ESPECTROFOTOMETRÍA

Almeida Guerrero Andrea Carolina

UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS ESPE
NRC:1233
acalmeida4@espe.edu.ec

I. OBJETIVO GENERAL
Realizar un análisis espectrofotométrico a una solución de permanganato de potasio
K Mn O4.

II. OBJETIVOS ESPECÍFICOS

1. Redactar el procedimiento y el uso del espectrofotómetro
2. Preparar soluciones de K Mn O4 a diferentes concentraciones: 0,01M, 0,001M, 0,0001M,
0,00001M para tener una curva de calibración e interpolar una muestra problema, y obtener
su concentración.
3. Realizar una curva de calibración.
4. Determinar la cantidad de manganeso que se encuentra en la solución problema.

III. MARCO TEÓRICO

A. Espectro
Referido a un objeto, el espectro electromagnético o simplemente espectro es la radiación
electromagnética que emite (espectro de emisión) o absorbe (espectro de absorción) una
sustancia cualquiera, ya sea en la Tierra o en el espacio estelar. En este sentido, el espectro
sirve para identificar cualquier sustancia a través del ojo humano en un rango de 400nm y
700nm lo cual es perceptible. Los espectros se pueden observar mediante espectroscopios,
con los cuales, además, se pueden medir la longitud de onda, la frecuencia y la intensidad
de la radiación .El espectro electromagnético se extiende desde la radiación de menor
longitud de onda (rayos gamma, rayos X), hasta las de mayor longitud de onda (ondas de
radio). (astrojem, s.f)

Fig.1Diagrama del espectro electromagnético

espectrofotometría (2015)
B. Espectrofotómetro

Es un instrumento con el que se apoya la espectrofotometría para medir la cantidad de

intensidad de luz absorbida después de pasar a través de una solución muestra. Con
el espectrofotómetro, la cantidad de una sustancia química conocida (concentraciones)
también puede determinarse midiendo la intensidad de la luz detectada. Dependiendo del
rango de longitud de onda de la fuente de luz.

La estructura básica de los espectrofotómetros consiste en una fuente de luz, un colimador,

un monocromador, un selector de longitud de onda, una cubeta para la solución muestra, un
detector fotoeléctrico y una pantalla digital o un medidor. El espectrómetro produce un
rango deseado de longitud de onda de luz. Primero un colimador (lente) transmite un haz
recto de luz (fotones) que pasa a través de un monocromador (prisma) para dividirlo en
varias componentes de longitudes de onda (espectro). Entonces un selector de longitud de
onda (ranura) transmite sólo las longitudes de onda deseadas. Después de que el rango
deseado de longitud de onda de luz pasa a través de la solución muestra en la cubeta, el
fotómetro detecta la cantidad de fotones que se absorbe y luego envía una señal a un
galvanómetro o una pantalla digital. (espectrofotometro, 2011)

Fig.2Espectrofotómetro
espectrofotómetro(2011)

Fig.3 Partes del espectrofotómetro

espectrofotómetro(2011)
C. Espectrofotometría

La espectrofotometría es un método científico utilizado para medir cuanta luz absorbe una
sustancia química, midiendo la intensidad de la luz cuando un haz luminoso pasa a través
de la solución muestra, basándose en la Ley de Beer-Lambert. Esta medición también
puede usarse para medir la cantidad de un producto químico conocido en una sustancia.
El principio básico es que cada compuesto absorbe o transmite luz sobre un cierto rango de
longitud de onda. Este es un principio subyacente de la espectrofotometría: la intensidad del
color es una medida de la cantidad de un material en solución.
Un segundo principio de la espectrofotometría es que cada sustancia absorbe o transmite
ciertas longitudes de onda de energía radiante pero no otras longitudes de onda.
(espectrofotometro, 2011)
Las principales ventajas de la espectrofotometría son:
 Sensibilidad relativa elevada.
 Facilidad para realizar mediciones rápidas.
 Grado de especificidad relativamente elevado.

D. Fundamento de la Espectrofotometría
 Se hace incidir luz monocromática sobre un medio homogéneo.
 Parte de la luz es absorbida por el medio y otra transmitida.
 Promueve el estado del analito a un estado excitado.
 Se mide la cantidad de luz absorbida en función de la longitud de onda utilizada

Fig. 4: absorción de las radiaciones ultravioletas

(quimbiotec, 2010).

La absorción de las radiaciones ultravioletas, visibles e infrarrojas depende de la estructura

de las moléculas, y es característica de cada sustancia química (quimbiotec, 2010).

E. Ley de Lambert
Esta ley establece que cuando pasa luz monocromática por un medio homogéneo, la
disminución de la intensidad del haz de luz incidente es proporcional al espesor del medio,
lo que equivale a decir que la intensidad de la luz transmitida diminuye exponencialmente
al aumentar aritméticamente el espesor del medio absorbente (Fig. 5):

Fig.5 Ley de Lambert

Guía Química (2015)

La siguiente relación matemática da cuenta de esta ley:

𝑃
= 𝑒 −𝑘𝑏 (1)
𝑃0

Donde:

Po : Intensidad de la luz incidente

P : Intensidad de la luz transmitida
b : Espesor del medio absorbente
k : Constante, cuyo valor depende de la naturaleza del soluto, de la longitud de onda de la
luz incidente, del espesor del medio absorbente y de la naturaleza del medio.

F. Ley de Beer

La intensidad de un haz de luz monocromática disminuye exponencialmente al aumentar

aritméticamente la concentración de la sustancia absorbente, cuando este haz pasa a través
de un medio homogéneo (Fig. 6).

Fig.6 Ley de Beer

Guía Química (2015)

La relación matemática que da cuenta de esta ley se muestra a continuación:

 𝑃
= 𝑒 −𝑘𝑐 (2)
𝑃0

Donde:

Po : Intensidad de la luz incidente

P : Intensidad de la luz transmitida
c : Concentración de la solución
k : Constante, cuyo valor depende de la naturaleza del soluto, de la longitud de onda de la
luz incidente, de la concentración de la solución, y frecuentemente, de la naturaleza del
medio.

G. Ley de Lambert-Beer

La ley de Lambert-Beer establece que la absorbancia está directamente relacionada con las
propiedades intrínsecas del analito, con su concentración y con la longitud de la trayectoria
del haz de radiación al atravesar la muestra. La expresión matemática de la ley de Lambert-
Beer es:

𝑃0
log =𝑎𝑏𝑐 (3)
𝑃

𝐴 = 𝑎 𝑏 𝑐 (4)

donde :
a : Absortividad
b : Longitud o espesor del medio (longitud de la cubeta)
c : Concentración de la solución
A: absorbancia

H. Transmitancia

Relación de la cantidad de luz transmitida a la cantidad de luz que cayó inicialmente en la

superficie. Por consiguiente ,es la razón entre la luz monocromática transmitida (P) por una
muestra y la energía o luz incidente (Po) sobre ella. Tanto la energía radiante incidente
como la transmitida deben ser medidas a la misma longitud de onda.

𝑃
𝑇= (5)
𝑃0

𝑃
%𝑇 = × 100 (6)
𝑃0
Donde:

T: transmitancia
P: intensidad de la luz transmitida
P0:intensidad de la luz incidente
Se acostumbra a considerar la transmitida como la razón de la luz transmitida por la
muestra y la luz transmitida por un estándar arbitrario. Este estándar puede ser el líquido
(solvente) en que esta disuelta la muestra, aire, blanco analítico (solución que contiene
todos los componentes de la solución problema menos la sustancia problema) u otra
sustancia elegida arbitrariamente. Debido a que la transmitancia de este estándar no es
necesariamente 100%, es necesario especificar el estándar con el cual la muestra es
comparada. (Guia_TP_2_Quimica_II, 2015)

I. Absorbancia
Se define como la cantidad de energía radiante absorbida por una sustancia pura o en
solución. Matemáticamente, corresponde al logaritmo negativo de la transmitancia.T,
transmitancia expresada como fracción decimal %T, transmitancia expresada como
porcentaje. (Guia_TP_2_Quimica_II, 2015)
𝑃
𝐴 = − log 𝑇 = − log (7)
𝑃0
Esto permite que diferentes espectrofotómetros con diferentes fuentes de luz produzcan lecturas de
absorción independientes de la potencia de la fuente de luz.

J. Absortividad y Absortividad molar

La absortividad de una solución es la cantidad de luz que ésta es capaz de absorber. Es la

relación entre su absorbancia y la concentración de la solución por la longitud de la celda
en la cual se halla dicha solución, ya que ésta es la trayectoria que la luz debe atravesar.La
absortividad es directamente proporcional a la conductividad del soluto presente en la
solución absorbente.
La absortividad de una solución es la cantidad de luz que ésta es capaz de absorber. Es la
relación entre su absorbancia y la concentración de la solución por la longitud de la celda
en la cual se halla dicha solución, ya que ésta es la trayectoria que la luz debe atravesar. La
absortividad es directamente proporcional a la conductividad del soluto presente en la
solución absorbente. (quimica.laguia2000.com, 2015)
Así se reemplazara en la ecuación de Lambert-Beer la a de absortividad por ε que seria
absortividad molar así queda la ecuación de la siguiente manera:

𝐴 = 𝜀 𝑏 𝑐 (8)
K. Curva de absorbancia

La longitud de onda de trabajo corresponde, generalmente, a la longitud de onda en la cual

la absorbancia del analito (sustancia a analizar) es máxima, y recibe la denominación de
Lambda máximo (λmax). Para seleccionar el λmax., se hace un espectro de absorción o
curva espectral, y que consiste en una gráfica de la absorbancia de una solución de la
sustancia absorbente de concentración adecuada, medida a distintas longitudes de onda y en
ella se determina el λmax.

Fig.7 Curva espectral

Guía Química (2015)

Las mediciones de absorbancia se hacen en la zona de longitudes de onda donde se espera

que absorba la sustancia problema. Si se trata de sustancias coloreadas, las mediciones se
realizan en la zona visible del espectro electromagnético (380 a 800nm). En el caso de
sustancias no coloreadas, las mediciones se realizan en la región ultravioleta del espectro
electromagnético (200 a 380nm). (Guia_TP_2_Quimica_II, 2015)

L. Curva de calibración
Uno de los métodos más utilizados para determinar la concentración de una muestra
problema, es el método de la curva de calibración. Esta curva de calibración es una gráfica
que relaciona la concentración de al menos cinco soluciones de estándar de concentraciones
conocidas, con la absorbancia de cada uno de ellos a la longitud de onda máxima (λ max).
(Guia_TP_2_Quimica_II, 2015)
 Fig.8 Curva de calibración

Guía Química (2015)

Una vez obtenida la gráfica se determina la función matemática que presenta dicha recta a
través del tratamiento estadístico de regresión de los mínimos cuadrados, la cual relaciona
la absorbancia y la concentración de un analito. La siguiente ecuación matemática
corresponde a dicha función:

𝑦 = 𝑎𝑥 + 𝑏 (9)

Donde:

y : Absorbancia.
b : Intercepto de la recta
a : Pendiente de la recta y que corresponde al producto entre absortividad a de la muestra y
el espesor b de la cubeta.
Luego se mide la absorbancia de la solución problema y se interpola su valor en la gráfica o
se reemplaza en la ecuación (9), para obtener el valor de concentración del analito.

Fig.9 Interpolación gráfica

Guía Química (2015)

Con base en que la absorbancia guarda una relación lineal con la concentración se
comprende la existencia de la siguiente expresión matematica:

𝐴1 𝐶1
= (10)
𝐴2 𝐶2
 𝐶1 = 𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑝𝑟𝑜𝑏𝑙𝑒𝑚𝑎

𝐴1 × 𝐶2
𝐶𝑜𝑛𝑐 𝑑𝑒𝑙 𝑝𝑟𝑜𝑏𝑙𝑒𝑚𝑎 = (11)
𝐴2

IV. MATERIALES Y EQUIPOS

Tabla1. Materiales y equipos

Materiales de Equipos Reactivos Materiales

Seguridad
Mandil Permanganato de 1 pipeta volumétrica
Balanza analítica. potasio (KMnO4 ) de 5ml
Marca: Kern, Marca: Merck
Modelo: ABJ 220-
Código:k21544482445
4M,
Guantes de Espectrofotómetro. Agua destilada 1 Vaso de
latex Marca: Hach, precipitación de 250
Modelo:DR5000 ml
Mascarilla - - 1 Balón volumétrico
de 50 ml

Gafas de - - 1 Piseta con agua

seguridad destilada.

- - - 4recipientes de 125 ml
con tapa

- - - 4 tubos de ensayo con

tapa

- - -
1 espátula

1 embudo de vidrio
Almeida Andrea (2018)

V. PROCEDIMIENTO
1. Preparar una solución de permanganato de potasio (KMnO4 ) de 0.01 M con un
volumen de 50 ml
2. Pesar 0,08 g de KMnO4 obtenido de los cálculos
3. Diluir los 0,08 de KMnO4 con agua destilada en un vaso de precipitación
 4. Aforamos el Permanganato de potasio (KMnO4 ) a 50 ml de agua
5. Aplicamos 𝐶1. 𝑉1 = 𝐶2. 𝑉2 para determinar el volumen en distintas (1)
concentraciones para ser diluidas
6. Para las cuatro concentraciones se deberá tomar 5 ml de la solución madre.
7. Con la pipeta volumétrica tomamos 5 ml de la solución madre y aforamos a 50 ml
con agua destilada en el balón volumétrico, agitándolo.
8. La solución diluida colocar en un recipiente una mínima cantidad para comprobar
que el envase este limpio si no se hace negro es que está limpio.
9. Luego se coloca toda la dilución en el recipiente con su respectiva etiqueta que
indique a que concentración se encuentra.
10. La primera etiquetamos la solución madre a 0,01 M
11. La segunda la dilución a 0, 001 M.
12. De allí tomamos una muestra y colocamos en el tubo de ensayo con la ayuda de
embudo de vidrio.
13. Por consiguiente de la dilución de 0,001 M tomamos con la pipeta 5 ml y aforamos
a 50 ml en el balón volumétrico y se procede a diluir.
14. Se coloca esta dilución en un recipiente y se toma una muestra en el tubo de ensayo.
15. Se realiza el mismo procedimiento anterior hasta la dilución con una concentración
de 0,00001 M.
16. En un tubo de ensayo se coloca agua destilada para encerar el espectrofotómetro.
17. Se realiza un SCANIN de longitud de onda , para determinar el espectro molecular
colocando la muestra a analizar.
18. Luego se pone en opciones y se coloca la medición de la longitud de onda a la cual
se debe medir.
19. Se parte nuevamente con la muestra de agua colocando para medir su absorbancia
lo que dará cero.
20. Al tener listas las muestras se coloca una por una en el espectrofotómetro y se mide
la absorbancia de cada una de ellas.

VI. DATOS EXPERIMENTALES

Tabla2. Datos para realizar la solución

Volumen 50 ml
Peso molecular de KMnO4 158,036 g/mol
Gramos pesados 0,0805 g de KMnO4
Gramos calculados 0,08 g de KMnO4
Almeida Andrea (2018)

Tabla3.Datos experimentales realizados en el espectrofotómetro

 Muestra Concentración Absorbancia
aparente
1 0,00001 0.033
2 0,0001 0.326
3 0,001 3.460
4 Muestra Madre 0,01 -
5 Muestra Problema ? 1.481
Almeida Andrea (2018)

VII. CÁLCULOS
A. Cantidad de gramos que se debe pesar de KMnO4 para preparar una solución de 0,01 M
con un volumen de 50 ml

𝑃𝑚 = 158,036 KMnO4
𝑉 = 50 𝑚𝑙

𝑔 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜
𝑀 = 𝑃𝑚. 𝑉𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖𝑜𝑛

𝑔KMnO4
0,01𝑀 =
158,036 × 0,05𝐿

𝑔 = 0,079018 KMnO4

Como los gramos pesados fueron 0,0805 ajustamos la concentración de la siguiente

manera:
0,0805
𝑀 = 158,036𝑔/𝑚𝑜𝑙×0,05𝐿

𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 = 0,01019𝑀

B. Calculo de volúmenes de diferentes concentraciones

a.
𝐶1 × 𝑉1 = 𝐶2 × 𝑉2
𝐶1 = 0,01019𝑀
𝑉2 = 50 𝑚𝑙
𝐶2 = 0,001019 𝑀

0,001019 × 50 𝑚𝑙
𝑉1 =
0,01019
 𝑽𝟏 = 𝟓 𝒎𝒍 𝐊𝐌𝐧𝐎𝟒
b.

𝐶1 = 0,001019𝑀
𝑉2 = 50 𝑚𝑙
𝐶2 = 0,0001019 𝑀
0,0001019 × 50 𝑚𝑙
𝑉1 =
0,001019

𝑽𝟏 = 𝟓 𝒎𝒍 𝐊𝐌𝐧𝐎𝟒
c.

𝐶1 = 0,0001019𝑀
𝑉2 = 50 𝑚𝑙
𝐶2 = 0,00001019 𝑀
0,00001019 × 50 𝑚𝑙
𝑉1 =
0,0001019

𝑽𝟏 = 𝟓 𝒎𝒍 𝐊𝐌𝐧𝐎𝟒

Concentració Absorbancia Xi-Xm Yi-Ym (Xi-Xm)( Yi- (Xi-Xm)^2

n Y Ym)
X
0,00001019 0,033 -0,00036684 -1,24 0,0004548816 0,0000001345715856
0,0001019 0,326 -0,00027513 -0,947 0,00026054811 0,0000000756965169
0,001019 3,46 0,00064197 2,187 0,00140398839 0,0000004121254809
Xm= Ym=1,273 ∑=0 ∑=0 ∑= ∑= 0,0000006223935834
0,00037703 0,0021194181
Tabla4. Datos para obtener la ecuación lineal

Almeida Andrea (2018)

C. Calculo de los coeficientes de la ecuación lineal

La curva de calibración se obtendrá a partir de una ecuación lineal que se ajusta a
los datos obtenidos en laboratorio.

𝑦 = 𝛽0 + 𝛽1 𝑥

∑(𝑋𝑖 − 𝑋𝑚)(𝑌𝑖 − 𝑌𝑚)

𝛽1 =
(𝑋𝑖 − 𝑋𝑚)2
0,0021194181
𝛽1 = 6,223935834−7
 𝛽1 = 3405,3

𝛽0 = 𝑦𝑚 − 𝛽1 𝑥𝑚

𝛽0 = 1,273 − 3405,3(0,00037703)

𝛽0 = −0,0109

𝑦 = −0,0109 + 3405,3𝑥

𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 = −0,0109 + 3405,3 ∗ 𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛

D. Calculo de la concentración de la solución problema a partir de su absorbancia

𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 = −0,0109 + 3405,3 ∗ 𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛

1,481 = −0,0109 + 3405,3 ∗ 𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛

𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 = 0,000438 𝑀 𝑑𝑒 𝐾 𝑀𝑛 𝑂4

E. Calculo de la cantidad de Manganeso que se encuentra en la solución problema

0,01019 𝑀 0,0805𝑔𝐾 𝑀𝑛 𝑂4
0,000438 𝑀 𝑋

0,0805𝑔𝐾 𝑀𝑛 𝑂4 × 0,000438𝑀
𝑋=
0,01019𝑀

𝑋 = 0,00346 𝑔𝐾 𝑀𝑛 𝑂4

1 𝑚𝑜𝑙 54,938 𝑔 𝑀𝑛
0,00346 𝑔𝐾 𝑀𝑛 𝑂4 × ×
158,036𝑔𝐾 𝑀𝑛 𝑂4 1 𝑚𝑜𝑙

= 0,0012 𝑔 𝑀𝑛
VIII. RESULTADOS

Tabla 5. Resultados obtenidos de los cálculos

Gramos de 𝐾 𝑀𝑛 𝑂4 0,08 g
Volumen 1 5ml
Volumen 2 5ml
Volumen 3 5ml
Concentración de solución 0,000438 𝑀 𝑑𝑒 𝐾 𝑀𝑛 𝑂4
problema
Gramos de Mn 0,0012 g Mn
Almeida Andrea (2018)
Tabla6.Datos experimentales realizados en el espectrofotómetro

Muestra Concentración Absorbancia

real
1 0,00001019 0.033
2 0,0001019 0.326
3 0,001019 3.460
4 Muestra Madre 0,01019 -
5 Muestra Problema ? 1.481

Almeida Andrea (2018)

Fig.10 Curva de Calibración

Almeida Andrea (2018)
 Fig.11 Interpolación
Almeida Andrea (2018)

IX. DISCUSIONES

Para observar y detectar como se relaciona la concentración vs la absorbancia , se puede

realizar más muestras para ser analizadas en el espectrofotómetro. Siempre y cuando las
diluciones estén bien preparadas para que los resultados arrojados sean correctos.

X. CONCLUSIONES

1. Antes de realizar las mediciones en el espectrofotómetro se debe calibrar el equipo con

una muestra de agua destilada debido a sus propiedades ópticas, donde se lleva a un valor
de cero para continuar con las siguientes muestras a analizar.

2. Para obtener la concentración de una solución problema, se debe tener un patrón con
concentraciones conocidas, que sirve como escala de comparación siendo estándares y que
a través de una interpolación se obtendrá el dato faltante.

3.Al ver los datos que arrojaron el espectrofotómetro se puede concluir que a mayor
concentración , mayor será la absorbancia lo que quiere decir que son directamente
proporcional.
 4. La muestra más diluida teniendo una concentración de 0,00001 M tiene una absorbancia
de 0,033, diez veces más concentrada se tendrá una absorbencia mayor porque es en
función lineal diez veces más.

5. El análisis espectrofotométrico no se realiza a la solución madre ya que la ley de Beer

menciona que solo se realiza a soluciones diluidas.

XI. RECOMENDACIONES

1.Se recomienda antes de hacer cualquier medición calibrar el equipo y ponerle en cero, o
sea el punto de intersección de la concentración y la absorbancia.

2.Ademas se recomienda determinar el espectro de medición de la sustancia a medir. es

decir la longitud de onda en la que absorbe , en el caso del permanganato de potasio
absorbe a 525 nm.

3.Las muestras que se colocaran en el espectrofotómetro deberán estar totalmente limpias

para que el resultado no sea alterado por partículas.

4.Se recomienda etiquetar las muestras con su concentración , ya que ayudara a relacionar
la concentración y la absorbancia.

5.Se recomienda preparar las diluciones correctamente y aforar a la medida establecidas

para que los resultados sean óptimos y coherentes.

XII. BIBLIOGRAFÍA

astrojem. (s.f). astrojem. Obtenido de

https://astrojem.com/teorias/espectroelectromagnetico.html

espectrofotometro. (15 de Julio de 2011). espectofotometro. Obtenido de

https://elespectrofotometro.com/partes-del/

Guia_TP_2_Quimica_II. (2015). Guia_TP_2_Quimica_II_. Obtenido de

file:///C:/Users/Invitado1/Downloads/Guia_TP_2_Quimica_II_2010%20(1).pdf

quimica.laguia2000.com. (2015). quimica.laguia2000.com. Obtenido de

https://quimica.laguia2000.com/conceptos-basicos/absortividad

XIII. ANEXOS
Anexo 1.Preparacion de la solución Anexo 2.Muestras de las diluciones
de KMnO4 Almeida Andrea (2018)
Almeida Andrea (2018)

Anexo3. Muestra madre aforada a Anexo 4.Muestras para analizar en el

50 ml. espectrofotómetro
Almeida Andrea (2018) Almeida Andrea (2018)

Anexo5.Absorbancia de la muestra problema Anexo6.Espectro molecular del KMnO4

Almeida Andrea (2018) Almeida Andrea (2018)