GUÍA UNIDAD 3 “FACTORES MEDIOAMBIENTALES QUE AFECTAN EL

DESARROLLO DE LOS MICROORGANISMOS”

1. ¿Cuál es la definición de crecimiento microbiano?

Es el incremento ordenado de todos los componentes químicos de la célula (ADN, ARN, lípidos,
carbohidratos, nitrógeno, agua intracelular, etc.) y su posterior división. Es generalmente caracterizado
por el tiempo requerido para una población microbiana duplique su número o masa celular.

2. ¿Cómo se define la velocidad especifica de crecimiento (μ)?

Es la variación que se presenta en el número de células con respecto del tiempo

3. ¿Qué es el tiempo de generación promedio (tg) y como se calcula?

Es el tiempo que se tarda la célula para duplicarse y se calcula con la siguiente ecuación:

𝑙𝑛2
𝑡𝑔 =
𝜇

4. Defina que es la curva de crecimiento y cuáles son sus 4 fases.

La curva de crecimiento describe un ciclo completo de crecimiento y puede dividirse en distintas fases
llamadas:

 Fase lag o de latencia

 Fase exponencial
 Fase estacionaria
 Fase de muerte.

5. Defina al menos dos de las 4 fases (A elegir):

Fase de Latencia. - cuando se inocula una población microbiana en un medio fresco, por lo general
el crecimiento no comienza inmediatamente sino sólo tras un periodo de tiempo que constituye la
fase lag o fase de latencia, la cual puede ser breve o prolongada dependiendo de la historia del
cultivo y de las condiciones de crecimiento.
La fase de latencia tambien ocurre cuando se transfiere una población de un medio rico a otro medio
más pobre, por ejemplo, de un medio complejo a un medio definido.
En esta fase los m.o se están adaptando al medio de cultivo en esta fase las bacterias sintetizan las
enzimas para desdoblar los nutrientes, hay incremento en masa pero no hay división celular, esta
fase depende de la edad del inoculo, composición del medio y los factores que afectan el
crecimiento como pH, temperatura, nutrientes, disponibilidad de oxigeno y agua etc

Fase Exponencial. - la fase exponencial de crecimiento, es consecuencia de que cada célula se

divide para formar dos, cada una de las cuales va a formar otras dos, y así sucesivamente durante
 un periodo de tiempo que puede ser breve o prolongado en función de los recursos disponibles y de
otros factores. Es la fase más activa, y en la cual los microorganismos son mas sensibles al frio,
calor, compuestos químicos. Esta fase se caracteriza porque los m.o. están creciendo a una
velocidad constante con el tiempo. En ella se hacen los cálculos de tg y velocidad específica de
crec.

Fase Estacionaria. – para limitar el crecimiento de la población lo que generalmente sucede es que
1. Un nutriente esencial del medio de cultivo se agota y llega a ser un factor limitante del crecimiento
o 2. Se acumulan en el medio algunos productos de desecho hasta niveles inhibitorios que hacen
cesar el crecimiento exponencial. Frecuentemente ocurren ambas cosas y, al producirse esto, la
población alcanza la fase estacionaria.
En la fase estacionaria no hay aumento ni descenso neto en el número de células. Aunque no suele
haber crecimiento en la fase estacionaria, muchas funciones celulares continúan, incluyendo el
metabolismo energético y algunos procesos biosintéticos.

Fase de Muerte. – si continua la incubación después de que la población haya alcanzado la fase
estacionaria, las células pueden continuar vivas y metabólicamente activas, pero finalmente mueren.
Si ocurre esto último, se dice que la población está en fase de muerte. En algunos casos la muerte
se acompaña de una lisis celular real. En la mayoría de los casos la velocidad de muerte celular es
mucho más lenta que la de crecimiento exponencial.

6. Defina como se hace la cuantificación del crecimiento microbiano

El crecimiento de una población se mide estimando los cambios en el número de células, en la

cantidad de algún componente de las mismas, como proteínas, ácidos nucleicos o el peso seco de
las células.
El número total de células microbianas se puede obtener usando un microscopio para observar y
contar las células presentes en un cultivo o en una muestra natural. El método es simple pero los
resultados pueden ser poco seguros.

7. Clasifique los métodos directos e indirectos para el conteo del crecimiento microbiano

-Métodos directos:

1. Método de cuenta viable (dilución seriada).

2. Microscopio directo o Recuento Total.

3. Conteo electrónico de células (Contador de Coulter).

-Métodos indirectos:

1. Método óptico (turbidez).

2. Determinaciones de peso seco.

3. Determinaciones de proteínas (métodos Biuret, Brad Ford, Lowry).

 4. Determinaciones de nitrógeno.

5. Determinaciones de ADN y ARN.

6. Describa el método de Cuenta Viable

Una célula viable es aquella que es capaz de dividirse y originar descendencia, y en la

mayoría de las situaciones éste es el tipo de células que nos interesa. Por esta razón, la determinación
de viables a menudo se llama también recuento en placa o recuento de colonias. En este procedimiento
se supone que cada célula viable puede crecer y dividirse hasta formar una colonia.

Se puede hacer por el método de vertido en placa que consiste en pipetear un volumen conocido
(normalmente 0.1 a 1 mL) de cultivo en una placa Petri estéril sobre la que se añade el medio con agar
fundido y se mezcla todo bien con suaves movimientos de la placa sobre la superficie de la mesa antes
de dejar solidificar. Como la muestra se mezcla con el medio fundido, se pueden usar volúmenes de
inóculos mayores; sin embargo, con este método el organismo que se encuentra debe ser capaz de
resistir la temperatura del agar fundido (45-50 °C). aquí las colonias se forman por toda la placa y no
solamente por la superficie. Por consiguiente, la placa debe examinare cuidadosamente para tener la
seguridad de contar todas las colonias.

7. Describa el método óptico

La turbidez puede medirse con un espectrofotómetro, un instrumento que hace pasar la luz a través
de suspensiones celulares y detecta la cantidad de luz emergente no dispersada. El
espectrofotómetro emplea un prisma o red de difracción para generar luz incidente de longitud de
onda especifica. Las longitudes de onda más comúnmente usadas para medir la turbidez bacteriana
son 480 nm (azul), 540 nm (verde), 600 nm (naranja) y 660 nm (rojo).

8. ¿Qué es un sistema de cultivo continuo?

Un cultivo continuo es un sistema abierto. El recipiente del cultivo continuo mantiene un volumen
constante, al que se añade continuamente medio fresco a una velocidad constante y del que rebosa
continuamente medio usado con células a la misma velocidad. Una vez que se alcanza el equilibrio,
el volumen del quimiostato, el número de células en el sistema y el estado metabólico permanecen
constantes y se dice entonces que el sistema está en estado de equilibrio.

9. ¿Cuál es el equipo más utilizado para la realización de los sistemas de cultivo continuos?

El tipo más común de aparato utilizado para cultivo continuo es el quimiostato que puede controlar
tanto la velocidad de crecimiento como la densidad de población de un cultivo de modo
independiente y simultáneo. Para lograr este control son importantes dos factores:

1. La velocidad de dilución, que es la velocidad con que se bombea el medio fresco y se retira medio
gastado.
 2. La concentración de un nutriente limitante, tal como la fuente de carbono o de nitrógeno, que está
presente en el medio estéril que entra en el recipiente del quimiostato.

10. ¿Qué es un sistema de cultivo discontinuo?

El método de cultivo mas simple es el cultivo discontinuo en el que el microorganismo crece a partir
de una limitada cantidad de medio hasta que se agota un nutriente esencial o se acumulan
productos tóxicos hasta niveles que inhiben el crecimiento

11. ¿Qué es un sistema de cultivo discontinuo alimentado?

El término de cultivo discontinuo alimentado se utiliza para describir un cultivo discontinuo al que se le
añade continua o secuencialmente medio fresco sin la eliminación del cultivo crecido. Por lo tanto, el
volumen de un cultivo discontinuo alimentado aumenta con el tiempo.

Esta técnica se define como un cultivo en batch donde se alimenta continuamente medio nutritivo fresco
o alguno de sus componentes. Si el nutriente que se alimenta es el limitante del crecimiento, esta
técnica permite controlar la velocidad de crecimiento (m) del microorganismo.

12. Mencione los equipos que se emplean en la realización de cultivos continuos

Quimiostato: tanque de producción donde todas las propiedades químicas permanecen constantes.

Turbidostato: equipo eléctrico usado para regular el volumen del medio fresco a un cultivo bacteriano,
para que este mantenga una densidad constante.

Biorreactor: sistema que mantiene un ambiente biológicamente activo.

Fermentadores: es un tipo de biorreactor en el cual se realiza el proceso de fermentación.

13. De un breve explicación sobre el fundamento de los fermentadores

El sistema cuenta con un depósito de medio fresco estéril suministrando por acción de una bomba
peristáltica al recipiente de cultivo.

El recipiente de cultivo está equipado con un agitador y con una tapa de acero inoxidable con
entradas suficientes; la tapa de acero inoxidable tiene un dispositivo (sensor) de pH, un termopar y
un electrodo de oxigeno colocados en las diferentes entradas. Existen otras tres entradas, la primera
recibe la alimentación del depósito de medio fresco, la segunda contiene una válvula de muestreo y
la tercera es el sifón de rebosamiento.

Todas las señales del termopar, del electrodo de pH y de oxígeno, la señal del agitador, de la
alimentación y del sifón de rebosamiento llegan a un módulo (controlador) que mantiene al
fermentador en las condiciones que al controlador se le especificaron. El fermentador cuenta con
depósitos de ácido (HCl) y base (NaOH) por si el pH del medio de cultivo cambia, cuenta con un
regulador de temperatura que hace fluir agua en el revestimiento del fermentador ya se caliente o
fría para mantener una temperatura constante y por ultimo cuenta con un suministro de energía.

Por último el sistema cuenta con un tanque de producto donde se recibe una mezcla de medio de
cultivo, células muertas y vivas, así como los metabolitos de interés.

El cultivo continuo se caracteriza por tener constante: el volumen de medio de cultivo, la

concentración del sustrato, el pH, temperatura, concentración de oxígeno, densidad celular. Además
las células están en fase exponencial.

14. Clasifique los organismos según sus requerimientos de oxígeno y mencione cuál es su
función

Su función es ser el último aceptor de electrones

 Aerobios: aquellos microorganismos que requieren de la presencia de oxígeno (Pseudomonas

aeruginosa y hongos).
 Microaerófilos: aquellos microorganismos que crecen en presiones bajas de oxígeno
(Azotobacter y Rhizobium).
 Anaerobios: aquellos microorganismos que no pueden respirar oxígeno, por ejemplo:
Aerotolerantes: toleran el oxígeno en bajas concentraciones (Clostridium perfringens).
Estrictos: mueren en la mínima presencia de oxígeno (Clostridium botulinum y Clostridium
tetáni).
 Anaerobio facultativo: microorganismos que pueden crecer tanto en ausencia como en presencia
de oxígeno (E. coli y levaduras).

15. Clasifique los microrganismos según su temperatura

 Psicrófilos: microorganismos que pueden crecer a temperaturas bajas. Desde 0 a 20 °C.
Temperatura óptima= 15 °C. Ejemplos: Polaromonas y Flavobacterium
 Mesófilos: microorganismos que crecen a temperatura media. Desde 25 a 40 °C. Temperatura
óptima= 37 °C. Ejemplos: Esherichia coli y Haemophilus influenzae
 Termófilos: microorganismos que crecen a temperaturas altas. Desde 45 a 80 °C. Temperatura
óptima= 55 °C. Ejemplos: Thermus thermophilus y Thermus aquaticus
 Hipertermófilos: microorganismos que crecen a temperaturas extremas. Desde 95 a 100 °C.
Ejemplos: Pyrolobus fumarii y Pyrococcus abyssi

16. Mencione el rango de valores de pH que deben tener las bacterias, los hongos y las
levaduras para su crecimiento.

VALOR DE pH
GRUPO MICROBIANO MINIMO OPTIMO MAXIMO
BACTERIAS 4.0 6.8-7.2 8.0
HONGOS 2.0 4.5 11
LEVADURAS 1.5-2.0 3.5-4.0 11
17. ¿Cómo se clasifican los microorganismos según el rango de pH necesario para su
crecimiento?
 Acidófilos: son organismos que crecen mejor a pH bajo. El grupo de los hongos suele ser
más acidófilo que las bacterias. Dentro de este grupo se encuentran varias Archeas
como la Sulfolobus, Thermoplasma y Ferroplasma, y el procariota más acidófilo,
Picrophilus oshimae.
 Alcalófilas: los organismos que crecen a pH óptimos de 9 o más. Se encuentran por lo
general en hábitats muy básicos, como los lagos sódicos o suelos ricos en carbonatos.
Bacterias como el Bacillus firmus pertenecen a este grupo.
 Neutrófilos: Aquellos microorganismos cuyo pH óptimo para su crecimiento está entre 6 y
8.
18. Mencione los efectos de los ácidos y los álcalis sobre los microorganismos

1) Afectan el sistema enzimático y su metabolismo.

2) Se afecta la permeabilidad de la membrana celular:
 A alta concentración de iones protonados se hace impermeable al paso de los cationes
esenciales.
 En altas concentraciones de iones hidroxilo la membrana se hace impermeable al paso
de los aniones esenciales.

3) Se puede presentar una interferencia con la aceptación de iones metálicos esenciales

para el microorganismo, por ejemplo: en pH acido los iones magnesio y hierro precipitan
formando complejos por lo que no están disponibles para el microorganismo.
4) Al incrementar el pH en la célula, ósea en pH básico, hay una interferencia en la síntesis
de proteínas debido a que el RNA de transferasa se inhibe.

19. ¿Qué es la actividad de agua (aw) y cuales son los valores de Aw que requieren los
microorganismos para su crecimiento?

Es el cociente entre la presión de vapor del aire en equilibrio con una sustancia o solución y la
presión del vapor del agua a la misma temperatura. Sus valores abarcan desde 0 al 1.

También se puede definir como la cantidad de agua disponible para crecimiento microbiano.

GRUPO MICROBIANO VALOR DE AW

Bacterias 0.91-0.999
Levaduras 0.84-0.94
Hongos 0.75-0.77

20. ¿Cuál es la clasificación de los microorganismos según sus necesidades de actividad de

agua?
 Los organismos que tienen una dependencia específica de NaCl se conocen como halófilos.

• Los halófilos discretos requieren concentraciones de entre 1 y 6% de sal.Ejemplo:

Staphylococcus aureus
• Los halófilos moderados requieren concentraciones de entre 6 y 15% de sal.Ejemplo:Vibrio
fischeri
• Los halófilos extremos requieren concentraciones de entre 15 y 30% de sal.Ejemplo:
Halobacterium salinarum

Los organismos capaces de crecer en altas concentraciones de azucares se conocen como

osmófilos.Ejemplos: Saccharomyces rouxii y Debaryomyces hansenii

Y los organismos capaces de crecer en ambientes muy secos se llaman xerófilos.Ejemplos

Pedomicrobium y Metallagenium

21. ¿Qué es el fenómeno de osmosis?

La ósmosis es el fenómeno que se produce cuando dos soluciones con diferente concentración son
separadas por una membrana semipermeable y el solvente difunde a través de la membrana del
líquido de menor concentración al de mayor hasta equilibrar las concentraciones. Este fenómeno se
produce de forma espontánea sin gasto energético.

22. Según la concentración de solventes y solutos se pueden clasificar los medios en:
 Hipotónicos: cuando la concentración de soluto es menor respecto al medio con el que se
compara
 Hipertónico: cuando la concentración de soluto es mayor respecto al medio con el que se
compara.
 Isotónico: cuando ambos medios tienen la misma concentración.
23. Defina presión osmótica

A la presión que ejerce el solvente (agua) sobre la cara de la membrana donde hay menor
concentración hacia el compartimento de mayor concentración.

24. ¿Cómo afectan los nutrientes en el crecimiento microbiano?

Los microorganismos necesitan nutrientes para crecer, específicamente proteínas y carbohidratos.

Aunque hay que decir que, cada microorganismo tiene unas necesidades nutricionales específicas,
existiendo especies que por ser poco exigentes pueden crecer sobre una gran variedad de substratos y
otras, por el contrario, precisan vitaminas, aminoácidos, etc. para poder crecer.

Los nutrientes que requiere la célula para su crecimiento se pueden clasificar en los siguientes grupos:
Macronutrientes: C, H, O, N, P, Mg, Ca y Fe.

Micronutrientes: Co, Zn, Cu y Mn.

Además: vitaminas, peptonas y agua.

Cuando los microorganismos se separan de su hábitat (donde adquieren los nutrientes) y se cultivan en
laboratorios o industrias se deben usar medios de cultivo que contengan los elementos químicos
necesarios para su crecimiento.

25. ¿Qué es un microorganismo de interés industrial?

Es aquel microorganismo que sintetizan productos útiles para el hombre. Un microorganismo de

uso industrial debe producir la sustancia de interés;debe estar disponible en cultivo puro;debe ser
genéticamente estable y debe crecer en cultivos a gran escala. Otra característica importante es que
el microorganismo industrial crezca rápidamente y produzca el producto deseado en un corto
período de tiempo.El microorganismo debe también crecer en un relativamente barato medio de
cultivo disponible en grandescantidades.

Existen una serie de características que comparten todos los microorganismosy que suponen ciertas
ventajas para su uso en la industria. la más fundamental, el pequeño tamaño de la célula microbiana
y su correspondiente alta relación de superficie a volumen. Esto facilita el rápido transporte de
nutrientes al interior de la célula y permite, por consiguiente, una elevada tasa metabólica.

26. ¿Cómo se clasifican los metabolitos?

Un metabolito es cualquier molécula química sintetizada, transformada o degradada en el

metabolismo del microorganismo. El metabolismo microbiano es el conjunto de procesos por
los cuales un microorganismo obtiene la energía y los nutrientes (carbono, por ejemplo) que
necesita para vivir y reproducirse. Los metabolitos se clasifican en metabolitos primarios y
secundarios

27. ¿Qué es un metabolito primario, ejemplo de metabolitos primarios?

Se refiere a los procesos fotosintéticos que dan lugar a los ácidos carboxílicos del ciclo de
Krebs que son de bajo peso molecular y que están ampliamente distribuidos, alfa-
aminoácidos, carbohidratos, grasas, proteínas y ácidos nucleicos implicados en los procesos
vitales.

Los metabolitos primarios, muy abundantes en la naturaleza, son indispensables para el desarrollo
fisiológico de la planta; se encuentran presentes en grandes cantidades, son de fácil extracción y su
explotación es relativamente barata y conducen a la síntesis de los metabolitos secundarios. Entre ellos
se encuentran aminoácidos proteícos, proteínas, carbohidratos, lípidos, ácidos grasos, algunos ácidos
carboxílicos, etc.

28. ¿Qué son los metabolitos secundarios?

Los metabolitos secundarios son, en principio, no esenciales para la vida pero contribuyen
definitivamente a la adaptación de las especies y su supervivencia. Son más característicos para un
grupo biológico particular, tal como una familia o un género, y aparentemente, la maquinaria sintética
puesta en juego aquí está relacionada con la evolución de las especies.

Los metabolitos secundarios son derivados de los primeros, pero su distribución en el reino vegetal es
más limitada y para determinados compuestos queda restringida a ciertas especies e incluso a algunos
grupos dentro de una misma especie, por lo tanto es improbable que desarrollen un papel fundamental
en el metabolismo primario. Sin embargo, existen excepciones, entre estas están las clorofilas y los
reguladores del crecimiento (hormonas vegetales), de los que sus funciones bioquímicas y fisiológicas
han sido ampliamente reconocidas; además, recientemente se estableció que los flavonoides son
factores que inducen la germinación del polen y la elongación del tubo polínico.

29. Menciona algunos ejemplos de metabolitos primarios y secundarios

Los azúcares más comunes como, glucosa, fructosa y manosa, cuya química y misión biológica han
sido estudiadas ampliamente por los bioquímicos, se colocan en el primer grupo, mientras que
azúcares, raros estrechamente relacionados, tales como calcosa, estreptosa, y micaminosa,
descubiertos como constituyentes de antibióticos e investigados por químicos orgánicos, se consideran
como metabolitos secundarios.

30. ¿Qué datos constituyen la curva de crecimiento?

Está constituida por el número de células viables /ml pero en log sobre tiempo para poder sacar el
tiempo degeneración y la velocidad especifica de crecimiento.