Produksi bioetanol dari hidrolisat asam dan enzimatik dari kultur mikroalga campuran

Budaya mikroalga campuran dianggap sebagai daerah penelitian yang menarik dibandingkan dengan budaya
murni tradisional untuk mendominasi risiko kontaminasi budidaya dan meningkatkan kelayakan ekonomi
produksi biofuel skala besar. Namun, pre-treatment dan produksi bioetanol dari budaya mikroalga campuran
belum dilaporkan. Oleh karena itu, penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi pengaruh strategi pre-treatment
yang berbeda termasuk hidrolisis asam, basa, dan enzimatik pada ekstraksi gula dari campuran mikroalga.
Selain itu, efek MgSO4 dan CaCl2 sebagai asam lewis dalam pre-treatment asam pada pengurangan hasil gula
dipelajari.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa campuran asam sulfat encer dan MgSO4 menunjukkan hasil gula yang
lebih tinggi daripada asam encer. Di antara semua pre-treatment yang digunakan, perawatan enzimatik dengan
enzim termostabil menunjukkan pemulihan tertinggi sebesar 0,951 g gula / gula total yang diekstraksi. Selain
itu, pra-perlakuan enzimatik dari mikroalga basah dibandingkan dengan yang kering pada kondisi operasional
yang sama dan konsentrasi biomassa kering 50 g / l, hasil gula yang sama dicapai yang akan menguntungkan
untuk mengurangi kebutuhan pengeringan biomassa mikroalga. . Fermentasi dari sampel yang diberi perlakuan
asam dan enzimatik ke etha-nol menggunakan Saccharomyces cerevisiae menunjukkan hasil 0,38 dan 0,46 g / g
glukosa, masing-masing sebesar 76% dan 92% dari nilai teoritis. Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa
hasil bioetanol setelah hidrolisis enzy-matic kultur mikroalga campuran lebih tinggi daripada hidrolisis asam.

PENDAHULUAN

Pertumbuhan populasi dunia yang cepat dan ekspansi ekonomi yang cepat telah menyebabkan peningkatan
tajam dalam konsumsi energi universal [1Ð3]. Oleh karena itu ada insentif yang kuat untuk mengurangi emisi
CO2 dan mengembangkan sumber energi lain sebagai alternatif untuk bahan bakar fosil [4]. Ganggang akan
menjadi kandidat yang baik untuk sumber energi terbarukan, menerima energi dari sinar matahari dan
membangun biomassa mereka dengan menghilangkan CO2 dari atmosfer melalui foto-sintesis [
Karbohidrat dalam mikroalga biomassa terutama pati dan selulosa (dengan tidak adanya lignin), sehingga
mereka lebih mudah terhidrolisis menjadi monosakarida dari bahan lignoselulosa lainnya [6]. Karbohidrat ini
dalam mikroalga tidak mudah difermentasi menjadi bioetanol, sehingga proses pre-treatment termasuk kimia
(asam dan basa) atau hidrolisis enzimatik sangat penting [7,8]. Biaya pre-treatment berkontribusi secara
signifikan terhadap total biaya proses konversi biomassa, hingga 30% [9]. Akibatnya, pre-treatment memiliki
potensi besar untuk peningkatan konversi bio-massa menjadi gula yang dapat difermentasi.

Untuk saat ini, studi produksi etanol dari gula yang berasal dari hidrolisis enzimatik ganggang oleh enzim
termostabil jarang [10]. Hidrolisis enzimatik menggunakan enzim termostabil memiliki keuntungan dalam
mengurangi kebutuhan akan perawatan pra-asam primer. Terlepas dari kenyataan bahwa ada beberapa penelitian
tentang bioetanol pro-duksi menggunakan mikro-budidaya murni [6,11,12] dan makroalga [13Ð 17], produksi
bioetanol dari budaya campuran ganggang belum dilaporkan

Budidaya mikroalga dalam budaya murni adalah penghalang utama untuk produksi biofuel skala besar karena
proses aseptis yang mahal. Di sisi lain, penerapan budaya campuran mikroalga adalah solusi yang diinginkan
untuk mendominasi risiko kontaminasi budidaya, beroperasi dalam kondisi yang berbeda, dan meningkatkan
kelayakan ekonomi. Dengan demikian, budaya campuran dianggap sebagai daerah penelitian yang menarik
dibandingkan dengan budaya murni tradisional. Mooij dkk. memperkenalkan konsep survival of the fat, strategi
untuk pengayaan spesies dengan produktivitas senyawa penyimpanan yang tinggi dalam kultur campuran
mikroalga [18]. Kemudian, Hassanpour dkk. menerapkan metode pengayaan gravi-metrik untuk skrining
karbohidrat dan lipid mengumpulkan spesies dalam budaya mikroalga campuran [19].

Dalam pekerjaan ini, ekstraksi gula dari budaya campuran mikroal-gae melalui strategi pre-treatment yang
berbeda termasuk asam, basa, hidrolisis enzimatik menggunakan enzim termostabil yang diinvestigasi dan
dibandingkan. Selanjutnya, hasil bioetanol dari gula yang dapat difermentasi berasal dari prosedur pra-perlakuan
yang berbeda dibandingkan melalui pembudidayaan ragi Saccharomyces cerevisiae

2. Bahan-bahan dan metode-metode

2.1. Mikroalga dan medium pertumbuhan

Budaya campuran asli mikroalga diperoleh dari daerah air tawar di Osku yang terletak di barat laut Iran (garis
lintang adalah 37.91523 dan bujur adalah 46.119901). Budaya telah diperkaya dengan menggunakan metode
gravimetri dalam urutan reaktor batch dalam penelitian sebelumnya untuk penyimpanan pati [19]. Sampel kultur
stok ini digunakan untuk menyiapkan pra-kultur untuk foto bioreaktor 12 L. Di bawah kondisi pra-budaya,
strain mikroalga ditumbuhkan dalam 1000 ml Erlenmeyer ßask dengan volume kerja 500 ml pada suhu sekitar
25 1 LC, pH 8,9, intensitas cahaya konstan 60 mmol m 2 s 1, dan tingkat agitasi konstan 150 rpm . Posisi com-
sedang adalah sebagai berikut (g / l): NaHCO3 (1,25); NaNO3 (0,8); KH2PO4 (0,2); MgSO4 (0,1); CaCl2 (0,1);
KCl (0,1) dan 2 ml / l elemen elemen solusi yang mengandung (konsentrasi dalam mg / l): EDTA (100); MnCl2
4H2O (10.12); FeSO4 7H2O (10); ZnSO4 7H2O (4.4); (NH4) 6Mo7O24 4H2O (3); CoCl2 6H2O (3,22);
CuSO4 5H2O (3.14).
Ketika densitas optik pada 688 nm menggunakan spektrofotometri UV-vis (Pharo 300, MERCK, Jerman)
mencapai 1,5, ganggang yang tumbuh dipindahkan ke foto-bioreaktor utama.

2.2. Desain dan pengoperasian foto-bioreaktor

The foto-bioreaktor (12 L) dengan volume kerja 10 L diinokulasi dengan media, yang pra-budidaya di 1000 ml-
Erlenmeyer ßask. Bioreaktor foto ini diterangi dengan sumber cahaya eksternal yang dipasang pada dua sisi
bioreaktor foto pada intensitas cahaya sekitar 260 mmol m 2 s 1 dan bekerja pada pH 8,9, 25 ± 1 LC dan tingkat
aerasi 8 vvm. Media yang dijelaskan di atas digunakan sebagai nutrisi dalam foto-bioreaktor. Bioreaktor foto
utama selalu diinokulasi dengan stok pra-kultur di mana kontaminasi mikroba dapat diabaikan. Pengamatan
mikroskopis biasa menggunakan penghitungan sel oleh Neubauer menghitung kamar menunjukkan bahwa
kontaminasi bakteri selalu kurang dari 2%, dan tidak ada protozoa yang diamati. Risiko kontaminasi
diminimalkan melalui pembaharuan budaya secara periodik dalam reaktor dengan stok pra-budaya.

2.3. Hidrolisis kimia

Dalam uji hidrolisis kimia, serbuk mikroalga dicampur secara terpisah dengan H 2SO4 (0,5, 1, 2 M), HCl (0,5, 1,
2 M), H3PO3 (0,5, 1, 2 M) dan NaOH (0,5, 1, 2 M). ). Selain itu, efek MgSO4 dan CaCl2 sebagai asam lewis
dalam pre-treatment asam pada mengurangi hasil gula dipelajari. Bubur yang dihasilkan kemudian diautoklaf
pada 121 LC selama 10, 20, 30, dan 40 menit. Setelah hidrolisis, sampel diizinkan mencapai suhu kamar.
Kemudian, sus-pensiun disentrifugasi pada 4000g selama 5 menit dan supernatan diambil untuk analisis
kandungan gula. Bahan kimia yang digunakan didasarkan pada referensi berikut.

Dalam studi yang dilakukan oleh Miranda dkk. [20], ekstraksi gula dari mikroalga S. obliquus diselidiki dengan
H2SO4, HCl dan NaOH dalam autoklaf pada 121 LC selama 30 menit. Ho et al.

[6] mikroalga pra-perlakuan C. vulgaris FSP-E dengan H2SO4 dalam autoklaf selama 20 menit. Nguyen dkk.
[21] menggunakan pra-perlakuan asam hidrotermal mikroalga Chlamydomonas reinhardtii dengan H2SO4
dalam bejana autoklaf pada suhu yang berbeda (100, 110, dan 120 LC) dari 15 hingga 120 menit. Zhou et al.
menyelidiki hidrolisis algae chlorella untuk gula yang dapat difermentasi dengan adanya HCl dan MgCl2 pada
180 LC dari 10 menit dan 120 LC dari 60 menit.

Enzim yang digunakan untuk menghidrolisis komponen karbohidrat (cel-lulosa dan pati) dalam mikroalga dibeli
dari perusahaan enzim alfa (Mashhad, Iran). Mereka termasuk termostabil b-glukosidase / selulase dari
Talaromyces emersonii, termostabil a-amilase Bacillus licheniformis (EC 3.2.1.1) dan amyloglucosi-dase dari
Aspergillus niger dengan kegiatan 1000 U / g, 145.000 TSAU / ml dan 600 AGU / ml, masing-masing.
Ringkasan kondisi optimal untuk enzim disajikan pada Tabel 1.

Untuk percobaan hidrolisis enzimatik, sampel dengan konsentrasi 50 g / l serbuk mikroalga kering dihidrolisis
dalam volume 20 ml berisi buffer sitrat dengan nilai pH 5,5. Mempertimbangkan suhu optimum untuk enzim
(tabel 1), biomassa dihidrolisis selama 3 jam oleh b-glukosidase / selulase (dilambangkan sebagai enzim 1), dan
a-amilase (dilambangkan sebagai enzim 2) pada 65 dan 95 LC, masing-masing. Untuk kantung-kasiasi
berikutnya, suhu dikurangi menjadi 55 LC dan amiloglukosidase (dilambangkan sebagai enzim 3) ditambahkan
dan dicampur selama 3 jam. Hidrolisis enzimatik dilakukan pada kecepatan agitasi 400 rpm dan total
pengurangan hasil gula dari waktu ke waktu diukur.
2.5. Fermentasi bioetanol

S. cerevisiae (ATCC 7921) dipertahankan dalam medium padat dengan komposisi sebagai berikut (konsentrasi
dalam g / l): pepton (5); ekstrak ragi (3); ekstrak malt (3); glukosa (10); dan agar (20) pada 4 LC. Setelah itu,
pra-kultur disiapkan dengan mentransfer sel-sel ragi dari piring agar ke dalam 250 ml-Erlenmeyer ßask yang
mengandung 100 ml media kultur yang mengandung (konsentrasi dalam g / l):
glukosa (100); KH2PO4 (3); MgSO4 (1); (NH4) 2SO4 (1); Ekstrak ragi

(10) dan 2 ml / l elemen elemen solusi. Erlenmeyer ßask diguncang di inkubator pada 150 rpm dan 30 LC untuk
menumbuhkan ragi aero-bically selama 24Ð48 jam. Pengukuran kerapatan optik pada panjang gelombang 600
nm (dilambangkan sebagai OD600) menunjukkan perilaku pertumbuhan eksponensial. Ketika OD600 mencapai
3 (fase pertengahan log), volume dari inokulum (3% v / v) disentrifugasi pada 4000g selama 5 menit, supernatan
diambil, dan kemudian ragi ditambahkan ke solution mengandung hidrolisa biomassa mikroalga. Hidrolisa asam
dari biomassa mikroalga (50 g / l) menggunakan 0,5 M H2SO4 dan 2,5% (w / v) MgSO4 dengan autoklaf pada
121 LC setelah 40 menit dan juga hidrolisa enzimatik dari biomassa kering dan basah (50 g / l) setelah 9 jam. ,
digunakan untuk proses fermentasi. Selain itu, pH mikroalga hidrolisat disesuaikan menjadi 6,5 untuk
memberikan pH yang sesuai untuk produksi etanol. Fermentasi dilakukan secara anaer pada 30 LC dikocok
pada 150 rpm.
2.6. metode analitis

Untuk penentuan padatan tersuspensi total (TSS), 40 ml kultur mikroalga disentrifugasi pada 4000g dan dicuci
dengan air suling. Kemudian supernatan diambil dan biomassa yang tersisa dikeringkan dengan oven pada 100
LC selama 24 jam sampai berat konstan tercapai. Kandungan abu ditentukan dengan menyalakan sampel kering
oven pada 550 LC selama 1 jam. Jumlah padatan tersuspensi volatil (VSS) dihitung oleh perbedaan antara TSS
dan kadar abu. Total karbohidrat biomassa mikroalga ditambang dengan metode anthrone [23]. Penentuan
konsentrasi residu nitrogen dilakukan menggunakan metode kolorimetri menurut Cataldo et al. (1975) [24].
Juga, total kandungan gula pereduksi mikroalga hidrolisat ditentukan dengan metode asam dinitros-alicylic
(DNS) menggunakan kurva standar yang disiapkan dengan glukosa [25]. Konsentrasi glukosa dan etanol
dianalisis menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC, detektor RI) dengan kolom Eurokat H. Semua
percobaan dilakukan dalam rangkap dua.

2.7. Perhitungan total gula reduksi, glukosa dan etanol hasil

Total pengurangan hasil gula dinyatakan sebagai konsentrasi gula pereduksi yang diekstraksi per konsentrasi
total karbohidrat dalam ganggang menurut persamaan berikut.

Selanjutnya, hasil glukosa dinyatakan sebagai konsentrasi glukosa yang diekstraksi per konsentrasi total
karbohidrat dalam alga. Hasil etanol dihitung dengan persamaan berikut:

3. Hasil dan Pembahasan

3.1. Budidaya mikroalga

Biomassa dan konsentrasi sisa nitrogen dalam med-ium medik dianalisis selama 37 hari; hasilnya digambarkan
pada Gambar. 1.

Seperti yang digambarkan pada Gambar. 1, setelah 29 hari, konsentrasi sel meningkat menjadi 1,96 g / l
sedangkan sumber nitrogen (NO3) benar-benar habis. Setelah itu, selama delapan hari berikutnya di bawah
kelaparan nitrogen dan kehadiran CO2, mikroalga terakumulasi karbon ,xed, terutama dalam bentuk
karbohidrat. Total kandungan karbohidrat dari biomassa mikroalga meningkat sekitar 20,1% dari VSS tanpa
adanya nitrogen. Peningkatan yang diamati adalah sesuai dengan studi sebelumnya pada budaya murni
mikroalga di bawah kelaparan nitrogen [26,27]. Juga, hasil yang diperoleh pada hari 37 menunjukkan bahwa
TSS, kadar abu, VSS, dan total konsentrasi karbohidrat mikroalga adalah 2,05, 0,41, 1,64 dan 0,596 g / l,
masing-masing. Oleh karena itu, persentase total karbohidrat dihitung menjadi sekitar 29% TSS atau 36% dari
VSS.
3.2. Hidrolisis biomassa mikroalga

3.2.1. Hidrolisis kimia

Asam encer terurai selulosa, dan pati dalam biomassa untuk melepaskan gula sederhana, yang dapat
difermentasi menjadi bioetanol [28,29]. Telah dilaporkan bahwa kinetik hidrolisis tergantung pada jenis
substrat, temperatur, konsentrasi asam, dan waktu reaksionisasi [29,30]. Pertama, efek konsentrasi biomassa
mikroalga pada pengurangan gula dan hasil glukosa melalui H2SO4 0,5 M dan waktu reaksi (10, 20, 30, dan 40
menit) dengan autoklaf pada 121 LC diselidiki (Gbr. 2).

Ketika konsentrasi biomassa mikroalga meningkat dari 25 menjadi 50 g / l, gula reduksi dan hasil glukosa
setelah 40 menit tetap konstan pada sekitar 86 dan 81%, masing-masing. Namun, ketika konsentrasi biomassa
mikroalga meningkat dari 50 menjadi 100 g / l, gula reduksi dan hasil glukosa menurun dari 86 dan 81%
menjadi sekitar 60 dan 54%, masing-masing. Konsentrasi mikro-massa mikroalga adalah faktor yang signifikan,
yang dapat dioptimalkan untuk mendapatkan hasil gula tertinggi. Oleh karena itu, konsentrasi biomassa
mikroba-gae yang sesuai adalah sekitar 50 g / l. Konsentrasi biomassa ini dipertimbangkan untuk percobaan
berikut.

Selain itu, pengaruh asam hidroklorat (0,5, 1, 2 M) dan konsentrasi asam sulfat (0,5, 1, 2 M), 0,5 M H2SO4 dan
2,5% (w / v) MgSO4, 0,5 M H2SO4 dan 2,5% ( w / v) CaCl2 menggunakan 50 g / l mikroal-gae dengan
autoclaving pada 121 LC pada waktu reaksi yang berbeda (10, 20, 30, 40 menit) pada efisiensi hidrolisis
mikroalga diinvestigasi dan hasilnya disajikan pada Gambar 3.

Seperti ditunjukkan pada Gambar. 3, peningkatan konsentrasi asam meningkatkan hasil ekstraksi gula. Dengan
demikian, dapat disimpulkan bahwa konsentrasi asam yang lebih tinggi menghasilkan tingkat perawatan yang
lebih tinggi [31]. Namun demikian, konsentrasi asam di atas 2 M, HCl 3 M dan H2SO4 3 M, menghasilkan gula
reduksi kurang sekitar 82% dan 84% setelah 40 menit, mungkin karena degradasi gula (data tidak ditampilkan).
Hasil ini sesuai dengan penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh Miranda dkk. [20]. Meskipun asam sulfat
umumnya digunakan sebagai katalis asam untuk mengubah banyak stok pakan menjadi gula yang dapat
difermentasi [32,33], ia melepaskan lebih sedikit gula daripada asam hidroklorik. Meskipun mekanisme yang
mendasari harus diselidiki lebih lanjut, hasil yang diperoleh adalah sesuai dengan Kim et al. [34] dan Israilides
dkk. [35]. Selanjutnya, Gambar. 3 menunjukkan bahwa hasil gula reduksi tertinggi adalah 94% menggunakan
HCl 2 M atau campuran H2SO4 0,5 M dan 2,5% (w / v) MgSO4 selama 30 menit, sementara mengurangi hasil
gula ketika pra-perlakuan dilakukan menggunakan H2SO4 0,5 M selama 30 menit diperoleh menjadi 72,18%.
Selain itu, hidrolisis biomassa mikroalga di hadapan MgSO4 dan tanpa H2SO4 0,5 M menghasilkan tidak lebih
dari 8,06% dari total gula pereduksi. Beberapa peneliti telah mengusulkan magnesium sulfat (MgSO4) dan
garam klorida (CaCl2) sebagai asam lewis mengkatalisis hidrolisis bio-massa [36], meskipun MgSO4 adalah
asam lewis yang lebih kuat [37].

Setelah itu, efek natrium hidroksida (0,5, 1, 2 M) dan asam fosfor (0,5, 1, 2 M) pada efisiensi hidrolisis
mikroalga dengan konsentrasi mikroalga 50 g / l dengan autoklaf pada 121 LC selama 20 dan 40 menit.
diselidiki dan hasilnya disajikan pada Gambar. 4.].

Hasilnya menunjukkan bahwa natrium hidroksida melepaskan lebih sedikit gula daripada asam klorida dan
sulfat, mungkin karena degradasi gula yang disebabkan oleh perlakuan alkalin yang kuat. Hasil ini sesuai
dengan Miranda dkk. bekerja [20]. Dari Gambar. 4, dapat juga diamati bahwa ketika biomassa alga diawali
dengan asam fosfat (2 M) selama 40 menit, hasil maksimum gula reduksi dan glukosa mencapai sekitar 48%
dan 42%. Namun demikian, nilai-nilai ini mencapai sekitar 80% dan 75,5% dalam perawatan yang dilakukan
dengan NaOH (2 M). Hasil serupa diamati oleh Kavitha et al. [38], mereka mencapai hasil glukosa maksimum
0,35 g / g ganggang dan 0,055 g / g ganggang dalam perawatan dilakukan dengan 4% NaOH dan 3% H3PO4 di
autoklaf pada 121 LC selama 40 menit, masing-masing. Oleh karena itu, dapat dikatakan bahwa di bawah
konsentrasi yang sama dan waktu hidrolisis, H3PO3, asam lemah, melepaskan lebih sedikit gula dan glukosa
dibandingkan dengan rekan-rekannya yang lebih kuat, NaOH, HCl dan H2SO4.
3.2.2. Hidrolisis enzimatik

3.2.2.1. Pengaruh komposisi enzim pada hasil hidrolisis mikroalga. Hidrolisis enzimatik dilakukan selama 9 jam
dan total pengurangan hasil gula dari waktu ke waktu diukur. Gambar. 5 menyajikan kompresi mengurangi hasil
gula antara enzimatik hidrolisis menggunakan 3 enzim, dan tanpa menambahkan enzim 1.

Seperti yang dapat dilihat pada Gambar. 5, setelah waktu reaksi 3 jam menambahkan enzim b-glukosidase /
selulase untuk menghidrolisis bi-massa mikroalga, total hasil gula reduksi mencapai sekitar 33,26%. Setelah-
bangsal, penambahan-amilase dan amiloglukosidase pada waktu 6 jam menyebabkan total mengurangi hasil
gula sekitar 93,64% dan 97,06%, masing-masing. Namun, penambahan a-amilase selama 3 jam tanpa b-
glukosidase / selulase menunjukkan total hasil gula pereduksi sekitar 61,19%, yang kemudian meningkat
menjadi 66,23% dengan penambahan amiloglukosidase. Selain itu, setelah waktu reaksi 9 jam, hasil glukosa
menggunakan 3 enzim, dan tanpa enzim 1 diukur menjadi 95,10% dan 64,01%, masing-masing. Dapat
dinyatakan, ketika b-glukosidase / selulase digunakan untuk menghidrolisis massa mikroalga, total gula reduksi,
dan hasil glukosa jauh lebih tinggi daripada tanpa b-glukosidase / selulase.

Seperti telah disebutkan, karbohidrat dalam biomassa mikroalga terutama selulosa dan pati. Molekul selulosa
adalah polimer glukosa yang dihubungkan bersama oleh ikatan glikosidik b-1, 4, berlawanan dengan ikatan
glukosidik a-1, 4 dan a-1, 6 untuk pati. Dalam pre-treatment enzimatik alga, b-glukosidase / selulase
terhidrolisis b-1, 4 glu-cosidic obligasi alga selulosa. Sedangkan, a-amilase mengkalutkan pati alga ke
oligosakarida melalui hidrolisis hubungan a-1, 4 glu-cosidic, dan kemudian amyloglucosidase menghidrolisis
ikatan a-1, 4 dan a-1, 6 glukosidik dari oligosakarida menjadi glukosa. Oleh karena itu, diinginkan untuk
menggunakan tiga enzim dalam pra-perlakuan enzimatik mikroalga, sehingga meningkatkan hasil hidrolisis
lebih jauh.

kondisi yang sama dijelaskan sebelumnya menggunakan Enzyme 1, Enzyme 2 dan Enzyme 3. Total mengurangi
hasil gula yang diperoleh dari mikroalga kering dan basah setelah hidrolisis enzimatik selama 9 jam adalah
sekitar 97,06% dan 93,85%, masing-masing. Seperti yang ditunjukkan hasil, efisiensi serupa dicapai tanpa
pengeringan biomassa mikroalga mengungkapkan pengurangan biaya proses pre-treatment. Harga proses pre-
treatment hingga 30% dari total biaya. Dengan demikian, pre-treatment memiliki potensi besar untuk
peningkatan konversi biomassa menjadi gula yang dapat difermentasi [9] .Hasil yang diperoleh dalam penelitian
ini menunjukkan kecukupan langkah hidrolisis enzimatik yang unik, tanpa kebutuhan akan pengeringan dan
perawatan pra-asam primer. langkah.

3.3. Produksi bioetanol

Produksi bioetanol hidrolisat biomassa mikroalga diselidiki menggunakan ragi dengan metode hidrolisis dan
fermen-tasi (SHF) terpisah. Ragi dimanfaatkan glukosa dan nutrisi lainnya dalam mikroalga hidrolisat untuk
produksi bioetanol. Konsumsi glukosa dan produksi etanol dari asam hidrolisis biomassa mikroalga
menggunakan 0,5 M H2SO4 dan 2,5% (w / v) MgSO4 dengan autoklaf setelah 40 menit dan juga hidrolisa
enzimatik dari biomassa kering dan basah selama 9 jam, digambarkan pada Gambar 6.

Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa ragi dapat menghasilkan 6,41 dan 6,01 g / l etanol dari 13,77 dan 13,3
g / l glukosa yang berasal dari mikroalga kering dan basah, masing-masing, menggunakan hidrolisis enzimatik
setelah

24 jam Hasil yang diperoleh adalah 0,46 dan 0,45 g / g glukosa, yang 92% dan 90% dari nilai-nilai teoritis untuk
mikroalga kering dan basah, masing-masing. Oleh karena itu, hasil etanol yang sama diperoleh tanpa
mengeringkan mikroalga mengungkapkan pengurangan biaya proses.

Ragi juga dapat menghasilkan 4,96 g / l etanol dari 13,05 g / l glu-cose yang berasal dari mikroalga
menggunakan hidrolisis asam (H2SO4 0,5 M dan 2,5% MgSO4 dengan autoklaf pada 121 LC pada 40 menit)
setelah 24 jam
Hasil dihitung menjadi 0,38 g / g glukosa, yang merupakan 76% dari nilai teoritis. Sebagai hasil menunjukkan
hasil bioetanol setelah hidrolisis enzimatik ganggang lebih tinggi daripada asam hidrolisis. Hasil yang diperoleh
dalam kesepakatan yang baik dengan makalah-makalah lain yang diterbitkan [39Ð41]. Namun, dalam studi
tersebut, produksi bioetanol dari budaya ganggang murni telah diteliti di sebagian besar hidrolisis enzimatik
yang membutuhkan bahan kimia primer atau pre-treatment fisik. Sebagai kesimpulan, hidrolisis enzimatik akan
sangat menjanjikan, karena hasil yang lebih tinggi, masalah korosi kurang, konsumsi utilitas yang lebih rendah,
dan produk kurang hambat [10]. Selain itu, ukuran inokulasi dalam produksi bioetanol penting dalam
menyelesaikan proses fermentasi. Oleh karena itu, pengaruh konsentrasi ragi terhadap hasil etanol juga
diinvestigasi. Ditemukan bahwa ketika volume inokulasi yang berbeda 3 dan 10% v / v dari kultur S. cerevisiae
ditambahkan ke media fermentasi yang mengandung hidrolisat mikroalga, 13.77 g / l glu-cose, waktu batch
dikurangi dari 24 menjadi 8 jam. Namun, hasil etanol independen dari ukuran inokulasi dan rata-rata 92% dari
teoritis.

4. Kesimpulan

Studi ini menunjukkan kelayakan ekstraksi gula dan produksi bioetanol dari budaya campuran mikroalga. Di
antara semua pre-treatment yang diselidiki untuk mengurangi ekstraksi gula, enzim yang paling baik termasuk
b-glukosidase / selulase, a-amilase, dan amiloglukosidase secara efektif dapat menghidrolisis mikroalga bio-
massa untuk produksi etanol. Hasil yang diperoleh dalam penelitian menunjukkan bahwa untuk ekstraksi gula,
langkah hidrolisis yang unik (hidrolisis enzy-matic tanpa perlu pengeringan dan pra-perlakuan asam primer)
cukup memadai dan karena itu biaya proses pre-treatment dapat menurun. Setelah pra-perlakuan, glukosa dalam
hidrolisat asam dan enzimatik mikroalga diubah menjadi etanol menggunakan S. cerevisiae dengan nilai hasil
0,38 dan 0,46 g / g glukosa, masing-masing adalah 76% dan 92% dari yang teoritis. Akhirnya, dapat dinyatakan
bahwa fermentasi glukosa setelah hidrolisis enzimatik menunjukkan hasil bioetanol yang lebih tinggi
dibandingkan dengan hidrolisis asam mikroalga.