Darah

INTRUKSI
Darah dikultur untuk mendeteksi dan mengidentifikasi bakteri atau
mikroorganisme yang dapat diperolah seperti (ragi, fungi filamen). Kehadiran
organisme semacam itu dalam darah disebut bacterimia atau fungaemia, dan
biasanya patologis. Pada subyek yang sehat, darahnya steril. Namun, ada
beberapa pengecualian: sementara Bakteremia sering terjadi segera setelah
pencabutan gigi atau gigi lainnya.
Atau manipulasi bedah membran mukosa yang terkontaminasi, bronkoskopi,
atau kateterisasi uretra. Jenis bakteremia transien ini umumnya disebabkan
oleh bakteri komensal dan biasanya sembuh secara spontan melalui tes fagosit
bakteri di hati dan limpa. '

Septicemia adalah istilah klinis yang digunakan untuk menggambarkan bakteremia

dengan manifestasi klinis dari infeksi berat, termasuk demam dingin, demam,
malaise, toksisitas, dan hipotensi, bentuk ekstrim yang mengejutkan. Kejutan dapat
disebabkan oleh racun yang diproduksi oleh batang Gram negatif atau Gram positif.
Cocci

Kapan Dan dimana Baterimia terjadi

Bakteremia adalah ciri beberapa penyakit menular, mis. Brucellosis, lep- tospirosis dan
demam tifoid. Bakteremia persisten adalah ciri infeksi endovasis, mis. Endokarditis,
aneurisma yang terinfeksi dan tromboflebitis.

Bakteremia tiroid sering menyertai infeksi lokal seperti artritis, luka tidur,
kolesistitis, enterokolitis, meningitis, osteomielitis, peritoriitis, pneumonia,
pielonefritis, dan infeksi luka traumatis atau bedah. Ini bisa timbul dari
berbagai manipulasi bedah, tapi biasanya sembuh secara spontan pada subyek
sehat.

Bakteremia dan fungaemia dapat terjadi akibat pengenalan mikroorganisme

iatrogenik melalui jalur intravena: melalui cairan intravena, kateter, atau tusukan
gigitan yang terkontaminasi. Kedua jenis infeksi tersebut dapat berkembang pada
pengguna obat-obatan intravena dan subyek imunosupresi, termasuk dengan
human immunodeficiency virus / acquired immunodeficiency syndrome (HIV /
AIDS). Mereka disebabkan oleh mikroorganisme "oportunistik" dan mungkin
memiliki konsekuensi serius. Tabel 5 menunjukkan penyebab paling umum dari
bakteriemia atau fungaemia.

Pengempulan darah

Waktu pengumpulan darah

Bila memungkinkan, darah harus dikonsumsi sebelum pemberian
antibiotik. Waktu terbaik adalah saat pasien diperkirakan mengalami
kedinginan atau lonjakan suhu. Dianjurkan agar dua atau lebih disukai tiga
kultur darah ditahan, dipisahkan dengan interval kira-kira 1 jam (atau
kurang jika pengobatan tidak dapat ditunda). Lebih dari tiga kultur darah
jarang ditunjukkan. Kelebihan budaya berulang adalah sebagai berikut:

— - Kemungkinan hilangnya bakteriemia sementara berkurang;

- Peran patogen isolat "saprophytic"
 Table S. Common causes of bacteraemta or fungaemia

Organisme gram negatif Organisme gram postif

“ Escheriachia coli
Klebsiella spp.
Enterobacter spp.
Proteus Spp
Salmonella typhi
Salmonella spp. other than S. Typhi
Pseudomonas aeruginosa
Neisseria Meningitidis
Haemophilus Influenzae
Batecroides Fragilis (anaerobe)
Brucella spp
Burkholderia (pseudomonas)pseudomallei
(in cetain areas)
Sayzhyfococcus auzeus
S. epidermidis
alfa-HaemoIytic (vifidans) streptococci Strzy›fococcus
prieumon/be
E. heaths (group D)
S. pyogenes (group A)
S.agalactie (group B)
Listeria monocytogenes
Clostridium perfrigens
Peptostrep tococcus spp. (anaerobes)
Candida albicans and other yeast like
fungi (e.g.cryptococcus neoformans)

penting bahwa spesimen darah untuk kultur dikumpulkan sebelum memulai

terapi antimikroba empiris. Jika perlu, pilihan antimikroba dapat disesuaikan saat
tes suseptibilitas tersedia.

Kualitas darah
Karena jumlah bakteri per mililiter darah biasanya rendah, penting untuk
mengambil jumlah darah yang wajar: 10mI per veriepuncture untuk orang
dewasa; 2-5mI mungkin cukup untuk anak-anak, yang biasanya memiliki
tingkat bakteriemia yang lebih tinggi; Untuk bayi dan neonatus, 1-2 ml sering
kali paling banyak
Diperoleh. Dua tabung harus digunakan untuk setiap venepuncture: tabung
berventilasi pertama untuk pemulihan optimal mikroorganisme aerobik ketat,
tabung non-vented kedua untuk kultur anaerobik.

Desinfeksi kulit
Kulit di tempat venepuncture harus dipersiapkan dengan cermat
menggunakan desinfektan bakterial: 2% tinktur yodium, 10% polividin iodin,
alkohol 70%, atau 0,5% klorheksidin dalam alkohol 70% Desinfektan harus
dievakuasi pada kulit. Permukaan sebelum darah ditarik. Jika tingtur iodium
digunakan, harus dilarutkan dengan alkohol 70% untuk menghindari
kemungkinan iritasi kulit.
Bahkan setelah persiapan kulit yang hati-hati, beberapa bakteri bertahan di
lapisan kulit yang lebih dalam dan bisa mendapatkan akses ke darah, mis. S.
epidermidis, Propionibacterium, dan bahkan spora Clostridium.
Pseudobaeteraemia (kultur darah positif palsu) dapat terjadi akibat penggunaan
larutan antiseptik, jarum suntik, atau jarum suntik yang terkontaminasi. Isolasi
organisme lokal yang tidak biasa (misalnya Burkholderia (Pseudomonas)
cepacia, Pantagata (Enterobacter) agglomerans, os Serratia spp.) Di rumah sakit
yang sama harus menimbulkan kecurigaan terhadap infeksi nosokomial dan
mendorong penyelidikan Sumber kontaminasi lain adalah kontak atau jarum.
Dengan botol tidak steril (atau larutan), jika jarum suntik yang sama pertama kali
digunakan untuk memberikan darah untuk analisis kimia atau pengukuran
tingkat sedimentasi eritrosit.
ANTIKOAGULAN
Kegunaan dari Sodium Polyanethol Sulfonate (SPS) sebagai antikoagulan
sangat disarankan karena SPS juga menghambat efek antibakterial dari serum
dan fagositas. Jika darah segera ditambahkan ke volume yang cukup (50 ml)
dari broth dan dicampur secara menyeluruh untuk mencegah pembekuan, tidak
ada antikoagulan yang dibutuhkan. Dainjurkan agar botol biakan darah tersedia
di semua rumah sakit dan pusat kesehatan utama. Jika botol biakan darah tidak
tersedia, darah dapat di transfer ke laboratorium dalam tabung yang
mengandung larutan antikoagulan yang steril (sitrat, heparin, atau SPS). Setelah
diterima di laboratorium , samper darah semacam itu harus segera di pindahkan
ke botol biakan darah menggunakan teknik aseptic yang ketat. Darah yang
diambil tanpa antikoagulan, gumpalan darah yang beku dapat dipindakan secara
aseptic ke broth media yang ada di laboratorium dan serum digunakan untuk tes
serologis tertentu.

MEDIA KULTUR-DARAH

Pilihan Media Broth

Broth kultur darah dan tryptic soy broth (TSB) harus bisa mendukung
pertumbuhan dari semua bakteri yang signifikan secara klinis.

Jumlah dari Broth

Secara ideal, darah harus bercampur dengan 10 kali dari volume broth (5 ml
dari darah dalam 50 ml broth) untuk mengencerkan setiap antibiotic yang ada
dan untuk mengurangi efek bacterial yang ada pada serum manusia.

Botol Kultur-Darah
Botol Kultur-Darah (125 ml) dengan tutup ulir yang belum berlubang dan dan
karet diafragma yang harus digunakan. Mengisi botol dengan 50 ml dari media
dan kemudian kendurkan tutup ulir setengah putran. Tutup botol tabung dilapisi
dengan alumunium foil, dan autoclave botol selama 20 menit dalam suhu 120˚
C. Segera setelah di autoclave, selama botol dan media masih panas,
kencangkan tutupnya tanpa menghilangkan alumunium foilnya (jika tidak maka
penutupnya ridak akan steril). Saat madia sudah dingin, vakum parsial akan
dibuat di dalam botol, dimana akan memfasilitasi injeksi dari specimen darah
melalui diafragma.
Bagian atas penutup harus benar-benar didesinfeksi sebelum notol diinokulasi.
Sebelum di distribusikan dan digunakan, semua botol kultur darah harus
diperiksa dengan cermat untuk kepastiannya. Setiap media yang menunjukkan
kekeruhan seharusnya tidak boleh digunakan.
Jika tersangkanya adalah bakteri aerob (Pseudomonas, Neisseria) atau ragi,
botol harus dilepas dengan segera saat diterima di laboratorium, dengan
memasukkan jarum kapas steril melalui diafragma yang sebelumnya sudah
didesinfeksi. Jarum bisa dilepas begitu tekanan dalam botol mencapai tekanan
atmosfir. Botol kultur darah yang dijual kebanyakan juga mengandung karbon
dioksida, yang mana akan membangkitkan efek dalam pertumbuhan.

Pada Negara yang brucellosis sudah umum, penggunaan dari dipasik botol
kultur darah, dengan fase media dan fase media solid-miring pada satu
permukaan yang rata pada botol (Botol Castaneda), disarankan untuk
penanaman Brucella sp. Adanya karbon dioksida dibutuhkan untuk isolasi pada
kebanyakan stain dari B. abortus.
Pengolahan dari Kultur Darah
Waktu Inkubasi
Botol kultur darah harys diinkubasi pada suhu 35-37˚ C dan secara rutin
diperiksa dua kali sehari (paling tidak pada hari ke-3) untuk menandakan
mikrobakteri yang tumbuh. Kultur yang steril biasanya ditunjukkan dengan
lapisan dari sedimentasi darah merah yang ditutupi oleh agar kuning pucat
transparan. Pertumbuhan dibuktikan dengan :
- Deposit flokular di atas lapisan darah
- Kekeruhan di bawah permukaan
- Hemolisis
- Koagulasi dari broth
- Permukaan pellicle
- Gas yang dihasilkan
- Bintik-bintik putih pada permukaan datau di dalam lapisan darah.

Kapanpun pertumbuhan terluhat muncul, botol harus dibuka secara aseptic,

sedikit dari broth dihilangkan dengan loop steril atau pipet Pasteur, dan
mengolesi gram stain untuk melihat adanya mikroorganisme.
Sibkultur ditunjukkan dengan streaking menggunakan ose pada media yang
sesuai :
- Untuk batang gram negative : agar Mc Conkey, agar kligler iron, media MIU,
agar simmon sitrat.
- Untuk batang gram negative yang kecil : agar darah ;
- Untuk staphylococcus : agar darah dan agar mannitol salt
- Untuk streptococcus : agar darah dengan optochin, dan agar empedu aesculin,
basitrasin, dan pitingan telurit, agar darah domba untuk tes CAMP.

Untuk pemeriksaan rutin, tidak perlu menginkubasi kultur darah melebihi dari 7
hari. Pada beberapa kasus, Inkubasi mungkin berkepanjangan dari 7 hari, jika
Brucella atau organisme tersangka lainnya, pada kasus endokarditis, atau pada
pasien yang menerima antimikrobakteri.

Subkultur Buta dan Pengolahan Akhir

Beberapa mikroorganisme mungkin tumbuh tanpa memproduksi kekeruhan
atau terlihat perubahan dari broth. Organisme lainnya, contohnya pneumococci,
cenderung menjalani autolysis dan mati dengan cepat. Untuk alasan ini
beberapa laboratorium melakukan rutinitas penanaman pada coklat agar setelah
18-24 jam dari inkubasi. Penanaman buta mungkin dibuat pada akhir dari 7
hari dari inkubasi, dengan memindahkan beberapa tetes kultur darah yang
sudah tercampur (menggunakan pipet Pasteur steril) ke dalam tabung
tioglykolat broth, yang selanjutnya diinkubasi dan diamati dalam 3 hari.
Antibiogram
Bila staphylococci atau batang Gram negatif dicurigai, waktu yang berharga
dapat diselamatkan Melakukan secara langsung, tidak distandarisasi
menggunakan kaldu positif sebagai inokulum. Sebuah swab steril adalah
Dicelupkan ke dalam kaldu keruh, cairan berlebih diekspresikan, dan usapan
tersebut digunakan untuk menginokulasi Mueller Media Hinton seperti pada
metode standar (lihat halaman 110). Pembacaan sementara sering bisa
dilakukan Setelah 6-8 jam inkubasi. Pada 95% kasus, hasil yang diperoleh
dengan metode ini adalah di Kesepakatan dengan tes standar.

Kontaminasi
Kontaminasi kultur darah dapat dihindari dengan persiapan kulit yang cermat
dan oleh Kepatuhan terhadap prosedur aseptik yang ketat untuk inokulasi dan
subinokulasi. Namun, meski ideal Kondisi, 3-5% kultur darah tumbuh
"kontaminan" yang berasal dari kulit (S. epidermidis, P Acnes, Clostridium
spp., Diphtheroids) atau dari lingkungan (Acinetobacter spp., Bacillus spp.).
Organisme semacam itu, bagaimanapun, kadang-kadang dapat berperilaku
sebagai patogen dan bahkan menyebabkan endokarditis. Benar Infeksi harus
dicurigai dalam situasi berikut:

- jika organisme yang sama tumbuh dalam dua Botol spesimen darah yang
sama.
- Jika organisme yang sama tumbuh dalam budaya dari lebih dari satu contoh;
- Jika pertumbuhannya cepat (dalam waktu 48 jam);
- Jika isolat yang berbeda dari satu spesies menunjukkan hal yang sama Biotipe
dan profil kerentanan antimikroba.

Semua hasil budaya harus dilaporkan ke Dokter, termasuk kontaminan yang

diduga. Namun, untuk yang terakhir ini tidak diperlukan antibiogram
Dilakukan dan penyebutan yang tepat harus dilakukan pada slip laporan, mis.
Hektar propionibacterium (Skin commensal), Staphylococcus epidermidis
(kemungkinan kontaminan). Ini untuk keuntungan dari semua Prihatin untuk
menjalin komunikasi yang baik antara dokter dan petugas laboratorium.

Itu Identifikasi dua atau lebih agen dapat mengindikasikan bacteriemia

polymicrobial, yang dapat terjadi pada Pasien yang lemah, tapi mungkin juga
karena kontaminasi. Bakteremia "Anaerobik" sering terjadi Oleh beberapa
patogen; Misalnya satu atau lebih anaerob dapat dikaitkan dengan satu atau
lebih Aerob dalam bakteriemia fulminasi parah yang terkait dengan trauma atau
operasi parah yang melibatkan usus besar.