La derivación de la primera ecuación de velocidad para una reacción catalizada

por enzimas fue derivada en 1903 por Henri y se basó en los siguientes
supuestos:

E + S ES E + P

1. La enzima es un catalizador (propuesto por Berzelius en 1835-1837).

2. La enzima y el sustrato reaccionan rápidamente para formar un complejo enzima-
sustrato (propuesto en 1902 por Brown)
3. Sólo 1 sustrato y un complejo enzima-sustrato están involucrados, y el complejo
ES se rompe directamente para formar E libre y producto.
4. La enzima, el sustrato y el complejo enzima-sustrato están en equilibrio, esto es la
velocidad a la cual ES se disocia a E + S es mucho más rápida que la velocidad a la
cual ES se rompe para formar E + P.
5. La [S] es mucho mayor que la [E], de modo que la formación del complejo ES no
altera la [S].
6. La velocidad de la reacción está limitada pro el rompimiento del complejo ES para
formar E libre y P (etapa limitante).
7. La velocidad es medida durante tiempos muy cortos, de modo que la velocidad de
la reacción reversa es insignificante
Primera ecuación de velocidad para una reacción catalizada por enzimas
fue derivada por Henri (1903)

k1 k2
E+S ES P+E
k-1 k-2

V= K [S]
1 + [S] / Ks

Ks = constante de disociación del complejo ES

K = constante característica para cada enzima
 Maud Menten Leonor Michaelis

The cover photographs show Leonor Michaelis and Maud Menten, who together
pioneered the development of enzyme kinetics by formulating the Michaelis-Menten
equation to describe the steady state action of enzymes.
Biochem. Z. 49, 333-369 (1913)
 Michaelis y Menten 1913
“Padres de la enzimología”

1. Controlaron el pH del medio de reacción (buffer acetato)

2. Midieron velocidad inicial de modo que la reacción reversa y

otros efectos de los productos pudieran ser legitimamente
ignorados

Al igual que Henri supusieron que la enzima, el sustrato y el

complejo ES estaban en equilibrio
 Suposición de equilibrio
k-1>>k2 the formation of product is so
much slower than the formation of the ES
complex. That we can assume:

k1 ES
Ks  
k1 ES
Ks is the dissociation constant for the ES complex.
Michaelis y Menten, al igual que Henri, supusieron que la primera etapa de
la reacción era lo suficientemente rápida como para estar representada por
una constante de equilibrio:

Ks = [E] [S] [ES] = [E] [S] / Ks

[ES] Como Et = E + ES
E = Et - ES

[ES] = Et
(Ks/S) + 1
V = k2 [ES]

V = k2 Et [S]
Ks + [S]
Por el mismo tiempo, Van Slyke y Cullen (1914) obtuvieron resultados
similares con la enzima ureasa. Ellos supusieron un mecanismo similar,
pero con la importante diferencia de que supusieron la primera etapa como
irreversible:
k1 k2
E+S ES P+E
(Et – X) k-1 X k-2
Aquí, la concentración del complejo ES no puede ser representada por una
constante de equilibrio, en cambio tenemos:
dx = k1 (Et – x) [S] – k2 x
dt
Van Slyke y Cullen implícitamente supusieron que la concentración del intermediario
(ES) era constante, de modo que:
V = k2 X = k2 k1 Et [S]
dx = 0 X= k1 Et [S] k2 + k1 [S]
dt k2 + k1 [S]
v = k2 Et [S]
(k2/k1) + [S]
Tratamiento en estado estacionario

Briggs y Haldane 1925

La concentración de ES no cambia apreciablemente

durante el curso de la reacción

–se rompe tan rápido como se forma

 Velocidad Inicial

• Un esquema general para una reacción simple catalizada por enzima, la

cuál convierte un sustrato en un producto es:
k1 k2
E+S k-1
ES k-2
E+P

• Este esquema cinético se simplifica cuando la reacción procede en

condiciones de “velocidad inicial”, esto es al principio de la reacción,
[S] = 100% mientras que [P] = 0%. Mientras [P] permanezca muy bajo,
la velocidad de la reacción reversa es despreciable y el esquema
anterior se simplifica a :
k1 k2
E+S ES E+P
k-1

• El ensayo de una enzima en condiciones de velocidad inicial, es por lo

tanto, una consideración importante en el diseño de experimentos para
el ensayo de enzimas.
 Suposición de estado estacionario
Transient phase where in the course of a reaction the concentration of
ES does not change

pendiente = velocidad inicial

a

Note que ES no cambia

apreciablemente durante el curso
de la reacción

Tarea: explique qué le

pasa y porqué a S, P, E, y
ES en función del tiempo?
b

La parte inferior (b) es una

ampliación del comienzo
de las cruvas mostradas en
a (pre estado-estacionario).
 How to Do Kinetic Measurements
Experiment:
1) Mix enzyme + substrate
2) Record rate of substrate disappearance/product formation as a function of time
(the velocity of reaction)
3) Plot initial velocity versus substrate concentration.
4) Change substrate concentration and repeat
 Curva de Progreso

Velocidad Inicial

 Cantidad de producto formado en función del tiempo

 Velocidad versus Tiempo

 k1 k2
E+S ES P+E
k-1 k-2

Velocidad inicial
 Reacción Reversa

[S]
[S]
Derivación ecuación de Michaelis-Menten
 Briggs y Haldane
k1 k2
E+S ES P+E
(Et – X) k-1 k-2
X
En este caso:
1. dx = k1 (Et – x) [S] – k-1 x - k2 x Si dx = 0
dt dt

2. k1 Et [S] = (k1[S] + k-1 + k2) X de donde: X = k1 Et [S]

k1[S] + k-1 + k2
Como: v = k2 X Vmax

3. v = k2 k1 Et [S] v= k2 Et [S]
k1[S] + k-1 + k2 k-1+ k2 + [S]
k1 Km
 Michaelis-Menten
• Assumption of
equilibrium

• Assumption of Steady
State
 Velocidad inicial, Vo (mM/min)

S4
S3
S2

S1

Concentración de sustrato, [S] mM

Cada punto de color rojo indica que es una velocidad inicial para las correspondientes
concentraciones de sustrato (S1 a S4)..
Simple uncatalyzed S P reaction Enzyme-catalyzed reactions show a
shows linear dependence of Vo on [S]: hyperbolic dependence of Vo on [S]:

1. Rate is saturable: there's a maximum rate (velocity = Vmax) for any

single concentration of enzyme.
2. Rate (velocity) is proportional to [Etotal]: at any single concentration
of [S], Vo = c[E] (double [E] double Vo).
3. Half-maximal velocity occurs at a specific substrate concentration,
independent of [E].
 Reaction order
Reaction Order: the number of reactant molecules that need to come
together to generate a product.
A unimolecular S  P reaction is first order.
A bimolecular 2S  P reaction is second order.
A bimolecular S1 + S2  P is second order, first order in S1 and first
order in S2.

• The order of a reaction is given by the exponents of the reactant

concentrations in the rate law.
– v = k[A]n
• n=0, zero order (no dependence on [A]
• n=1, first order
• n=2, second order
– v = k[A]2[B]
• second order in A, first order in B, third order overall
 Orden de la reacción

• A altas [S] (S >>> Km)

– v = Vmax
• orden cero en S

• A bajas [S] (S <<< Km)

– v = (Vmax/Km)S
• primer orden en S
1° orden

Orden cero