Effect of combined inoculations of endophytic fungi on the biocontrol of

Radopholus similis
Dari berbagai nematoda parasit tanaman yang mempengaruhi pisang dan pisang raja di
seluruh dunia, Radopholus similis diakui sebagai yang paling penting (Gowen et al., 2005).
Kerusakan yang disebabkan oleh R. similis dimulai dengan terowongan jaringan nekrotik di akar
dan corms, yang mempengaruhi pengambilan air dan nutrisi sehingga memperpanjang masa
pertumbuhan. Akhirnya, akar membusuk karena infeksi sekunder jaringan yang rusak oleh
bakteri dan jamur, yang menyebabkan tanaman tomat ditumpuk sebagai akibat dari kerusakan
akar dan hilangnya anchorage (Gowen et al 2005, Sarah et al 1996). R. similis bermigrasi dari
jaringan akar nekrotik ke jaringan segar yang berdampingan dan melalui tanah untuk
mendapatkan akses ke jaringan yang tidak terkena infeksi dari tanaman yang sama atau tanaman
lain (Sarah et al 1996). Keuntungan hasil substansial antara 20% dan 75% telah ditunjukkan
mengikuti aplikasi nematisida untuk mengendalikan R. similis dan nematoda pada umumnya
(Broadley 1979,
McSorley dan Parrado 1986, Sarah 1989, Gowen 1994). Dalam perkebunan pisang
komersial di Amerika Latin, pengendalian nematoda pada dasarnya bergantung pada penggunaan
granular organophosphate dan carbamate nematicides (Marín 2005). Praktik budaya, seperti
penggunaan amandemen organik, rotasi tanaman, aduk dan bahan tanam bersih juga digunakan,
namun dengan berbagai keberhasilan. Beberapa produk biokontrol, yang mengandung bakteri,
seperti Blue Circle ™ (Burkholderia cepacia), jamur, seperti Paecilomyces lilacinus), atau
produk fermentasi jamur yang terbunuh, seperti DiTera ™ (Myrothecium verrucaria), tersedia.
untuk pengelolaan nematoda (APS Biological Control Committee 2005), namun produsen pisang
pada umumnya tidak menggunakannya karena kurangnya kontrol yang memadai. Untuk
meningkatkan aktivitas dan dengan demikian meningkatkan pilihan pengelolaan biologis R.
similis dalam pisang, nove
agen pengendali biologis, seperti jamur endofitik dari lokasi yang menjanjikan, sedang
dipelajari untuk aplikasi lapangan. Lokasi yang menjanjikan mencakup area di perkebunan
komersial dimana nematisida tidak digunakan dan sampling nematoda telah mengungkapkan
kepadatan nematoda rendah selama periode waktu yang lama - seperti bagian Lembah Motagua
di Guatemala (zum Felde et al 2005) - dan perkebunan organik dan produksi alternatif daerah, di
mana pisang dan pisang tumbuh bersama tanaman lainnya, seperti coklat dan kayu (Meneses et
al., 2003). Clay (1989) pertama kali menyarankan potensi endophytes dari endosfer sebagai agen
biokontrol hama serangga. Baru-baru ini, endophytes jamur dari endorhiza telah diidentifikasi
sebagai agen biokontrol pada pisang (Pocasangre et al., 2000, Carñizares Monteros 2003, Niere
et al., 2004, Vu et al., 2004, zum Felde et al. 2005), sayuran (Hallmann et al 2001), beras
(Padgham et al 2005, Padgham dan Sikora 2006) dan jagung (Wicklow et al 2005). Dalam upaya
untuk memperbaiki stabilitas, intensitas dan / atau keandalan metode biokontrol, banyak penulis
telah mempelajari efek penggabungan agen biokontrol (ditinjau oleh Meyer dan Roberts 2002).
Kombinasi tidak selalu menguntungkan, karena antagonisme dapat terjadi antara organisme
biokontrol, dan menyebabkan tingkat kontrol yang tidak berubah (Zaki dan Maqbool 1991,
Viaene dan Abanoi 2000) atau bahkan untuk pengendalian yang lebih rendah (Esnard et al 1998,
Chen et al., 2000) bila dibandingkan dengan aplikasi individual agen biokontrol. Namun, banyak
kombinasi yang dipelajari telah menghasilkan tingkat biokontrol yang meningkat (Guetsky et al
2001, Guetsky et al., 2002, Meyer dan Roberts 2002). Kombinasi agen biokontrol yang dinilai
terhadap nematoda meliputi jamur dengan jamur (Khan et al 1997, Duponnois et al 1998, Hojat
Jalali et al 1998, Chen et al 2000.) dan jamur dengan bakteri (Maheswari dan Mani 1988, de Leij
et al. 1992, Siddiqui dan Mahmood 1993, Perveen et al 1998, Chen et al., 2000), dengan
sebagian besar kombinasi yang melibatkan dua organisme, namun hanya sedikit yang melibatkan
kombinasi tiga atau lebih organisme (Esnard et al 1998). Mayoritas agen biokontrol yang telah
dinilai dalam kombinasi terhadap nematoda diisolasi dari rhizosfer atau rhizoplane dan diuji pada
Meloidogyne spp. (Meyer dan Roberts 2002). Diedhiou dkk. (2003) dinilai
arbuscular mycorrhizal fungi (AMF) Glomus coronatum, dan Fusarium oxysporum
endofitik non patogen terhadap Meloidogyne incognita pada tomat. Mereka memperoleh hasil
yang menarik mengenai interaksi kedua jamur di dalam tanaman, namun mengamati tidak ada
peningkatan kontrol nematoda yang terkait dengan inokulasi gabungan. Sikora dan Reimann
(2004), yang bekerja dengan tanaman kesehatan yang mempromosikan rhizobacterium
Rhizobium etli G12, intraradiks Glomer AMF dan rhizobacterium yang terkait dengan spora
AMF, menemukan bahwa dalam percobaan jangka panjang, rhizobacteria dalam kombinasi
dengan G. intraradices mengurangi empedu dan sel telur. produksi massal M. incognita.
Sepengetahuan kami, penelitian yang menggabungkan dua atau lebih jamur endofitik belum
dilakukan. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengevaluasi pengaruh inokulasi gabungan jamur
endofitik pada pengelolaan R. similis pada akar pisang. Bahan dan metode Jamur yang
digunakan dalam penelitian ini diisolasi dari pisang sehat dan akar tanaman pisang, dikumpulkan
di Lembah Motagua, Guatemala (zum Felde et al., 2005) dan daerah Talamanca dan Sixaola di
Kosta Rika (Meneses et al., 2003, Carñizares Monteros 2003). Semua isolat diidentifikasi
sebagai jamur R. similis-antagonis melalui uji skrining in vitro dan in vivo yang dilakukan di
laboratorium nematologi dan fitoplankologi di CATIE, Turrialba, Costa Rica, selama periode
dari Januari 2002 sampai Desember 2003 (zum Felde et al. 2005, Meneses et al., 2003,
Carñizares Monteros 2003). Isolat yang paling efektif diidentifikasi pada tingkat spesies oleh Dr.
H. Nierenberg, di Biologische Bundesanstalt, di Berlin, Jerman. Sifat non-patogen dari semua
jamur R. similis-antagonis dibentuk dengan uji patogenisitas pada planta. Pada tahun 2005,
kompatibilitas vegetatif dari semua isolat F. oxysporum diuji terhadap 56 strain referensi isolat
F. oxysporum patogen (F. oxysporum f. Sp. Cubense, radicis-lycopersici dan lycopersici), di
Bonn, Jerman (A. zum Felde dan T. Vu Thi Thanh, data yang tidak dipublikasikan). Keempat
endofit yang telah memberikan kontrol nematoda terbesar pada percobaan planta, yang
diidentifikasi sebagai isolat F. oxysporum dan T. atroviride, digunakan untuk
menjadi tiga lubang kecil (sedalam 1 sampai 2 cm) dibuat di dasar masing-masing
tanaman pisang. Lubang itu ditutupi dengan tanah disekitarnya. R. similis diambil dari kultur
disk wortel steril yang disiapkan di CATIE (Speijer dan Gold 1996). Nematoda berasal dari
perkebunan pisang yang banyak penuh sesak di Kosta Rika. Tanaman disiram secara teratur, tapi
tidak ada pupuk yang diterapkan. Dua bulan setelah inokulasi nematoda, tanaman dipanen dan
berat akar segar direkam. Nematoda kemudian diekstraksi dari akar menggunakan metode
maserasi dan saringan yang diadaptasi dari Speijer dan De Waele (1997). Setiap sistem akar
dipotong-potong sepanjang 1 cm, dan dimaserasi dalam blender komersial 200 ml air keran
selama 10 detik dengan kecepatan rendah, dan 10 detik dengan kecepatan tinggi, dengan selang
waktu 5 detik antara kedua langkah maserasi. Suspensi dituang melalui saringan bersarang dari
lubang 1000 μm, 150 μm dan 45 μm. Isi saringan 45 μm dicuci ke wadah plastik 250 ml dengan
penutup. Setiap wadah diisi sampai 200 ml dan sebelum dihitung, isinya dihomogenisasi dengan
mengaduk dengan pompa akuarium. Untuk setiap sampel, kerapatan nematoda ditentukan dari
dua sub sampel 2 ml dengan menggunakan slide penghitungan (Speijer dan De Waele 1997).
Desain eksperimen adalah rancangan blok acak lengkap, dengan sembilan perlakuan dan sebelas
ulangan (n = 11) per perlakuan. Data nematoda adalah √ (x + 0.5) yang ditransformasikan untuk
analisis. Data dianalisis dengan menggunakan program SAS (SAS / STAT® Software, SAS
Institute Inc.). Berarti dipisahkan dengan menggunakan uji Duncan Multiple Range dan kontras
ortogonal. Hasil Dua bulan setelah inokulasi dengan R. similis, jumlah nematoda pada akar dan
densitas keduanya menurun secara signifikan
di tanaman yang diinokulasi dengan endofit daripada di pabrik kontrol (Tabel 2).
Inokulasi ganda mengurangi jumlahnya, namun bukan kepadatan, R. similis lebih dari satu
inokulasi tunggal, namun inokulasi multipel tidak secara signifikan mengurangi jumlah atau
densitas yang diakibatkan oleh inokulasi ganda. Isolat Fusarium (S9 dan P12) cenderung
menekan nematoda lebih baik daripada isolat Trichoderma (MT-20 dan S2). Kontras Orthogonal
menunjukkan perbedaan yang sangat signifikan antara jumlah populasi dan kepadatan nematoda
pada tanaman inokulasi dan kontrol, serta antara tanaman yang diinokulasi dengan keempat
jamur atau hanya dua kali (Tabel 3). Tanaman yang menerima inokulasi ganda memiliki populasi
R. similis yang berbeda secara signifikan, dengan yang diinokulasi dengan isolat Fusarium S9 &
P12 mengandung nematoda kurang dari pada yang diinokulasi dengan isolat Trichoderma MT-
20 & S2, meskipun kepadatan nematoda tidak berbeda secara signifikan. Efek inokulasi ganda
atau tunggal berbeda secara signifikan satu sama lain, dengan kontrol yang lebih besar terlihat
pada tanaman yang diinokulasi dengan dua jamur. Kepadatan nematoda tidak berbeda nyata
antara tanaman yang mendapat inokulasi tunggal isolat Fusarium atau Trichoderma. Pembahasan
Hasil penelitian kami menunjukkan bahwa menggabungkan agen biokontrol yang kompatibel
dapat memberikan perlindungan yang lebih baik terhadap R. similis bila dibandingkan dengan
hanya menggunakan satu agen biokontrol. Kami menggunakan inokulasi berurutan untuk
menghindari kemungkinan interaksi negatif antara konidia jamur sebelum inokulasi, dan
menempel pada waktu inokulasi pra-mapan kami selama 5 menit untuk setiap jamur. Percobaan
dilakukan di Universitas Bonn pada tahun 1998 dan 1999, yang melibatkan biokontrol dengan
isolat F. oxysporum non-patogen dari penyakit yang disebabkan oleh F. oxysporum f.sp.
cubense, telah menetapkan durasi inokulasi optimum dan kerapatan konidia untuk kolonisasi
efektif sistem akar oleh strain patogen dan non-patogen dari F. oxysporum (data L. Pocasangre
yang tidak dipublikasikan). Percobaan ini membandingkan efisiensi inokulasi celup untuk
suspensi konidia mulai dari 1 x 102 sampai 1 x 106 cfu / ml dan untuk dips yang berlangsung
antara 5 dan 30 menit menunjukkan bahwa saus 5 menit dalam suspensi 1 x 106 cfu / ml optimal
untuk kolonisasi akar tanaman pisang kultur jaringan (Pocasangre 2000).
Selain itu, beberapa penelitian yang dilakukan di CATIE selama enam tahun terakhir
menunjukkan bahwa mencelupkan sistem akar tanaman kultur jaringan dalam suspensi konidia
minimal 1 x 105 cfu / ml selama 5 menit adalah sistem inokulasi yang efektif (zum Felde 2002,
Canizares 2003, Meneses 2003, Pocasangre et al., 2004). Konsentrasi suspensi konidia
memainkan peran yang lebih penting dalam kolonisasi akar yang efektif oleh jamur, daripada
durasi inokulasi celup. Desai dan Dange (2003) sampai pada kesimpulan yang sama mengenai
hubungan antara kolonisasi dan konsentrasi inokulum yang berhasil dan durasi kemiringan.
Dalam karyanya dengan layu kacang (F. oxysporum f.sp. ricini), mereka menemukan korelasi
positif antara kejadian layu (kolonisasi jamur pada jaringan tanaman) dan peningkatan
konsentrasi inokulum, namun tidak ada yang memiliki waktu perendaman (Desai dan Dange
2003). ). Meskipun banyak penelitian telah menggunakan inokulasi celup untuk menerapkan
jamur patogen dan biokontrol dan bakteri ke akar tanaman, beberapa penulis memberikan rincian
tentang prosedur ini. Seringkali, hanya konsentrasi inokulum yang diberikan, sementara panjang
kemiringan dihilangkan.
Akibatnya, kita tidak berpikir bahwa meningkatkan total waktu inokulasi mempengaruhi
kolonisasi jamur akar oleh jamur individu, karena konidia pada setiap jamur hanya bersentuhan
dengan sistem akar selama 5 menit, memberi kesempatan pada masing-masing jamur untuk tetap
berpegang pada akar. Jumlah total konidia yang menempel dan kemudian menjajah akar
mungkin lebih besar pada tanaman yang diinokulasi dengan dua atau keempat jamur, tapi itulah
tujuan percobaan - untuk mengamati efek inokulasi gabungan, yang bertentangan dengan yang
sederhana. Kami tidak percaya bahwa jumlah nematoda yang lebih rendah di akar tanaman yang
diinokulasi dengan lebih dari satu isolat jamur hanya dapat dikaitkan dengan peningkatan
inokulum. Kami pikir ini terkait dengan efek sinergis dari agen biokontrol yang kompatibel ini.
Guetsky dkk. (2002) menunjukkan bahwa penggunaan kombinasi agen biokontrol meningkatkan
keefektifan dan konsistensi biokontrol. Meyer dan Roberts (2002) mengemukakan bahwa
penekanan penyakit yang lebih efektif dengan menggunakan kombinasi agen biokontrol
disebabkan oleh efek aditif atau sinergis dari mekanisme gabungan mereka. Sementara mode
tindakan yang tepat terhadap R. similis perlu dikonfirmasi, mungkin berbeda antara isolat atau
genus. Dalam uji skrining yang dilakukan sebelum pengujian isolat isolat, isolat Trichoderma
(MT-20 & S2) menunjukkan parasitisasi R. similis secara in vitro (zum Felde 2002, Carñizares
Monteros 2003), sedangkan metabolit kedua isolat Fusarium (P12 & S9) yang diaplikasikan
secara in vitro memiliki efek nematistatik dan nematisida pada R. similis (Carñizares Monteros
2003, Menenses Hérnandez 2003). Guetsky dkk. (2001) mendalilkan bahwa selama agen
biokontrol memiliki persyaratan ekologis yang berbeda, kombinasi agen dengan persyaratan
yang berbeda kemungkinan akan meningkatkan reliabilitas dan menurunkan variabilitas
biokontrol. Meyer dan Roberts (2002) menyimpulkan bahwa efek negatif kombinasi agen
biokontrol dihasilkan dari mekanisme kontrol yang diarahkan tidak hanya pada patogen tanaman,
tetapi juga pada agen biokontrol pendamping dalam kombinasi. Memang, Trichoderma dan
Fusarium spp. keduanya telah berhasil digunakan untuk menekan layu Fusarium (Park et al
1988, Mao et al 1998). Namun, meskipun keempat agen biokontrol yang diuji diisolasi dari
jaringan internal pisang
akar, dan karena itu mungkin menempati relung ekologi yang sama atau serupa, mereka
tetap tampil untuk tidak berkompetisi satu sama lain dan bahkan mungkin saling melengkapi satu
sama lain. Selain itu, merawat bibit dengan endofit ini adalah pendekatan biokontrol yang sangat
praktis dan ekonomis, dibandingkan dengan penanganan tanah. Percobaan lapangan untuk
mengevaluasi efek dari empat isolat individu saat ini sedang berlangsung, dengan hasil awal
yang menjanjikan. Karena hasil penelitian ini mengungkapkan biokontrol yang lebih besar ketika
isolat digunakan dalam kombinasi dan menyarankan sistem biokontrol yang lebih stabil, uji coba
lapangan lebih lanjut diperlukan untuk memastikan keefektifan dan potensi di lapangan.
Penelitian lebih lanjut juga diperlukan untuk mengeksplorasi mekanisme dimana endophytes
jamur mengendalikan R. similis di jaringan akar pisang dan pergerakannya atau transfer dari satu
generasi tanaman ke generasi berikutnya. Ucapan Terimakasih Penulis mengucapkan terima
kasih kepada anggota Unit Kesehatan Nematologi dan Satwa di CATIE, Turrialba, Costa Rica
atas dukungan dan bantuan mereka dalam melaksanakan penelitian ini, dan DAAD (German
Academic Exchange Service) dan INIBAP-LAC untuk mendanai peneliti.

Root system and shoot growth of banana (Musa spp.) in two agro-
ecological zones in Nigeria
Konsep plastisitas fenotipik akar mengacu pada kemampuan kultivar untuk
menyesuaikan struktur akar mereka dengan perubahan lingkungan (O'Toole dan Bland 1987,
Draye 2002). Parameter yang paling signifikan yang mempengaruhi pertumbuhan dan
perkembangan akar adalah lingkungan edafik yang, misalnya, meliputi suhu tanah, tingkat
kelembaban, tekanan parsial karbon dioksida dan oksigen, dan ketersediaan unsur hara. Faktor
lingkungan seperti suhu udara, panjang hari, intensitas cahaya dan tekanan parsial karbon
dioksida mempengaruhi pemberian nutrisi dan zat pengatur tumbuh dari tunas ke sistem akar.
Faktor lingkungan juga mempengaruhi rasio tunas / akar tanaman (Wright 1976, Jung 1978,
Smucker 1984, Bastow Wilson 1988, Kasperbauer 1990, Squire 1993, Martinez Garnica 1997,
McMichael dan Burke 1998). Penelitian tentang pengembangan sistem akar kapas (Gossypium
hirsutum L.) telah menunjukkan bahwa perubahan yang cukup besar dapat terjadi pada berbagai
kondisi tanah (Pearson 1965, Adams et al 1967, Halevy 1976), sementara Bennie dan du T.
Burger (1981) melaporkan bahwa peningkatan impedansi mekanis (yaitu meningkatnya densitas
curah tanah) mengurangi pemanjangan akar pada jagung (Zea mays L.), gandum (Triticum
aestivum L.) dan kacang tanah (Arachis hypogaea L.). Efek positif dari peningkatan porositas
tanah terhadap pertumbuhan dan perkembangan akar telah ditunjukkan pada pisang dessert
(AAA) (Sioussaram 1968, Champion dan Sioussaram 1970, Delvaux dan Guyot 1989). Selain
itu, ada pengaruh yang signifikan dari kondisi iklim pada makanan penutup akar pisang dan
pertumbuhan tunas (Robin dan Champion 1962, Turner 1970, Turner dan Lahav 1983).
Robinson dan Alberts (1989) melaporkan bahwa pertumbuhan akar lebih lambat pada suhu yang
lebih rendah. Misalnya, pada varietas Cavendish 'Williams' (AAA), perpanjangan sumbu hampir
3 cm per hari pada suhu 25 ° C, di bawah 0,5 cm per hari pada suhu 15 ° C dan berhenti pada
suhu 11,5 ° C. Beugnon dan Champion (1966) melaporkan efek tanggal tanam pada
pertumbuhan akar dan tunas untuk makanan penutup pisang 'Poyo' (AAA). Di pisang raja
(AAB), Irizarry et al. (1981) melaporkan pengaruh substansial jenis tanah terhadap pertumbuhan
tanaman, pengembangan dan distribusi sistem akar. Mereka menunjukkan bahwa pengetahuan
yang lebih baik tentang distribusi sistem akar dapat menyebabkan praktik budaya yang lebih
efektif seperti irigasi dan pemupukan. Namun, penelitian mereka adalah