada entre la velocidad inicial (v0) y la
concentración inicial de sustrato ([S]0) Michaelis y Menten propusieron que las
reacciones catalizadas enzimáticamente ocurren en dos etapas: En la primera
etapa se forma el complejo enzima-sustrato y en la segunda, el complejo enzima-
sustrato da lugar a la formación del producto, liberando el enzima libre:

En este esquema, k1, k2 y k3 son las constantes cinéticas individuales de cada

proceso y también reciben el nombre de constantes microscópicas de
velocidad. Según esto, podemos afirmar que:
 v1 = k1 [E] [S]
 v2 = k2 [ES]
 v3 = k3 [ES]
Se puede distinguir entre enzima libre (E) y enzima unido al sustrato (ES), de
forma que la concentración total de enzima, [ET], (que es constante a lo largo de
la reacción) es:
[ET] = [E] + [ES]
Como [E] = [ET] - [ES], resulta que: v1= k1[S] [ET] - k1 [S] [ES]
Este modelo cinético adopta la hipótesis del estado estacionario, según la cual
la concentración del complejo enzima-sustrato es pequeña y constante a lo largo
de la reacción (Figura de la derecha). Por tanto, la velocidad de formación del
complejo enzima-sustrato (v1) es igual a la de su disociación (v2+ v3):
v1 = v2 + v3

Además, como [ES] es constante, la velocidad de formación de los productos es

constante:
v = v3 = k3 [ES] = constante.
Como v1=v2+v3, podemos decir que:
k1[S] [ET] - k1 [S] [ES] = k2 [ES] + k3 [ES]

en donde la expresión (k2+k3)/k1 se ha sustituido por KM, o constante de

Michaelis-Menten. Este enlace nos aporta una explicación sobre las razones
que hacen de la KM un parámetro cinético importante.

Por lo tanto, en el estado estacionario, la velocidad de formación del producto

es:
Para cualquier reacción enzimática, [ET], k3 y KM son constantes. Vamos a
considerar dos casos extremos:
 A concentraciones de sustrato pequeñas ([S] << KM) v = (k3 [ET]/KM)
[S]. Como los términos entre paréntesis son constantes, pueden englobarse en
una nueva constante, kobs, de forma que la expresión queda reducida a: v =
kobs [S], con lo cual la reacción es un proceso cinético de primer orden.
 A concentraciones de sustrato elevadas ([S] >> KM), v = k3 [ET]. La
velocidad de reacción es independiente de la concentración del sustrato, y por
tanto, la reacción es un proceso cinético de orden cero. Además, tanto k3 como
[ET] son constantes, y nos permite definir un nuevo parámetro, la velocidad
máxima de la reacción (Vmax): Vmax = k3 [ET], que es la velocidad que se
alcanzaría cuando todo el enzima disponible se encuantra unido al sustrato.
Si introducimos el parámetro Vmax en la ecuación general de la velocidad, (la
fórmula recuadrada anteriormente), obtenemos la expresión más conocida de
la ecuación de Michaelis-Menten:

Hay enzimas que no obedecen la ecuación de Michaelis-Menten. Se dice que su

cinética no es Michaeliana. Esto ocurre con losenzimas alostéricos, cuya gráfica
v frente a [S] no es una hipérbola, sino una sigmoidea. En la cinética sigmoidea,
pequeñas variaciones en la [S] en una zona crítica (cercana a la KM) se traduce
en grandes variaciones en la velocidad de reacción.
MODELO DE MICHAELIS-MENTEN.
Ecuación de Michaelis-Menten.

Inhibición en las reacciones enzimáticas.

La inhibición enzimática es importante por varias razones:

• Sirve como un mecanismo de control fundamental en los sistemas biológico

permitiendo la regulación de los caminos metabólicos.
• Muchos medicamentos actúan inhibiendo enzimas específicas en el cerebro
o en los tejidos corporales.
• La comprensión del mecanismo de inhibición enzimática es, por tanto,
esencial. Los propios inhibidores se usan frecuentemente como
herramientas para el estudio del mecanismo de las propias enzimas.

Básicamente, hay dos tipos de inhibidor:

• Irreversible: se enlaza permanentemente a la enzima con lo que la inhibición

es completa. Los inhibidores reversibles se unen covalentemente a la
enzima con lo cual resultan muy difíciles de eliminar
• Reversible: se enlaza a la enzima pero no permanentemente con lo que la
inhibición es transitoria. Los inhibidores reversibles se pueden eliminar
normalmente mediante diálisis o cambios en el pH o en la disolución
tampón. Hay tres formas principales de inhibición reversible:
a. competitiva.
b. no competitiva.
c. Anticompetitiva.
Inhibición competitiva.

Un inhibidor competitivo normalmente es similar a la enzima en tamaño y forma

con lo que compite por la enzima con el sustrato al unirse a la enzima por el
mismo centro activo.
La velocidad de reacción se reduce porque baja la proporción de moléculas
unidas al substrato.
El esquema general de la inhibición es:
• Sin productos EI I + E + S ES E + Productos
• Cuanto más inhibidor hay presente, más complejo EI se forma y menos
producto se forma.

Un ejemplo clásico de este tipo de inhibición es la del malonato sobre la succínico

deshidrogenasa. Muchas veces el propio producto de la reacción actúa como
inhibidor competitivo ya que es químicamente parecido a substrato y así se
produce un típico mecanismo de feedback en el que el propio producto de la
reacción regula la acción de la enzima.
El nivel de inhibición real que causa un inhibidor competitivo depende las
concentraciones relativas de inhibidor [I] y de substrato [S]. Ambas sustancias
compiten por la enzima ya bajas concentraciones de I, la inhibición puede
vencerse
añadiendo una gran cantidad de S con lo que aumenta la cantidad de ES sobre
EI, ya que es necesario añadir más sustrato para vencer la inhibición, Km será
mayor.
• Matemáticamente la ecuación para una cinética Michaelis–Menten con
inhibición competitiva es:
Inhibición no competitiva.

En este tipo de inhibición tanto el sustrato como el inhibidor se enlazan a la

enzima pero en sitios activos diferentes. El enlace de I ejerce un efecto sobre el
centro activo probablemente afectando a la estructura de la enzima que ya no
funciona tan eficientemente. En consecuencia Vm se altera pero no se altera Km.
• La expresión matemática para el mecanismo Michaelis-Menten para este
tipo de inhibición es:

Inhibición anticompetitiva.
En este tipo de inhibición el inhibidor se enlaza al centro activo pero solo después
de que el sustrato lo haya hecho y, por tanto, inhibidor y sustrato no compiten.
De
esta manera, aunque todo el sustrato esté saturando la enzima y toda la enzima
esté como complejo ES, el inhibidor puede enlazarse produciendo un complejo
inactivo ESI.
Como I solo se une a ES estimula la formación de ES y, por tanto, incrementa la
unión del sustrato a la enzima, disminuyendo Km. Sin embargo, el complejo ESI
no
conduce a productos y Vm disminuye.

Una vez vistas las ecuaciones del modelo de Michaelis-Menten de inhibición en

las reacciones enzimáticas, a continuación, describimos las ecuaciones del
modelo de Michaelis-Menten adaptadas para nuestro modelo.
Tasa de consumo de O2.
donde:
-1 -1
• VO2: tasa de consumo de O2 (μmol kg s ).

• Km: constante de Michaelis-Menten para el consumo de O2 y uno de los

parámetros del modelo.

-1 -1
• VmO2: tasa máxima de consumo de O2 (μmol kg s ).

• O2: concentración de O2 (%).

Tasa de producción de CO2.

donde:
-1 -1
• Vco2: tasa de producción de CO2 (μmol kg s ).

• CR: coeficiente respiratorio (Vco2 / VO2).

-1 -1
• Vm CO2: tasa máxima de producción de CO2 (μmol kg s ).

• Km O2 f : parámetro que describe la inhibición del metabolismo fermentativo

por parte del O2.

Modelos de inhibición.
Modelo de inhibición competitiva.

donde:
• Kmc CO2: constante de Michaelis-Menten para la inhibición competitiva de

CO2.
Modelo de inhibición acompetitiva.

donde:
• Kmu CO2: constante de Michaelis-Menten para la inhibición acompetitiva de

CO2.

Modelo de inhibición mixta.

donde:
• Kmu CO2: constante de Michaelis-Menten para la inhibición mixta de CO2.

CONSIDERACIONES DE EQUILIBRIO RAPIDO

(ECUACION DE HENRI –MICHAELIS MENTEN)
1.- REACCIONES INVOLUCRADAS : E+S ES E+P
2.- BALANCE DE MASA : [E] = [E]+[ES]
3.- VELOCIDAD LIMITANTE : V= Kcat [ES]
4.- DIVIDIR POR [E]t : v/[E] = Kcat [ES]/[E]+[ES]
CINETICA DE MICHAELIS MENTEN
APLICACIONES DEL MODELO DE MICHAELIS MENTEN
La constante Kcat /km es una medida de la eficiencia con una enzima convierte
un sustrato en producto.
El modelo se utiliza en una distintas situaciones bioquímicas como :
 Union a antígeno del anticuerpo.
 Hibridacion ADN-ADN.
 Interaccion proteína-proteina.
 Caracterizacion de una reacción , bioquímica genérica.

EJEMPLO 1.- FERMENTACION DEL ZUMO DE PIÑA

El presente trabajo de investigación tuvo como objetivo, aplicar el modelo cinético de Michaelis
– Menten en función al parámetro de CO2 en la fermentación de zumo de piña sobremadurada
y evaluar dos tipos de levaduras (Saccharomyces cerevisiae y levadura silvestre).
El proceso fermentativo se realizó aislando la levadura silvestre de las cascaras de piña (Ananas
comosus), de la variedad Golden y la levadura Saccharomyces cerevisiae se utilizó como
microorganismo productor para la fermentación de zumo de piña. Las variables que se
evaluaron a diferentes condiciones fueron el ° Brix, pH y Cantidad de levaduras. Con este
propósito, se utilizó el diseño central compuesto rotable (DCCR), a 95% de nivel de confianza.
Los parámetros pH (5) y °Brix (16.5) presentaron los mejores resultados con un tiempo de
fermentación de 72 horas. La levadura Saccharomyces cerevisiae mostro mayor concentración
de alcohol que fue del 1°GL.
Mientras la levadura silvestre obtuvo 0.1°GLde alcohol. Asimismo se ajustó la cinética de
fermentación de zumo de piña al modelo cinético de Michaelis – Menten, obteniéndose los
parámetros cinéticos del modelo: las constantes µmax 0.00297s-1 y Km 5.940g/L para
Saccharomyces cerevisiae y µmax 0.0468s-1 y Km 140.400g/L para la levadura silvestre.
Finalmente la levadura Saccharomyces cerevisiae evidencio mejores resultados en cuanto a la
velocidad máxima y porcentaje de alcohol.
EJMEPLO 2 .- Modelo matemático de la cinética y velocidad de hidratación del grano de maíz
blanco dentado durante la cocción alcalina.
a) Se hace una predicción significativa, que la velocidad inicial de hidratación de las muestras
para cuando t→0 es máxima con un valor de Vmax =h sat / B

b) El comportamiento de la hidratación del grano de maíz durante el proceso de nixtamalización

se puede modelar a través de la adecuación de parámetros de la ecuación de Michaelis-Menten.
Obteniendo valores del coeficiente de determinación muy altos, indicando que esta ecuación se
ajusta muy bien a los datos experimentales.

c) A través de la cinética de hidratación para diferente tiempo y temperatura, con varias

concentraciones de Ca(OH)2, se establece un modelo matemático que se ajuste para todo
tiempo, dentro de los limites para tiempos cortos cuando t→0 y para tiempos largos cuando
t→∞; así como también para la velocidad de hidratación. Se observa un efecto de sinergia entre
la temperatura de cocción y la concentración de Ca(OH)2 para los resultados de hidratación y
de la velocidad de hidratación del grano de maíz.
Bibliografía
· http://www.fisicanet.com.ar/quimica/bioquimica/ap05_enzimas.php
· http://www.ehu.es/biomoleculas/enzimas/enz3.htm#mm
· http://es.wikipedia.org/wiki/Cin%C3%A9tica_de_Michaelis-Menten
http://www.scielo.org.mx/pdf/sv/v20n4/v20n4a2.pdf

Modelo de Michaelis-Menten. Ecuación de Michaelis-Menten. España. En línea.

Noviembre 6 del 2018.
http://repositorio.upct.es/bitstream/handle/10317/282/ANEXO%20II.%20MODE
LO%20DE%20MICHAELIS-%20MENTEN.pdf?sequence=5&isAllowed=y