AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK BUAH DAN

DAUN MENGKUDU

ANNISA MULYANINGRUM UTAMI

DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2010
 ABSTRAK
ANNISA MULYANINGRUM UTAMI. Aktivitas Antioksidan Ekstrak Buah dan Daun
Mengkudu. Dibimbing oleh ELLY SURADIKUSUMAH dan ZULHAN ARIF.
Bagian buah dan daun mengkudu (Morinda citrifolia) memiliki kemampuan
sebagai antioksidan alami. Penelitian ini bertujuan menentukan aktivitas antioksidan, total
fenol, dan golongan senyawa antioksidan dari fraksi ekstrak daun dan buah mengkudu.
Ekstrak etil asetat buah dan daun mengkudu difraksionasi menggunakan kromatografi
kolom menghasilkan 4 dan 7 fraksi berdasarkan profil kromatografi lapis tipis (KLT)
yang sama. Aktivitas antioksidan dari fraksi-fraksi ekstrak ditentukan menggunakan
metode 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) dan kandungan fenol totalnya diukur
menggunakan metode Folin-Cioacalteau. Fraksi 1 (IC50 38.18 ppm) dari 4 fraksi ekstrak
buah dan fraksi 5 (IC50 85.86 ppm) dari 7 fraksi ekstrak daun menunjukkan aktivitas
antioksidan tertinggi, tetapi lebih rendah daripada vitamin C (IC 50 3.85 ppm). Kandungan
fenol total sebesar 0.40 mg ekuivalen asam galat/g serbuk buah kering dan 1.15 mg
ekuivalen asam galat/g serbuk daun kering. Berdasarkan hasil uji fitokimia, diduga
senyawa alkaloid dan flavonoid berperan sebagai antioksidan di dalam buah dan daun,
serta senyawa selain fenol berperan sebagai antioksidan di dalam buah.

ABSTRACT
ANNISA MULYANINGRUM UTAMI. Antioxidant Activity of Noni`s Fruit and Leaf
Extract. Supervised by ELLY SURADIKUSUMAH and ZULHAN ARIF.
Different parts of noni (Morinda citrifolia) plant including fruit and leaf exhibited
antioxidant activity. This study was conducted to investigate the antioxidant activity, total
phenol, and antioxidant compound group of Noni`s leaf and fruit extracts fractions. This
fruit and leaf ethyl acetate extracts were fractionated by column chromatography, yielded
4 and 7 fractions based on the identical thin layer chromatography (TLC) profile.
Antioxidant activities of extracts fractions were determined by radical scavenging assay
using 2,2-diphenyl-1- picrylhydrazyl (DPPH) radical and the total phenolic contents were
measured using Folin-Ciocalteau method. Fraction 1 (IC50 38.18 ppm) of 4 fruit extract
fractions and fraction 5 (IC50 85.86 ppm) of 7 leaf extract fractions revealed the highest
antioxidant activity, though lower than vitamin C (IC 50 3.85 ppm). The total phenolic
contents varied from 0.40 mg of gallic acid equivalent/gram dry fruit and 1.15 mg of
gallic acid equivalent/gram dry leaf. The result of phytochemical analysis confirmed the
responsible antioxidant compounds present in fruit and leaf were considered as alkaloid
and flavonoid. In addition, nonphenol compounds had a role as antioxidant acitivity in
fruit.
AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK BUAH DAN
DAUN MENGKUDU

ANNISA MULYANINGRUM UTAMI

Skripsi
sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
Sarjana Sains pada
Departemen Kimia

DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2010
Judul : Aktivitas Antioksidan Ekstrak Buah dan Daun Mengkudu
Nama : Annisa Mulyaningrum Utami
NIM : G44050304

Menyetujui

Pembimbing I, Pembimbing II,

Ir. Elly Suradikusumah, MS Zulhan Arif, SSi

NIP 19450214 197010 2 001

Mengetahui
Ketua Departemen,

Prof. Dr. Ir. Tun Tedja Irawadi, MS

NIP 19501227 197603 2 002

Tanggal Lulus :
 PRAKATA
Segala puji bagi Allah SWT yang telah melimpahkan segala rahmat-Nya,
sehingga penulis mampu menyelesaikan karya ilmiah yang dilaksanakan sejak bulan Juni
hingga Oktober 2009 di Laboratorium Kimia Analitik dan Pusat Studi Biofarmaka. Tema
yang dipilih adalah antioksidan, dengan judul “Aktivitas Antioksidan Ekstrak Buah dan
Daun Mengkudu”
Selama penelitian sampai penulisan karya ilmiah ini, penulis mendapatkan
banyak bimbingan dan dorongan dari berbagai pihak. Oleh karena itu, penulis
mengucapkan terima kasih kepada Ibu Ir Elly Suradikusumah, MS. dan Bapak Zulhan
Arif, SSi. selaku pembimbing penelitian ini. Ucapan terima kasih tak terhingga kepada
ayah, ibu, dan adik-adik atas doa-doa, nasihat, semangat, dan bantuan materi.
Penulis juga mengucapkan terima kasih kepada seluruh staf laboratorium Kimia
Analitik (Pak Eman, Bu Nunung, Pak Dede, Pak Kosasih, Pak Ridwan) dan Pusat Studi
Biofarmaka, serta teman-teman angkatan 42 yang selalu memberikan dorongan dan doa
(Ida, Ufa, Malia, Siti, Rhenny, Ecep, Ois, Mbak Janti, Eem). Terima kasih atas bantuan
dan semangat yang diberikan, semoga mendapat balasan pahala dari Allah SWT.
Semoga karya ilmiah ini bermanfaat.

Bogor, Januari 2010

Annisa Mulyaningrum Utami

 RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di Boyolali pada tanggal 29 Januari 1987 dari pasangan
H. Sutarno dan Hj. Darmani. Penulis merupakan anak pertama dari lima bersaudara.
Tahun 2005 penulis lulus dari SMA Bhinneka Karya 2 Boyolali dan pada tahun
yang sama lulus seleksi masuk IPB melalui jalur Undangan Seleksi Masuk IPB (USMI).
Penulis memilih Program Studi Kimia, Departemen Kimia, Fakultas Matematika dan
Ilmu Pengetahuan Alam, IPB.
Selama mengikuti perkuliahan, penulis aktif mengikuti organisasi kemaha-
siswaan atau Himpunan Profesi Kimia/Imasika menjadi staf Departemen Keilmuan.
Penulis menjadi asisten praktikum Kimia Fisik Layanan pada tahun ajaran 2007/2008;
Kimia Analitik Layanan 2008/2009; Kimia Analitik 2 2008/2009; Kimia Tingkat
Persiapan Bersama (TPB) 2008/2009; dan Analisis Komponen Aktif dan Uji aktivitas
Diploma 2009/2010. Pada bulan Juli-Agustus 2008, penulis berkesempatan melaksanakan
kegiatan praktik lapangan di PT Jakarana Tama di bagian Quality Control.
 DAFTAR ISI
Halaman

DAFTAR TABEL ................................................................................................... viii

DAFTAR GAMBAR .............................................................................................. viii
DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................................... ix
PENDAHULUAN .................................................................................................. 1
TINJAUAN PUSTAKA
Mengkudu .................................................................................................... 1
Antioksidan .................................................................................................. 2
Mekanisme Kerja Antioksidan ...................................................................... 2
2,2’-Difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) ............................................................. 3
Analisis Kuantitatif Total Fenol .................................................................... 3
Ekstraksi dan Fraksionasi Senyawa Metabolit Sekunder ............................... 3
BAHAN DAN METODE
Lingkup Kerja ............................................................................................ 4
Alat dan Bahan ........................................................................................... 4
HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar Air ................................................................................................... 6
Ekstrak ....................................................................................................... 6
Ekstrak Teraktif .......................................................................................... 7
Fraksi ......................................................................................................... 7
Kandungan Fitokimia ................................................................................. 8
Aktivitas Antioksidan ................................................................................. 8
Kandungan Fenol Total .............................................................................. 10
SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan ................................................................................................... 11
Saran .......................................................................................................... 11
DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................. 11
LAMPIRAN ........................................................................................................... 13
 DAFTAR TABEL

Halaman
1 Uji fitokimia buah mengkudu ............................................................................... 8

2 Uji fitokimia daun mengkudu ............................................................................... 8

DAFTAR GAMBAR

Halaman
1 Mengkudu ........................................................................................................... 1

2 Reaksi DPPH dan antioksidan ............................................................................. 3

3 Fraksionasi dengan kromatografi kolom. ............................................................ 4

4 Kromatografi lapis tipis (KLT) ............................................................................ 4

5 Profil KLT bioautografi dengan larutan DPPH 1 mM dari berbagai ekstrak ......... 7

6 Profil KLT eluen terbaik ...................................................................................... 7

7 Profil KLT bioautografi dengan larutan DPPH 1 mM dari fraksi

ekstrak etil asetat mengkudu ............................................................................... 8

8 Nilai IC50 fraksi teraktif ....................................................................................... 9

9 Reaksi antara flavonoid dan DPPH ...................................................................... 9

10 Reaksi antara asam askorbat dan DPPH ............................................................... 10

11 Kandungan fenol total fraksi teraktif .................................................................... 10

12 Hubungan antara IC50 dan kandungan fenol total. ................................................ 11

 DAFTAR LAMPIRAN

Halaman
1 Diagram alir penelitian ....................................................................................... 14

2 Diagram alir uji fitokimia ................................................................................... 15

3 Penetapan kadar air buah dan daun mengkudu ................................................... 16

4 Penentuan rendemen ekstrak kasar buah dan daun mengkudu.............................. 17

5 Penentuan eluen terbaik menggunakan kromatografi lapis tipis ........................... 17

6 Hasil fraksionasi dan profil KLT hasil fraksionasi ekstrak etil asetat buah
mengkudu dengan eluen heksana:etil asetat (2:1) ............................................... 18

7 Hasil fraksionasi dan profil KLT hasil fraksionasi ekstrak etil asetat daun
mengkudu dengan eluen heksana:etil asetat (2:1) ............................................... 19

8 Penentuan panjang gelombang maksimum larutan DPPH 0.05 mM ....... ……….. 22

9 Penentuan aktivitas antioksidan fraksi teraktif ekstrak buah mengkudu………… 23

10 Penentuan aktivitas antioksidan fraksi teraktif ekstrak daun mengkudu ............... 24

11 Penentuan aktivitas antioksidan vitamin C .......................................................... 25

12 Penentuan panjang gelombang maksimum larutan asam galat 100 ppm ............... 26

13 Penentuan kandungan fenol total dari fraksi teraktif ekstrak buah dan daun
mengkudu .......................................................................................................... 27
 PENDAHULUAN
Antioksidan merupakan senyawa yang
mampu memperlambat, menghambat, atau
mencegah oksidasi lemak atau molekul lain.
Berdasarkan asalnya, terdapat dua macam
antioksidan, yaitu antioksidan alami dan
antioksidan sintetik. Tubuh manusia tidak
mempunyai cadangan antioksidan dalam
jumlah berlebih, sehingga jika terdapat radikal
berlebih maka tubuh membutuhkan antioksi-
dan eksogen. Adanya kekhawatiran akan
kemungkinan efek samping yang belum
diketahui dari antioksidan sintetik menyebab-
kan antioksidan alami menjadi alternatif yang
sangat dibutuhkan (Javanmardi et al. 2003).
Antioksidan alami mampu melindungi tubuh
terhadap kerusakan yang disebabkan spesies
oksigen reaktif, mampu menghambat terja-
dinya penyakit degeneratif serta mampu
menghambat peroksida lipid pada makanan.
Meningkatnya minat untuk mendapatkan
antioksidan alami terjadi beberapa tahun
terakhir ini.
Mengkudu (Morinda citrifolia) meru-
pakan salah satu tanaman obat yang dapat
digunakan untuk pengobatan berbagai macam
penyakit di antaranya kanker, infeksi, artritis,
diabetes, asma, hipertensi, dan luka (Wang et
al. 2002). Zin et al. (2002) menyatakan bahwa
bagian buah dan daun mengkudu memiliki
kemampuan sebagai antioksidan alami.
Aktivitas antioksidan memiliki hubungan
yang linier positif dengan kandungan fenol di
dalam ekstrak buah mengkudu (Rohman et al.
2006). Senyawaan fenol terutama asam
fenolat dan flavonoid merupakan antioksidan
alami di dalam buah, sayur, dan tanaman lain
(Kahkonen et al. 1999). Pada penelitian ini
melakukan penentuan fraksi teraktif ekstrak
buah dan daun mengkudu melalui pengujian
terhadap radikal bebas DPPH, kemudian
menentukan kandungan fenol total, aktivitas
antioksidan, dan identifikasi golongan senya-
wa antioksidannya melalui uji fitokimia.
Penentuan aktivitas antioksidan dari fraksi
ekstrak mengkudu pada penelitian ini adalah
metode DPPH. Metode ini merupakan metode
analisis antioksidan berdasarkan penangkapan
radikal bebas dengan DPPH sebagai radikal
bebasnya serta salah satu metode spektro-
fotometrik yang mudah dan banyak digunakan
untuk penentuan aktivitas antioksidan
Metode analisis senyawa metabolit sekun-
der dilakukan dengan pemisahan kromatografi
kolom. Ekstrak difraksionasi dan diuji aktivi-
tas antioksidannya, dan fraksi yang paling
aktif dianalisis kandungan fenol totalnya de-
ngan metode Folin-Ciocalteau. Secara ring-
kas, penelitian ini bertujuan untuk menentu-
kan aktivitas antioksidan dan kandungan fenol
total fraksi ekstrak etil asetat buah dan daun
mengkudu, serta menentukan golongan senya-
wa antioksidannya.
TINJAUAN PUSTAKA
Mengkudu
Mengkudu (Morinda citrifolia) meru-
pakan tanaman liar yang memiliki tinggi 2–6
meter. Daunnya tebal, lebar, dan berbentuk
lonjong mengkilat. Daun mengkudu yang
besar memiliki lebar 15–30 cm dan panjang
20–40 cm. Buah mengkudu bervariasi uku-
rannya, yaitu lebar mulai dari 3 sampai 10 cm
dan kadang ada yang panjang mencapai 20 cm
(Gambar 1). Permukaan buah seperti terbagi
dalam sel-sel poligonal (segi banyak) yang
berbintik-bintik dan berkutil. Mula-mula buah
berwarna hijau, menjelang masak menjadi
putih kekuningan. Setelah matang, warnanya
putih transparan dan lunak. Setelah lunak,
daging buah mengkudu banyak mengandung
air dan aromanya seperti keju busuk
disebabkan adanya asam butirat yang muncul
setelah buah matang (McClatchey 2002).
(a) (b)
Gambar 1 Morinda citrifolia a) Buah, b)
Daun.
Mengkudu diklasifikasikan ke dalam
kingdom Plantae, divisi Spermatophyta, sub-
divisi Angiospermae, kelas Dicotyledonae,
ordo Gentianales, famili Rubiceae, genus
Morinda, dan spesies Morinda citrifolia Roxb.
Nama lain mengkudu adalah pace (Jawa
Tengah dan Jawa Timur), cangkudu (Jawa
Barat), sedangkan di Sumatra mengkudu
diberi nama eodu, kumudee, lengkudu,
bangkudu. Mengkudu dikenal di berbagai
negara dengan nama yang berbeda seperti
Indian mulberry (India), nono (Tahiti dan
Rara tonga), polynesian bush fruit, painkiller
tree (Kepulauan Karibia), lada (Guam),
mengkudo (Malaysia), nhau (Asia Tenggara),
grand morinda (Vietnam), cheesefruit (Aus-
tralia), kura (Fiji), dan bumbo (Afrika) (Elkins
1998).
Antioksidan alami merupakan metabolit
sekunder dalam tanaman. Kandungan senya-
wa antioksidan dari buah dan daun mengkudu
di antaranya β-karoten, terpenoid, asam askor-
bat, alkaloid, β-sitosterol, polifenol seperti
flavonoid, flavon glikosida, dan asam hidroksi
fenolat (Wang et al. 2002). Hasil analisis
aktivitas antioksidan ekstrak kasar etil asetat
buah dan daun mengkudu dengan metode
ferric thiocyanate (FTC) dan thiobarbituric
acid (TBA) menunjukkan bahwa ekstrak buah
dan daun mengkudu memiliki aktivitas anti-
oksidan (Zin et al. 2002).
Antioksidan
Antioksidan merupakan inhibitor penting
terhadap peroksidasi lemak, yaitu sebagai
pelindung makanan dan pertahanan sel
makhluk hidup melawan kerusakan oksidatif
(Vimala & Adenan 1999). Antioksidan dalam
tubuh bermanfaat untuk mencegah reaksi
oksidasi yang ditimbulkan oleh radikal bebas
baik berasal dari metabolisme tubuh maupun
faktor eksternal lainnya.
Radikal bebas adalah atom atau molekul
yang tidak stabil dan sangat reaktif karena
mengandung satu atau lebih elektron tidak
berpasangan pada orbital terluarnya. Radikal
bebas akan bereaksi dengan molekul di
sekitarnya untuk memperoleh pasangan
elektron supaya mencapai kestabilan atom
atau molekul. Reaksi ini akan berlangsung
terus menerus dalam tubuh dan bila tidak
dihentikan akan menimbulkan berbagai
penyakit seperti kanker, jantung, katarak,
penuaan dini, serta penyakit degeneratif
lainnya. Oleh karena itu tubuh memerlukan
suatu substansi penting, yaitu antioksidan
yang mampu menangkap radikal bebas
tersebut sehingga tidak dapat menginduksi
suatu penyakit (Kikuzaki & Nakatani 1993).
Beberapa sumber utama antioksidan di
antaranya enzim, molekul besar (albumin,
seruloplasmin, feritin), molekul kecil (asam
askorbat, asam urat, tokoferol, karotenoid,
fenol), dan beberapa hormon seperti estrogen
dan lain-lain (Prior et al. 2005).
Mekanisme Kerja Antioksidan
Mekanisme kerja antioksidan secara
umum menghambat oksidasi substrat yang
terjadi dalam tiga tahap utama, yaitu iniasi,
propagasi, dan terminasi. Tahap inisiasi terjadi
pembentukan radikal substrat, yaitu turunan
substrat yang bersifat tidak stabil dan sangat
reaktif akibat hilangnya satu atom H. Radikal
substrat akan bereaksi dengan oksigen
membentuk radikal peroksi pada tahap
propagasi. Radikal peroksi lebih lanjut akan
menyerang substrat menghasilkan hidrope-
roksida dan radikal substrat baru (Javanmardi
et al. 2003).
Reaksi inisiasi
RH R● + H●
Reaksi propagasi
R● + O2 ROO●
ROO● + RH ROOH + R●
Reaksi Terminasi
ROO● + ROO● ROOR + O2
ROO● + R● ROOR
Antioksidan mampu mendeaktivasi radikal
melalui dua mekanisme utama, yaitu perpin-
dahan atom hidrogen (PAH) dan perpindahan
elektron bebas (PEB). Hasil akhir dari kedua
mekanisme adalah sama tetapi kinetika dan
potensial reaksinya berbeda. Reaksi PEB dan
PAH mungkin terjadi secara paralel. Meka-
nisme yang mendominasi dalam sistem
ditentukan oleh struktur dan sifat antioksidan,
kelarutan dan koefisien partisi pelarut.
Metode PAH mengukur kemampuan dari
antioksidan dalam menstabilkan radikal bebas
dengan memberikan atom hidrogennya (AH).
Kapasitas pengukuran berdasarkan pada
kinetikanya. Reaksi PAH tidak bergantung
pada pelarut dan pH, biasanya berlangsung
dengan cepat yaitu hanya beberapa detik atau
menit.
X● + AH XH + A●
Metode PEB mengukur kemampuan dari
antioksidan melalui proses perpindahan satu
elektron untuk mereduksi berbagai senyawa
seperti logam, karbonil, dan radikal (Prior et
al. 2005).
(1) X●+ AH X− + AH●+
-H2O
(2) AH●+ A● + H3O+
(3) X + H3O +H2O
− +
XH + H2O
(4) M(III) + AH AH+ + M(II)
Reaksi (1), (2), (3) merupakan reaksi reduksi
senyawa radikal dan karbonil, sedangkan
reaksi (4) merupakan reaksi reduksi senyawa
logam. Reaktivitas relatif metode ini
berdasarkan pada deprotonasi dari gugus
fungsional yang reaktif. Secara umum,
meningkatnya kapasitas donor elektron
melalui deprotonasi menyebabkan mening-
katnya pH, sehingga reaksi bergantung pada
pH. Reaksi PAH umumnya lambat sehingga
kapasitas antioksidannya tidak berdasarkan
kinetika, tetapi pada persen penurunan produk
reaksi.
2,2’-Difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH)
Metode penentuan aktivitas antioksidan
terdiri atas asam 2-tiobarbiturat (TBA), ke-
mampuan mereduksi ion feri (FRAP), 2,2’-
Difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH), kapasitas
mereduksi kupri (CUPRAC), 2,2’-Azinobis(3-
etil-benzotiazolin-6-asam sulfonat) (ABTS),
dan kapasitas absorbansi radikal oksigen
(ORAC) (Michalowska et al. 2007). Metode
DPPH merupakan metode yang sering
digunakan untuk penentuan aktivitas anti-
oksidan. DPPH merupakan radikal bebas yang
stabil dalam larutan berair atau metanol dan
memiliki warna ungu yang ditunjukkan oleh
pita absorpsi dalam pelarut metanol pada
panjang gelombang sekitar 515-520 nm.
DPPH bersifat peka terhadap cahaya, oksigen,
dan pH. Namun, DPPH bersifat stabil dalam
bentuk radikal sehingga mungkin dilakukan
pengukuran aktivitas antioksidan yang cukup
akurat. Metode DPPH hanya mampu mengu-
kur aktivitas antioksidan yang mekanime
kerjanya PAH. Radikal bebas DPPH dapat
menangkap atom hidrogen dari komponen
aktif ekstrak yang dicampurkan, kemudian
bereaksi menjadi bentuk tereduksinya dan
ditandai dengan berkurangnya intensitas
warna ungu larutan DPPH (Gambar 2).
(a) (b)
Gambar 2 Reaksi DPPH dan antioksidan, (a)
DPPH bentuk radikal, (b) DPPH
bentuk nonradikal (Molyneux
2004).
Berdasarkan reaksi tersebut, senyawa
antioksidan (RH) melepas atom hidrogen
menjadi radikal senyawa antioksidan (R●).
DPPH yang merupakan radikal bebas
direaksikan dengan senyawa antioksidan dan
membentuk DPPH yang nonradikal (DPPHn)
(Molyneux 2004).
Pengujian keberadaan senyawa antioksi-
dan dalam bahan dapat dilakukan mengguna-
kan metode kromatografi lapis tipis (KLT)
bioautografi, yaitu menggabungkan KLT dan
bioassay. Metode ini cepat dan melokalisasi
senyawa aktif dari ekstrak. Ekstrak dipisahkan
secara kromatografi menggunakan eluen
terbaik, kemudian plat diuji dengan pereaksi
DPPH. Warna noda yang pucat menunjukkan
adanya senyawa antioksidan (Hostettman et
al. 1997).
Kuantitatif Total Fenol
Kadar fenol total dapat ditentukan dengan
pereaksi Folin-Ciocalteau. Pereaksi ini biasa-
nya digunakan pada metode Lowry untuk
menentukan konsentrasi protein. Pereaksi
Folin tidak memiliki gugus fenol, tetapi
bersifat sensitif untuk mengoksidasi senyawa-
senyawa fenol. Reaksi antara pereaksi Folin
dan senyawa fenol menghasilkan senyawa
kompleks warna biru, sehingga dapat diukur
serapannya dengan spektrofotometer Ultra-
violet-Tampak (UV-tampak) pada panjang
gelombang 750 nm (Rohman et al. 2006).
Ekstraksi dan Fraksionasi Senyawa
Metabolit Sekunder dari Tumbuhan
Ekstraksi merupakan suatu proses yang
secara selektif mengambil zat terlarut yang
terkandung dalam suatu campuran dengan
bantuan pelarut. Metode pemisahan pada
ekstraksi pelarut menggunakan prinsip kelaru-
tan like dissolve like, yaitu pelarut polar akan
melarutkan zat polar dan sebaliknya. Hal-hal
yang perlu dipertimbangkan dalam pemilihan
pelarut adalah selektivitas, sifat racun, dan
kemudahannya untuk diuapkan (Khopkar
2002).
Salah satu prosedur klasik untuk mem-
peroleh kandungan senyawa organik dari
jaringan tumbuhan ialah maserasi. Metode
maserasi digunakan untuk mengekstraksi
contoh yang relatif tidak tahan panas. Metode
ini dilakukan hanya dengan merendam contoh
dalam suatu pelarut dengan lama waktu
tertentu, biasanya selama 24 jam tanpa meng-
gunakan pemanasan. Kelebihan metode mase-
rasi, yaitu sederhana, tidak memerlukan alat-
alat yang rumit, relatif murah, serta dapat
menghindari kerusakan komponen senyawa
yang tidak tahan panas. Kelemahannya di
antaranya dari segi waktu yang lama dan
penggunaan pelarut yang tidak efisien. Pemi-
lihan pelarut untuk proses maserasi akan
memberikan efektivitas yang tinggi dengan
memperhatikan kelarutan senyawa bahan
alam pada pelarut tersebut (Rohman et al.
2006).
 Fraksionasi adalah proses pemisahan kom-
ponen dalam suatu ekstrak menjadi kelompok-
kelompok senyawa yang memiliki kemiripan
karakteristik secara kimia (Houghton &
Raman 1998). Teknik fraksionasi dapat dila-
kukan dengan kromatografi kolom, yaitu
teknik analisis untuk menentukan jumlah
komponen dalam suatu campuran senyawa,
dan juga untuk memisahkan dan memurnikan
komponen senyawa tertentu dari campuran-
nya. Pemisahan kromatografi kolom ini meng-
gunakan suatu pelarut pengelusi yang dialir-
kan secara kontinu melalui kolom dan kompo-
nen demi komponen dari campuran pada
akhirnya keluar dari kolom kemudian dapat
dikumpulkan dan difraksionasi (Gambar 3)
(Rouessac & Rouessac 1994).
Gambar 3 Fraksionasi dengan kromatografi
kolom (a) bahan yang dibutuhkan
(C, kolom; SP, fase stasioner; MP,
fase mobil; dan S, contoh); (b)
contoh dimasukkan; (c) proses elusi
dimulai; (d) hasil separasi
diperoleh; (Rouessac & Rouessac
1994).
Kromatografi lapis tipis merupakan jenis
kromatografi partisi menggunakan sebuah
lapis tipis silika atau alumina yang seragam
pada sebuah lempeng gelas atau logam yang
keras. Fase diam untuk kromatografi lapis
tipis seringkali juga mengandung substansi
yang dapat berpendar dalam sinar ultraviolet.
Fase gerak merupakan pelarut atau campuran
pelarut yang sesuai (Furniss et al. 1989).
Pergerakan zat relatif terhadap garis depan
pelarut dalam sistem kromatografi tertentu
dapat didefinisikan sebagai nilai Rf, yaitu
perbandingan jarak tempuh zat dengan jarak
tempuh garis depan pelarut (Gambar 4).
(a) (b)
Gambar 4 Kromatografi lapis tipis, (a)
chamber, tempat pengembangan
pelat KLT; (b) plat KLT dalam
penentuan Rf (Furniss et al.
1989).
BAHAN DAN METODE
Lingkup Kerja
Secara garis besar metode penelitian ini
dilakukan dalam dua tahap. Tahap pertama
adalah ekstraksi maserasi buah dan daun
mengkudu dengan metanol lalu ekstraksi cair-
cair dengan etil asetat. Tahap kedua, yaitu
melakukan fraksionasi terhadap ekstrak kasar
etil asetat buah dan daun, menentukan aktivi-
tas antioksidan dan kandungan fenol total
terhadap fraksi teraktif dari ekstrak. Bagan alir
penelitian dapat dilihat pada Lampiran 1.
Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan adalah
spektrofotometer UV-tampak (Shimadzu
PharmaSpeck UV-1700).
Bahan-bahan yang digunakan dalam
penelitian ini adalah contoh buah dan daun
mengkudu dari perkebunan Pusat Studi Bio-
farmaka, DPPH dari Sigma, plat KLT SiO2 60
F254 dan silika gel G60 F254 dari Merck.
Penentuan Kadar Air (AOAC 2006)
Cawan porselin dikeringkan pada suhu
105 ºC selama 30 menit lalu didinginkan
dalam eksikator dan ditimbang. Sebanyak 3 g
contoh buah dan daun mengkudu masing-
masingnya dimasukkan dalam cawan dan
dipanaskan pada suhu 105 ºC selama 3 jam
sampai diperoleh bobot konstan, kemudian
didinginkan dalam eksikator dan ditimbang.
Penetapan kadar air ini dilakukan berdasar-
kan penentuan jumlah bobot kering contoh.
A B
Kadar air (%) = 100 %
A
keterangan:
A adalah bobot contoh (g)
B adalah bobot bahan setelah dikeringkan (g)
Ekstraksi Buah dan Daun Mengkudu (Zin
et al. 2002)
Serbuk buah dan daun mengkudu dibebas-
kan dari lemak dengan menggunakan heksana.
Sebanyak 150 gram serbuk kering buah dan
daun mengkudu masing-masingnya dimasuk-
kan ke dalam labu erlemeyer, ditambah 300
mL heksana, dan direndam selama 12 jam.
Residu dikeringkan pada suhu kamar selama
24 jam, selanjutnya diekstraksi dengan
metanol. Residu ditambah 600 mL metanol
dan direndam selama enam jam sambil sekali-
kali diaduk, kemudian didiamkan selama 24
jam. Maserat dipisahkan dan proses diulang 2
kali dengan jenis dan jumlah pelarut yang
sama. Semua maserat dikumpulkan dan diuap-
kan dengan penguap putar tekanan rendah
hingga diperoleh ekstrak metanol yang
volumenya 1/10 volume awal. Ekstrak
metanol diekstraksi cair-cair sebanyak tiga
kali dengan etil asetat dengan perbandingan
volume 1:1. Fraksi yang larut dalam etil asetat
dikumpulkan, kemudian diuapkan dengan
penguap putar tekanan rendah dan dike-
ringbekukan, serta dilanjutkan dengan uji
berikutnya.
Uji Fitokimia (Harborne 1987)
Uji Flavonoid. Sebanyak 0.1 gram
ekstrak etil asetat buah dan daun mengkudu
ditambahkan 10 mL air panas kemudian
dididihkan selama 5 menit dan disaring.
Sebanyak 10 mL filtrat ditambahkan 0.5 gram
serbuk Mg, 1 mL HCl pekat, dan 1 mL amil
alkohol. Campuran dikocok kuat-kuat. Uji
positif ditandai dengan munculnya warna
merah, kuning, atau jingga pada lapisan amil
alkohol.
Uji Triterpenoid dan Steroid. Sebanyak
0.1 gram ekstrak etil asetat buah dan daun
mengkudu dilarutkan dengan 25 mL etanol
(50 ºC), disaring dan residu ditambahkan eter.
Filtrat ditambahkan 3 tetes asam asetat anhi-
drat dan 1 tetes asam sulfat pekat secara
berurutan. Larutan dikocok perlahan dan
dibiarkan beberapa menit. Uji positif ditandai
dengan terbentuknya warna merah atau ungu
untuk triterpenoid serta hijau atau biru untuk
steroid.
Uji Alkaloid. Sebanyak 0.1 gram ekstrak
etil asetat buah dan daun mengkudu dilarutkan
dengan 10 mL kloroform dan beberapa tetes
NH4OH dan disaring ke dalam tabung reaksi
tertutup. Ekstrak kloroform dalam tabung
reaksi dikocok dengan penambahan 10 tetes
H2SO4 2 M kemudian lapisan asamnya
dipindahkan ke dalam tabung reaksi yang lain.
Lapisan asam ini diteteskan pada pelat tetes
dan ditambahkan pereaksi Meyer, Wagner,
dan Dragendorf yang akan menimbulkan
endapan warna berturut-turut putih, cokelat,
dan merah jingga.
Uji Saponin. Sebanyak 0.1 gram ekstrak
etil asetat buah dan daun mengkudu ditam-
bahkan ke dalam 10 mL air panas dan didi-
dihkan selama 5 menit lalu disaring. Filtrat
dikocok dalam tabung reaksi tertutup selama
10 detik untuk kemudian dibiarkan 10 menit.
Adanya saponin ditunjukkan dengan terben-
tuknya buih stabil.
Uji Tanin. Sebanyak 0.1 gram ekstrak etil
asetat buah dan daun mengkudu ditambah-
kan ke dalam 10 mL air panas dan dididihkan
selama 5 menit lalu disaring. Filtrat di-
tambahkan 10 mL FeCl3 1%. Uji positif
ditandai munculnya warna hijau kehitaman.
Bagan alir uji fitokimia dapat dilihat pada
Lampiran 2.
Pemilihan Eluen Terbaik
Pelarut atau fase gerak yang akan digu-
nakan untuk fraksionasi ekstrak buah dan
daun mengkudu dipilih pelarut terbaik yang
dihasilkan dari kromatografi lapis tipis, yaitu
heksana:etil asetat 1:1, heksana:etil asetat 2:1,
etil asetat:toluena 1:1, metanol:kloroform 1:9
etil asetat:diklorometana 7:3. Noda hasil elusi
oleh berbagai pelarut dilihat di bawah sinar
lampu ultraviolet pada panjang gelombang
254 dan 366 nm.
Fraksionasi dengan Kromatografi Kolom
(Rouessac & Rouessac 1994)
Fraksionasi dilakukan dengan pengemasan
kolom sebanyak 30 g silika gel untuk pemisa-
han 1.5 gram ekstrak dengan diameter 2 cm
dan tinggi kolom 30 cm. Pengemasan kolom
menggunakan silika gel 15-20 kali jumlah
ekstrak dan perbandingan tinggi adsorben dan
diameter kolom 8:1. Ekstrak etil asetat buah
dan daun mengkudu dilarutkan dalam eluen
terbaik, kemudian dipisahkan komponen-
komponennya dengan kolom kromatografi
dengan elusi gradien (peningkatan kepolaran).
Eluat ditampung setiap 5 mL dalam tabung
reaksi yang telah diberi nomor kemudian diuji
dengan KLT. Noda pemisahan dideteksi di
bawah lampu UV 254 nm dan 366 nm. Eluat
yang memiliki Rf dan pola KLT yang sama
digabungkan sebagai satu fraksi dan diuji
aktivitas antioksidan dengan KLT bioautogra-
fi sehingga diperoleh fraksi teraktif.
Penentuan Aktivitas Antioksidan (Hanani
2005)
Sebanyak 10 mg ekstrak dilarutkan dengan
metanol dalam labu takar 10 mL, maka
didapatkan konsentrasi 1000 ppm. Kemudian
ekstrak 1000 ppm diencerkan dengan menam-
bahkan metanol sehingga diperoleh ekstrak
dengan konsentrasi 10, 30, 50, 70, 90 ppm.
Masing-masing konsentrasi larutan contoh
dipipet 0.2 mL ke dalam vial, kemudian
ditambahkan 3.8 mL larutan DPPH 50 µM.
Campuran dihomogenkan dan dibiarkan sela-
ma 30 menit di tempat gelap. Serapan diukur
dengan spektrofotometer UV-tampak pada
panjang gelombang 515 nm. Sebagai pemban-
ding digunakan asam askorbat (konsentrasi 2,
3, 4, 5, 6 ppm) dengan perlakuan yang sama
dengan contoh uji. Nilai IC50 fraksi dan asam
askorbat dihitung dengan menggunakan ru-
mus persamaan regresi.
Persentase inhibisi =K ( S1 S0 )
100
K Kadar air pada contoh tidak selalu sama
K : absorbansi kontrol negatif/blanko DPPH
S1 : absorbansi contoh dengan penambahan
DPPH
S0 : absorbansi contoh tanpa penambahan
DPPH
Penentuan Kandungan Fenol Total (Chun
et al. 2003)
Kandungan fenol total fraksi ekstrak etil
asetat ditentukan menggunakan metode Folin-
Ciocalteau. Sebanyak dua mg ekstrak di-
larutkan dengan tiga mL metanol, maka
didapatkan konsentrasi ekstrak 2 mg/3 mL
pelarut. Sebanyak 200 μL larutan asam galat
berbagai konsentrasi (50, 75, 100, 125, 150
ppm) dan larutan contoh (2 mg/3 mL) ma-
sing-masing dimasukkan ke dalam labu takar
10 mL dan ditambahkan 3 mL akuabides.
Pereaksi Folin-Ciocalteu sebanyak 400 μL
ditambahkan ke dalam campuran lalu dihomo-
genkan. Setelah lima menit, 4 mL larutan
Na2CO3 7% ditambahkan ke dalam campuran
lalu dihomogenkan. Campuran ditambahkan
akuabides hingga tepat 10 mL. Selanjutnya
campuran didiamkan selama 90 menit,
kemudian diukur absorbansinya dengan
spektofotometer UV-tampak pada panjang
gelombang maksimum (750 nm). Kandungan
fenol total fraksi ekstrak etil asetat dinyatakan
sebagai mg ekuivalen asam galat/g bobot
contoh kering.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar Air
Serbuk buah dan daun mengkudu yang
diperoleh dari kebun Pusat Studi Biofarmaka
ditentukan kadar airnya. Penentuan kadar air
ini bertujuan menentukan jumlah air suatu
contoh sehingga dapat diketahui cara penyim-
panan yang terbaik agar tidak terjadi kerusak-
an contoh. Kadar air buah dan daun meng-
kudu yang diperoleh sebesar 13.27% dan
12.52% (Lampiran 3). Nilai yang diperoleh
>10% menunjukkan contoh tidak baik jika
disimpan dalam jangka waktu lama sehingga
contoh yang telah diekstraksi dan dipekatkan
harus segera dianalisis dengan memperhatikan
faktor koreksi. Serbuk contoh dikeringkan
terlebih dahulu sebelum diekstraksi. Penge-
ringan bertujuan agar contoh tidak mudah
rusak sehingga dapat disimpan dalam jangka
waktu yang lama karena dengan mengurangi
kadar air, kerusakan contoh oleh mikroba
dapat dihindari.
karena dipengaruhi oleh kelembaban, perla-
kuan terhadap contoh, dan besarnya peng-
uapan. Kandungan air dihilangkan dengan
pemanasan pada suhu 105 ºC. Menurut Har-
jadi (1993), air yang terikat secara fisik dapat
dihilangkan dengan pemanasan pada suhu
100-105 ºC.
Ekstrak
Sebelum serbuk contoh buah dan daun
mengkudu diekstraksi, komponen lemak atau
nonpolar dari contoh dihilangkan terlebih
dahulu menggunakan pelarut yang bersifat
nonpolar seperti heksana. Komponen nonpolar
yang terdapat dalam contoh dapat menggang-
gu proses analisis. Lemak dapat menghambat
penguapan pelarut pada saat ingin memper-
oleh ekstrak pekat. Selain itu, lemak dikhawa-
tirkan juga dapat terjerap dalam fase diam
pada saat analisis menggunakan kromatografi
(Kramer 1985).
Pelarut ekstraksi komponen aktif meng-
kudu yang digunakan adalah metanol. Meta-
nol merupakan pelarut yang dapat melarutkan
hampir semua senyawa organik yang ada pada
contoh, baik senyawa polar maupun semi
polar. Metanol mudah menguap sehingga
mudah dibebaskan dari ekstrak, dan metanol
lebih ekonomis dibandingkan dengan pelarut
organik yang lain. Ekstrak metanol yang
diperoleh kemudian diekstraksi cair-cair de-
ngan etil asetat. Menurut Zin et al. (2002),
ekstrak kasar etil asetat buah dan daun
mengkudu memiliki aktivitas antioksidan
tinggi. Heinicke (1985) menyatakan bahwa
senyawa antioksidan yang berperan besar di
dalam ekstrak etil asetat adalah alkaloid yang
terdapat di dalam buah dan daun mengkudu.
Metode ekstraksi yang digunakan adalah
maserasi karena cara ini merupakan metode
yang mudah dilakukan dan menggunakan alat-
alat sederhana, yaitu cukup dengan merendam
contoh dalam pelarut. Rendemen ekstrak etil
asetat buah dan daun mengkudu, yaitu 2.24%
dan 2.95% (Lampiran 4). Rendemen ekstrak
yang diperoleh tidak berbeda jauh dengan
hasil penelitian Jayaraman et al. (2008), yang
menunjukkan bahwa rendemen ekstrak etil
asetat buah mengkudu sebesar 1.90%. Rende-
men ekstrak etil asetat daun mengkudu sedikit
lebih besar karena mungkin senyawa kimia
yang memiliki sifat kepolaran sama dengan
etil asetat di dalam daun mengkudu jumlahnya
sedikit lebih besar daripada di dalam buahnya.
Ekstrak Teraktif
Pengujian potensi bahan sebagai penang-
kap radikal bebas dan antioksidan dilakukan
menggunakan KLT bioautografi karena mu-
dah, cepat, dan hanya membutuhkan jumlah
contoh yang sedikit. Bahan yang diujikan
antara lain ekstrak etil asetat (EA), ekstrak
metanol (EM), dan estrak metanol hasil
ekstraksi cair-cair dengan etil asetat (EMP)
dari buah dan daun mengkudu. Penentuan
ekstrak teraktif melalui KLT bioautografi,
yaitu berdasarkan penampakan warna noda
ekstrak dengan cara menyemprotkan larutan
DPPH 1 mM dalam metanol (Hanani 2005)
pada beberapa ekstrak mengkudu yang sudah
ditotolkan pada pelat kromatografi lapis tipis
dengan fase diam silika gel.
a b c d e f
Gambar 5 Profil KLT bioautografi dengan
larutan DPPH 1 mM dari (a) EA
buah, (b) EA daun, (c) EMP buah,
(d) EMP daun, (e) EM buah, (f)
EM daun.
Larutan DPPH menghasilkan warna ungu
pada pelat KLT. Komponen aktif bereaksi
dengan DPPH sehingga DPPH menjadi
bentuk tereduksinya dan ditandai dengan
berkurangnya intensitas warna ungu dari
larutan DPPH pada noda ekstrak. Ekstrak ter-
aktif dilihat pada noda-noda ekstrak yang
memiliki intensitas warna ungu yang rendah
atau terlihat paling pudar. Hasil pewarnaan
noda ekstrak dengan DPPH menunjukkan
bahwa ekstrak teraktif adalah ekstrak etil
aseatat (EA) buah dan daun mengkudu
(Gambar 5). Hal ini didukung oleh pernyataan
Zin et al. (2002) bahwa ekstrak metanol tidak
memiliki aktivitas antioksidan, sedangkan
ekstrak etil asetat buah dan daun mengkudu
memiliki aktivitas antioksidan yang tinggi.
Fraksi
Pelarut atau fase gerak yang akan
digunakan untuk fraksionasi ekstrak buah dan
daun mengkudu dipilih pelarut terbaik yang
dihasilkan dari kromatografi lapis tipis
(Lampiran 5). Noda hasil elusi oleh berbagai
pelarut dilihat di bawah sinar lampu
ultraviolet pada panjang gelombang 254 dan
366 nm. Pelarut yang akan dijadikan sebagai
penyusun fase gerak adalah pelarut yang
menghasilkan jumlah noda terbanyak dan
memiliki pemisahan yang baik.
Fraksionasi dilakukan terhadap ekstrak etil
asetat buah dan daun mengkudu. Fraksionasi
menggunakan eluen terbaik dengan perban-
dingan heksana:etil asetat (2:1) (Gambar 6).
Pemisahan dilakukan dengan elusi gradien
(peningkatan kepolaran), hal ini bertujuan
agar peningkatan polaritas sistem eluen
menyebabkan semua komponen akan terbawa
lebih cepat (Harvey 2000).
(a) (b)
Gambar 6 Profil KLT eluen terbaik heksana:etil
asetat (2:1) ekstrak etil asetat buah
(a) dan daun mengkudu (b). (Kondisi
KLT: plat KLT SiO2 60 F254, visual-
isasi noda: UV 254 nm dan 366 nm).
Elusi diawali dengan pelarut heksana,
kemudian campuran kedua pelarut dan di-
akhiri dengan pelarut etil asetat. Hasil pemi-
sahan ekstrak ditampung sebanyak 5 ml dalam
tiap tabung reaksi. Pemisahan ekstrak buah
mengkudu tersebut diperoleh 88 tabung
reaksi, sedangkan ekstrak daun menghasilkan
117 tabung reaksi. Hasil pemisahan dimo-
nitor dengan kromatografi lapis tipis (KLT).
Fase gerak yang digunakan dalam KLT adalah
eluen terbaik heksana:etil asetat (2:1). Pemi-
sahan dengan KLT dan kolom didasarkan
pada interaksi antara fase gerak, fase diam,
dan analat.
 Pergerakan suatu senyawa pada bidang Berdasarkan hasil uji fitokimia terhadap
adsorben tergantung pada kepolaran antara ekstrak dan fraksi 1 ekstrak buah mengkudu
eluen dengan senyawa tersebut. Fraksionasi (Tabel 1), menunjukkan bahwa ekstrak buah
ini menggunakan adsorben silika gel. Sifat mengkudu mengandung flavonoid, alkaloid,
dari silika gel adalah polar sehingga silika gel saponin, tanin, kuinon, dan triterpenoid.
akan mengikat senyawa yang bersifat polar Fraksi 1 ekstrak buah mengkudu mengan-
juga, sedangkan hubungannya dengan eluen, dung flavonoid, alkaloid, saponin, dan triter-
yaitu senyawa yang polar akan cepat bergerak penoid.
jika menggunakan pelarut yang polar begitu
juga sebaliknya (Harvey 2000). Senyawa yang Tabel 1 Uji fitokimia buah mengkudu
kurang polar akan keluar terlebih dahulu dari Senyawa Ekstrak Fraksi teraktif
kolom dengan eluen heksana dan dilanjutkan Alkaloid + +
dengan senyawa semi polar dengan campuran Meyer – +
kedua eluen, dan terakhir senyawa polar de- Wagner + +
ngan eluen etil asetat. Dragendorf + +
Noda yang terbentuk dapat dideteksi Flavonoid + +
dengan sinar UV pada panjang gelombang
Saponin + +
254 nm dan 366 nm. Pada panjang gelom-
Tanin + –
bang ini adanya senyawa yang berpendar jika
Kuinon + –
disinari dengan sinar ultraviolet sehingga noda
Triterpenoid + +
akan terlihat. Eluat dalam tabung reaksi yang
Steroid – –
memiliki pola dan Rf yang sama dijadikan
Keterangan: (-): tidak terdeteksi; (+): terdeteksi
satu fraksi. Fraksionasi buah mengkudu
menghasilkan 4 fraksi, sedangkan daun meng- Tabel 2 Uji fitokimia daun mengkudu
kudu menghasilkan 7 fraksi (Lampiran 6 dan
Lampiran 7). Senyawa Ekstrak Fraksi teraktif
Fraksi-fraksi yang diperoleh selanjutnya Alkaloid + +
diuji aktivitas antioksidannya secara bioauto- Meyer + +
grafi. Penentuan fraksi teraktif melalui KLT Wagner + +
bioautografi menghasilkan fraksi teraktif Dragendorf + +
ekstrak buah dan daun mengkudu adalah Flavonoid + +
fraksi 1 dan fraksi 5 (Gambar 7). Saponin – –
Tanin – –
Kuinon – –
Triterpenoid – –
Steroid + –
Keterangan: (-): tidak terdeteksi; (+): terdeteksi

Hasil uji fitokimia terhadap ekstrak dan

(a) (b)
Gambar 7 Profil KLT bioautografi dengan
larutan DPPH 1 mM dari fraksi
ekstrak etil asetat (a) buah
mengkudu (F1–F4), (b) daun
mengkudu (F1–F7).
Kandungan Fitokimia
Analisis fitokimia adalah salah satu cara
untuk mengetahui kandungan metabolit se-
kunder pada suatu tanaman. Analisis fitoki-
mia dilakukan dua kali, yaitu terhadap ekstrak
kasar dan fraksi teraktif buah dan daun
mengkudu.
fraksi teraktif daun mengkudu (Tabel 2),
menunjukkan bahwa ekstrak daun mengkudu
mengandung flavonoid, alkaloid, dan steroid.
Fraksi 5 ekstrak daun mengkudu mengan-
dung flavonoid dan alkaloid.
Hasil uji negatif pada analisis fitokimia
dapat disebabkan oleh rusaknya senyawa
ekstrak atau memang kandungan fitokimia
yang terdapat dalam contoh sangat kecil. Hasil
positif analisis fitokimia menunjukkan bahwa
kemungkinan golongan senyawa yang aktif
sebagai antioksidan pada buah dan daun
mengkudu adalah golongan senyawa flavo-
noid, alkaloid, dan terpenoid.
Aktivitas Antioksidan
Penentuan aktivitas antioksidan dari fraksi
teraktif mengkudu didasarkan pada penang-
kapan radikal bebas DPPH dan aktivitasnya
ditentukan menggunakan metode spektros-
kopi. Radikal bebas DPPH memiliki warna
ungu yang ditunjukkan oleh pita absorpsi
dalam pelarut metanol pada panjang gelom-
bang maksimum 515 nm (Lampiran 8).
Larutan DPPH diukur serapan cahayanya
dan dihitung aktivitas antioksidannya dengan
menghitung persentase inhibisi, yaitu banyak-
nya aktivitas senyawa antioksidan yang dapat
menangkap radikal bebas DPPH. Parameter
yang juga digunakan untuk pengukuran aktivi-
tas antioksidan dari mengkudu adalah IC50,
yaitu bilangan yang menunjukkan konsentrasi
ekstrak yang mampu menghambat aktivitas
DPPH sebesar 50%.
Penentuan nilai IC50 menggunakan persa-
maan kurva hubungan antara %inhibisi seba-
gai sumbu y dan konsentrasi fraksi antioksi-
dan sebagai sumbu x. Nilai IC50 dihitung
dengan cara memasukkan nilai 50% ke dalam
persamaan kurva sebagai sumbu y kemudian
dihitung nilai x sebagai konsentrasi IC50.
Perhitungan IC50 bertujuan menentukan besar-
nya konsentrasi senyawa antioksidan yang
diperlukan untuk dapat menghambat setengah
aktivitas radikal bebas. Semakin kecil nilai
IC50 menunjukkan semakin tinggi aktivitas
antioksidannya (Molyneux 2004). Radikal
bebas diharapkan dapat ditangkap oleh
senyawa antioksidan hanya dengan
konsentrasi yang kecil. Berdasarkan peng-
ujian aktivitas antioksidan, nilai IC50 untuk
fraksi teraktif buah mengkudu sebesar 38.18
ppm (Lampiran 9) dan nilai IC50 untuk fraksi
teraktif daun mengkudu sebesar 85.86 ppm
(Lampiran 10).
Gambar 8 Nilai IC50 dari fraksi teraktif buah,
daun mengkudu, dan vitamin C.
Gambar 8 menunjukkan bahwa nilai IC50
fraksi ekstrak buah mengkudu lebih kecil
daripada fraksi ekstrak daun, yang berarti
fraksi ekstrak buah mengkudu memiliki
aktivitas antioksidan lebih besar daripada
fraksi ekstrak daun mengkudu. Hal ini
berbeda dengan pernyataan Zin et al. (2002)
bahwa aktivitas antioksidan ekstrak daun
mengkudu lebih besar daripada ekstrak
buahnya. Perbedaan hasil diduga disebabkan
contoh yang dianalisis berbeda umur, asal dan
tempat tumbuh. Perbedaan ini menyebabkan
kandungan metabolit sekunder di dalam con-
toh berbeda sehingga aktivitas antioksidannya
juga berbeda.
Senyawa antioksidan seperti alkaloid,
flavonoid, asam fenol, alkohol, gula atau
glikosida di dalam buah mengkudu diduga
lebih banyak daripada di dalam daunnya,
sehingga menghasilkan aktivitas antioksidan
fraksi ekstrak buah yang lebih besar. Selain
itu, kandungan triterpenoid dan saponin yang
ditemukan di dalam fraksi ekstrak buah
mengkudu tidak ditemukan di dalam fraksi
ekstrak daun sehingga diduga senyawa selain
fenol ini berperan besar sebagai antioksidan.
Gambar 9 Reaksi antara senyawa flavonoid
dan DPPH (Williams et al.1995).
Reaksi yang terjadi antara senyawa
antioksidan (contoh flavonoid) dan DPPH
(Gambar 9) meliputi pemberian atom hidro-
gen dari senyawa flavonoid untuk mereduksi
radikal DPPH. Selanjutnya radikal aril dari
flavonoid mengalami resonansi dan memberi-
kan atom hidrogennya kembali kepada radikal
DPPH. Pembentukan kompleks antara anti-
oksidan dan DPPH bergantung pada kesta-
bilan dan potensial reaksi dari struktur
molekulnya. Berdasarkan mekanisme tersebut,
maka dapat dikatakan bahwa senyawa anti-
oksidan mempunyai sifat yang relatif stabil
dalam bentuk radikalnya (Williams et al.
1995). Sifat ini yang menyebabkan golongan
senyawa flavonoid, terpenoid, dan alkaloid
diduga senyawa yang berpotensi sebagai
antioksidan.
 Penelitian ini menggunakan asam askorbat
atau vitamin C sebagai kontrol positif anti-
oksidan. Molekul asam askorbat atau vitamin
C mereduksi dua radikal DPPH (2Z●) melalui
pelepasan dua atom hidrogennya, sehingga
membentuk DPPH nonradikal (Gambar 10)
(Blouis 1958). Senyawa ini mampu memberi-
kan atom hidrogennya kepada radikal bebas
sehingga aktivitasnya dapat diukur menggu-
nakan metode DPPH. Senyawa ini merupakan
salah satu antioksidan sekunder dan memiliki
cara kerja yang sama dengan vitamin E, yaitu
menangkap radikal bebas dan mencegah
terjadinya reaksi berantai (Praptiwi et al.
2006). Lampiran 11 menunjukkan bahwa nilai
IC50 asam askorbat sebesar 3.85 ppm. Hal ini
menunjukkan bahwa fraksi ekstrak dan vita-
min C mempunyai aktivitas antioksidan yang
kuat karena mempunyai IC50 kurang dari 200
ppm (Blouis 1958).
Gambar 10 Reaksi antara asam askorbat dan
DPPH (Blouis 1958).
Reaksi antara DPPH dan senyawa anti-
oksidan menghasilkan dehidrogenasi pada
molekul antioksidan, sedangkan DPPH ber-
ubah menjadi DPPHn dengan n menunjukkan
jumlah atom H yang diterima oleh DPPH dari
antioksidan. DPPH berwarna violet dan
DPPHn tak berwarna sehingga memung-
kinkan pengukuran dengan spektrofotometri
dari penurunan intensitas warna DPPH.
Absorbansi yang rendah menunjukkan kapasi-
tas penangkapan radikal DPPH yang lebih
tinggi.
Kandungan Fenol Total
Penentuan kadar senyawa fenolat total
menggunakan asam galat sebagai larutan
standar. Serapan maksimum asam galat
diperoleh pada panjang gelombang 750 nm
(Lampiran 12). Kurva kalibrasi larutan standar
asam galat dibuat terlebih dahulu dengan
konsentrasi 50; 75; 100; 125; 150 mg/L,
sebelum kadar fenol total diperiksa.
Pembuatan kurva kalibrasi berguna untuk
membantu menentukan kadar fenol dalam
contoh melalui persamaan regresi dari kurva
kalibrasi. Pemeriksaan larutan standar asam
galat menghasilkan kurva kalibrasi dengan
persamaan regresi y = 0,002x - 0,069 dan
harga koefesien korelasi (r) yaitu 0,9849.
Nilai r yang mendekati 1 membuktikan
bahwa persamaan regresi tersebut adalah
linier.
Konsentrasi larutan contoh dapat
ditentukan dengan menggunakan kurva
kalibrasi dengan cara mengukur absorbansi
contoh kemudian kadar fenolat total dalam
mengkudu dihitung dengan menggunakan
persamaan regresi linear.
Gambar 11 Kandungan fenol total dalam
fraksi teraktif ekstrak etil asetat
buah dan daun mengkudu.
Menurut Pratt & Hudson (1992), senyawa
fenol ditemukan di semua bagian tanaman
seperti buah, akar, bunga, batang, dan daun.
Gambar 8 menunjukkan bahwa fraksi 1 dari
ekstrak buah mengkudu mengandung 0.40 mg
ekuivalen asam galat /g bobot contoh kering,
sedangkan fraksi 5 ekstrak daun mengkudu
adalah 1.15 mg ekuivalen asam galat /g bobot
contoh kering (Lampiran 13). Hal ini
menunjukkan bahwa kandungan fenol total
dari buah mengkudu lebih kecil daripada
daunnya, sehingga hasil menunjukkan bahwa
tidak ada hubungan yang linier positif antara
aktivitas antioksidan ekstrak buah dan daun
megkudu dengan kandungan fenol totalnya
(Gambar 12). Hal ini tidak sesuai dengan
Rohman et al. (2006) yang menyatakan bahwa
terdapat hubungan yang linier positif antara
aktivitas antioksidan dengan kandungan fenol
total ekstrak buah mengkudu.
Gambar 12 menunjukkan bahwa kan-
dungan sejumlah senyawa fenol bukan satu
faktor utama aktivitas antioksidan, dan
senyawa selain fenol berperan penting
terhadap aktivitas antioksidan (Zin et al.
2004). Selain itu, tidak semua senyawa fenol
memiliki aktivitas antioksidan yang sama,
beberapa ada yang kuat dan lainnya lemah.
Senyawa fenol ini bekerja secara antagonis
atau sinergis saat bercampur dengan sesama
senyawa fenol atau senyawa selain fenol (Lien
et al. 1999). Berdasarkan hasil uji fitokimia,
diduga senyawa alkaloid dan flavonoid dalam
fraksi ekstrak buah dan daun berperan sebagai
antioksidan. Fraksi teraktif ekstrak buah
 mengkudu mengandung senyawa selain fenol
seperti triterpenoid dan saponin yang juga
berperan sebagai antioksidan. Hal ini didu-
askorbat, senyawa karotenoid dan minyak
atsiri di dalamnya juga berperan sebagai
antioksidan (Javanmardi et al. 2003).
Daun
Buah
Gambar 12 Hubungan antara aktivitas anti-
oksidan (IC50) dan kandungan
fenol total (mg ekuivalen asam
galat/g contoh kering).
SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan
Pemisahan ekstrak etil asetat buah dan
daun mengkudu menghasilkan 4 dan 7 fraksi.
Fraksi teraktif dari ekstrak buah dan daun
mengkudu memberikan nilai IC50 38.18 ppm
dan 85.86 ppm. Kandungan fenol total dalam
fraksi teraktif dari ekstrak buah dan daun
mengkudu, yaitu 0.40 mg ekuivalen asam
galat/g bobot contoh kering dan 1.15 mg
ekuivalen asam galat/g bobot contoh kering.
Berdasarkan hasil uji fitokimia, senyawa
alkaloid dan flavonoid berperan sebagai
antioksidan di dalam buah dan daun mengku-
du, serta senyawa selain fenol berperan besar
sebagai antioksidan di dalam buah mengkudu.
Saran
Penelitian lebih lanjut perlu dilakukan
untuk menguji hasil secara in vivo dan untuk
mengidentifikasi senyawa yang berperan se-
bagai antioksidan.
DAFTAR PUSTAKA
Abbott IA. 1992. La`au Hawai Traditional
Uses of Plants. Hawai: Bishop Musesum
Press.
[AOAC] The Association of Official
Analytical Chemist. 2006. Official
Methods of Analysis. Ed ke-18.
Washington DC: Association of Official
Analytical Chemist.
Blouis MS. 1958. Antioxidant Determi-
nations By The Use Of a Stable Free
Radical. Nature 181: 1199-1200.
Chun OK, Kim DO, Lee CY. 2003.
Superoxide Radical Scavenging Activ-ity
of The Major Polyphenols in Fresh Plums.
Journal of Agricultural and Food
Chemistry 51: 8067-8072.
Elkins R. 1998. Hawaiian noni (Morinda
citrifolia) Prize Herb of Hawaii and the
South Pacific. Utah: Woodland Pub-
lishing.
Furniss BS, Hannaford AJ, Smith PWG,
Tatchell AR, Vogel AI. 1989. Vogel’s
Textbook of Practical Organic Chemistry
4th. New York: Wiley.
Harjadi W. 1993. Ilmu Kimia Analitik Dasar.
Jakarta: Gramedia.
Hanani E, Abdul M, Ryany S. 2005.
Identifikasi Senyawa Antioksidan dalam
Spons Callyspongia sp dari Kepulauan
Seribu. Majalah Farmasi Indonesia 2: 127
– 133.
Harborne JB. 1987. Metode Fitokimia. K
Padmawinata & I Sudiro, penerjemah.
Bandung: Institut Teknologi Bandung.
Terjemahan dari: Phytochemical Methods.
Harvey D. 2000. Modern Analytical Chem-
istry. Washington DC: McGraw-Hill.
Heinicke RM. 1985. The pharmacologically
active ingredient of Noni. Bulletin of the
National Tropical Botanical Garden 165.
Hostettmann K, Terreaux C, Marston A,
Potterat O. Strategy for the Biological and
Chemical Evaluation of Plant Extracts.
1997. Journal of Planar Chromatography
10: 251-257.
Houghton J, Raman A. 1998. Laboratory
handbook for the Fractionation of Natural
Extract. London: Chapman & Hall.
Jayaraman SK, Manoharan MS, Illanchezian
S. 2008. Antibacterial, Antifungal and
Tumor cell suppression potential of
Morinda citrifolia fruit extracts.
International Journal of Integrative
Biology 1: 44-49.
Javanmardi J, Stushnoff C, Locke E, Vivan-co
JM. 2003. Antioxidant Activity and Total
Phenolic Content of Iranian Ocimum
Accessions. Journal of Agricultural and
Food Chemistry 83: 547-550.
Kahkonen MP, Hopia AI, Vuorela HJ, Rauha
JP, Pihlaja K, Kujala TS, Heinonen M.
1999. Antioxidant activity of extracts
containing phenolic compounds. Journal
of Agricultural and Food Chemistry 47:
3954-3962.
Khopkar. 2002. Konsep Dasar Kimia Analitik.
Saptorahardjo, penerjemah. Jakarta: UI
Press. Terjemahan dari: Basic Concept of
Analitical Chemistry.
Kikuzaki H, Nakatani N. 1993. Antioxidant
effects of some ginger constituents.
Journal of Food Science 58: 1407–1410.
Kramer RE. 1985. Antioxidants in Clove.
Journal of the American Oil Chemist`s
Society 62: 111-113.
Lien EJ, Ren S, Bui HH, Wang R. 1999.
Quantitative structure activity relation-ship
analysis of phenolic antioxidants. Free
Radical Biology and Medicine 26: 285–
294.
McClatchey W. 2002. From Polynesian
healers to health food stores: changing
perspectives of Morinda citrifolia
(Rubiaceae). Integrative Cancer Therapies
1: 110-120.
Michalowska AG, Korczak J, Hes M. 2007.
Purification process influence on green tea
extracs polyphenol content and antioxidant
activity. Acta Scientiarum Polonorum
Technology Aliment 6: 41-48.
Molyneux P. 2004. The use of the stable free
radical diphenylpicrylhydrazyl (DPPH)
for estimating antioxidant activity. Jounal
of Science Technology 26: 211-219.
Praptiwi, Dewi P, Harapini M. 2006. Nilai
Peroksida dan Aktivitas Anti Radikal
Bebas Diphenil Picrylhidrazil Hydrate
(DPPH) Ekstrak Metanol Knema laurina.
Majalah Farmasi Indonesia 17: 32-36.
Pratt DE dan Hudson BJF. 1990. Natural
Antioxidants Not Exploited Commer-
cially. Elsevier Applied Science 1: 239-
243.
Prior RL, Wu X, Schaich K. 2005.
Standardized methods for the
determination of antioxidant capacity and
phenolics in foods and dietary
supplements Journal of Agricultural and
Food Chemistry 55: 2698 A-J.
Rohman A, Riyanto S, Utari D. 2006.
Aktivitas antioksidan, kandungan fenolik
total dan kandungan flavonoid total
ekstrak etil asetat buah mengkudu serta
fraksi-fraksinya. Majalah Farmasi Indo-
nesia 17: 136-142.
Rouessac F, Rouessac A. 1994. Chemical
Analysis Modern Instrumentation Methods
and Techniques 2nd. New York: Wiley.
Vimala S, Adenan MI. 1999. Malaysian
tropical forest medicinal plants: a source
of natural antioxidants. Journal of
Tropical Forest Products 5: 32–38.
Wang MY, West BJ, Jensen CJ, Nowicki D,
Su C, Palu AK, Anderson G. 2002.
Morinda Citrifolia (noni): A literature
review and recent advances in noni
research. Acta Pharmacologica Sinica 23:
1127-1141.
Williams B, Cuvelier WME, Berset C. 1995.
Use of a Free Radical Method to Evaluate
Antioxidant Activity. Lebens-mittel-
wissenschaft und Technology 28: 25-30.
Zin M, Abdul H, Osman. 2002. Antioxidative
Activity of Extracts from Mengkudu
(Morinda citrifolia) Root, Fruit, and Leaf.
Food Chemistry 78: 227-231.
Zin M, Abdul H, Osman A, Saari N. 2004.
Antioxidative activities of chromato-
graphic fractions obtained from root, fruit
and leaf of Mengkudu (Morinda citrifolia
L). Food Chemistry 08: 048.
LAMPIRAN
Lampiran 1 Diagram alir penelitian

Simplisia sampel (buah,

daun mengkudu)

Penghilangan lemak
dengan heksana

Residu sampel bebas

lemak
Maserasi dengan Metanol

Ekstrak Metanol

Ekstraksi cair-cair dengan etil asetat

Ekstrak Etil asetat

Uji Fitokimia

Penentuan Eluen Terbaik Eluen terbaik

dengan KLT
Fraksionasi dengan
kromatografi kolom

Fraksi teraktif

Uji Fitokimia Penentuan Kandungan Analisis kuantitatif

Fenolik Total Aktivitas Antioksidan
Lampiran 2 Uji Fitokimia

a) Uji Alkaloid
0.1 gram sampel

ekstrak dengan 10 mL kloroform dan beberapa tetes amonia

saring
10 tetes H2SO4
lapisan asam +pereaksi

Dragendorf Meyer Wagner

endapan jingga endapan putih endapan coklat

b) Uji saponin, flavonoid, dan tanin

0.1 gram sampel

dilarutkan dalam 10 mL air panas

didihkan selama 5 menit
saring

kocok + 0.5 mg Mg + 10 mL FeCl3 1%

+1 mL HCl pekat
+ 1 mL amil alkohol

Busa 10 menit Merah/kuning/ Biru tua

jingga (flavonoid) (tanin)
saponin

c) Steroid/triterpenoid
0.1 gram sampel

dilarutkan dalam 25 mL etanol panas

uapkan pelarut
residu dilarutkan dalam eter

ekstrak eter

+ 3 tetes anhidrida asam asetat dan 1 tetes H2SO4 pekat

merah/ungu hijau/biru
(triterpenoid) (steroid)
Lampiran 3 Penentuan kadar air buah dan daun mengkudu

a) Kadar air buah mengkudu

Bobot cawan Bobot sampel Bobot cawan+sampel Kadar Air

Ulangan
kosong (g) (g) kering (g) (% b/b)
1 1.9672 3.0202 4.5870 13.26
2 1.8780 3.0109 4.4906 13.23
3 1.9915 3.019 4.6081 13.33
Rerata 13.27

b) Kadar air daun mengkudu

Bobot cawan Bobot sampel Bobot cawan+sampel Kadar Air

Ulangan
kosong (g) (g) kering (g) (% b/b)
1 1.9263 3.0278 4.569 12.72
2 1.9855 3.0210 4.6369 12.23
3 2.0331 3.0417 4.6913 12.61
Rerata 12.52

Contoh perhitungan ulangan 1 buah mengkudu:

Bobot sampel ((Bobot cawan sampel kering) Bobot cawan kosong)

Kadar air 100%
Bobot sampel
3.020 2 (4.5870 1.9672) gram
100%
3.0202 gram
13.25 %
 Lampiran 4 Penentuan rendemen ekstrak kasar buah dan daun mengkudu

Bobot ekstrak Bobot sampel Faktor Rendeman

Ekstrak
(g) (g) koreksi (% b/b)
Buah Etil asetat 2.9632 150.0061 1.1327 2.24
Daun Etil asetat 3.939 150.2231 1.1252 2.95

Contoh perhitungan ekstrak buah etil asetat:

100 kadar air
Faktor koreksi
100
100 13 . 2705
100
= 1.1327

Bobot Ekstrak
Re ndemen xfkx 100 %
Bobot sampel
2 . 9632 g
x1 . 1327 x100 %
150 . 0061 g
= 2.24%

Lampiran 5 Penentuan eluen terbaik menggunakan kromatografi lapis tipis

Pelarut Ekstrak etil asetat Nilai Rf

Heksana:etil asetat 2:1
Heksana:etil asetat 1:1
Metanol:kloroform 1:9
Etil asetat:dikorometana 7:3
Etil asetat:toluena 1:1
(1) 0.1125, (2) 0.1688, (3) 0.2250,
buah (4) 0. 3875, (5) 0.5813
daun (1) 0.1511, (2) 0.4250, (3) 0.5750
(4) 0.7688, (5) 0.7875, (6) 0.9819
buah (1) 0.2901, (2) 0.4074, (3) 0.5494
daun (1) 0.3703, (2) 0.5123, (3) 0.6296
(4) 0.7407, (5) 0.8765
buah (1) 0.5125, (2) 0.6500, (3) 0.7188
(4) 0.7688
daun (1) 0.5625, (2) 0.6375, (3) 0.7188
(4) 0.7625, (5) 0.8750
buah (1) 0.6173, (2) 0.7777
daun (1) 0.2592, (2) 0.6605, (3) 0.7777
(4) 0.8395, (5) 0.9136
buah (1) 0.4500, (2) 0.6375
daun (1) 0.1375, (2) 0.4375, (3) 0.6188
(4) 0.8563, (5) 0.9125
Lampiran 6 Hasil fraksionasi dan profil KLT hasil fraksionasi ekstrak etil asetat
buah mengkudu dengan eluen heksana:etil asetat (2:1)

F1 F2 F3 F4

Jarak spot Jarak tempuh

Tabung Fraksi Bobot Rendemen
dari garis eluen dari garis Rf
ke- ke- (gram) (% b/b)
awal (cm) awal (cm)
1−20 − − − − − −
21 6.6 7.9 0.84 1 0.2931 19.54
29 6.6 7.9 0.84
30 3.7 8 0.46 2 0.0384 2.56
1.7 8 0.21
33 3.8 8 0.48
1.6 8 0.20
35 3.7 8 0.46
1.5 8 0.19
40 3.7 8 0.46
1.5 8 0.19
41 3.7 8 0.46
1.8 8 0.23
42 3.7 8 0.46
1.6 8 0.20
43 1.8 8 0.23 3 0.0439 2.93
1.4 8 0.18
1 8 0.13
61 1.8 8 0.23
1.4 8 0.18
0.8 8 0.10
62 1.7 8 0.21
1.3 8 0.17
0.8 8 0.10
Lanjutan lampiran 6 Hasil fraksionasi ekstrak etil asetat buah mengkudu

Jarak spot Jarak tempuh

Tabung Fraksi Bobot Rendemen
dari garis eluen dari garis Rf
ke- ke- (gram) (% b/b)
awal (cm) awal (cm)
63 1.2 8 0.15 4 0.021 3.16
65 1.2 8 0.15
70 1.2 8 0.15
75 1.2 8 0.15
80 1.2 8 0.15
85 1.2 8 0.15
88 1.3 8 0.16

Lampiran 7 Hasil fraksionasi dan profil KLT hasil fraksionasi ekstrak etil asetat
daun mengkudu dengan eluen heksana:etil asetat (2:1)

F1 F2 F3 F4 F5 F6 F7

Jarak spot Jarak tempuh

Tabung Fraksi Bobot Rendemen
dari garis eluen dari garis Rf
ke- ke- (gram) (% b/b)
awal (cm) awal (cm)
1 7.8 8 0.98 1 0.0993 6.62
5 7.8 8 0.98
7 7.8 8 0.98
15 7.8 8 0.98
20 7.8 8 0.98
25 7.8 8 0.98
28 7.6 8 0.95
29 6.6 8 0.83 2 0.0252 1.68
31 6.6 8 0.83
32 6.9 8.1 0.85
33 6.9 8.1 0.85
34 6.9 8.1 0.85
35 6.8 8 0.85
36 6.8 8 0.85
Lanjutan lampiran 7 Hasil fraksionasi ekstrak etil asetat daun mengkudu

Jarak spot Jarak tempuh

Tabung Fraksi Bobot Rendemen
dari garis eluen dari garis Rf
ke- ke- (gram) (% b/b)
awal (cm) awal (cm)
37 6.90 8.1 0.85 3 0.2705 18.03
6.50 8.1 0.80
6.00 8.1 0.74
39 6.90 8.1 0.85
6.50 8.1 0.80
5.90 8.1 0.73
40 6.70 7.9 0.85
6.10 7.9 0.77
5.50 7.9 0.70
50 6.60 7.9 0.84
5.90 7.9 0.75
4.90 7.9 0.62
51 6.60 7.9 0.84
5.90 7.9 0.75
4.90 7.9 0.62
54 6.60 7.9 0.84
5.90 7.9 0.75
4.90 7.9 0.62
55 5.9 8 0.74 4 0.1469 9.79
4.9 8 0.61
3.90 8 0.49
2.70 8 0.34
57 5.90 8 0.74
4.90 8 0.61
3.80 8 0.48
2.70 8 0.34
59 5.90 8 0.74
5.00 8 0.63
3.90 8 0.49
2.70 8 0.34
61 5.90 8 0.74
4.90 8 0.61
3.90 8 0.49
2.70 8 0.34
Lanjutan lampiran 7 Hasil fraksionasi ekstrak etil asetat daun mengkudu

Jarak spot Jarak tempuh

Tabung Fraksi Bobot Rendemen
dari garis eluen dari garis Rf
ke- ke- (gram) (% b/b)
awal (cm) awal (cm)
62 3.80 8 0.48 5 0.5673 37.82
2.80 8 0.35
69 3.80 8 0.48
2.80 8 0.35
86 3.80 8 0.48
2.80 8 0.35
94 3.90 8 0.49
2.80 8 0.35
101 3.90 8 0.49
2.60 8 0.33
102 3.80 8 0.48 6 0.1913 12.75
3.00 8 0.38
2.00 8 0.25
108 3.80 8 0.48
3.10 8 0.39
2.00 8 0.25
110 3.80 8 0.48
2.90 8 0.36
1.90 8 0.24
111 3.80 8 0.48 7 0.1626 10.84
2.90 8 0.36
1.50 8 0.19
0.30 8 0.04
114 3.80 8 0.48
3.00 8 0.38
1.40 8 0.18
0.50 8 0.06
115−117 − − − − − −

Contoh perhitungan:

Rf = Jarak spot dari garis awal

Jarak tempuh eluen dari garis awal
= 7.8
8
= 0.98
Lampiran 8 Penentuan panjang gelombang maksimum larutan DPPH 0.05 mM

Panjang Panjang
Absorbansi Absorbansi
Gelombang (nm) Gelombang (nm)
500 0.455 515 0.494
501 0.460 516 0.494
502 0.464 517 0.493
503 0.468 518 0.492
504 0.472 519 0.491
505 0.476 520 0.489
506 0.479 521 0.487
507 0.482 522 0.484
508 0.485 523 0.482
509 0.487 524 0.479
510 0.489 525 0.475
511 0.491 526 0.471
512 0.492 527 0.467
513 0.493 528 0.463
514 0.494 529 0.458

λ maksimum= 515 nm

Panjang gelombang (nm)

Lampiran 9 Penentuan aktivitas antioksidan fraksi teraktif ekstrak buah meng-
kudu dengan metode DPPH

Kons Absorbansi Rerata IC50

Ulangan %Inhibisi
(ppm) smpl+dpph tanpa dpph %Inhibisi (ppm)
Blanko – 0.463 – – –
10 1 0.279 0.006 41.04
40.18
2 0.296 0.015 39.31
30 1 0.264 0.016 46.44
46.22
2 0.296 0.046 46.00
50 1 0.265 0.066 57.05 38.18
56.85
2 0.302 0.092 54.64
70 1 0.267 0.097 63.28
61.23
2 0.297 0.108 59.18
90 1 0.265 0.120 68.68
60.85
2 0.301 0.139 65.01

Konsentrasi ekstrak (ppm)

Contoh Perhitungan:

A blanko A sampel DPPH A sampel tan pa DPPH

% Inhibisi = x100 %
A blanko
0 , 463 0 , 279 0 , 006
= x100 %
0 , 463
= 41.04%

Perhitungan IC50 :
y = 0.341x + 36.98
50 = 0.341x + 36.98
13.02 = 0.341x
x = 38.18
Jadi, IC50 untuk fraksi aktif ekstrak etil asetat buah mengkudu = 38.18 ppm
Lampiran 10 Penentuan aktivitas antioksidan fraksi teraktif ekstrak daun meng-
kudu dengan metode DPPH

Kons Absorbansi Rerata IC50

Ulangan %Inhibisi
(ppm) smpl+dpph tanpa dpph %Inhibisi (ppm)
Blanko – 0.463 – – –
10 1 0.278 0.000 39.96
39.2
2 0.304 0.014 38.44
30 1 0.267 0.003 42.98
41.79
2 0.29 0.015 40.6
50 1 0.27 0.012 44.28
42.88
2 0.287 0.016 41.47
70 1 0.255 0.018 48.81
47.84
2 0.269 0.023 46.87
90 1 0.254 0.030 51.62
51.41
2 0.265 0.040 51.4 85.86
100 1 0.259 0.045 53.78
53.03
2 0.276 0.055 52.27
150 1 0.259 0.075 60.26
59.51
2 0.293 0.102 58.75
200 1 0.246 0.097 67.82
67.07
2 0.288 0.132 66.31
250 1 0.231 0.115 74.95
74.41
2 0.271 0.150 73.87
300 1 0.216 0.130 81.43
80.24
2 0.286 0.189 79.05

Konsentrasi ekstrak (ppm)

Contoh Perhitungan:
A blanko A sampel DPPH A sampel tan pa DPPH
% Inhibisi = x100 %
A blanko
0 , 463 0 , 278 0 , 000
= x100 %
0 , 463
= 39.96%

Perhitungan IC50 :
y = 0.145x + 37.55
50 = 0.145x + 37.55
12.45 = 0.145x
x = 85.86
Jadi, IC50 untuk fraksi aktif ekstrak etil asetat daun mengkudu = 85.86 ppm

Lampiran 11 Penentuan aktivitas antioksidan vitamin C dengan metode DPPH

Konsentrasi Rerata IC50

(ppm) Ulangan Absorbansi % Inhibisi %Inhibisi (ppm)
Blanko – 0.463 – –
2 1 0.352 23.97
2 0.350 24.41 23.90
3 0.355 23.33
3 1 0.275 40.60
2 0.272 41.25 40.75
3 0.276 40.39
4 1 0.229 50.54 3.85
2 0.225 51.40 50.97
3 0.227 50.97
5 1 0.162 65.01
2 0.160 65.44 65.08
3 0.163 64.79
6 1 0.098 78.83
2 0.086 81.43 79.19
3 0.105 77.32

Konsentrasi (ppm)
Contoh Perhitungan:

A blanko A sampel
% Inhibisi =
A blanko
0 , 463 0 ,352
= x100 %
0 , 463
= 23.97%

Perhitungan IC50 :
y = 13.49x - 1.986
50 = 13.49x - 1.986
51.986 = 13.49x
x = 3.85
Jadi, IC50 untuk vitamin C = 3.85 ppm

Lampiran 12 Penentuan panjang gelombang maksimum larutan standar fenol

asam galat 100 ppm

Panjang Panjang
gelombang (nm) Absorbansi gelombang (nm) Absorbansi
724 0.207 758 0.213
726 0.207 760 0.213
728 0.208 762 0.212
730 0.209 764 0.212
732 0.21 766 0.212
734 0.21 768 0.212
736 0.211 770 0.212
738 0.211 772 0.211
740 0.212 774 0.211
742 0.212 776 0.211
744 0.213 778 0.211
746 0.213 780 0.211
748 0.214 782 0.21
750 0.214 784 0.21
752 0.213 786 0.209
754 0.213 788 0.208
756 0.213 790 0.207
 λ maksimum= 750 nm

Panjang gelombang (nm)

Lampiran 13 Penentuan kandungan fenol total fraksi teraktif ekstrak buah dan
daun mengkudu

Kadar Fenol
Absorbansi terkoreksi Rerata (mg ekuivalen
Larutan
Absorbansi asam galat/g
ul 1 ul 2 ul 3 sampel kering)
Asam galat 50 ppm 0.047 0.047 0.039 0.0443 –
Asam galat 75 ppm 0.164 0.164 0.073 0.1577 –
Asam galat 100 ppm 0.221 0.188 0.156 0.1883 –
Asam galat 125 ppm 0.264 0.26 0.223 0.2490 –
Asam galat 150 ppm 0.348 0.328 0.314 0.3300 –
Daun 2 mg/3 ml 0.122 0.115 0.105 0.1140 1.15
Buah 2 mg/3 ml 0.085 0.102 0.086 0.0910 0.40

Konsentrasi asam galat (ppm)

Contoh perhitungan:

Perhitungan kadar fenol total fraksi 5 etil asetat daun mengkudu:

y = 0.002x - 0.069
0.1140 = 0.002x - 0.069
x = 69.09 ppm
Kandungan fenol total
= kadar fenol x konsentrasi fraksi x rendemen fraksi x rendemen ekstrak
69 . 09 mg fenol 3 mL 37 . 82 g fraksi kering 2 . 93 g ekstrak kering
= x x x
1000 mL 2 mg fraksi kering 100 g ekstrak kering 100 g sampel kering
= 1.15 mg/g sampel kering

Jadi, kandungan fenol total fraksi 5 etil asetat daun mengkudu adalah 1.15 mg
ekuivalen asam galat/g berat sampel kering.

Perhitungan kadar fenol total fraksi 1 etil asetat buah mengkudu:

y = 0.002x - 0.069
0.0910 = 0.002x - 0.069
x = 60.41 ppm

Kandungan fenol total =

60 . 41 mg fenol 3 mL 19 . 54 g fraksi kering 2 . 24 g ekstrak kering
x x x
1000 mL 2 mg fraksi kering 100 g ekstrak kering 100 g sampel kering
= 0.40 mg/g sampel kering

Jadi, kandungan fenol total fraksi 1 etil asetat buah mengkudu adalah 0.40 mg
ekuivalen asam galat/g berat sampel kering.