TRABAJO PRÁCTICO

Taller de Criminalística

“ADN: Trabajo de laboratorio – Técnicas e

Instrumental”

Alférez Pablo Ramiro HEREDIA – OPM CRIEFOR

2018
 Portada

La presente obra trata sobre el trabajo de laboratorio en materia de ADN, orientado a la

resolución de causas judiciales mediante la identificación de víctimas y posibles victimarios.

En la misma se abordarán las técnicas aplicadas como también los instrumentos y tecnología

empleados en la obtención de perfiles genéticos, comparación y almacenamiento de los

mismos.

Introducción

La aplicación del análisis de ADN (ácido desoxirribonucleico) en investigaciones

judiciales ha adquirido vital importancia en los últimos 30 años. Esto se debe al progreso de

los métodos y tecnologías instrumentales que posibilitaron el perfeccionamiento de técnicas

de obtención, análisis y almacenamiento de la información genética, como así también su

gestión. En la actualidad, la utilización del análisis de ADN constituye un elemento de prueba

muy importante para la justicia en la resolución de causas de diversa naturaleza, sobre todo

en materia penal, en la cual se presentan escenarios violentos tales como agresiones,

homicidios y delitos contra la integridad sexual. El carácter incuestionable de esta técnica se

debe a la precisión de sus resultados.

Trabajo de Laboratorio y Técnicas Instrumentales

Finalizadas las tareas de recolección de indicios en la escena del crimen o sobre la victima,

los elementos son enviados al laboratorio para su análisis. Cuando el éste recibe una muestra

de ADN, debe acusar recibo de la misma y registrarla, de modo que se encuentre sujeta a un

seguimiento continuo. En el procedimiento operativo normalizado se deben contemplar las

cuestiones relativas a la seguridad para garantizar la verificación de la cadena de custodia a lo

largo de todo el proceso. Además, la acreditación del laboratorio debe basarse en las normas
ISO adecuadas en materia de análisis de ADN. Estas normas prestan gran atención a la

trazabilidad y a las cuestiones relativas a la integridad de la cadena de custodia lo que

contribuirá a la credibilidad del valor de la prueba.

Estudio de ADN

El análisis de ADN aplicado a la resolución de cuestiones judiciales, en el cual se buscan

obtener perfiles genéticos a partir de indicios, victimas o victimarios, obedece a una serie de

pasos bien detallados:

1. Identificación y extracción de material genético:

Consiste en un examen de los elementos de prueba recepcionados, utilizando productos

químicos y/o fuentes de luz para detectar la presencia de fluidos corporales, células epiteliales

y cuerpos pilosos, entre otros rastros biológicos que contengan material genético. Los fluidos

corporales como la sangre o el semen se pueden identificar presuntamente mediante técnicas

bioquímicas, microscópicas o inmunológicas. Por su parte, fragmentos de células epiteliales y

cabellos pueden detectarse mediante el empleo de lupas o microscopios.

El siguiente cuadro presenta una serie de ejemplos de indicios que pueden ser recolectados

en el lugar del hecho/escena del crimen, las fuentes de material genético que se pueden hallar

y su ubicación en el mismo.

Elemento de prueba Posible ubicación del Fuente de ADN

Marca de mordisco
Manta, almohada, sábana
ADN en el elemento de
prueba
Piel o ropa Saliva Células bucales
Superficie Sangre, caspa, pelo, saliva,
semen, sudor, orina y/o
flujo vaginal
 Botella, lata, vaso Laterales, embocadura Huellas dactilares, saliva
y/o sudor
Ropa sucia Superficie Sangre, caspa, pelo, saliva,
semen y/o sudor
Picaporte En el pomo o manilla Huellas dactilares, piel y/o
sudor
Gafas Fragmentos de nariz u Piel y/o sudor
oreja, lente
Pañuelo de papel, Superficie Sangre, secreciones
bastoncillo de algodón nasales o auriculares,
semen y/o sudor
Uñas Bajo la uña o sobre ella Sangre, carne y/o sudor
Gorro, bandana, máscara Interior Caspa, pelo y/o sudor
Sello de correos Lado adherido Saliva
Cinta o ligaduras Superficie interior/exterior Huellas dactilares, piel y/o
sudor
Bala extraída Superficie exterior Sangre y/o carne
Mondadientes Puntas Saliva
Cigarrillo usado Boquilla Saliva
Preservativo usado Superficie interior/exterior Heces, células rectales,
semen y/o flujo vaginal
Arma, por ejemplo, bate Mango, extremo Sangre, huellas dactilares,
de béisbol, cuchillo carne y/o sudor

Los ejemplos citados en el cuadro precedente no son de carácter excluyente sino que

deben tomarse como guía general, ya que en la escena del crimen se pueden encontrar

indicios de diversa naturaleza.

Las muestras de ADN extraídas de los elementos son aisladas, purificadas y tratadas

mediante técnicas específicas para el siguiente paso.

2. Amplificación del ADN extraído utilizando la reacción en cadena de la

polimerasa (PCR).

Ésta es una técnica de laboratorio común utilizada para hacer millones de copias de una

región particular de ADN (amplificación) la cual se puede secuenciar, visualizar

por electroforesis en gel o clonar en un plásmido para otros experimentos. En este caso, las

regiones de interés son los marcadores genéticos usados por científicos forenses para

relacionar el ADN de la escena del crimen con los sospechosos.

La PCR requiere de la participación de una enzima llamada Taq polimerasa para producir

nuevas cadenas de ADN a partir de las cadenas ya existentes que funcionarán como molde.

La razón por la cual se emplea esta enzima es por la resistencia a la temperatura que soporta

la bacteria de la cual se aisló ésta, la Thermus aquaticus.

Sin embargo, para que esta enzima pueda generar o ampliar ADN, es necesaria la

presencia de un cebador. Esto es una secuencia corta de nucleótidos (alrededor de 20) que

proporciona un punto de partida para la síntesis de ADN. En una reacción de PCR, la región

de ADN que será copiada o amplificada, se determina por los cebadores que el investigador

intente desarrollar.

En cada reacción de PCR se utilizan dos cebadores que están diseñados para flanquear la

región blanco (la región que debe ser copiada). Es decir, se agregan secuencias que harán que

se unan a cadenas opuestas del molde de ADN solo en los extremos de la región a copiar. Los

cebadores se unen al molde mediante complementariedad de bases.

Cuando los cebadores se unen al molde, la polimerasa los extiende y la región que se

encuentra entre ellos se copia.

Los pasos de la PCR

Los componentes necesarios para desarrollar una reacción de PCR son Taq polimerasa,

cebadores, ADN molde y nucleótidos (los bloques básicos del ADN). Los ingredientes se

colocan en un tubo, junto con los cofactores que necesite la enzima, y se someten a ciclos

repetidos de calentamiento y enfriamiento que permiten la síntesis del ADN. Este proceso se

lleva a cabo en un instrumento específico, llamado termociclador.

 Los pasos básicos consisten en:

Desnaturalización (96°C): la reacción se calienta lo suficiente para separar, o desnaturalizar,

las cadenas de ADN. Esto proporciona los moldes de cadena sencilla que servirán para el

siguiente paso.

Templado (55 - 65°C): la reacción se enfría para que los cebadores puedan unirse a sus

secuencias complementarias en el molde de ADN de cadena sencilla.

Extensión (72°C): la temperatura de la reacción se eleva para que la Taq polimerasa extienda

los cebadores y sintetice así nuevas cadenas de ADN.

 Este ciclo se repite 25 - 35 veces en una reacción de PCR típica, que generalmente

tarda entre 2 a 4 horas, según la longitud de la región de ADN que se copie. Si la reacción es

eficiente, puede producir miles de millones de copias a partir de una o unas cuantas copias de

la región blanco.
 La siguiente imagen muestra este patrón de crecimiento exponencial.

3. Visualización de resultados mediante Electroforesis en Gel

Los resultados de una reacción de PCR se visualizan mediante la técnica de electroforesis

en gel, la cual implica el paso de corriente eléctrica que impulsa fragmentos de ADN a través

de una matriz en gel. Dichos fragmentos de ADN, conforme su tamaño, se desplazarán a

distintas velocidades. Cuanto mayor sean más lento se deslizarán a través de los poros del

gel, por lo que transcurrido un tiempo determinado aquellos tramos de menor tamaño habrán

alcanzado mayor distancia que los de mayor dimensión.

Para conocer el tamaño de las cadenas, se emplea como referencia un estándar o marcador

de peso molecular, mediante el cual se comparan a simple vista los niveles que alcanzaron las

bandas.

Para que estas bandas sean visibles a simple vista, se agrega un compuesto de bromuro de

etidio, el cual se entrelaza con los fragmentos de ADN tiñéndolos.

A modo de resumen, podemos destacar que los aspectos más importantes de esta técnica son:

 La electroforesis en gel es una técnica utilizada para separar

fragmentos de ADN según su tamaño.
 Las muestras de ADN se cargan en pozos (ranuras) en un extremo
de un gel y se aplica una corriente eléctrica para arrastrarlas a través
del gel.
 Los fragmentos tienen carga negativa, por lo que se mueven hacia el
electrodo positivo. Puesto que todos los fragmentos de ADN tienen la
misma cantidad de carga por masa, los fragmentos pequeños
atraviesan el gel más rápido que los grandes.
 Cuando un gel se tiñe con un pigmento que se une al ADN (bromuro
de etidio), los fragmentos de ADN pueden verse como bandas, las
cuales representan un grupo de fragmentos de ADN del mismo
tamaño.

Composición del gel

Como su nombre lo indica, en la electroforesis en gel participa un gel: un bloque de

material similar a la gelatina, el cual se compone de un polisacárido llamado agarosa, que se

consigue como hojuelas secas pulverizadas. Cuando la agarosa se calienta en una solución

amortiguadora (agua mezclada con algunas sales) y se deja enfriar, se forma un gel sólido

ligeramente blando. A nivel molecular, el gel es una matriz de moléculas de agarosa que se

mantienen unidas por puentes de hidrógeno y que forman pequeños poros.

En un extremo, el gel tiene muescas en forma de ranuras llamadas pozos, que son donde se

colocarán las muestras de ADN:

Procedimiento de la Electroforesis

En primer lugar se coloca el gel en una en una cámara, la cual posee conectado en uno de

los extremos un electrodo positivo y el otro un electrodo negativo. Dicha cámara (donde se

encuentra el gel) es llenada con una solución amortiguadora (buffer) compuesta por sales que

contribuyen a la conductividad de corriente y también a la estabilidad de la temperatura.

Sobre el extremo del gel cercano al electrodo negativo, se encuentran cavidades llamadas

pozos. Hacia el otro extremo (lado positivo) migrarán los fragmentos de ADN.

El primer pozo se reserva para el marcador de peso molecular, es decir un estándar de

referencia que contiene fragmentos de ADN de longitudes conocidas, mientras que los

restantes se destinan a las muestras de ADN productos de la PCR.

Una vez dispuestos todos los elementos en su locación, se aplica energía eléctrica la cual

fluye a través del gel. A raíz de que los grupos fosfato que componen el esqueleto del ADN,

le otorgan a éste una carga negativa, las cadenas de ADN desplazarán a través de la matriz de

gel hacia el polo positivo.

 Otra forma de visualizar estos resultados en haciendo pasar los fragmentos de ADN a

través de un capilar que posee gel (electroforesis capilar en gel) hasta un punto en que se

encuentra el detector. Éste consiste en un emisor láser que incide sobre los fragmentos a

medida que van pasando, las ondas electromagnéticas reflejadas son captadas por el detector

y traducidas en datos datos numéricos y gráficos (electroferograma).

En el siguiente gráfico se observa el método de electroforesis capilar en gel.
 A continuación se observan dos gráficos de individuos diferentes en los cuales se

comparan sus perfiles genéticos, observándose la no correspondencia.

Una vez obtenidos los resultados de laboratorio, la información es traducida para

responder los interrogantes planteados.

 Conclusiones de los análisis de ADN: (ejemplos)

Exclusión: (ninguna coincidencia) El perfil de ADN de la persona conocida (muestra de

referencia procedente de la víctima, o muestra para la eliminación de sospechosos) no

coincide con el perfil de ADN generado a partir de las pruebas recogidas en el lugar del

delito.

Inclusión: (coincidencia) El perfil de ADN de las personas conocidas (muestras de referencia

procedentes de la víctima o del sospechoso) coincide con el perfil de ADN obtenido a partir

de las pruebas recogidas en el lugar del delito. Ambos perfiles concuerdan en que proceden

de la misma fuente.

La importancia o el grado de coincidencia se indican mediante un dato estadístico

denominado Probabilidad De Coincidencia Aleatoria (RMP). Por ejemplo, una RMP de “1

entre 6.000 millones de personas de origen caucásico” expresa la probabilidad o posibilidad

de hallar el mismo perfil de ADN en una persona no relacionada elegida al azar entre esa

población. Cuanto mayor (menor) sea el número correspondiente a la estimación de la

frecuencia, el perfil será menos común y por consiguiente los resultados serán más

significativos.

El presente trabajó desarrolló como tema el trabajo de laboratorio y las técnicas

instrumentales empleadas en el análisis de ADN aplicado a la investigación forense. Esto es,

emplear las tecnologías disponibles en la actualidad para contribuir a la resolución de causas

criminales mediante el tratamiento de material genético recolectado en la escena del crimen o

del cuerpo de la víctima y/o victimario. La normativa legal y técnica que regula el

funcionamiento y proceder de los laboratorios genéticos permite a la justicia contar con un

elemento de valor irreprochable al momento de ser presentado en un tribunal.

Bibliografía

 https://es.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dna-

sequencing-pcr-electrophoresis/v/the-polymerase-chain-reaction-pcr

 MANUAL DE INTERPOL SOBRE EL INTERCAMBIO Y LA UTILIZACIÓN

DE DATOS RELATIVOS AL ADN - RECOMENDACIONES DEL GRUPO DE

EXPERTOS EN ADN DE INTERPOL - SEGUNDA EDICIÓN 2009

(HandbookPublic2009ES.pdf)