2.1.

Persiapan ekstrak mentah

Ekstrak kasar aseton disiapkan dengan maserasi 10 g tanaman dalam 100 mL aseton / air (70/30, V /
V) dan ekstrak kasar berair diperoleh dengan menggunakan 100 mL air steril. Maserasi dilakukan
dalam pengocok listrik selama 2 jam. Kemudian, pelarut dipulihkan dengan filtrasi menggunakan
kertas No.1 Whatman dan diuapkan dengan rotary evaporator. Ekstrak kasar yang diperoleh
diencerkan dalam air steril untuk mendapatkan suspensi 1 mg / mL [10,11].

2.2 Persiapan suspensi jamur

Empat ragi diuji: Candida albicans, Candida glabrata, Candida tropicalis dan Candida krusei. Masing-
masing dibudidayakan dalam kaldu dekstrosa Sabouraud dan diinkubasi pada suhu 30 8C selama 24
jam. Kemudian, sel-sel disaring dan dibilas dengan suspensi salin fosfat-buffered normal (PBS).
Suspensi jamur disiapkan dan diencerkan dengan PBS untuk memperoleh 107 CFU / mL [3]. Untuk uji
in vivo terhadap ragi, ukuran inokulum cukup untuk menyebabkan kematian tikus yang tidak diobati
adalah 1,5x104 CFU / mL; itu ditentukan dalam percobaan awal.

Microsporum persicolor dikultur di Sabouraud agar dan diinkubasi pada 28 8C selama 14 hari.
Setelah ini, suspensi konidia disiapkan dengan merendam permukaan miselium dengan PBS dan
penyaringan konidia. Konsentrasi yang digunakan adalah 107 konidia / mL [12].

2.3. Aktivitas antijamur in vitro

Ekstrak kasar diencerkan dalam air suling untuk mendapatkan konsentrasi yang berbeda dari 0,005
hingga 0,200 mg / mL. Suspensi jamur diinokulasikan pada cawan Petri yang mengandung agar
Sabouraud dan dosis berbeda dari ekstrak mentah. Waktu inkubasi 24 jam pada 30 8C diterapkan
untuk ragi. M. persicolor membutuhkan 48 jam pada 28 8C. Aktivitas antijamur dinyatakan dengan
pertumbuhan atau tidak ada pertumbuhan dan konsentrasi hambat minimum (MIC) ditentukan
untuk setiap ekstrak kasar [11].

2.4. Aktivitas antijamur in vivo terhadap ragi

Tikus C57BL6 diberi imunosupresi dengan 2 mg siklofosfat yang diberikan secara intraperitoneal
selama 4 hari sebelum infeksi, kemudian pada hari ketiga pasca infeksi. Hewan-hewan itu disimpan
di kandang yang bersih dan disajikan makanan yang diautoklaf dan air untuk menjaga lingkungan
steril selama percobaan [13]. Infeksi diinduksi secara intravena dan setelah 24 jam, ekstrak mentah
diberikan secara intravena selama 5 hari

pada konsentrasi 20 mg / tikus / hari. Kami menggunakan kelompok binatang

masing-masing berisi lima tikus. Angka kematian dipantau setiap hari [14]. Sebagai kontrol kami
menggunakan dua kelompok hewan: yang pertama adalah imunosupresi, terinfeksi dan tidak
diberikan ekstrak. Dan yang kedua tidak imunosupresi, tetapi

terinfeksi dan diberikan dengan 100 mg ekstrak yang diuji. Itu

kelompok pertama memberikan 100% mortalitas dan 0% kematian kedua.

2.5. Aktivitas antijamur in vivo terhadap M. persicolor

C57BL6 tikus imunosupresi oleh injeksi subkutan 500 mg estradiol valerat 4 hari sebelum infeksi.
Untuk setiap tikus, kami mencukur sedikit permukaan kulit dan menyemprotkan 10 mL suspensi
jamur. Ketika mikosis muncul, ekstrak mentah diberikan secara lisan selama 5 hari pada konsentrasi
20 mg / tikus / hari diencerkan ke dalam 250 mL air steril yang distilasi. Seperti aktivitas sebelumnya,
hewan-hewan itu dipelihara di kandang yang bersih dan disajikan makanan yang diautoklaf dan air.
Setiap kelompok berisi lima hewan. Lesi kulit diberi skor pada skala dari 0 (tidak terlihat lesi) menjadi
3 (kerak dan eritema signifikan) [12]. Sebagai kontrol kami menggunakan dua kelompok hewan: yang
pertama adalah imunosupresi, terinfeksi dan tidak diberikan dengan ekstrak. Dan yang kedua
terinfeksi dan diberikan 100 mg ekstrak kasar yang diuji, tetapi tidak diberi imunosupresif. Kelompok
pertama menunjukkan kerak dan eritema yang signifikan dan pada kelompok kedua, infeksi tidak
muncul. Percobaan dilakukan menurut Asosiasi Ilmu Hewan Eksperimental Aljazair. Izin untuk
menggunakan hewan telah disetujui oleh Departemen Mikrobiologi Terapan dan Ilmu Pangan,
Fakultas Ilmu Alam dan Hayati, Universitas Mohammed Seddik Ben Yahia.

3. Analisis statistik

Nilai rata-rata dari aktivitas antijamur in vitro dan in vivo dihitung menggunakan Microsoft Office
Excel 2007. Percobaan aktivitas antijamur in vitro diulang dua kali dan hasilnya dinyatakan sebagai
nilai rata-rata MICS T standard error of mean (SEM). Untuk aktivitas antijamur in vivo, kami
menggunakan kelompok hewan yang masing-masing berisi lima tikus. Hasilnya diperoleh dengan
menghitung persentase kematian.

4. Hasil

4.1. Aktivitas antijamur in vitro

Konsentrasi terendah dari ekstrak mentah yang tidak memberikan pertumbuhan terdaftar untuk
semua spesies (Gambar 1). Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak kasar aseton aktif terhadap
semua jamur. Candida albicans adalah spesies yang paling sensitif terhadap ekstrak ini, diikuti oleh
Candida glabrata dan M. persicolor. Ekstrak kasar berair memiliki aktivitas yang baik hanya melawan
Candida albicans; semua spesies lain membutuhkan MIC yang lebih besar (Tabel 1).

4.2. Aktivitas antijamur in vivo terhadap ragi

Aktivitas in vivo terhadap ragi menunjukkan bahwa ekstrak kasar aseton lebih aktif terhadap
Candida albicans, Candida glabrata dan Candida tropicalis (Gambar 2-4). Candida albicans
membutuhkan dosis terendah untuk memberikan 100% viabilitas, jadi itu adalah spesies yang paling
sensitif. Tapi, infeksi disebabkan oleh Candida krusei

tahan bahkan pemberian 100 mg aseton

ekstrak kasar (Tabel 2).

Di sisi lain, ekstrak mentah berair hanya aktif melawan Candida albicans dan Candida krusei: itu
memberi 100% viabilitas dengan masing-masing 60 mg dan 100 mg (Gbr. 5). Eksperimen ini diulang
dua kali dan memberikan hasil yang sama persis.
4.3. Kegiatan in vivo melawan M. persicolor

Mikosis yang disebabkan oleh M. persikolor diobati dengan pemberian 80 mg ekstrak kasar aseton,
jadi setelah empat hari pengobatan. Tapi ekstrak kasar berair kurang aktif terhadap spesies: lesi kulit
juga serius setelah hari kelima pengobatan (Gambar 6). Untuk mikosis ini acetone mentah

ekstrak adalah perawatan yang paling sesuai (Gbr. 7). Percobaan pada M. persicolor diulang dua kali
dan memberikan hasil yang sama persis.

Aktivitas in vitro menunjukkan bahwa ekstrak kasar aseton dan air aktif terhadap lima spesies. Tapi
ekstrak mentah aseton memberikan MIC yang terbaik. Cheruiyot et al., 2015 telah melaporkan
bahwa ekstrak berair Camellia sinensis aktif terhadap beberapa jamur patogen, terutama terhadap
Candida albicans, sesuai dengan temuan kami. Mereka juga menetapkan bahwa ekstrak air panas
lebih aktif daripada yang dingin. Tetapi mereka melaporkan bahwa Candida glabrata sangat sensitif
terhadap ekstrak air [11]. Dalam penelitian kami, kami mengamati bahwa spesies ini lebih dihambat
oleh ekstrak mentah aseton dan aktivitas in vivo mengkonfirmasi informasi ini. Hasil kami dapat
dianggap sebagai menarik karena Candida glabrata menjadi semakin resisten terhadap pengobatan
antijamur umum [15].

Kegiatan in vivo juga menunjukkan bahwa ekstrak kasar aseton adalah yang paling aktif terhadap
Candida albicans, Candida glabrata, Candida tropicalis dan M. persicolor. Sebuah penelitian
sebelumnya telah menetapkan bahwa ekstrak etanol berair dan yang paling efektif untuk mengobati
infeksi Candida dan dermatophycules [16]. Ini bertentangan dengan hasil kami karena ekstrak
mentah berair hanya aktif melawan Candida albicans, Candida glabrata dan Candida krusei, dan itu
membutuhkan MIC yang lebih besar. Aktivitas in vivo dari ekstrak ini terhadap M. persicolor juga
sangat rendah. Lebih tepatnya, ekstrak kasar berair lebih aktif daripada aseton hanya untuk aktivitas
in vivo melawan Candida krusei.

Candida albicans adalah spesies yang paling sensitif terhadap ekstrak kami. Beberapa penelitian
telah melaporkan bahwa spesies ini sangat penting

Candida albicans

Candida glabrata

Candida tropicalis

Candida krusei

sensitif terhadap ekstrak teh dan tahan terhadap antijamur standar

obat [4,17]. Dengan analogi, penelitian lain telah menunjukkan bahwa Candida albicans menjadi
lebih sensitif ketika ekstrak teh
Aseton ekstrak mentah 40 mg 80 mg 100 mg -

Ekstrak mentah berair 60 mg - - 100 mg