Artikel Penelitian

www.acsami.org

Bioinorganic Nanohybrid Catalyst untuk tahapan Sintesis Acetaminophen,

sebuah Analgesik
Boi Hoa San, †, ‡, § Subramaniyam Ravichandran, ‡, § Kwang-su Park, ‡ Vinod Kumar Subramani, ‡
dan Kyeong Kyu Kim *, †, ‡
† Sungkyunkwan Advanced Institut Nanoteknologi, Sungkyunkwan University, Suwon 440-746, Korea
‡ Departemen Molecular Cell Biology, Sungkyunkwan University School of Medicine, Suwon 440-746, Korea

* S informasi pendukung

ABSTRAK: Katalis nanohybrid bioinorganic disintesis dengan menggabungkan esterase dengan

Download melalui UNIV OF SUNDERLAND pada 11 Oktober 2018 di 08:32:32 (UTC). Lihat https://pubs.acs.org/sharingguidelines

nanopartikel platinum (PtNP). Kombinasi dari dua katalis mengakibatkan kegiatan ditingkatkan katalitik,
esterase hidrolisis, dan hidrogenasi di PtNPs, dibandingkan dengan masing-masing katalis saja. katalis
hybrid ini dapat berhasil digunakan dalam sintesis tahapan acetaminophen (parasetamol), analgesik
dan obat antipiretik, dalam reaksi satu-pot dengan hasil yang tinggi dan e FFI keampuhan dalam waktu
singkat, menunjukkan bahwa katalis nanobiohybrid o ff ers keuntungan dalam sintesis fi bahan kimia ne
dalam aplikasi industri.
untuk pilihan tentang bagaimana untuk secara sah berbagi artikel yang dipublikasikan.

KATA KUNCI: bioinorganic nanohybrid, platinum nanopartikel, katalisis, esterase, hidrolisis, hidrogenasi, acetaminophen

1. PERKENALAN tions 1 - 4 . 13 . 15 dalam kimia sintetik, obat-obatan, perawatan lingkungan, dan

teknologi pangan. enzim oligomer dengan interior berongga telah digunakan
Integrasi sinergis dari nanoteknologi dengan bioteknologi memungkinkan
sebagai template untuk membangun katalis nanobiohybrid menggunakan NP
peningkatan fungsi dan aplikasi diperpanjang yang akan dicapai dalam
karena keuntungan mereka dalam mensintesis NP homogen dengan
bahan nanobiohybrid. 1 - 4 Di antara berbagai platform untuk membangun
stabilitas tinggi, biokompatibilitas, dan keanekaragaman fungsional. 10 . 16 - 24 Dalam
nanobiohybrids, kombinasi enzim dan nanopartikel logam yang sangat
kasus nanopartikel dikemas dalam enzim, diamati bahwa aktivitas enzim
aktif sangat menarik karena fungsi biocatalytic mereka ditingkatkan dan
berkurang karena adanya nanopartikel dekat dengan situs aktif enzim. 11 Oleh
kemampuan untuk melakukan beberapa reaksi. Enzim sangat e FFI sien di
karena itu, diperlukan untuk mengatasi keterbatasan ini dengan
mengkatalis berbagai reaksi dengan hasil yang tinggi dan memiliki
mengembangkan nanobiohybrid dengan di ff erent arsitektur struktural.
substrat akurat atau spesifik produk fi kota di bawah kondisi reaksi ringan. 5 Dengan
demikian, ada signi fi permintaan tidak bisa untuk utilitas mereka dalam
makanan, energi, dan berbagai proses industri serta dalam sintesis fi bahan
kimia ne untuk farmasi, pertanian, dan keperluan elektronik. 1 . 5 Namun,
Dalam studi ini, kami disintesis katalis nanobiohybrid baru dengan
nanopartikel logam (NP) terbuat dari logam mulia yang sangat aktif
menggabungkan esterases oligomer (EST) dengan PtNPs yang tumbuh di
seperti platinum dan paladium telah diteliti secara ekstensif untuk aplikasi
luar protein. Dengan pendekatan ini, situs katalitik dari kedua platinum dan
mereka di berbagai fi medan seperti sintesis kimia, 6
enzim yang utuh dan sepenuhnya dapat diakses dengan substrat. Kami
menunjukkan kemampuan mengkatalis reaksi beberapa langkah dalam novel
reaksi satu-pot untuk produksi acetaminophen (parasetamol), sebuah
antipiretik banyak digunakan ( skema 1 ), Dengan kegiatan katalitik
produksi hidrogen, 7 . 8 dan biomedis. 9 . 10 Kombinasi enzim dan NP metalik ditingkatkan. Onepot reaksi yang paling e FFI Strategi sien untuk sintesis
dengan kegiatan yang saling melengkapi dapat signi fi cantly organik dan sangat diinginkan dalam pembuatan obat-obatan. Kombinasi dari
meningkatkan kinerja aktivitas, stabilitas, kemampuan, dan teknik reaksi sintesis satu-pot dengan kimia hijau dapat mengakibatkan signi fi tidak
biocatalytic dari kedua komponen di Bioprocessing. 11 . 12 Selain itu, dapat bisa bene fi ts,
berkontribusi untuk menciptakan fungsi baru. Fleksibilitas dan reaksi
spesifik fi Kota katalis nanobiohybrid telah dibuktikan dengan generasi
hibrida bahan multifungsi dengan sifat baru dan fungsi yang diterima: 10 Oktober 2016
disempurnakan, 1 . 2 . 11 . 13 . 14 yang membuat mereka menjanjikan biocatalysts Revisi: 19 Oktober 2016
untuk berbagai applica- menarik diterima: 20 Oktober 2016
Diterbitkan: 31 Oktober 2016

© 2016 American Chemical Society 30058 DOI: 10.1021 / acsami.6b12875

ACS Appl. Mater. antarmuka 2016, 8, 30058 - 30065
ACS Bahan & Interfaces Terapan Artikel Penelitian

Skema 1. Skema Sintesis Reaksi tahapan dari Acetaminophen Dikatalisis oleh EST - Kompleks PtNP Sebuah

Sebuah( 1) Hidrolisis 4-nitrophenyl asetat untuk menghasilkan 4-nitrofenol oleh aktivitas enzimatik EST - PtNPs. ( 2) Hidrogenasi 4-nitrofenol ke 4aminophenol oleh aktivitas
terhidrogenasi dari EST - PtNPs. ( 3) Formasi dari N- ( 4-hidroksifenil) acetamide (acetaminophen) di hadapan anhidrida asetat. ( 4) sintesis langsung acetaminophen dari
4-nitrofenol asetat di hadapan EST - PtNPs dan anhidrida asetat.

dan studi ini secara komprehensif menunjukkan keuntungan dari menggunakan Komponen yang tercantum di atas adalah mereka fi konsentrasi nal dalam campuran reaksi. The

katalis nanobiohybrid untuk aplikasi industri. NaBH 4 solusi ditambahkan drop-bijaksana untuk campuran reaksi dengan pengadukan konstan
selama 1 jam. Itu fi produk akhir disimpan pada 4

2. BAGIAN EKSPERIMENTAL ° C sampai digunakan lebih lanjut. Konsentrasi PtNPs sitrat-capped ditentukan
oleh induktif ditambah plasma emisi optik spektroskopi (ICP-OES).
2.1. Bahan. Semua bahan kimia yang dibeli dari Sigma-Aldrich (St Louis, MO) dan
digunakan sebagai diterima tanpa puri lanjut fi kation.
2.3. Karakterisasi sampel. UV - spektrum serapan terlihat pada 200 - 500 nm
2.2. Preparasi Sampel. Penyusunan EST dan sintesis nanopartikel
diukur menggunakan UV-550 spektrofotometer (Jasco, Tokyo, Jepang) dengan
platinum (PtNPs) menggunakan EST yang dijelaskan sebelumnya. 11 . 25 Secara
sampel dalam 10 mm jalan cahaya kuvet kuarsa. Mikroskop elektron transmisi
singkat, enzim EST dengan aktivitas hidrolitik disiapkan oleh kloning gen
(TEM) gambar diambil menggunakan JEOL JEM-3010 mikroskop (JEOL, Tokyo,
encoding EST dari
Jepang) dioperasikan pada 300 kV. sampel TEM disiapkan dengan menerapkan
Mycobacterium smegmatis ( GeneID: 4532379) menjadi berbasis vektor pET
EST - solusi PtNP ke grid tembaga ditutupi dengan karbon tipis fi lm (JEOL, Tokyo,
dengan N-terminal tag histidin hexa- protease-cleavable virus etch tembakau
Jepang) dan dehidrasi semalam pada suhu kamar. Untuk mempersiapkan negatif
(TEV). Plasmid rekombinan, bernama pVFT1S-EST, menjelma menjadi Escherichia
patri PS - sampel PtNP, sampel protein yang bernoda pada grid tembaga dengan
coli BL21 (DE3) sel (Novagen, Billerica, MA). Sel dikultur di Luria - menengah
2% uranil asetat selama 30 s. Ukuran dari PtNPs diperkirakan dengan rata-rata
Bertani pada 37 ° C ke OD 600 0,5 sebelum diinduksi dengan 0,5 mM isopropyl- b- D-
200 partikel individu menggunakan software Gatan Digital mikrograf (Gatan,
Pleasanton, CA). Energi Data spektroskopi dispersif X-ray diperoleh dari sampel
thiogalactopyranoside. protein adalah fi pertama puri fi ed oleh logam FFI kromatografi
disiapkan untuk TEM.
nity pada kolom HiTrap pengkelat (GE Healthcare, Pittsburgh, PA).
N-terminal-Nya-tag telah dihapus menggunakan TEV protease di bu ff er A (20
mM Tris - HCl, pH 7,5, dan 10 mM NaCl). Protein dibelah itu lanjut puri fi ed
Circular dichroism (CD) spektrum EST saja dan EST - PtNPs diukur dengan CD
dengan kromatografi pertukaran anion pada kolom HiTrap Q (GE Healthcare).
spektrometer Jasco J-810 pada 25 ° C dalam sel kuarsa 1 mm. -Kromatografi cair
The puri fi ed protein didialisis bu ff er B (20 mM Tris - HCl, pH
kinerja tinggi (HPLC) analisis dilakukan dengan menggunakan reverse-fase kolom
C18 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA) dalam sistem HPLC Agilent 1100
7,5) dan terkonsentrasi menggunakan YM-3 yang ultra fi filtrasi dan Centricon (Millipore,
Billerica, MA). Kemurnian EST ditentukan dengan menggunakan 15% natrium dodesil
(Agilent Technologies).
sulfat poliakrilamida gel elektroforesis (SDS- PAGE). Dalam sintesis situ PtNPs
dilakukan dalam larutan dengan mengurangi Pt II di hadapan EST pada 22 ° C. Untuk X-ray spektroskopi fotoelektron (XPS) dilakukan pada Thermo Ilmiah fi c ESCALAB

mensintesis EST - PtNPs, puri fi ed rekombinan EST protein dicampur dengan K 2 PtCl 4 dalam 250 sistem Xi. 2,6 nm EST - PtNPs yang drop-dilapisi pada 1 cm 2 wafer silikon yang
10 ml bu ff er (50 mM HEPES, pH 8.0) diikuti dengan 1 jam inkubasi dengan sebelumnya dibersihkan oleh ultrasonication dalam aseton. Sampel dikeringkan
pengadukan konstan. Dalam campuran reaksi, fi Konsentrasi nal dari EST adalah 1 μ M, semalam sebelum analisis XPS. Energi ikat dikalibrasi menggunakan C 1s intensitas
dan fi Konsentrasi nal dari K 2 PtCl 4 adalah 0,5, 1,0, dan 3,0 mM untuk sintesis puncak pada 284,8 eV. Data dianalisis menggunakan CasaXPS dan puncak

fi ttings dilakukan dengan menggunakan Gaussian - fungsi Lorentzian.

1,8, 2,6, dan 3,8 nm EST - PtNPs, masing-masing. Setelah 1 jam inkubasi protein dan
platinum prekursor, 0,5 mL NaBH 100 mM dingin 4
solusi ditambahkan ke dalam campuran reaksi, diikuti oleh 2 jam inkubasi dengan
pengadukan konstan. Campuran reaksi yang mengandung EST - PtNPs terkonsentrasi
menggunakan Centricon centrifuge (30 kDa Cuto ff, Sartorius, Göttingen, Jerman) pada 16
100 RCF selama 30 menit pada 4 ° C untuk menghapus agregat dari supernatan yang
digunakan untuk analisis lebih lanjut sebagai EST - PtNPs. Konsentrasi EST ditentukan
oleh assay Bradford 26 menggunakan bovine serum albumin untuk menghasilkan kurva
standar.
PtNPs sitrat-capped disintesis menurut prosedur dilaporkan dengan beberapa
modi fi kation. 27 Brie fl y, PtNPs diperoleh dengan mengurangi 1 mM H 2 PtCl 6 dengan
10 mM NaBH 4 di hadapan 3 mM natrium sitrat dalam 50 mL campuran reaksi.
Jumlah masing-masing
Kromatografi cair - spektrometri massa (LC - MS) dilakukan pada 1100 sistem HPLC
Agilent Model fi tted dengan analyzer massa ion trap. LC dilakukan pada kolom
reverse-fase C18 dan massa dianalisis menggunakan sistem ESI di kedua mode ion
positif dan negatif. Campuran reaksi sintesis tahapan itu fi disaring menggunakan 0,22
μ m fi lter sebelum analisis. A 1 g solusi / mL Asetaminofen (Sigma) dalam DMSO
digunakan sebagai standar.
2.4. Kegiatan hidrolitik dari EST - PtNPs. Kegiatan hidrolitik dari EST - PtNPs ditentukan
dengan menggunakan 4-nitrophenyl asetat sebagai substrat. Dalam sebuah percobaan yang
khas, 200 μ L dari campuran reaksi yang mengandung 1 mM substrat dan 1 μ M larut EST - PtNPs
di 10 mM Tris - HCl bu ff er pada pH 7,0 diinkubasi pada 37 ° C dalam 96 piring dengan baik.
Pelepasan 4-nitrofenol kemudian dipantau menggunakan SpectraMax Plus384 (Molecular
Devices, Sunnyvale, CA) pada panjang gelombang 405

30.059 DOI: 10.1021 / acsami.6b12875

ACS Appl. Mater. antarmuka 2016, 8, 30058 - 30065
ACS Bahan & Interfaces Terapan Artikel Penelitian

Gambar 1. Struktur kristal (PDB ID: 2Q0Q) dari EST. diagram (A) Ribbon dari octamer EST. Subunit EST ditunjukkan dalam di ff warna erent. (B) distribusi Mengisi pada
permukaan luar EST; muatan negatif berwarna merah, dan muatan positif berwarna biru. distribusi (C) Mengisi pada permukaan internal EST. Dimensi dari dalam dan luar
EST ditunjukkan.

Gambar 2. gambar TEM dari EST - PtNPs. (A) EST - PtNP kompleks yang con fi rmed menggunakan mikroskop elektron dengan 2% uranil asetat pewarnaan. Insets adalah gambar wakil
dari EST - kompleks PtNP pada 2: 1 (kiri) dan 3: 1 (kanan) rasio antara EST dan PtNP. (B) analisis EDX dari EST -
PtNP kompleks. (C - E) sintesis Rasio-dikendalikan dari EST - PtNPs. prekursor Platinum diinkubasi dengan EST pada berbagai rasio molar 500: 1, 1000: 1, dan 3000: 1 selama 2 jam,
menghasilkan kompleks dengan ukuran rata-rata 1,8, 2,6, dan 3,8 nm, masing-masing. The inset di (D) menunjukkan Magni yang fi ed citra sebuah dicemarkan 2,6 nm EST - PtNP.
Periodisitas dari pinggiran kisi ditemukan 0,226 nm dalam arah [111]. Bagian bawah panel dalam (C - E) adalah histogram distribusi ukuran yang sesuai, dengan nomor yang menunjukkan
ukuran rata-rata dari NP.

nm selama 30 menit, dan semua percobaan diulang tiga kali untuk mendapatkan nilai
rata-rata.
2.5. Kegiatan hidrogenasi EST - PtNPs. Kegiatan katalitik dari EST - PtNPs
diukur dengan menggunakan 4-nitrofenol sebagai substrat dalam fase cair. 14 Brie fl y,
campuran reaksi 9 mL mengandung EST - PtNPs (20 ppm PtNP) dan 0,15 M
NaBH 4 diaduk selama 15 menit pada RT. Sebanyak 1 mL dari 4-nitrofenol
reaksi hidrogenasi. Hidrogenasi 4-nitrofenol ke 4- aminophenol juga dipantau pada 405 nm
melalui UV - vis pemindaian selama 5 menit pada interval 1 menit. Akhirnya, 0,12 g
anhidrida asetat ditambahkan ke dalam campuran reaksi untuk menghasilkan fi produk akhir
dari acetaminophen. Pembentukan fi produk akhir dipantau pada interval 5 menit selama 30
menit. Semua reaksi dilakukan pada 22 ° C dengan pengadukan yang kuat. Untuk semua
pengukuran UV, 50 μ aliquot L sampel diencerkan dalam 450

ditambahkan ke campuran untuk menghasilkan fi Konsentrasi nal 0,5 mM, dan

campuran ini diaduk sampai reaksi selesai. Kemajuan reaksi spektrofotometri
dipantau pada 405 nm menggunakan UV - vis spektrometer (UV550, JASCO,
Tokyo, Jepang) selama 6 menit. setiap 50 μ L aliquot dari sampel diencerkan
dalam 450 μ L air suling. Kegiatan hidrogenasi ditentukan sebagai fi Reaksi
pertama-order. Aktivitas hidrogenasi dari natrium sitrat-capped PtNPs pada 20
ppm dinilai dengan cara yang sama.
2.6. Tahapan Catalytic Kegiatan. Sintesis acetaminophen dilakukan dalam
reaksi satu panci dengan mencampurkan 1 mM dari 4nitrophenyl asetat substrat
dengan EST - kompleks PtNP untuk konsentrasi 20 ppm Pt dalam fi Volume reaksi
nal dari 5 mL. Untuk mengukur pelepasan 4-nitrofenol dari 4-nitrophenyl asetat,
UV -
vis spektrum dengan panjang gelombang berkisar 250-500 nm yang dipindai selama 5
menit pada 1 menit interval (UV550, JASCO, Tokyo, Jepang). Selanjutnya, 28,5 mg
NaBH 4 ditambahkan untuk memulai
μ L air suling.
2.7. Perhitungan Hasil Produk Akhir (Acetamino-
phen). Komersial acetaminophen tersedia dalam bentuk bubuk dilarutkan dalam
dimetil sulfoksida (DMSO) sebagai standar dan disuntikkan ke dalam reverse-fase
kolom C18 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA) dalam sistem HPLC Agilent
1100 (Agilent Technologies). Elusi pro fi le acetaminophen dipantau pada 250 nm.
Kurva standar acetaminophen diplot menggunakan area puncak puncak elusi pada y
sumbu dan jumlah tahi lalat di x- sumbu. Jumlah acetaminophen yang dihasilkan
dihitung dengan ekstrapolasi nilai-nilai melalui kurva kalibrasi ( R 2 = 0,9999) ( Gambar
S7 ). Hasil produksi acetaminophen diperoleh dengan menggunakan persamaan
berikut:
hasil acetaminophen (%)
jumlah molekul acetaminophen
= × 100
jumlah mol 4 nitrophenylacetate
-

30060 DOI: 10.1021 / acsami.6b12875

ACS Appl. Mater. antarmuka 2016, 8, 30058 - 30065
ACS Bahan & Interfaces Terapan Artikel Penelitian

2.8. Perhitungan Frekuensi Omset Reaksi tahapan. Frekuensi perputaran

(TOF) nilai EST - PtNP kompleks reaksi tahapan ditentukan dengan
menggunakan rumus berikut: 13

jumlah mol jumlah acetaminophen mol Pt 1

TOF = ×
atom pada permukaan PtNP waktu

3. HASIL DAN PEMBAHASAN

3.1. Sintesis dan Karakterisasi EST - PtNPs.
Esterase (EST) dari M. smegmatis, yang merakit diri ke dalam sumur-de fi ned
kubus seperti kompleks octameric 28 dengan dimensi eksterior keseluruhan 8,0 nm
× 8,0 nm × 6,0 nm, telah diperkenalkan sebagai PS untuk sintesis PtNPs.
Arsitektur kubus-seperti EST mengungkapkan rongga dengan diameter sekitar
2,5 nm terletak di pusat ( Gambar 1 ). EST, enzim hidrolase SGNH, e FFI sien
mengkatalisis pemindahan gugus asil ke alkohol (alkoholisis) dalam kondisi
berair. Hal ini juga sebaiknya mengkatalisis perhydrolysis daripada reaksi
hidrolisis ketika peroksida bertindak sebagai akseptor. 28 Sebanyak enam saluran,
Gambar 3. wilayah spektrum XPS dari EST - PtNP kompleks. (A) O 1s, (B) Pt 4f 7/2 dan 4f Pt 5/2,
dua besar dan empat kecil dengan diameter 2 dan 1 nm, masing-masing,
( C) C 1s, dan (D) N 1s. Garis merah dan putus-putus mewakili fi tted dan eksperimental
disajikan pada setiap wajah kubus cenderung untuk melayani sebagai masukan
kurva, masing-masing. Hitam, hijau, biru, dan coklat garis-garis mewakili puncak energi
untuk substrat dan keluar untuk produk selama katalisis. Situs aktif dari EST
mengikat.
menghadapi ke dalam di rongga kubus-seperti. Est - PtNPs disintesis
menggunakan EST protein sebagai template dengan perlahan-lahan mengurangi
K 2 PtCl 4 dengan NaBH 4 sebagai agen pereduksi dalam larutan berair pada 25 ° C. Gaussian - kurva Lorentzian ( tabel S1 ). XPS puncak pada
Pembentukan PtNPs itu tampak diamati oleh perubahan warna dari kuning muda 69,45 dan 72,88 eV dapat dikaitkan dengan 4f Pt 7/2 dan 4f Pt 5/2
sampai coklat tua, yang juga con fi rmed oleh UV - pengukuran vis spektrum ( Gambar tingkat inti, masing-masing. Pemisahan antara 4f yang 7/2 dan 4f 5/2 puncak adalah
S1 ). Konsisten dengan port ulang sebelumnya, 9 - 11 EST - solusi PtNP menunjukkan 3,4 eV, yang konsisten dengan laporan sebelumnya. 29 Namun, puncak tambahan
UV yang luas - vis spektrum serapan dengan puncak maksimum pada 280 nm, di setiap tingkat inti diamati, mungkin karena pergeseran energi yang disebabkan
perwakilan fi ngerprint dari protein EST ( Gambar S1 ). Sebaliknya, dua puncak oleh protein mengikat.
utama dari K 2 PtCl 4 solusi pada 320 dan 375 nm benar-benar hilang ( Gambar S1 ),
Menunjukkan pembentukan PtNPs. Est - PtNPs berada puri fi ed menggunakan C 1s puncak itu deconvoluted menjadi tiga puncak di 284,70,
tinggi kecepatan sentrifugasi (16 100 RCF) dan dicirikan dengan menggunakan 285,58, dan 287,15 eV, yang dapat ditugaskan untuk C - C dan C -
TEM ( Gambar 2 ). Sebagai kontrol, PtNPs dengan ukuran 2,4 nm yang disintesis H, C • N, dan C • O obligasi, masing-masing. 30 O 1s puncak yang fi tted untuk
secara kimia dan distabilkan oleh natrium sitrat ( Gambar S2 ). tiga puncak di 530,56 dan 531,54 eV dan puncak lemah di 535,51 eV;
posisi ini konsisten dengan literatur sebelumnya. 31 Energi ikat di 531,54 eV
kemungkinan sesuai dengan atom oksigen dalam COO - kelompok terikat
pada permukaan Pt. Spektrum wilayah untuk N 1s adalah

gambar TEM dari EST - PtNPs, diwarnai dengan 2% uranil asetat,
mengungkapkan PtNPs distabilkan oleh beberapa protein EST ( Gambar 2 SEBUAH).
Dalam beberapa kasus, satu PtNP dapat distabilkan oleh dua atau tiga protein
EST ( Gambar 2 A, inset). Namun, secara keseluruhan, distribusi EST sekitar PtNP
tetap heterogen. Kami mengamati bahwa fi nal EST - PtNPs yang cukup
baik-tersebar; sangat sedikit menggumpal terlihat, yang merupakan hasil dari
stabilisasi nanopartikel dengan protein. Perbandingan molar antara prekursor
platinum dan EST dalam campuran reaksi awal sebagian besar memberikan
kontribusi untuk ukuran PtNPs. ketika 1
μ M esterase octameric diinkubasi dengan platinum prekursor pada
konsentrasi 500 μ M, 1 mM, dan 3 mM, ukuran PtNPs mengakibatkan
EST - PtNP nanohybrids yang
1.8 ± 0,3, 2,6 ± 0,4, dan 3,8 ± 0,9 nm, masing-masing ( Angka 2 C - E).
Gambar resolusi tinggi mengungkapkan bahwa jarak kisi adalah 0,226 nm,
yang sesuai dengan (111) bidang platinum menunjukkan struktur kristal fcc ( Gambar
negatif di PS bermain peran dalam deposisi logam dalam tahap awal sintesis
2 D, inset). X-ray energi dispersif (EDX) analisis con fi rmed kehadiran ion
platinum dalam protein - NP kompleks ( Gambar 2 B). X-ray fotoelektron
Spektroskopi (XPS) digunakan untuk menganalisis karakteristik permukaan
EST - PtNP kompleks (Angka 3 dan S3 ). Daerah-spesifik fi c XPS spektrum
diperoleh dan fi tted untuk analisis Pt, C, O, dan N ( Gambar 3 ) menggunakan
fi tted untuk puncak pada 398,51 dan 400,54 eV yang dapat ditugaskan ke
negara kimia NH nitrogen 2 dan NH 3+ terhubung ke atom karbon,
masing-masing. 30 . 31 NH 3+ energi ikat dialihkan relatif terhadap NH 2, mungkin
karena pengikatan NH 3+
kelompok ke permukaan PtNP. 30
Melingkar dichroism (CD) spektrum EST - PtNPs dan EST
mengungkapkan bahwa komposisi struktur sekunder mereka
hampir identik, menunjukkan bahwa secara keseluruhan
konformasi terpelihara dengan baik selama sintesis PtNP. Namun, perubahan
konformasi lokal diharapkan dari penyimpangan kecil dalam dua spektrum ( Gambar
S4 ). Bersama dengan analisis TEM, hasil ini menunjukkan bahwa, tidak
seperti NP lain yang dikenal disimpan di dalam PS, 10 . 18 . 32 PtNPs sebaiknya
disintesis di luar EST, mungkin karena di dalam ff selisih antara distribusi
muatan dari EST dan bahwa dari PS dikenal lainnya seperti Pepa, ferritin, dan
CLPP, yang telah bermuatan negatif residu dalam. 10 . 18 . 32 Namun, EST
menunjukkan permukaan yang sangat bermuatan negatif, sedangkan interior
bermuatan positif ( Gambar 1 B, C). Menimbang bahwa residu bermuatan
NP, NP cenderung tumbuh dari bagian luar EST.
Mengingat semua sifat fisikokimia EST -
PtNPs, kami mengusulkan mekanisme berikut untuk sintesis PtNP di
EST: ( 1) mengikat ion platinum, inkubasi

30.061 DOI: 10.1021 / acsami.6b12875

ACS Appl. Mater. antarmuka 2016, 8, 30058 - 30065
ACS Bahan & Interfaces Terapan Artikel Penelitian

pt 2+ ion dengan molekul EST menyebabkan Pt 2+ ion untuk mengikat ke permukaan EST protein, kami membandingkan aktivitas EST - kompleks PtNP dengan
melalui interaksi elektrostatik dengan permukaan bermuatan negatif dari EST, yang campuran yang mengandung EST dan PtNPs sitrat-stabil ( Gambar 4 ).
berfungsi sebagai situs nukleasi; ( 2) Ukuran rata-rata PtNPs in hybrid dan sitrat-stabil adalah 2,6 dan 2,4 nm,
nukleasi platinum kristal, penambahan jumlah kelebihan zat pereduksi masing-masing. Konsentrasi protein dan Pt di EST - PtNP kompleks
yang kuat (NaBH 4) kemudian mengurangi Pt 2+ Pt 0, setelah Pt 0 inti dianalisis menggunakan uji Bradford dan ICP-OES, masing-masing.
terbentuk pada permukaan EST; ( 3) pertumbuhan PtNPs, di mana dari Ketika campuran EST dan sitrat-stabil PtNP digunakan untuk uji aktivitas,
Pt 0 inti, PtNPs terus berkembang hingga Pt 2+ habis dalam larutan. konsentrasi mereka disesuaikan dengan yang di EST - PtNPs. Aktivitas
hidrolisis dari EST - PtNP kompleks adalah signi fi jauh lebih tinggi
3.2. Evaluasi Kemampuan Catalytic dari EST - PtNPs. dibandingkan dengan campuran yang mengandung EST dan PtNPs
Kita fi pertama menyelidiki kegiatan hidrolitik dan hidrogenasi, secara sitrat-stabil, menunjukkan bahwa PtNPs di EST - PtNP kompleks kontribusi
terpisah, di EST - katalis hybrid PtNP. 4-nitrophenyl asetat digunakan untuk aktivitas katalitik yang disempurnakan EST. Demikian pula, aktivitas
sebagai substrat untuk pengukuran aktivitas hidrolitik dari EST - PtNPs. hidrogenasi EST - PtNPs dibandingkan dengan yang dari PtNPs dalam
Pelepasan 4-nitrofenol dari 4-nitrophenyl asetat diamati selama 30 menit ( Gambar
campuran EST dengan memantau laju reaksi hidrogenasi dari p-
4 ).

nitrophenol untuk p- aminofenol selama 6 menit ( Gambar 5 A, C). Itu

Gambar 4. Enzimatik aktivitas perbandingan 1,8, 2,6, dan 3,8 nm EST -

PtNPs dengan EST saja dan campuran EST dengan 2,6 PtNPs sitrat-stabil nm.
Hidrolisis 4-nitrophenyl acetate untuk 4-nitrofenol dipantau dengan mengambil
absorbansi pada 405 nm. Absorbansi EST hanya ditetapkan sebagai 100%, dan
relatif aktivitas persen dari kondisi lain dihitung relatif terhadap EST saja. Semua
eksperimen dilakukan dalam rangkap; error bar mewakili standar deviasi dari tiga Gambar 5. kegiatan hidrogenasi (A) campuran EST dan 2,4 nm sitrat-stabil PtNPs dan
percobaan individu ( n = 3). di ff erent berukuran EST - PtNPs (B - D). Inset menunjukkan tingkat konstan.

Kami membandingkan kegiatan hidrolitik dari EST - PtNPs dari di ff ukuran erent
untuk memastikan apakah ukuran punya e ff dll aktivitas, yang merupakan salah
satu keterbatasan sebelumnya katalis nano BioHybrid. 11 Hasil penelitian
menunjukkan bahwa aktivitas hidrolitik adalah independen dari ukuran
nanopartikel dalam EST - PtNP kompleks. Karena nanopartikel yang stabil
eksternal, situs aktif interior EST tidak bisa menjadi ff ected oleh pengikatan
PtNPs pada permukaan eksterior. Anehnya, aktivitas hidrolitik dari EST - PtNPs
adalah signi fi jauh lebih tinggi dibandingkan dengan EST saja, menunjukkan
bahwa substrat situs EST mengikat dalam kompleks hybrid lebih terkena
substrat dibandingkan EST saja mungkin dengan perubahan konformasi
disertai dengan PtNP mengikat, yang dibuktikan dengan CD spektrum ( Gambar
S4 ). Secara konsisten, telah juga melaporkan bahwa nanopartikel emas bisa
positif a ff dll aktivitas katalitik dari lysozymes ketika mereka membentuk enzim - NP
konjugasi dengan menginduksi perubahan konformasi dalam lysozymes. 33 sekutu
tambahan-, konjugasi protein untuk nanopartikel logam juga dapat
meningkatkan aktivitas enzim dengan meningkatkan tabrakan dari substrat
dengan enzim dibantu oleh gerakan Brown dari nanopartikel. 12
aktivitas hidrogenasi EST - PtNPs adalah lebih tinggi dari sitrat-stabil PtNPs
fisik dicampur dengan EST, menunjukkan bahwa PtNP distabilkan oleh
protein EST lebih aktif. Hal ini sesuai dengan laporan sebelumnya di mana
aktivitas katalitik nanopartikel logam ditingkatkan ketika mereka terikat
dengan protein. 10 . 11 Mengambil hasil ini bersama-sama,
dapat
menyimpulkan bahwa EST - PtNPs memiliki aktivitas hidrolitik dan
hidrogenasi lebih tinggi dibandingkan dengan kegiatan katalitik dari EST
dan PtNP dalam campuran sederhana. Selain itu, kami juga memeriksa
apakah ukuran PtNPs di nanobiohybrid katalis ff ECTS aktivitas hidrogenasi ( Gambar
5 ). Kami mengamati bahwa konstanta laju genation hidro adalah
berbanding terbalik dengan ukuran nanopartikel dalam EST - PtNP kompleks
( Angka 5 B - D). Hasil ini konsisten dengan hasil perubahan aktivitas
tergantung ukuran nanopartikel Pt dilaporkan dalam literatur lainnya. 34 Kami
juga con fi rmed bahwa katalis nanobiohybrid sangat stabil selama beberapa
siklus reaksi dengan memverifikasi bahwa aktivitas hidrogenasi tidak
menurun ( Gambar S5 ). Hasil ini menunjukkan bahwa ada belum ada
deaktivasi katalis. 35 . 36 Hal ini dikenal bahwa pencucian dan deaktivasi katalis
memiliki sebab - e ff Hubungan dll. 37 Oleh karena itu, kami percaya bahwa
tidak ada pencucian. Untuk memverifikasi analisis ini, kami

Selain itu, untuk memeriksa apakah aktivitas katalitik ditingkatkan adalah

hasil dari sinergi benar antara nanopartikel dan EST

30062 DOI: 10.1021 / acsami.6b12875

ACS Appl. Mater. antarmuka 2016, 8, 30058 - 30065
ACS Bahan & Interfaces Terapan
fi disaring campuran reaksi melalui membran dengan 10 kDa berat molekul
dipotong o ff dan menganalisis fi menyusup menggunakan ICPOES. Namun, kami
tidak bisa mendeteksi Pt di fi menyusup, yang menunjukkan bahwa jumlah
pencucian Pt lebih rendah dari batas deteksi mesin kami. Oleh karena itu, kita
dapat menyimpulkan bahwa tidak ada pencucian di setup saat percobaan. Ini
telah didokumentasikan dengan baik bahwa ukuran PtNPs (terutama <5 nm)
sangat di fl uences aktivitas katalitik. 6 . 38 . 39
Pertanyaannya adalah mengapa melakukan EST - PtNPs menunjukkan aktivitas
katalitik lebih tinggi dari sitrat - PtNPs meskipun ukuran mereka mirip? Kami
percaya bahwa di fungsional ff selisih berasal dari jumlah situs aktif yang
tersedia. The PtNPs di EST -
PtNP kompleks yang stabil dan dilindungi oleh protein EST karena
mereka membentuk protein termodinamika stabil -
nanopartikel entitas. Oleh karena itu, hibridisasi EST kemungkinan untuk
meningkatkan stabilitas dan dispersi dari PtNPs di lingkungan berair ( Gambar
2 ). Akibatnya, situs katalitik hadir pada permukaan PtNPs sepenuhnya
terkena dalam keadaan aktif. Selain itu, aksesibilitas substrat ke situs katalitik
pada PtNPs tidak bisa menjadi ff ected oleh EST karena substrat dapat
dengan bebas mengakses ke nanopartikel melalui saluran pelarut hadir
antara subunit EST ( Gambar 1 ). Namun, dalam kasus PtNPs sitrat-stabil,
partikel tidak baik tersebar ( Gambar S2 ). Oleh karena itu, diharapkan bahwa
permukaan PtNP tidak akan sepenuhnya dapat diakses dengan substrat.
Konsisten dengan interpretasi ini, telah dilaporkan bahwa aktivitas
hidrogenasi PtNPs ditingkatkan ketika mereka bergerak pada support karena
peningkatan dispersi bila dibandingkan dengan PtNPs capped tidak
didukung. 40 Hal ini juga melaporkan bahwa PtNPs protein-stabil telah
menunjukkan hingga 40% ditingkatkan kegiatan ROS-pemulungan dari
PtNPs distabilkan oleh stabilizer organik. 10 . 11
3.3. Sintesis dari Acetaminophen Menggunakan Gabungan Kegiatan
Catalytic dari EST - PtNPs. Kami kemudian diuji aktivitas katalitik gabungan
dari EST - PtNPs menggunakan 4-nitrophenyl asetat sebagai bahan awal.
hidrolisis EST-dimediasi menghasilkan 4-nitrofenol, dengan
perkembangan warna kuning ( skema 1 -1 dan Gambar 6 ). hidrogenasi
berikutnya 4nitrophenol dipantau oleh hilangnya warna kuning di bawah
kondisi mengurangi ( skema 1 -2), menunjukkan bahwa reaksi dua langkah
ini selesai dengan satu bioinorganic
Gambar 6. Reaksi bertingkat dikatalisasi oleh EST - kompleks PtNP. Hidrolisis
4-nitrophenyl asetat untuk menghasilkan 4-nitrofenol dipantau oleh perubahan dalam
spektrum dari 275 nm (oranye) ke 405 nm (biru tua). hidrogenasi berikutnya dari
4-nitrofenol mengakibatkan hilangnya puncak serapan pada 405 nm dan munculnya
puncak baru pada 300 nm (merah muda). Itu N- ( 4-hidroksifenil) acetamide
(acetaminophen) secara spontan dibentuk di hadapan anhidrida asetat (cahaya biru
dan abu-abu). Hitam, merah, hijau, dan oranye garis menunjukkan spektrum
penyerapan acetaminophen, EST - PtNP kompleks, anhidrida asetat, dan
4-nitrophenyl asetat, masing-masing.
30.063
Artikel Penelitian
nanohybrid katalis. Produk terhidrogenasi, fenol 4-amino, kemudian
bereaksi dengan anhidrida asetat untuk membentuk fi produk akhir, N-
(4-hidroksifenil) acetamide (acetamino- phen) ( skema 1 -3). ketika EST - PtNPs
diinkubasi dengan 4-nitrophenyl asetat, NaBH 4, dan asetat anhidrida,
yang fi produk akhir, acetaminophen, secara spontan terbentuk ( skema
1 -4). Semua reaksi dilakukan dalam satu kapal pada suhu kamar tanpa
peralatan khusus. Reaksi dimulai pada fasa berair, tapi berikutnya
hidrolisis oleh EST menyebabkan pembentukan asam asetat. Oleh
karena itu, fase berair dikonversi ke fase air asam. Namun, karena
diketahui bahwa asetilasi dapat dilakukan dengan adanya lingkungan
asam lemah, seluruh reaksi dapat dilakukan tanpa menggunakan
pelarut organik. 41 Untuk alasan yang sama,
liofilisasi tidak diperlukan sebelum
asetilasi. Proses reaksi keseluruhan tampaknya harus diselesaikan dalam
waktu 10 menit karena tidak ada perubahan spektral diamati setelah 10
menit reaksi ( Gambar 6 ). Campuran reaksi adalah syringe- fi disaring dan
dianalisis menggunakan kromatografi cair - spektrometri massa (LC - MS)
untuk con fi rm pembentukan acetaminophen ( Gambar 7 ). Dalam mode positif
Gambar 7. spektrum massa fi disaring tahapan campuran reaksi katalisis dalam ESI (+)
modus. Puncak di 151,9 m / z merupakan puncak untuk acetaminophen.
LC - MS puncak diperoleh di 151,9, yang sesuai dengan nilai yang dihitung
dari acetaminophen (C 8 H 9 TIDAK 2 [ M + H] +
152,1). Dengan penerapan kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) untuk
mengukur fi produk akhir, hasil konversi adalah con fi rmed menjadi 96% ( Gambar
S6 dan S7 ) Dan frekuensi perputaran (TOF) adalah 4,44 × 10 - 4 s - 1 ( melihat
Bagian Analisis Data dalam Informasi Pendukung ). Kami juga melakukan
reaksi sintesis acetaminophen dengan adanya campuran EST dan PtNPs
sitrat-stabil ( Gambar S8 ). Namun, ketika hasil dari reaksi yang dilakukan
oleh campuran EST dan PtNPs sitrat-stabil dihitung, ternyata menjadi
75%. Hasil ini menunjukkan bahwa EST - katalis nanobiohybrid PtNP
sangat e FFI efisien dan menguntungkan dari segi hasil reaksi
dibandingkan dengan katalis individu. Secara bersama-sama, hasil ini
menunjukkan bahwa EST - PtNP katalis bioinorganic nanohybrid dapat
digunakan untuk melakukan reaksi tahapan untuk sintesis
acetaminophen dalam reaksi satu-pot dengan hasil yang tinggi dan e FFI keampuhan
dalam waktu singkat. Gopinathan et al. sebelumnya telah menunjukkan
rute kimia untuk mensintesis acetaminophen dengan 86% hasil dari
reaksi hydroquinone dengan acetamide pada temperatur tinggi (280 -
300 ° C) dengan adanya katalis asam padat seperti zeolit β
atau hetero a. 42 Baru-baru ini, Joncour et al. telah menunjukkan rute
kimia hijau untuk sintesis langsung acetaminophen dengan hasil tinggi
(95%) dari hydroquinone menggunakan amonium asetat sebagai agen
amidating, tetapi
DOI: 10.1021 / acsami.6b12875
ACS Appl. Mater. antarmuka 2016, 8, 30058 - 30065
ACS Bahan & Interfaces Terapan
Reaksi dimanfaatkan suhu tinggi (220 ° C) dan waktu reaksi yang lama (15
h). 43 Dalam reaksi ini, suhu tinggi diterapkan untuk dehidrasi amonium
asetat. Selain itu, reaksi suhu tinggi akan menguntungkan karena laju
reaksi umumnya ditingkatkan pada suhu tinggi. Dalam pendekatan kami,
kami merancang reaksi tahapan pada suhu kamar dan tekanan atmosfer
dalam pertimbangan bahwa reaksi dilakukan oleh protein yang dapat
dengan mudah kehilangan lipat dan aktivitas mereka di suhu tinggi.
Namun, meskipun reaksi dilakukan pada suhu kamar, kita akan mampu
untuk mendapatkan produk dengan hasil yang tinggi dalam waktu singkat.
Brie fl y, dibandingkan dengan metode sebelumnya yang telah digunakan
untuk sintesis acetaminophen, pendekatan saat memiliki kelebihan dalam
hal biaya, waktu, dan lingkungan karena semua reaksi dilakukan dalam
fasa berair di bawah suhu kamar dan tekanan atmosfer dalam waktu
singkat (10 menit) tanpa menggunakan peralatan mahal atau khusus.
Keuntungan ini dapat dan akan diterjemahkan ke dalam signi fi pemotongan
biaya tidak bisa untuk industri. Dengan demikian, metode ini mungkin
dapat memfasilitasi produksi senyawa aktif farmasi di tempat di mana
investasi untuk membangun lini produksi baru atau akses ke peralatan
dibatasi.
4. KESIMPULAN
Singkatnya, kami mengembangkan metode sederhana untuk mensintesis EST - PtNP, DJ; Kiely, CJ; Hutchings, GJ The Direct Synthesis of Hydrogen Peroxide
katalis nanobiohybrid, dengan menumbuhkan PtNPs di hadapan enzim
oligomer. Est - PtNPs menunjukkan peningkatan kemampuan hidrolitik dan
hidrogenasi sementara mengatasi ukuran dan stabilitas keterbatasan yang
dihadapi sebelumnya BioHybrid katalis. Kami juga menunjukkan bahwa EST
saat ini - katalis nanobiohybrid PtNP dapat digunakan untuk sintesis satu-pot dari
acetaminophen dalam biaya-e ff efektif dan environ- cara yang ramah mental. o
ini ff ers signi fi keuntungan tidak bisa dibandingkan dengan proses sintetis yang
tersedia saat ini, dan dengan demikian penelitian ini bisa berpotensi o ff er cara
baru memanfaatkan keuntungan dari kombinasi kimia organologam dan
Biocatalysis untuk berbagai aplikasi.
■ TERKAIT ISI
* S informasi pendukung
Informasi Pendukung tersedia gratis di
situs ACS Publikasi di DOI: 10.1021 / acsami.6b12875 . Analisis data
tambahan dari TOF, UV - vis, CD, HPLC, dan hasil XPS dari EST - PtNP;Curr. Opin. Biotechnol. 2015, 34, 242 - 250. (13) Filice, M .; Marciello, M .;
analisis TEM sitrat -
PtNP; reaksi hidrogenasi siklik; dan kurva standar
acetaminophen. tabel fi Hasil tting untuk wilayah XPS
spektrum Pt, N, O, dan C. ( PDF )
■ INFORMASI PENULIS
Penulis yang sesuai
* E-mail: kyeongkyu@skku.edu . Tel: + 82-31-299-6136. Fax: 82- 31-299-6159.
penulis Kontribusi
§ BHS dan SR kontribusi sama untuk pekerjaan ini.
Catatan
Para penulis menyatakan tidak ada bersaing fi bunga keuangan.
■ UCAPAN TERIMA KASIH
Karya ini didukung oleh Next Generation BioGreen 21 Program (SSAC
PJ0110705).
30.064
Artikel Penelitian
■ REFERENSI
(1) Filice, M .; Palomo, JM Cascade Reaksi Dikatalisis oleh
Bionanostructures. ACS Catal. 2014, 4, 1588 - 1598. (2) Engstro ̈ m, K .; Johnston,
EV; Verho, O .; Gustafson, KPJ; Syakeri, M .; Tai, CW; ba ̈
ckvall, JE Co-imobilisasi dari
Enzim dan logam ke dalam kompartemen dari mesopori Silika Koperasi Tandem
Katalisis: Sebuah Metalloenzyme Buatan. Angew. Chem., Int. Ed. 2013, 52, 14.006 - 14010.
(3) Prastaro, A .; Ceci, P .; Chiancone, E .; Boffi, A .; Cirilli, R .; colone,
M .; Fabrizi, G .; Stringaro, A .; Cacchi, S. Suzuki-Miyaura CrossCoupling
Dikatalisis oleh Protein-stabil Nanopartikel Palladium bawah Kondisi aerobik
di air: Aplikasi untuk One-Pot Chemoenzymatic Sintesis Enansioselektif dari
Kiral Biaryl Alkohol.
Hijau Chem. 2009, 11, 1929 - 1932.
(4) van Dongen, SFM; Nallani, M .; Cornelissen, JJLM; Nolte,
RJM; van Lasso, JCM A Tiga-enzim Cascade Reaksi melalui Posisi Majelis
Enzim dalam Polymersome Nanoreactor. Chem. - Eur. J. 2009, 15, 1107 - 1114.
(5) Bornscheuer, UT; Huisman, GW; Kazlauskas, RJ; Lutz, S .; Moore, JC;
Robins, K. Teknik Gelombang Ketiga dari Biocatalysis.
Alam 2012, 485, 185 - 194.
(6) Yamamoto, K .; Imaoka, T .; Chun, WJ; Enoki, O .; Katoh, H .; Takenaga, M .;
Sonoi, A. Ukuran-Spesifik Kegiatan Catalytic dari Platinum Cluster Meningkatkan Reaksi
Oksigen Reduction. Nat. Chem. 2009, 1,
397 - 402.
(7) Edwards, JK; Pritchard, J .; Lu, L .; Piccinini, M .; Shaw, G .; Carley, AF; Morgan,
Menggunakan Emas Platinum-Dipromosikan -
Katalis Palladium. Angew. Chem., Int. Ed. 2014, 53, 2381 - 2384. (8) Navlani-Garcia, M .;
Martis, M .; Lozano-Castello, D .; CazorlaAmoros, D .; Mori, K .; Yamashita, H.
Investigasi Pd Nanopartikel yang didukung pada Zeolit ​untuk Produksi Hidrogen dari
Asam format Dehidrogenasi. Catal. Sci. Technol. 2015, 5, 364 - 371. (9) Kajita, M .;
Hikosaka, K .; Iitsuka, M .; Kanayama, A .; Toshima, N .; Miyamoto, Y. Platinum Nano
Partikel adalah Scavenger Berguna superoksida Anion dan Hidrogen Peroksida. Res
Radikal bebas. 2007,
41, 615 - 626.
(10) San, BH; Moh, SH; Kim, KK Pengaruh Kerang Protein pada Kegiatan
Antioksidan dari Protein-Encapsulated Platinum Nanopartikel. J. Mater. Chem. 2012,
22, 1774 - 1780. (11) San, BH; Kim, S .; Moh, SH; Lee, H .; Jung, DY; Kim, KK
Platinum Nanopartikel Encapsulated oleh Aminopeptidase: a multifungsi
Bioinorganic Nanohybrid Catalyst. Angew. Chem., Int. Ed.
2011, 50, 11.924 - 11.929.
(12) Ding, S .; Cargill, AA; Medintz, IL; Claussen, JC Meningkatkan Kegiatan
Imobilisasi Enzim dengan Nano Partikel konjugasi.
Morales, M. d. P .; Palomo, JM Sintesis heterogen Enzim-Logam Nano Partikel
Biohybrids di encer Media dan Aplikasi mereka di Formasi CC Bond dan
Tandem Katalisis. Chem. Commun. 2013, 49, 6876 - 6878. (14) San, BH; Ha, EJ;
Paik, HJ; Kim, KK Radiofrequency Pengobatan Meningkatkan Fungsi Catalytic
dari Catalyst Imobilisasi Nanobiohybrid. nano 2014, 6, 6009 - 6017. (15) Ganai,
AK; Shinde, P .; Dhar, BB; Sen Gupta, S .; Prasad, BL
V. Pengembangan multifungsi Catalyst untuk " Menyampaikan " Reaksi.
RSC Adv. 2013, 3, 2186 - 2191.
(16) Moh, SH; Kulkarni, A .; San, BH; Lee, JH; Kim, D .; Park, K.
S .; Lee, MH; Kim, T .; Kim, KK photocurrent Peningkatan SiNW-FET oleh
Mengintegrasikan Protein-Dikuliti CdSe Quantum Dots.
nano 2016, 8, 1921 - 1925.
(17) San, BH; Lee, S .; Moh, SH; Park, JG; Lee, JH; Hwang, H.
Y .; Kim, KK Ukuran dikendalikan Sintesis dan Karakterisasi Koptik Nanopartikel
Menggunakan Kerang Protein. J. Mater. Chem. B 2013, 1, 1453 -
1460.
(18) Moh, SH; San, BH; Kulkarni, A .; Kim, T .; Kim, Sintesis KK dan
Electric Karakterisasi Protein-Dikuliti CdSe Quantum Dots. J. Mater. Chem.
C 2013, 1, 2412 - 2415.
DOI: 10.1021 / acsami.6b12875
ACS Appl. Mater. antarmuka 2016, 8, 30058 - 30065
ACS Bahan & Interfaces Terapan Artikel Penelitian

(19) San, BH; Kim, JA; Kulkarni, A .; Moh, SH; Dugasani, SR; Subramani,
VK; Thorat, ND; Lee, HH; Park, SH; Kim, T .; Kim,
KK Menggabungkan Protein-Dikuliti Platinum Nanopartikel dengan Graphene
Membangun Bionanohybrid Capacitor. ACS Nano 2014, 8,
12120 - 12.129.
(20) Suzuki, M .; Abe, M .; Ueno, T .; Abe, S .; Goto, T .; Toda, Y .; Akita, T .;
Yamada, Y .; Watanabe, Y. Persiapan dan Reaksi Catalytic dari Au / Pd bimetal
Nanopartikel di Apo-Feritin. Chem. Commun. 2009, 32, 4871 - 4873.
(21) Ueno, T .; Suzuki, M .; Goto, T .; Matsumoto, T .; Nagayama, K .; Watanabe, Y.
Ukuran-Selektif Olefin Hidrogenasi oleh Pd nanocluster Disediakan dalam Apo-Feritin
Cage. Angew. Chem., Int. Ed. 2004,
Situs Active di Biomassa Konversi Reaksi. Hijau Chem. 2015,
17, 4133 - 4145.
(38) Arenz, M .; Mayrhofer, KJJ; Stamenkovic, V .; Blizanac, BB; Tomoyuki, T .;
Ross, PN; Markovic, NM Pengaruh Ukuran Partikel pada Kinetika CO
Electrooxidation pada tinggi permukaan Area Pt Katalis. Selai. Chem. Soc. 2005, 127,
6819 - 6829. (39) Park, S .; Xie, Y .; Weaver, Persiapan Electrocatalytic MJ di
Carbon-didukung Platinum Nanopartikel: Perbandingan Tarif
ParticleSize-Dependent dari Methanol, Asam format, dan formaldehida
Electrooxidation. Langmuir 2002, 18, 5792 - 5798. (40) Li, XD; Li, GZ; Zang, WT;
Wang, L .; Zhang, XW Catalytic Kegiatan Shaped Platinum Nanopartikel untuk
Hidrogenasi: A Kinetic Study. Catal. Sci. Technol. 2014, 4, 3290 - 3297. (41)
pengurangan Huber, J., Jr Stepwise dari p-nitrofenol. US Patent

43, 2527 - 2530.

(22) Mann, S .; Meldrum, FC Terkendali Sintesis Bahan anorganik
4.264.525, 28 April, tahun 1981.
Menggunakan supramolekul Sidang. Adv. Mater. 1991, 3,
(42) Gopinathan, S .; Gopinathan, C .; Kuruvilla, J .; Pardhy, SA; Ratnasamy,
316 - 318.
Proses P. untuk persiapan N- Aminophenol asetil.
(23) Douglas, T .; Dickson, DP; Betteridge, S .; Charnock, J .; Mengumpulkan,
US Patent 5.856.575, 5 Januari 1999. (43) Joncour, R .; Duguet, N .; Metay, E .;
CD; Mann, Sintesis S. dan Struktur Besi (III) Sulfida-Feritin Bioinorganic
Ferreira, A .; Lemaire, M. amidasi Derivatif Fenol: Sebuah Sintesis Langsung dari
nanokomposit. Ilmu 1995, 269, 54 - 57. (24) Douglas, T .; Young, M. Host-Tamu
Parasetamol (Asetaminofen) dari Hydroquinone. Hijau Chem. 2014, 16, 2997 -
Encapsulation Bahan oleh Rakitan Kandang Virus Protein. Alam 1998, 393, 152 - 155.
(25) Kim, D .; San, BH; Moh, SH; Park, H .; Kim, DY; Lee, S .; Kim, Dasar
3002.
Struktural KK untuk Kekhususan Substrat dari Pepa dari

Streptococcus pneumoniae, sebuah Dodecameric Tetrahedral Protease.

Biochem. Biophys. Res. Commun. 2010, 391, 431 - 436. (26) Bradford, MM Cepat
dan Metode Sensitif untuk Penghitungan Mikrogram Kuantitas dari Protein
Memanfaatkan Prinsip Protein-Dye Binding. Anal. Biochem. 1976, 72, 248 - 254.
(27) Xiao, XY; Bard, AJ Observing Tunggal Nano Partikel Tabrakan pada
Ultramicroelectrode oleh Electrocatalytic Amplifikasi. Selai. Chem. Soc. 2007, 129, 9610
- 9612.

(28) Mathews, saya .; Soltis, M .; Saldajeno, M .; Ganshaw, G .; Sala, R .; Weyler,

W .; Cervin, MA; Whited, G .; Bott, R. Struktur dari Novel Enzim yang mengkatalisis
Asil Transfer ke Alkohol dalam Kondisi encer. Biokimia 2007, 46, 8969 - 8979.

(29) Brault, P .; Caillard, A .; Baranton, S .; Mougenot, M .; Cuynet, S .;

Coutanceau, C. Satu-Langkah Sintesis dan Kimia Karakterisasi Pt-C nanowire
Komposit oleh Plasma Sputtering. ChemSusChem
2013, 6, 1168 - 1171.
(30) Zhao, M .; Cao, Y .; Liu, X .; Deng, J .; Li, D .; Gu, H. Pengaruh Persentase
Nitrogen Atom pada MWCNTs N + -Bombarded di Cytocompatibility dan
hemocompatibility. Nano Res. Lett. 2014,
9, 142.
(31) Wurth, W .; sto ̈ hr, J .; Feulner, P .; Pan, X .; Bauchspiess, KR; Baba, Y .; Hudel,
E .; Rocker, G .; Menzel, D. Bonding, Struktur, dan Magnet dari Physisorbed dan
chemisorbed O 2 pada Pt (111). Phys. Rev. Lett. 1990, 65, 2426 - 2429.

(32) Flenniken, ML; Uchida, M .; Liepold, LO; Kang, S .; Muda,

MJ; Douglas, T. Sebuah Perpustakaan Arsitektur Protein Cage sebagai Nanomaterials. Curr.
Teratas. Microbiol. Immunol. 2009, 327, 71 - 93. (33) Gagner, JE; Qian, X .; Lopez, MM;
Dordick, JS; Siegel, R.
W. Pengaruh Emas Nano Partikel Struktur pada konformasi dan Fungsi Terserap
Protein. biomaterial 2012, 33, 8503 - 8516. (34) Lin, XB; Wu, M .; Wu, DY; Kuga, S .;
Endo, T .; Huang, Y. Platinum Nanopartikel Menggunakan Nanomaterials Wood:
Eco-Friendly Sintesis, Shape Control dan Catalytic Kegiatan untuk p-Nitrophenol
Pengurangan. Hijau Chem. 2011, 13, 283 - 287.

(35) Nam, JO; Kim, J .; Jin, SH; Chung, YM; Lee, CS Mikofluida Persiapan
dari Catalyst sangat aktif dan Stabil Kinerja Tinggi dari Encapsulation
Polyvinylpyrrolidone (PVP) -PT Nanopartikel di Mikrokapsul. J. koloid
Antarmuka Sci. 2016, 464,
246 - 253.
(36) Wang, F .; Ren, J .; Cai, YL; Sun, L .; Chen, CL; Liang, S .; Jiang, XM
Nanopartikel Palladium Terbatas Dalam ZSM-5 Zeolit ​dengan Stabilitas
Peningkatan untuk Hidrogenasi p-nitrofenol ke paminophenol. Chem. Eng. J. 2016, 283,
922 - 928.
(37) Sadaba, saya .; Lopez Granados, ML; Riisager, A .; Taarning, E.
Deaktivasi Katalis Padat di Media Cair: Kasus Pelucutan

30065 DOI: 10.1021 / acsami.6b12875

ACS Appl. Mater. antarmuka 2016, 8, 30058 - 30065