LaboratoriumTeknik Lingkungan 16 (2). 1-5.

Desember 2018

STERILISASI DAN PEMBUATAN MEDIA MIKROBIA

Mulyani1, Nurul Huda2 dan Ika. Oksi. Susilawati,3

1
Teknik Lingkungan, Fakultas Teknik, Universitas Lambung Mangkurat, Jalan Jend A. Yani Km 36,
Banjarbaru, 70714, Indonesia
2,
Laboratorium Mikrobiologi, FMIPA, Universitas Lambung Mangkurat, Jalan Jend A. Yani Km 36,
Banjarbaru, 70713, Indonesia
1
E-mail: mulyani.apps27@gmail.com

Abstrak
Sterilisasi dalam mikrobiologi adalah suatu proses untuk mematikan semua organisme yang terdapat
pada atau di dalam suatu benda. Ada tiga cara utama yang umum dipakai dalam sterilisasi
penggunaan panas, penggunaan bahan kimia, dan penyaringan (filtrasi). Bila panas yang digunakan
bersama-sama dengan uap air maka disebut dengan sterilisasi panas lembab atau sterilisasi basah,
bila tanpa kelembaban disebut dengan sterilisasi panas kering atau sterilisasi kering. Sedangkan
sterilisasi kimiawi dapat dilakukan dengan menggunakan gas atau radiasi. Medium adalah suatu
bahan yang terdiri dari campuran zat-zat hara (nutrient) yang berguna untuk membiakkan mikroba.
Isolasi dapat dilakukan dengan menggunakan bermacam-macam media, perbanyakan, pengujian
sifat-sifat fisiologis dan perhitungan sejumlah mikroba. Metode yang digunakan dalam praktikum ini
adalah memasukkan medium NA sebanyak 20 gram/L dan medium PDA sebanyak 39 gram/L ke
dalam erlenmeyer. Setelah itu, memasukkan 75 mL akuades ke dalam Erlenmeyer yang sudah berisi
medium, kemudian memanaskan medium dengan hot plate. Medium yang sudah dipanaskan,
diangkat dan di dinginkan. Setelah itu, mulut erlenmeyer disumbat dengan kapas dan ditutup kertas
serta diikat dengan karet. Medium disterilkan dengan autoklaf selama kurang lebih 15 menit,
kemudian diangkat dan disimpan. Perhitungan pada Medium Nutrient Agar (NA)yang di dapat adalah
1,5 gram dan Medium Potato Dextrose Agar (PDA) adalah 2,92

Kata kunci: sterilisasi, mikrobia, medium Nutrient Agar (NA), Medium Potato Dextrose Agar (PDA)

I. Pendahuluan sterilisasi sering dipakai untuk

Mikroorganisme dapat ditumbuhkan
dan dikembangkan pada suatu substrat
yang disebut medium. Medium yang
digunakan untuk menumbuhkan dan
mengembangbiakkan mikroorganisme
tersebut harus sesuai susunanya dengan
kebutuhan jenis-jenis mikroorganisme
yang bersangkutan. Beberapa
mikroorganisme dapat hidup baik pada
medium yang sangat sederhana yang
hanya mengandung garam anargonik
ditambah sumber karbon organik seperti
gula. Sedangkan mikroorganime lainnya
memerlukan suatu medium yang sangat
kompleks yaitu berupa medium
ditambahkan darah atau bahan-bahan
kompleks lainnya.
Sebelum melakukan praktikum
mengenai peralatan yang ingin kita
gunakan harus disterilkan dahulu.
Sterilisasi atau suci hama yaitu proses
membunuh segala bentuk kehidupan
mikroorganisme yang ada dalam
sampel/contoh, alat-alat atau lingkungan
tertentu Dalam bidang bakteriologi kata
menggambarkan langkah yang diambil
agar mencapai tujuan meniadakan atau
membunuh semua bentuk kehidupan
mikroorganisme (Gabriel, 1996).
Praktek sterilisasi medium dan
alat-alat secara umum dapat dilakukan
secara fisik (misalnya pemanasan,
pembekuan, penge-ringan, liofilisasi,
radiasi), secara kimiawi (misalnya
antiseptik, disinfektan), secara bio-logis
(dengan antibiotika). Sterilisasi dengan
antibiotika tidak umum digunakan, tetapi
lebih banyak digunakan untuk tujuan
khemoterapi (pegobatan). Pemilihan cara
sterilisasi yang akan dipakai tergantung
dari beberapa hal misalnya macam
bahan dan alat yang disterilkan,
ketahanan terhadap panas, dan bentuk
bahan yang disterilkan (padat, cair, atau
berbentuk gas) (Waluyo, 2008). Pada
praktikum kali ini ala-alat yang digunakan
di sterilkan dengan cara dibungkus dan di
ikat dengan karet kemudian dimasukan
kedalam autoklaf selama 15 menit,
kemudian diangkat dan disimpan.

1
LaboratoriumTeknik Lingkungan 16 (2). 1-5 Desember 2018

Selama sterilisasi alat, media dan

bahan perlu disterilkan. Media adalah
susunan bahan baik bahan alami (seperti
tauge, kentang, daging, telur, wortel dan
sebagainya) ataupun bahan buatan
(berbentuk senyawa kimia, organik
ataupun anorganik) yang dipergunakan
untuk pertumbuhan dan Gambar 1 : Medium Nutrient Agar (NA)
perkembangbiakan mikroba.
Mikroorganisme memanfaatkan nutrisi Perhitungan :
media berupa molekul-molekul kecil yang Tsm/L media NA = 20 gr/L
dirakit untuk menyusun komponen sel. Volume needed (Vn) = 75 mL
Media adalah sarana pertumbuhan untuk Volume Total = 1000 mL
melakukan isolasi mikroorganisme
menjadi kultur murni dan juga
memanipulasi komposisi media
pertumbuhannya (Hidayat, 2006).

II. Materi & Metode

Alat
Alat-alat yang digunakan pada
praktikum percobaan kedua adalah labu
2. Medium Potato Dextrose Agar (PDA)
ukur, erlenmeyer, hot plate, magnetic stir,
neraca analitik, autoclave dan inkubator.

Bahan
Bahan-bahan yang digunakan
pada praktikum percobaan kedua adalah
nutrien agar, kentang dan akuades.
Metode yang digunakan dalam
praktikum ini adalah memasukkan
medium NA sebanyak 20 gram/L dan Gambar 2 : Medium Potato Dextrose Agar
medium PDA sebanyak 39 gram/L ke (PDA)
dalam erlenmeyer. Setelah itu,
memasukkan 75 mL akuades ke dalam Perhitungan :
Erlenmeyer yang sudah berisi medium, Tsm/L media PDA = 39 gr/L
kemudian memanaskan medium dengan Volume needed (Vn) = 75 mL
hot plate. Medium yang sudah Volume Total = 1000 mL
dipanaskan, diangkat dan di dinginkan.
Setelah itu, mulut erlenmeyer disumbat
dengan kapas dan ditutup kertas serta
diikat dengan karet. Medium disterilkan
dengan autoklaf selama kurang lebih 15
menit, kemudian diangkat dan disimpan.

III. Hasil dan Pembahasan

A. Hasil
1. Medium Nutrient Agar (NA) B. Pembahasan
Sterilisasi merupakan proses untuk
mematikan semua mikroorganisme yang
hidup. Adanya pertumbuhan mikro
menyatakan bahwa pertambahan bakteri
masih berlangsung dan tak sempurnanya

2
LaboratoriumTeknik Lingkungan 16 (2). 1-5
proses sterilisasi. Sterilisasi merupakan
metode praktis yang dirancang untuk
membersihkan dari mikroorganisme, atau
sengaja untuk menghambat
pertumbuhannya. Mikroorganisme sangat
berbeda, dalam kelemahannya terdapat
berbagai macam agen antimikroba
(Suriawiria, 2005).
Sterilisasi dapat didefinisikan sebagai
setiap proses yang secara efektif
membunuh atau menghilangkan agen-
agen penular (seperti jamur, bakteri, virus)
dari permukaan, peralatan, makanan,
obat-obatan atau media-media biologis.
Sebuah tingkat jaminan sterilitas (SAL)
10-6 berarti bahwa ada kurang dari atau
sama dengan satu kesempatan dalam
sejuta itu barang tertentu terkontaminasi
atau tidak steril mengikuti proses
sterilisasi (Gupta & Shukshith, 2016).
Medium merupakan bahan yang
digunakan untuk menumbuhkan
mikroorganisme di atas atau di dalamnya,
medium tersebut harus memenuhi syarat-
syarat, antara lain adalah harus
mengandung semua zat hara yang mudah
digunakan oleh mikroba, harus
mempunyai tekanan osmosis, tegangan
permukaan dan pH yang sesuai dengan
kebutuhan mikroba yang akan
ditumbuhkan, tidak mengandung zat-zat
yang dapat menghambat pertumbuhan
mikroba, harus berada dalam keadaan
steril sebelum digunakan, agar mikroba
yang di tumbuhkan dapat tumbuh dengan
baik. Percobaan kali ini yaitu pembuatan
medium NA dan PDA.
NA (nutrient agar) digunakan sebagai
media pertumbuhan bakteri pada
percobaan ini, dimana dalam
pembuatannya terlebih dahulu dengan
cara menimbang bahan yang akan
digunakan kedalam neraca analitik sesuai
dengan jumlah yang diperlukan, namun
dalam percobaan ini perbandingan
medium sudah disiapkan dalam bentuk
cawan dimana tiap 1 cawan setara
dengan 15 ml akuades, sehingga tiap
jumlah cawan yang digunakan dikalikan
dengan 15 ml sehingga didapat komposisi
bahan yang akan digunakan, dimana
pada praktikum kali ini digunakan
sebanyak 5 buah cawan Na sehingga
jumlah akuades yang akan digunakan
adalah 75 ml. Kemudian dicampurkan
Desember 2018
kedalam sebuah erlenmeyer, setelah itu
erlenmeyer dipanaskan diatas hot plate di
ikuti oleh pengadukan dengan
menggunakan magnetic stir, tujuan dari
pemanasan dan pengadukan ini adalah
untuk menghomogenkan NA dengan
akuades, dimana dengan pemanasan
dapat mempercepat pelarutan dari NA dan
akuades. Setelah dipanaskan beberapa
menit larutan berubah warna dari keruh
menjadi kuning kecoklatan hal ini
menandakan larutan telah homogen.
Kemudian dimasukkan kedalam
autoclave dengan mulut erlenmeyer
disumbat dengan kapas dan dilapisi
kertas diluarnya. Pada perhitungannya
75ml akan dibagi dengan volume total
yaitu 1000ml kemudian dikalikan dengan
Tsm/L dari Na yaitu 20 gr/L sehingga
didapat nilai 1,5 gr. Pembuatan NA
berdasarkan konsistennya termasuk
medium padat dan menurut kegunaannya
termasuk medium umum.
PDA (Potato Dextrose Agar)
digunakan untuk menumbuhkan fungi
atau jamur, dimana dalam pembuatannya
terlebih dahulu dengan cara memasukkan
5 cawan PDA kedalam erlenmeyer
beserta 75ml akuades sesuai dengan
ketentuan perbandingan pada percobaan
kali ini yaitu 1 cawan PDA setara dengan
15ml akuades. Setelah dicampurkan
kemudian erlenmeyer dipanaskan diatas
hot plate dengan dibantu magnetic stir
agar dapat teraduk. Tujuan dari
pemanasan dan pengadukan ini adalah
untuk menghomogenkan PDA dengan
akuades. Setelah dipanaskan lalu
erlenmeyer dimasukkan kedalam
autoclave tetapi sebelum dimasukkan
mulut erlenmeyer ditutup dengan kapas
dan kemudian dibungkus dengan kertas,
hal ini bertujuan agar meminimalkan
kontaminasi. Pada perhitungannya 75ml
akan dibagi dengan volume total yaitu
1000ml kemudian dikalikan dengan Tsm/L
dari PDA yaitu 39 gr/L sehingga didapat
nilai 2,92 gr. PDA termasuk medium
nonsintetik karena termasuk medium
padat sedangkan menurut fungsinya
termasuk medium umum.
Alkohol atau (alkanol) adalah istilah
yang umum untuk senyawa organic yang
memiliki gugus hidroksil (-OH) yang terikat
pada atom karbon dan hydrogen atau
3
LaboratoriumTeknik Lingkungan 16 (2). 1-5
karbon lainnya. Alkohol merupakan
denaturan protein merupakan sifat utama
yang memberikan aktivitas antimicrobial
pada alkohol. Alkohol juga merupakan
pelarut lipid sehingga merusak membran
sel. Alkohol yang umum dipakai pada
sterilisasi adalah alcohol 70% karena
efektif memecah protein yang ada dalam
mikroorganisme (Adji & dkk, 2007)
Membungkus cawan dan menyumbat
erlenmeyer memerlukan teknik khusus
dalam pengerjaannya. Cara membungkus
cawan pada praktikum percobaan kedua
ini adalah pertama-tama menyipkan
kertas (boleh menggunakan kertas bekas)
letakkan cawan ditengah-tengah kertas
dengan tidak menyentuh bagian tinta dari
kertas. Lalu lipat kertas dengan
menggabungkan kedua sisi kertas,
setelah itu lipat lagi berulang hingga rapat
dan buat kuncian dari lipatan terakhir
kertas. Selanjutnya kedua sisi lainnya dari
kertas dibentuk menyerupai segitiga rapat,
lalu kedua sisi segitiga tersebut dilipat
kebawah. Pastikan setiap lipatan rapat
dan kuat.
Gambar 3. Cawan yang telah dibungkus
Sedangkan untuk menyumbat
erlenmeyer dimulai dari menyiapkan
kapas yang digulung rapat hingga padat,
lalu kapas disumbatkan pada mulut
erlenmeyer dan dilapisi kertas diatasnya,
bagian kertas yang digunakan harus
bersih atau tidak boleh menggunakan
bagian kertas yang mempertemukan tinta
dengan kapas. Selanjutnya buat lipatan
pada kertas tersebut pada tiap sisinya
membentuk segitiga merapat kemulut
erlenmeyer dan diikat dengan karet.
Autoclave adalah suatu bejana
bertutup yang dapat di isi dengan uap
bertekanan tinggi 115⁰C hingga 125⁰C
dan tekanan uapnya mencapai 2 ATM.
Otoklaf merupakan ruang berdinding
rangkap yang di isi oleh uap jenuh bebas
Desember 2018
udara dan dipertahankan pada suhu serta
tekanan selama waktu yang telah di
tentukan. Waktu yang diperlukan
tergantung sifat bahan yang ingin di
sterilkan, tipe wadah dan volume bahan.
Kondisi yang baik untuk sterilisasi adalah
pada 15 spi dan temperature 121⁰C
selama 15 menit. Agar penggunaan
otoklaf efektif, uap air harus dapat
menembus setiap alat yang di sterilkan,
oleh karena itu otoklaf tidak boleh terlalu
penuh pada saat sterilisasi agar uap
benar-benar menembus semua area alat
yang di sterilkan, volk dan Margareth
(1993) dalam adji dkk, 2007
Prinsip kerja autoclave secara garis
besar ialah dengan memanfaatkan uap
panas dari hasil mendidihnya air di dalam
autoclave. Uap airnya kemudian
mendesak udara yang mengisi di dalam
autoclave. Jika udara telah terganti uap
air, katup udara atau katup uap akan
ditutup sehingga tekanan di dalamnya
semakin bertambah. Saat tekanan telah
mencapai suhu sesuai, proses sterilisasi
dimulai dan timer akan mulai menghitung
mundur. Setelah proses selesai
dijalankan, sumber panas akan langsung
dimatikan dan tekakan akan kembali turun
secara perlahan hingga suhunya
mencapai nol derajat Celcius. Demikian
cara kerja autoclave dalam mensterilkan
aneka peralatan (Gupta & Shukshith,
2016).
Teknik aseptik adalah usaha
menghindarkan setiap kontak antara
kultur murni, medium steril dan semua
wadah steril serta permukaan meja kerja,
dengan mikroorganisme kontaminan.
Teknik aseptik dibutuhkan misalnya, pada
saat melakukan kultivasi mikroorganisme
dan pemindahan (transfer) kultur murni
dari satu vessel misalnya tabung reaksi ke
tabung reaksi yang lain. Ancaman
kontaminasi mikroorganisme selalu ada
(mungkin terjadi) karena mikroorganisme
terdapat dimana-mana dan karena
ukurannya kecil maka mudah tersebar
melalui udara dan mudah ditemukan pada
berbagai permukaan peralatan
laboratorium dan media pertumbuhan
mikroorganisme. Oleh karena itu
penguasaan akan teknik aseptik sangat
diperlukan untuk mendukung keberhasilan
4
LaboratoriumTeknik Lingkungan 16 (2). 1-5 Desember 2018

eksperimen (praktikum) di Laboratorium

Mikrobiologi (Hendarto, dkk, 2014). Waluyo L. 2008. Teknik dan Metode
Dasar dalam Mikrobiologi.
IV. Kesimpulan Universitas Muhammadiyah
Kesimpulan dari praktikum ini adalah Malang Press. Malang.
mahasiswa dapat mengetahui pengertian
sterilisasi dan cara-cara yang sering
digunakan serta alat-alat dalam
melakukan sterilisasi dan cara
membungkus alat pada saat akan
melakukan sterilisasi. Selain itu
mahasiswa juga dapat mengetahui cara
membuat media dan perhitungan
pembuatan media mikrobia serta
beberapa teknik/pola menggores pada
cawan. Adapun hasil dari perhitungan
Medium Nutrient Agar (NA) yang di dapat
pada praktikum adalah 1,5 gram dan
Medium Potato Dextrose Agar (PDA)
adalah 2,92.

V. Daftar Pustaka

Adji, D., Zuliyanti, Z. & Larashanty, H.

2007. Perbandingan Efektivitas
Sterilisasi Alkhol 70%, Inframerah,
Otoklaf, Dan Ozon Terhadap
Pertumbuhan Bakteri Bacillus
Subtilus. Jurnal sain vet. 5 (1) hal
(19). Universitas Gajah Mada.
Yogyakarta.

Hendarto, R, D,. Lestari, E,. Sudarsih, S,.

Suharmadi, S,. 2014. Sterilisasi
Udara dan Clean Room
Menggunakan Pelaratan Fogging
Aerosept 8000. Prosiding Seminar
Nasional Sains dan Pendidikan
Sain IX. 5 (1). ISSN : 2087 – 0922.
Salatiga

Hidayat, Nur. 2006. Mikrobiologi Industri.

Yogyakarta: Andi Offset.

Gabriel, J.F. 1996. Fisika Kedokteran.

Jakarta: EGC.

Gupta, N, V., & Shukshith, K. S. 2016.

Qualification of Autoclave.
Department of Pharmaceutics,
JSS University, India.

Suriawiria, U. 2005. Mikrobiologi Dasar.

Papas Sinar Sinanti, Jakarta.