Gambar 2.9. Neuroprostane bertanda massa yang sebelumnya disintesis.

84,85

Biosintesis dari neuroprostanes

Neuroprostanes terbentuk secara non-enzimatik in vivo oleh serangan oksidatif membebaskan ROS pada DHA.
Meskipun mekanisme oksidasi DHA lebih kompleks dari pada asam arakidonat, mekanisme radikal bebas yang
sama dapat diterapkan untuk memprediksi regioisomer neuroprostana dan kelimpahan relatif mereka.86 GAMBAR
2.10 mengilustrasikan dua mekanisme yang diusulkan untuk pembentukan 20-F4-neuroprostanes.

2.10. Mekanisme endoperoxide & dioxetane dari biosintesis neuroprostana 20-F4.

Mekanisme endoperoxide dimulai dengan abstraksi atom hidrogen pada C18 posisi DHA untuk memberikan
resonansi stabil radikal allylic ganda. Oksigen molekuler menambahkan pada posisi C16 untuk membentuk radikal
peroksi yang mengalami 5-exo-trig cyclizations berturut-turut diikuti dengan menjebak dengan molekul oksigen lain
untuk memberikan bicyclic peroksida. Enzim reduktase mengurangi peroksida untuk memberikan alkohol allylic di
final produk.

Mekanisme dioxetane juga dimulai dengan abstraksi atom hidrogen pada C18 posisi DHA tetapi O2 menambahkan
pada ujung resonansi pentadienil resonansi radikal (posisi C20). Sebuah siklisasi 4-exo-trigonum berikutnya
membentuk 1,2-dioxetanelike menengah, yang terperangkap oleh molekul oksigen tambahan untuk membentuk
peroksi tersebut radikal. Dua siklisasi 5-exo-trigon berturut-turut diikuti dengan pembukaan dioxetane
cincin memberikan peroksida bisiklik yang pada akhirnya dikurangi oleh enzim reduktase 20-F4-neuroprostane.

Corey dan Wang 87 pertama kali mengusulkan mekanisme dioxetane untuk isoprostane biosintesis setelah
mengamati produk oksidasi yang tidak terduga saat merancang a sintesis biomimetik dari prostaglandin. Rokach et
al.88 menimbulkan dioxetane mekanisme sebagai alternatif yang layak untuk menjelaskan pembentukan berbagai
isoprostan regioisomer. Namun, Morrow dan Porter 89 menyarankan bahwa hanya endoperoxide mekanisme
beroperasi setelah mereka menganalisis kiralitas produk isoprostan yang terbentuk dari radikal peroksil optik murni.
Karena peroksidasi yang diinduksi oleh ROS bersifat kimiadan non-enzimatik, mekanisme biologis terus menjadi
topik perdebatan.70

Menurut mekanisme biosintesis endoperoxide, delapan kemungkinan neuroprostana regioisomerik (GAMBAR 2.11)
dapat dibentuk dari lima bisallik yang berbeda karbon (C6, C9, C12, C15, C18) dari DHA.

Gambar 2.11. Jalur endoperoxide diprediksi untuk pembentukan neuroprostane

regioisomer oleh peroksidasi DHA non-enzimatik.

Penting untuk dicatat bahwa abstraksi atom hidrogen pada posisi C9, C12, atau C15 DHA mengarah ke seri
neuroprostane seri 7/11, 10/14-series, atau 13/17-series, masing-masing. Masing-masing radikal pentadienyl ini
akhirnya mengarah ke dua yang berbeda regioisomer neuroprostana. Namun, abstraksi hidrogen pada posisi C6 atau
C18 mengarah ke seri-4 atau 20-seri, masing-masing. Morrow dan perusahaan membantahnya hanya satu, lawan
dua, regioisomer neoprostane dihasilkan karena radikal prekursor yang mengarah ke dua neuroprostane seri 4 dan 20
ini tidak dapat dilanjutkan siklisasi untuk membentuk zat antara 1,2-dioxolane. Jadi, baik seri 4 dan 20 seri
neuroprostanes dihasilkan dalam jumlah yang lebih besar dibandingkan dengan regioisomer lainnya. Analisis jumlah
neuroprostan yang terbentuk baik in vivo dan in vitro mendukung hipotesis bahwa seri-4 dan 20-seri sebenarnya
dihasilkan secara istimewa.86

Kesimpulan
Penelitian selama dua dekade terakhir menunjukkan bahwa PUFA dalam jaringan
otak sangat tinggi rentan terhadap kerusakan oksidatif oleh ROS endogen. Produk
peroksidasi lipid, seperti sebagai neuroprostanes, adalah biomarker yang peka
terhadap stress oksidatif dan percaya untuk memainkannya peran aktif dalam tubuh
manusia. Sebagaimana prevalensi neurodegenerative yang berkaitan dengan usia
gangguan terus meningkat, kuantifikasi neuroprostan yang ditemukan di vivo dapat
menyediakan dokter dengan metode yang tepat untuk diagnosis dini,
perkembangan penyakit, dan pengobatan tanggapan.

Bab 3: Sintesis Total Pertama 20-F4t-Neuroprostane

Penemuan regioselectivity dalam pembentukan neuroprostanes memungkinkan studi biologi untuk fokus pada
isomer yang paling banyak dihasilkan (4-series dan 20-seri) untuk menentukan peran mereka dalam proses
patofisiologis yang terkait dengan DHA peroksidasi dan stres oksidatif. Sintesis kimia dari neuroprostanes sangat
penting untuk sepenuhnya menjelaskan aktivitas biologis dan peran fungsional dari metabolit lipid ini.
Karena 20-seri belum pernah disintesis sebelumnya dan menjadi menarik menantang para ahli kimia sintetis, kami
memutuskan untuk memfokuskan upaya kami pada enantioselective sintesis total 20-F4t-neuroprostane.

Sintesis kimia masa lalu dari neuroprostanes

Pada tahun 2000, Durand et al.90 menyelesaikan sintesis total neuroprostana pertama di 18 langkah-langkah
(GAMBAR 3.1). Pendekatan mereka dimulai dengan mengakses siklopentana yang dilindungi silil
inti dari diacetone-D-glukosa dalam 9 langkah.

Gambar 3.1. Sintesis total 4 (RS) -F4t-neuroprostane methyl ester.

Kedua rantai samping ditambahkan ke inti siklopentana melalui penggunaan Wittig olefinations (modifikasi Horner-
Wadsworth-Emmons menghasilkan E-alkena). Durand dan perusahaan91 kemudian menerapkan pendekatan yang
sama dengan memvariasikan reagen Wittig mereka mensintesis 4-F3t-neuroprostane dan 4-epimer-nya (GAMBAR
3.2) dalam 17 langkah. Kedua Diastereomers neuroprostan akhirnya dipisahkan pada akhir sintesis mereka
kromatografi kolom (sekitar 30% pecahan campuran)

Gambar 3.2. 4-F3t-neuroprostane dan 4-epimer-nya.

Baru-baru ini, Durand dan Galano85 mensintesis suatu 4-F4t-neuroprostane yang berlabel deuterium. dalam 20
langkah. Cincin siklopentana inti diakses mulai dari 1,3-siklooktadiena dan lagi rantai samping yang mengandung
E-olefin didirikan menggunakan Horner- Reagen Wadsworth-Emmons. Reaksi selanjutnya dengan pereaksi Wittig
yang tidak distabilkan memberikan rantai samping vinil yang dilewati, yang secara selektif dikurangi (cis
deuterated) oleh Katalis Brown.92
Gambar 3.3. Dilewati pendekatan diyne untuk neuroprostane bertanda massa.

Katalis berbasis nikel Brown92 terbukti untuk mencapai semideuterasi stereoselektif

diynes dilewati lebih efektif daripada beberapa metode lain, seperti
Katalis Lindlar.

Pada tahun 2002, Quan dan Cha93 menerbitkan sintesis 19-langkah 17-F4c-neuroprostane sebagai
dirangkum dalam GAMBAR 3.4.

Gambar 3.4. Pendekatan Cha terhadap sintesis total 17-F4c-neuroprostane.

Langkah kunci dalam pendekatan mereka memanfaatkan palang intramolekul paladium-katalis reaksi yang
melibatkan Pd (OAc) 2, dppp, Et3N, dan H2O dalam DMF pada 80 ° C untuk menghasilkan produk bisiklik dalam
hasil 55%. Diena yang dilewati ditambahkan melalui tahap akhir Reaksi Wittig, yang setelah deproteksi,
menyelesaikan sintesis pertama dari 17-seri neuroprostan.

Dalam laporan tahun 2007, Taber et al.94 mensintesiskan keempat enonomer murni 13-F4tneuroprostanes
dalam 21 langkah masing-masing. Para penulis mengusulkan bahwa strategi sintetis mereka dapat dengan mudah
diadaptasi ke 13-F4c-neuroprostanes (seri cis) juga. Seperti yang diilustrasikan GAMBAR 3.5, stereokimia cis-
dialkil dari siklopentana dibentuk menggunakan a reaksi Alder ene termediasi-termal.
Gambar 3.5. Taber's 21 langkah rute sintetik neuroprostane seri 13 trans.

Langkah kunci lainnya melibatkan reaksi penggandengan silang Sonogashira antara terminal alkuna dan alkil
bromida. Pengurangan selanjutnya dengan berbasis nikel Brown katalis, 92 deproteksi, dan saponifikasi berhasil
menghasilkan 13-F4t-neuroprostane. Pemisahan diastereomer sepanjang rute sintetis mereka memungkinkan tiga
trans lainnya stereoisomer akan disintesis dengan kemurnian enansiomerik yang tinggi.

Juga pada tahun 2007, Zanoni dan Vidari95 menggambarkan pendekatan enansioselektif pertama
sintesis cyclopentenone, atau A-ring, neuroprostanes. Mereka melaporkan 14 langkah
sintesis konvergen dari 14-A4t-neuroprostane (dirangkum dalam GAMBAR 3.6).

Gambar 3.6. Sintesis konvergen Zanoni dan Vidari 14-A4t-neuroprostane.

Strategi sintetis mereka menampilkan olefination Julia-Kocienki untuk memasang rantai samping mengandung
alkohol allylic. Selanjutnya, Olefination tahap akhir Wittig dan beberapa manipulasi kelompok fungsi dilakukan
untuk memberikan 14-A4tneuroprostane yang diinginkan.

Sintesis isoprostana sebelumnya dari Snapper Lab

Penelitian di laboratorium Snapper telah menunjukkan bahwa cyclobutenes difungsikan prekursor yang sangat
serbaguna dan berguna untuk sintesis berorientasi target. Sebagai bagian dari upaya berkelanjutan di bidang ini,
Schrader dan Snapper96 menyelesaikan sintesis yang stereodiver dari semua delapan isomer dari 15-F2-isoprostanes
(SKEMA 3.1). Kunci cyclobutenes 3.02 dan 3,03 disintesis dari [2 + 2] photocycloaddition antara cyclopentenone
3,01 dan asetilen. Ring-opening cross-metathesis (ROCM), dipromosikan oleh generasi kedua Grubbs katalis, dari
cyclobutenes 3,02 dan 3,03 dengan kelebihan okt-1-ene-3-ol memberikan campuran diastereomer dan isomer olefin.
Skema 3.1. Sintesis stereodiver dari semua isotop 15-F2-isoprostane delapan.
Stereoisomer ini kemudian diselesaikan untuk menghasilkan rasemik enon 3.04 dan 3.05. Pengurangan asimetris
berikutnya dan pemisahan diastereomer menyebabkan sintesis empat cis dan empat trans 15-F2-isoprostanes secara
enansiomerik diperkaya. Ini Sintesis 15 langkah (urutan linier terpanjang) menandai pendekatan stereodiver pertama
semua delapan isomer dari setiap kelas regiochemical isoprostanes.

Untuk masing-masing dari delapan isomer 15-F2-isoprostane, agregasi platelet darah utuh tes inhibisi dilakukan
untuk mendapatkan pemahaman yang lebih baik tentang biologis mereka aktivitas. Hanya dua dari delapan isomer
yang menunjukkan penghambatan total darah agregasi trombosit dan, pada konsentrasi yang lebih rendah, ent-15-
epi-F2t-isoprostane adalah secara signifikan lebih aktif daripada inhibitor yang dikenal 15-F2t-isoprostane
(GAMBAR 3.7) .97

Gambar 3.7. Hasil dari uji penghambatan agregasi platelet darah keseluruhan
15-F2-isoprostane.
Aktivitas antiagregasi baru yang ditemukan oleh penelitian biologi awal ini terinspirasi Shizuka dan Snapper98
untuk memodifikasi rute ke 15-F2-isoprostanes untuk selektif mensintesis ent-15-epi-F2t-isoprostane dan analog
D4-berlabel (SCHEME 3.2)
Skema 3.2. Selektif sintesis dari isomer biologis 15-F2-isoprostane aktif dan turunan tetradeuterated.

Keseluruhan sintesis selektif 14 langkah mereka dimulai dengan desymmetrization enzimatik meso-diol 3.06 diikuti
oleh manipulasi grup fungsional untuk menghasilkan enoneomer murni murni 3,01. Fotokimia fotokimia [2 + 2]
antara cyclopentenone 3.01 dan acetylene membentuk cyclobutene yang difungsikan direduksi secara selektif
dengan DIBAL-H untuk menghasilkan 1,3-diol 3.07 yang dilindungi oleh mono. ROCM di bawah atmosfer etilena
menghasilkan senyawa divinil 3.08. Dengan menggunakan oktober 1-en-3-one atau turunan tetradeuterasinya
sebagai pasangan silang, enones 3.09 dan 3.10 diperlengkapi oleh metatesis silang-dikatalisis ruthenium (CM).
Beberapa langkah tambahan diminta untuk memasang rantai samping kedua dan menyelesaikan sintesis selektif
15-epi-F2t-isoprostane dan analognya yang berlabel D4.

Dengan kedua senyawa di tangan, studi biologi kemudian dilakukan tentukan apakah 15-F2-isoprostane khusus ini
diproduksi pada manusia selama oksidatif menekankan. Isomer isoprostana yang terkontrasisasi digunakan sebagai
standar internal dalam a GC / MS assay untuk mendeteksi isoprostan dalam urin manusia. Data dari penelitian ini
akhirnya menyarankan bahwa ent-15-epi-F2t-isoprostane, atau enansiomernya, sebenarnya diproduksi di
vivo.99

Lawson dan rekan kerjanya100 telah membuktikan bahwa 5-F2-isoprostan adalah yang paling banyak
F2-isoprostane yang melimpah ditemukan dalam urin manusia. Ini, bersama dengan yang sebelumnya
menggambarkan sintesis stereodivergent dari perpustakaan 15-F2, mendorong Pandya dan Snapper101 untuk
mengembangkan strategi yang dimodifikasi untuk menyiapkan semua delapan 5-F2-isoprostane. Sebagai
digambarkan dalam Skema 3.3, pendekatan mereka menampilkan ROCM tunggal cyclobutenes
3.12 dan 3.07 dengan ethylene diikuti oleh CM dengan metil 5-oxohept-6-enoate untuk dihasilkan
produk mono-lintas 3.13 dan 3.14, masing-masing.

Skema 3.3. Modifikasi rute sintetis ke perpustakaan stereodiverse 5-F2-isoprostane.

Setelah beberapa langkah tambahan, termasuk strategi pengurangan / resolusi selektif untuk menghasilkan
stereoisomer yang diperkaya enansiomer dan protokol oksidasi / olefinasi memperkenalkan rantai samping alifatik,
semua delapan regioisomer 5-F2-isoprostane masing-masing disintesis dalam sepuluh langkah (linear terpanjang)
dari 4-hidroksi-2- yang tersedia secara komersial cyclopentenone (3.11).

Analisis retrosintetik
Terinspirasi oleh keberhasilan sintesis isoprostane dari lab kami, kami memutuskan untuk beradaptasi strategi ini
untuk mensintesis 20-F4t-neuroprostane secara enansioselektif. ANGKA 3.8 mengilustrasikan analisis retrosintetik
kami dari 20-F4t-neuroprostane.
Gambar 3.8. Analisis retrosintetik dari 20-F4t-neuroprostane.
Kami membayangkan bahwa rantai samping triena yang dilewati dapat dipasang oleh Olefinasi Wittig
dan inti cyclopentane dapat diakses melalui rute ROCM / CM yang dimodifikasi menggunakan etil vinil keton
sebagai pasangan silang. Adopsi pengurangan / resolusi serupa protokol dapat memungkinkan untuk persiapan
produk yang diperkaya enansiomer. Ini strategi sintetik berpotensi menawarkan rute yang ringkas dan stereodiver ke
semua delapan 20-F4- neuroprostanes (GAMBAR 2.6).

Kami kemudian melahirkan olefinasi double-Wittig double-pot, asimetris sebagai kemungkinan langkah kunci dari
sintesis kami (GAMBAR 3.9). Persiapan satu pot dilewati diena melalui penggunaan bis (fosfonium) garam pertama
kali dilaporkan102 oleh Wittig sendiri pada tahun 1958. Bestmann dkk. memodifikasi strategi ini untuk mensintesis
bis bersimpana (alkena) Feromon Lepidoptera dengan menggunakan dua aldehid yang berbeda.103

Gambar 3.9. Langkah kunci yang diajukan: asymmetric single-pot, double-Wittig olefination.
Kami merancang strategi yang dimodifikasi untuk menyiapkan methylene melewatkan triena melalui onepot,
alkenilasi ganda melibatkan aldehida yang sangat sensitif β,γ- tak jenuh.

Sintesis total 20-F4t-neuroprostane

Seperti yang digunakan dalam persiapan perpustakaan 15-F2-isoprostane, sintesis total kami
dimulai dengan mengakses cyclobutene yang difungsikan 3,16 dalam empat langkah dari furfuryl
alkohol (3.15). Prosedur yang dikenal ini104,96 (SCHEME 3.4) secara teknis sederhana dan
membutuhkan bahan awal yang murah, yang memungkinkan untuk persiapan multi-gram dengan mudah
jumlah cyclobutene 3.16.
Skema 3.4. Sintesis empat langkah cyclobutene 3.16.104,96

Seperti yang diilustrasikan dalam SCHEME 3.5, divinyl intermediate 3.18 dihasilkan oleh ROCM dari
3.16 dalam benzena menggunakan katalis generasi 1 Grubbs (3.17) di bawah etilena atmosfir.98

Skema 3.5. Persiapan divinyl intermediate 3.18 oleh ROCM.

Pengenceran (0,1 M) diperlukan untuk menghindari polimerisasi metatesis pembukaan cincin

(ROMP) dari bahan awal (3.16).

Menggunakan katalis generasi ke-2 Hovedya-Grubbs (3.19), senyawa divinil 3.18

menjalani CM dengan keton etil vinil dalam CH2Cl2 pada suhu kamar (SCHEME 3.6)

Skema 3.6. Protokol lintas-metatesis untuk sintesis enone 3.20.

Kondisi-kondisi reaksi ini menghasilkan produk mono-CM yang diinginkan 3,20 dalam tinggi regioselectivity (tidak
ada produk mono-CM yang tidak diinginkan terbentuk) sementara hanya jejak jumlah produk CM ganda diamati.
Selanjutnya, enone dalam yang diinginkan produk diperoleh secara eksklusif sebagai E-stereoisomer tanpa formasi
Zalkene. Regioselectivity tinggi dikaitkan dengan kemungkinan koordinasi antara katalis ruthenium 3.19 dan gugus
hidroksil bebas pada cincin siklopentana (3.18).
Mungkin hambatan sterik dari kelompok pelindung TBS juga mempengaruhi selektivitas
CM.99

Penting untuk dicatat bahwa kami memilih untuk menggunakan prosedur ROCM / CM dua langkah Dari pada
mencoba ROCM 3.16 dengan keton etil vinil secara langsung. Shizuka dan Snapper98 menemukan ROCM
cyclobutene 3.16 dengan menggunakan oct-1-en-3-one Katalis generasi ke-2 Hovedya-Grubbs (3.19) gagal; mereka
terutama mengamati ROMP dari cyclobutene 3.16. Selanjutnya, menggantikan katalis generasi ke-1 Grubbs (3.17)
hanya bahan awal yang tidak bereaksi. Mengingat preseden99 yang dilakukan kedua metatheses secara optimal
dalam kondisi reaksi yang berbeda, kami memutuskan untuk melakukan ini transformasi dalam dua langkah.

Skema 3.7. Reduksi asimetris (±) -3,20 menyebabkan pemisahan diastereomer.

Selanjutnya dalam sintesis kami, seperti yang ditunjukkan dalam SCHEME 3.7, perlindungan TBS dari
enone (±) -3,20 diikuti oleh reduksi katalitik asimetrik menggunakan (R) - (+) - 2-methyl-CBSoxazaborolidine
katalis (3,21) dan catecholborane dalam toluena memberikan sepasang diastereomer. Setelah pemisahan
diastereomer menggunakan Ag + -simpregnated silica gel kromatografi, alkohol alilikat yang diperkaya enansiomer
yang diinginkan diperoleh 3,22 dalam hasil tinggi.

Allylic alcohol 3.22 menjalani perlindungan TBS lain untuk mempersiapkan diri hidroborasi selektif dari olefin
yang disubstitusi mono dengan 9-BBN diikuti oleh oksidatif bekerja untuk memberikan alkohol primer 3,23
(diuraikan dalam SKEMA 3,8).

Skema 3.8. Sintesis aldehid 3.24: prekursor olefinisasi Wittig.

Oksidasi selanjutnya dengan Dess-Martin periodinan (DMP) menghasilkan aldehid 3.24 dan menyelesaikan sintesis
prekursor Wittig olefination utama kami.

Kami kemudian memfokuskan perhatian kami pada persiapan yang sangat sensitif,% - aldehida tak jenuh disebut
dalam GAMBAR 3.9. Untuk mencapai tujuan ini, kami membayangkan oksidasi alkohol homoallik 3,26, yang
disiapkan dari 3-butyn- 1-ol (3.25) oleh prosedur yang dikenal dalam enam langkah (SCHEME 3.9) .105
Skema 3.9. Sintesis enam langkah alkohol homoallik 3.26.105
Kami menemukan bahwa Dess-Martin periodinane secara efisien mengoksidasi alkohol utama 3,26 menjadi
aldehida β,γ - tak jenuh yang sesuai 3.27 (ditunjukkan dalam SKEMA 3.10).