Anda di halaman 1dari 6

Honey is the natural sweet substance produced by honey bees from the

nectar of plants or from secretions of living parts of plants or excretions of plant

sucking insects on the living
parts of plants, which the bees collect, transform by combining with specific
substances of their own, deposit, dehydrate, store and leave in the honey comb to
ripen and mature (Council Directive 2001/110/EC). The majority of its components
are derived from the plants, some are added by the bees and others are due to the
maturation of the honey (Anklam, 1998). Honey possesses valuable nourishing,
healing and prophylactic properties, which result from its chemical composition. It
has potential therapeutic value in the treatment of heart disease, cancer, cataracts
and several inflammatory diseases (Noor, Sarfraz, Ali, & Shahid, 2014). Although
the major components of honey are sugar and water, it has a wide range of minor
constituents, such as phenolic compounds, which may be responsible for the
biological activities of honey (Jaganathan, & Mandal, 2009). Phenolic compounds, or
polyphenols, are one of the important groups of phytochemicals that occur in
plants, in which they are widely distributed. They are products of the secondary
metabolism of plants, being fundamental for their normal development and an
important key in their defence mechanism (Bravo, 1998). Flavonoids and phenolic
acids (both benzoic and cinnamic-acid derivatives) constitute the most important
classes of polyphenols and the most abundant on the diet, accounting for the 60
and 30 % of the total, respectively, with more than 8000 phenolic structures known.
Flavonoids can be subdivided into 13 classes, including flavonols, flavanones,
flavones, anthocyanidins and isoflavones (Robards, Prenzler, Trucker, Swatsitang, &
Glover, 1999). Phenolic compounds contribute to the organoleptic properties, such
as color, taste or flavour of honey. They also have antioxidant activities, together
with other honey substances (e.g. enzymes (glucose oxidase, catalase), vitamins
(ascorbic acid) or organic acids) (Gheldof, Wang, & Engeseth, 2002). Honey can
serve as a source of natural antioxidants and the variations in the antioxidant
activities of honey are due to the qualitative and quantitative nature of their
phenolic constituents (Aljadi, & Kamaruddin, 2004).
It has been found that phenolic compounds present in honey can come from
flower nectar,
pollen, propolis and/or beeswax (Gil, Ferreres, Ortiz, Subra, & Tomás-Barberán,
1995) and,
consequently, it can be reasonably expected that the composition of honey will be
depending on its origin. As a matter of fact, the content of phenolic compounds in
honey is
strongly affected by the floral source and geographical origin, as well as by the
characteristics of the site of collection. Therefore, the analysis of phenolic
compounds has
been regarded as a very promising technique for studying the floral and
geographical origins
of honeys. The extraction of phenolics from the honey matrix is the first step
involved in their
analysis, and different protocols, including both liquid-liquid and solid-phase
strategies, have been employed for the isolation of this fraction. The use of non-
polymeric resins has the advantage of eliminating numerous polar and ionic
substances such as sugars and acids. Amberlite XAD type resins are polymeric
which have proved to be the best materials for extracting honey flavonoids with
yields higher
than 80 %. Amongst them, we have chosen amberlite XAD-4 because it has a higher
area, and so a higher efficiency, compared with the XAD-2 type (Iurlina, Saiz, Fritz, &
Manrique, 2009). Identification and quantification of polyphenols in honey have
been carried
out using different techniques: colorometric reactions, thin-layer chromatography
(TLC), gas
chromatography (GC), high-performance liquid chromatography (HPLC) and
electrophoresis (CE), the three later coupled to diverse detection systems
(Pyrzynska, &
Biesaga, 2009 ; Mattonai, Parri, Querci, Degano, & Ribechini, 2016). Moreover,
was used to study the phenolic acids and flavonoids contained in several unifloral
samples; the developed method enabled the identification of 37 phenolic
compounds within
14 min (Gasic et al., 2014 ; Trautvetter, Koelling-Speer, & Speer, 2009).
Nevertheless, the method of choice for phenolic compounds analysis is reversed-
phase (RP)-HPLC coupled to
UV detector and, more recently, to mass spectrometry (MS). In RP-HPLC, the
phase consists of a non-polar octadecylsilane (C) bonded phase and the mobile
phase is a 18polar solvent, so that the more polar the phenolic compounds, the
earlier they will elute.
Numerous mobile phases have been employed but binary systems comprising an
component and a less polar organic solvent (acetonitrile or methanol) remain as the
common (Pyrzynska, & Biesaga, 2009). In general, gradient elution is usually used
recognition of the complexity of the phenolic profile of honey samples.
Numerous flavonoids (such as apigenin, chrysin, galangin, kaempferol, luteolin,
pinobanksin, quercetin) and phenolic acids (caffeic, gallic, cinnamic, p-coumaric and
protocatechuic acids) were identified in honey samples (Gasic et al., 2014). Caffeic
and p-
coumaric acids, chrysin, galangin, hesperetin, kaempferol, luteolin, pinocembrin and
quercetin were detected in lemon and orange Spanish honeys (Escriche, Kadar,
juan-Boras, &
Domenech, 2011). In addition, a total of 43 polyphenols were identified in serbian
honeys (Keckes, Gasic, Velickovic, Milojkovic-Opsenica, Natic, & Tesic, 2013).
Several studies have revealed that the analysis of flavonoids and other
phenolic compounds constitute a very promising technique to study the
geographical and floral origin of honey. Flavonoids originating from propolis are not
helpflul for the determination of the botanical
origin of the honey, as the levels of such flavonoids depend on the presence and
content of
propolis in the honey. Pinocembrin, pinobanksin, galangin and chrysin are
characteristic flavonoids of propolis and they are determined in european honey
samples (Gasic et al., 2014;
Tomas-Barberan et al., 2001, Yao, Datta, Tomas-Barberan, Ferreres, Martos, &
2003). Specific flavonoids have been described as markers of the botanical origin of
honeys (Soler, Gil, García-Viguera, & Tomás-Barberán, 1995) as is the case of the
flavanone hesperetin for citrus honey (Ferreres, García-Viguera, Tomás-Lorente, &
Tomás Barberán,2008), the flavone kaempferol for rosemary honey (Gil et al., 1995)
or the flavonol quercetin for sunflower honey (Tomás-Barberán, Martos, Ferreres,
Radovic, & Anklam, 2001).
Additionally, some phenolic acids have also been used as floral marker
substances (Andrade, Ferreres, & Amaral, 1997); some examples include ellagic
acid in heather honey (Ferreres, Andrade, Gil, & Tomás-Barberán, 1996),
homogentisic acid in strawberry honey (Cabras et al., 1999) and gallic in the
Eucalyptus one (Yao et al., 2004). Due to the significance of natural phenolic
compounds as natural antioxidants and to their use as markers in plant
chemotaxonomic studies, interest in their identification and quantification in honey
samples has significantly increased in recent years (Bertoncelj, Polak, Kropf,
Korošec, & Golob, 2011; Pyrzynska, & Biesaga, 2009; Martos, Ferreres, Yao, D’arcy,
Caffin, & Tomás-Barberán, 2000; Michalkiewicz, Biesaga, & Pyrzynska, 2008 ; Yao et
al., 2003).
Honey production in Algeria has a very long tradition. However, its
composition and bioactive properties have not been exhaustively analysed hitherto.
There are publications dealing with the study of the pollen analysis, physico-
chemical and antioxidant properties of Algerian honeys (Makhloufi, Kerkvliet,
D’albore, Choukri, & Samar, 2010; Makhloufi, Kerkvliet, & Schweitzer, 2015;
Mouhoubi-Tafinine, Ouchemoukh, & Tamandjari, 2016; Ouchemoukh, Louaileche, &
Schweitzer, 2007; Ouchemoukh, Schweitzer, Bachir Bey, Djoudad-Kadji, &
Louaileche, 2010). According to our knowledge, this is the first research of phenolic
profiles in Algerian honeys. The major purpose of this study was the identification of
the phenolic compounds contained in honey samples by means of RP-HPLC-ESI-TOF-
Madu adalah zat manis alami yang dihasilkan oleh lebah madu dari nektar tanaman atau
dari sekresi bagian hidup tanaman atau ekskresi serangga penghisap tanaman pada makhluk
bagian-bagian tanaman, yang dikumpulkan lebah, bertransformasi dengan menggabungkan
dengan zat-zat tertentu dari mereka sendiri, menyimpan, mengeringkan, menyimpan dan
meninggalkan dalam sisir madu untuk matang dan matang (Council Directive 2001/110 / EC).
Mayoritas komponennya berasal dari tanaman, beberapa ditambahkan oleh lebah dan yang
lainnya adalah karena pematangan madu (Anklam, 1998). Madu memiliki sifat bergizi,
penyembuhan dan profilaksis yang berharga, yang dihasilkan dari komposisi kimianya. Ini
memiliki nilai terapeutik potensial dalam pengobatan penyakit jantung, kanker, katarak dan
beberapa penyakit radang (Noor, Sarfraz, Ali, & Shahid, 2014). Meskipun komponen utama
madu adalah gula dan air, ia memiliki berbagai macam konstituen minor, seperti senyawa
fenolik, yang mungkin bertanggung jawab untuk aktivitas biologis madu (Jaganathan, & Mandal,
2009). Senyawa fenolik, atau polifenol, adalah salah satu kelompok penting phytochemical yang
terjadi pada tumbuhan, di mana mereka didistribusikan secara luas. Mereka adalah produk dari
metabolisme sekunder tanaman, menjadi dasar bagi perkembangan normal mereka dan kunci
penting dalam mekanisme pertahanan mereka (Bravo, 1998). Flavonoid dan asam fenolik (baik
turunan benzoat dan sinamatik-asam) merupakan golongan polifenol yang paling penting dan
paling banyak pada makanan, menyumbang 60 dan 30% dari total, masing-masing, dengan lebih
dari 8000 struktur fenolik yang diketahui. Flavonoid dapat dibagi menjadi 13 kelas, termasuk
flavonol, flavanones, flavones, anthocyanidins dan isoflavones (Robards, Prenzler, Trucker,
Swatsitang, & Glover, 1999). Senyawa fenolik berkontribusi pada sifat organoleptik, seperti
warna, rasa atau rasa madu. Mereka juga memiliki aktivitas antioksidan, bersama dengan zat
madu lainnya (misalnya enzim (glukosa oksidase, katalase), vitamin (asam askorbat) atau asam
organik) (Gheldof, Wang, & Engeseth, 2002). Madu dapat berfungsi sebagai sumber antioksidan
alami dan variasi dalam aktivitas antioksidan madu adalah karena sifat kualitatif dan kuantitatif
dari konstituen fenolik mereka (Aljadi, & Kamaruddin, 2004).
Telah ditemukan bahwa senyawa fenolik yang ada dalam madu dapat berasal dari nektar
bunga, serbuk sari, propolis dan / atau lilin lebah (Gil, Ferreres, Ortiz, Subra, & Tomás-Barberán,
1995) dan, akibatnya, dapat diharapkan bahwa komposisi madu akan berbeda tergantung pada
asalnya. Sebagai soal fakta, kandungan senyawa fenolik dalam madu adalah sangat dipengaruhi
oleh sumber bunga dan asal geografis, serta oleh iklim karakteristik situs koleksi. Oleh karena
itu, analisis senyawa fenolik memiliki telah dianggap sebagai teknik yang sangat menjanjikan
untuk mempelajari asal-usul bunga dan geografis dari madu. Ekstraksi fenolik dari matriks madu
adalah langkah pertama yang terlibat dalam mereka analisis, dan protokol yang berbeda,
termasuk ekstraksi cair-cair dan fase padat strategi, telah digunakan untuk isolasi fraksi ini.
Penggunaan non-ionik resin polimer memiliki keuntungan menghilangkan banyak polar dan ion
yang mengganggu zat seperti gula dan asam. Resin jenis Amberlite XAD adalah adsorben
polimer yang telah terbukti menjadi bahan terbaik untuk mengekstrak flavonoid madu dengan
hasil lebih tinggidari 80%. Di antara mereka, kami memilih amberlite XAD-4 karena memiliki
permukaan yang lebih tinggi daerah, dan efisiensi yang lebih tinggi, dibandingkan dengan jenis
XAD-2 (Iurlina, Saiz, Fritz, & Manrique, 2009). Identifikasi dan kuantifikasi polifenol dalam
madu telah dilakukan menggunakan teknik yang berbeda: reaksi colorometric, thin-layer
chromatography (TLC), gas kromatografi (GC), kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) dan
kapiler elektroforesis (CE), tiga kemudian digabungkan ke sistem deteksi beragam (Pyrzynska,
& Biesaga, 2009; Mattonai, Parri, Querci, Degano, & Ribechini, 2016). Apalagi UPLC-MS
digunakan untuk mempelajari asam fenolik dan flavonoid yang terkandung dalam beberapa
madu unifloral sampel; metode yang dikembangkan memungkinkan identifikasi 37 senyawa
fenolik dalam 14 menit (Gasic dkk., 2014; Trautvetter, Koelling-Speer, & Speer, 2009). Namun
demikian, metode pilihan untuk analisis senyawa fenolik dibalik-fase (RP) -HPLC digabungkan
ke Detektor UV dan, baru-baru ini, untuk spektrometri massa (MS). Dalam RP-HPLC, stasioner
fase terdiri dari fase terikat oktadesilsilane (C) non-polar dan fase gerak adalah pelarut 18polar,
sehingga semakin polar senyawa fenolik, semakin awal mereka akan mengelusi.Banyak fase
gerak telah digunakan tetapi sistem biner terdiri dari berair komponen dan pelarut organik kurang
polar (asetonitril atau metanol) tetap sebagai yang paling umum (Pyrzynska, & Biesaga, 2009).
Secara umum, elusi gradien biasanya digunakan dalam pengakuan kompleksitas profil fenolik
sampel madu.Banyak flavonoid (seperti apigenin, chrysin, galangin, kaempferol, luteolin,
pinocembrin, pinobanksin, quercetin) dan asam fenolik (caffeic, gallic, cinnamic, p-coumaric dan
asam protocatechuic) diidentifikasi dalam sampel madu (Gasic et al., 2014). Caffeic dan p- asam
coumaric, chrysin, galangin, hesperetin, kaempferol, luteolin, pinocembrin dan quercetin
terdeteksi dalam jeruk lemon dan jeruk Spanyol (Escriche, Kadar, juan-Boras, & Domenech,
2011). Selain itu, total 43 polifenol diidentifikasi di Serbia unifloral honeys (Keckes, Gasic,
Velickovic, Milojkovic-Opsenica, Natic, & Tesic, 2013).
Beberapa penelitian telah mengungkapkan bahwa analisis flavonoid dan senyawa fenolik
lainnya merupakan teknik yang sangat menjanjikan untuk mempelajari asal geografis dan bunga
dari madu. Flavonoid yang berasal dari propolis tidak membantu untuk penentuan botani asal
usul madu, karena kadar flavonoid tersebut bergantung pada keberadaan dan kandungan propolis
dalam madu. Pinocembrin, pinobanksin, galangin dan chrysin adalah flavonoid karakteristik
propolis dan mereka ditentukan dalam sampel madu Eropa (Gasic et al., 2014; Tomas-Barberan
dkk., 2001, Yao, Datta, Tomas-Barberan, Ferreres, Martos, & Singanusong, 2003). Flavonoid
spesifik telah digambarkan sebagai penanda asal botani unifloral honeys (Soler, Gil, García-
Viguera, & Tomás-Barberán, 1995) seperti halnya flavanone hesperetin untuk madu jeruk
(Ferreres, García-Viguera, Tomás-Lorente, & Tomás Barberán, 2008), kaempferol flavon untuk
rosemary honey (Gil et al., 1995) atau quercetin flavonol untuk madu bunga matahari (Tomás-
Barberán, Martos, Ferreres, Radovic, & Anklam, 2001).
Selain itu, beberapa asam fenolik juga telah digunakan sebagai zat penanda bunga
(Andrade, Ferreres, & Amaral, 1997); beberapa contoh termasuk asam ellagic dalam madu
heather (Ferreres, Andrade, Gil, & Tomás-Barberán, 1996), asam homogentisic dalam madu
stroberi (Cabras et al., 1999) dan gallic di Eucalyptus one (Yao et al., 2004) . Karena pentingnya
senyawa fenolik alami sebagai antioksidan alami dan untuk digunakan sebagai penanda dalam
studi chemotaxonomic tanaman, minat dalam identifikasi dan kuantifikasi dalam sampel madu
telah meningkat secara signifikan dalam beberapa tahun terakhir (Bertoncelj, Polak, Kropf,
Korošec, & Golob, 2011 ; Pyrzynska, & Biesaga, 2009; Martos, Ferreres, Yao, D'arcy, Caffin, &
Tomás-Barberán, 2000; Michalkiewicz, Biesaga, & Pyrzynska, 2008; Yao et al., 2003).
Produksi madu di Aljazair memiliki tradisi yang sangat panjang. Namun, komposisi dan
sifat bioaktifnya belum dianalisis secara mendalam sampai sekarang. Ada publikasi yang
berurusan dengan studi tentang analisis serbuk sari, sifat fisikokimia dan antioksidan dari madu
Aljazair (Makhloufi, Kerkvliet, D'albore, Choukri, & Samar, 2010; Makhloufi, Kerkvliet, &
Schweitzer, 2015; Mouhoubi-Tafinine, Ouchemoukh, & Tamandjari, 2016; Ouchemoukh,
Louaileche, & Schweitzer, 2007; Ouchemoukh, Schweitzer, Bachir Bey, Djoudad-Kadji, &
Louaileche, 2010). Menurut pengetahuan kami, ini adalah penelitian pertama profil fenolik
dalam madu Aljazair. Tujuan utama dari penelitian ini adalah identifikasi senyawa fenolik yang
terkandung dalam sampel madu dengan menggunakan RP-HPLC-ESI-TOF-MS.