BOTANICA

Acta Científica Venezolana, 51: 78–83, 2000

ESTUDIOS ANATOMICOS Y MORFOLOGICOS DE LA

INICIACION DE EMBRIONES SOMATICOS OBTENIDOS A
PARTIR DE APICES MERISTEMATICOS DE Musa sp.
María del Carmen Vidal, Teresa Edith Vargas y Eva de García
Centro de Botánica Tropical, Facultad de Ciencias, Universidad Central de Venezuela,
Apartado 47114, Los Chaguaramos 10490, Caracas, Venezuela.

Recibido: 13/07/99 ; Revisado: 01/12/99 ; Aceptado: 08/02/00

RESUMEN: El origen de embriones somáticos obtenidos de ápices meristemáticos del clon de Musa (AAA) ’Gran enano’, fue analizado
mediante estudios histológicos y morfológicos durante las diferentes fases de desarrollo del proceso. La investigación reveló que los
embriones somáticos se originaron directamente de células del parénquima perivascular de las hojas. Secciones histológicas de los em-
briones globulares mostraron una disposición radial de las células y la presencia de una epidermis que rodea completamente al embrión.
Con la adición de citocinina (Z o BA), algunos embriones permanecieron en estado globular, con ligeros signos de agrandamiento sin un
posterior desarrollo de la invaginación. Otros lograron alcanzar el estado de embrión globular con invaginación; otros el estado alargado,
con una clara diferenciación entre el extremo apical y basal y con tejidos fotosintéticamente activos, pero no se logró la regeneración de
plantas completas. Tratamientos adicionales, como es el someter a los embriones a un "shock osmótico" o la adición de GA3 , fueron
también probados sin éxito. Al presente, no tenemos una explicación para la no regeneración de las plantas, por lo tanto sugerimos que
se deben realizar experimentos adicionales, como lo son estudios histológicos y bioquímicos en estados tempranos, intermedios y tardíos
de la embriogénesis somática, para tratar de entender en que momento y porque, son interrumpidos los procesos fisiológicos normales
del desarrollo del embrión. Palabras clave: Anatomía, morfología, histología, ontogenia, embriogénesis somática, Musa sp., banano.

ANATOMIC AND MORPHOLOGICAL STUDIES ON THE INITIATION OF SOMATIC EMBRYOS OBTAINED FROM
MERISTEMATIC APEXES OF Musa sp.
ABSTRACT: The origin of somatic embryos obtained from meristematic apexes of the Musa (AAA) clone "Gran enano" was analyzed
through histological and morphological studies during the various development phases of the process. The research point out that somatic
embryos developed directly from perivascular parenchyma cells of the leaves. Histological sections of globular embryos showed a radial
disposition of cell and the existence of an epidermal layer that surrounds the embryo completely. When citocinine (Z or BA) was added,
some embryos remained in globular stage with mild signs of enlargement but with no later development of invagination. Other’s embryos
reached the invagination stage; and some reached the enlargement stage with active photosynthetic tissues. Howevere there were no
to generation of complete plant regardless of additional treatment, such as "osmotic shock" or the additions of GA3 . At present do
not have an explanations for this results. Therefore, additional experiment should be in early, intermediate and later stages of somatic
embryogenesis, in order to understand the mechanisms underlying the lack of development of plants from somatics embryos. Key Words:
Anatomy, morphology, histology, ontogeny, somatic embryogenesis, Musa sp., banana.

INTRODUCCION de Musa, ya sea a partir de tejido vegetativo como son:

El creciente interés por la obtención de embriones somá-
ticos en diversos cultivos de plantas, se debe a que el
proceso de embriogénesis somática facilita dos aspectos
importantes en el mejoramiento genético de los cultivos:
la propagación clonal a gran escala, vía "semilla artificial"
y la variabilidad genética, vía variación somaclonal. En
un mismo proceso, se puede asegurar la estabilidad ge-
nética de un cultivo (embriogénesis directa) o inducir su
cambio (embriogénesis indirecta), con el objeto de obte-
ner nuevas variedades. En Musa, los métodos de cultivo
de tejidos ofrecen una alternativa a los sistemas de en-
trecruzamiento clásicos, los cuales han sido, hasta ahora,
poco exitosos24 . No obstante, la regeneración de plan-
tas completas a partir del cultivo de embriones somáticos,
ha constituido un paso limitante en la aplicación de téc-
nicas biotecnológicas para el mejoramiento de clones de
banano con importancia económica19 . Varios autores han
realizados esfuerzos para obtener embriones somáticos
la base de las hojas20;23;28 , la parte superior de las ye-
mas en proliferación1;5;17;22 , segmentos de cormos7;20;23 ,
y de tejido reproductivo: flores masculinas7;9 ; embriones
cigóticos inmaduros7;8;15 , y semillas inmaduras16 . En va-
rios de estos trabajos, se ha logrado la regeneración de
plantas completas vía embriogénesis somática, siguiendo
un patrón que muestra una gran similitud con la embrio-
génesis cigótica. Sin embargo, la obtención de embriones
somáticos a partir de embriones cigóticos y semillas inma-
duras presenta una limitación en los esquemas de mejora-
miento, ya que solo se puede aplicar a especies silvestres
de Musa y no a los cultivares económicamente importan-
tes, los cuales, por su condición partenocárpica, carecen
de semillas. Adicionalmente, en los clones de Musa sp.
que se ha logrado regenerar plantas a partir de embrio-
nes somáticos, la frecuencia de conversión (proceso de
obtención de plantas a partir de embriones) es baja5;20 y
depende del genotipo.
Hasta ahora, no se ha reportado una descripción del ori-
Anatomía y morfología de la embriogénesis somática en Musa sp. 79
Tabla 1. Composición de medios usados para la regeneración (2,4-D) y 1M zeatina (Z). El pH de los medios fue ajusta-
de plantas vía embriogénesis somática directa del clon de Musa do a 5.8.
(AAA) ’Gran enano’.
Los cultivos se mantuvieron bajo agitación constante a
100 r.p.m., una temperatura de 27Æ C y luz continua, con
Composición Sacarosa Mioinositol 2,4-D BA Z GA3 Gelrite una intensidad de 50 E
m 2
seg 1 . Cada 2 ó 3 sema-
del medio de: (gl 1 ) (mgl 1 ) (M) (M) (M) (mgl 1 ) (gl 1 )
nas, se decantaba el medio viejo y se agregaba el medio
Iniciación 30 5 1 fresco, hasta la obtención de los embriones somáticos.
Maduración 30 100 1
Germinación: Para la maduración de los embriones somáticos, estos
G1 40 100 2 fueron transferidos a un medio líquido igual al medio de
G2 40 100 1 2 inducción, pero con la sustitución de 2,4-D por citocinina.
G3 40 100 10 2
G4 40 100 1 2 Las citocinina usada fue 6-bencilaminopurina (BA) a una
G5
G6
40
80
100
100 1
0.1 2
2
concentración de 1M. La sacarosa se usó a una concen-
tración de 30 g/l. El pH de los medios fue ajustado a 5.8.
Abreviaturas: 2,4-D (2,4 Diclorofenoxiacético), BA (6-Belcilaminopurina), Z (Zeati- Para la germinación de los embriones, estos fueron
na), GA3 (Acido giberélico) transferidos a un medio sólido (2 g/l gelrite) igual en com-
posición al medio de maduración, pero varió el tipo (cito-
cinina o giberelina) y concentración de los reguladores de
gen y desarrollo de embriones somáticos de Musa sp. a crecimiento usados. Las citocininas utilizadas fueron BA
partir del cultivo de ápices meristemáticos en medio líqui- (1 M ó 10 M) y zeatina (1 M). La giberelina usada fue
do. Un estudio ontogénico de la embriogénesis somáti- el ácido giberélico (GA3 ) a una concentración de 0.1 mg/l.
ca, en el que se determine cuales tejidos en particular se La sacarosa fue usada a una concentración de 40 y 80 g/l.
derivan en meristemas embriogénicos o en que estados El pH de los medios se ajustó a 5.8. La composición de
posteriores de desarrollo se detiene el proceso, podría su- los medios utilizados y los seis tratamientos para la induc-
ministrar información adicional para aumentar o manipular ción de la germinación de los embriones somáticos (G1,
la respuesta embriogénica. El objetivo del presente tra- G2, G3, G4, G5, y G6) se indican en la Tabla 1. Se rea-
bajo fue investigar la ontogenia y estados de desarrollo lizaron 3 réplicas por tratamiento, usando 20 embriones
de embriones somáticos de un clon de Musa (AAA) ’Gran globulares en cada réplica. A estos embriones se les hizo
enano’, obtenidos a partir del cultivo de ápices meristemá- un seguimiento durante la fase conversión de embriones
ticos en medio líquido. en estado globular hasta alcanzar la fase de embrión alar-
gado.
MATERIALES Y METODOS

Material vegetal
Para establecer el proceso de embriogénesis somática di-
recta en Musa sp., se utilizaron vitroplantas del clon ’Gran
enano’, un clon triploide (AAA) del sub-grupo Cavendish.
Las vitroplantas fueron seleccionadas del banco de ger-
moplasma del Laboratorio de Biotecnología Vegetal de la
Facultad de Ciencias, U.C.V.
Inducción de la Embriogénesis somática
En la iniciación del proceso de embriogénesis somática
del clon ’Gran enano’, se seleccionó el método de Dhed’a
y col.5 , con las siguientes modificaciones: la inducción de
embriones somáticos se inició a partir de ápices meriste-
máticos de aproximadamente 1 cm2 , con 3 a 4 primordios
foliares y un peso promedio de 0.43 g. Los ápices fueron
seccionados por la mitad antes de sembrarlos en el medio
de cultivo.
Los ápices meristemáticos (dos ápices por fiola) fueron
colocados en una fiola de 250 ml que contenían 50 ml de
medio Murashige & Skoog18 (MS) líquido con las siguien-
tes modificaciones: macroelementos y hierro reducidos a
la mitad, con la adición de 0.4 mg/l tiamina, 50 mg/l ácido
ascórbico, 30 g/l sacarosa, 5M 2,4 diclorofenoxiacético
Estudios anatómicos
Para evaluar los eventos histológicos del proceso de em-
briogénesis somática en el clon de banano ’Gran enano’,
se emplearon ápices meristemáticos fijados a diferentes
tiempos de cultivo (0, 15, 30 y 45 días). La fijación se rea-
lizó en FAA (37% formaldehído: 100% ácido acético: 70%
etanol, en una proporción 5:5:90). El material preserva-
do en FAA se deshidrató en una serie alcohólica ascen-
dente, con las siguientes proporciones de agua destilada,
etanol y alcohol butílico terciario (ABT): 50% (50:40:10),
70% (30:50:20), 85% (15:50:35), 95% (0:45:55), 100%
(0:25:75), ABT (0:0:100).
Posteriormente, el material se infiltró en paraplast fun-
dido y ABT, manteniéndolo en la estufa a 60Æ C por dos o
tres días hasta que no quedaran restos de ABT. Luego se
hicieron cortes seriados a un grosor de 10-12m utilizan-
do un microtomo de rotación, y finalmente se realizó una
coloración con safranina al 0.5% y fast-green al 0.1%, dife-
renciando la coloración con una solución de ácido pícrico
(en etanol al 95%). Las secciones de los distintos tejidos
fueron registradas microfotográficamente con una cámara
Nikon FDX-35.
80 Vidal, Vargas y García

a b

Figura 1. Corte longitudinal de secciones de primordios foliares del clon de Musa (AAA) ’Gran enano’, luego de cultivarlos en medio
de inducción de la embriogénesis somática directa. a) Células meristemáticas (CM) y proembriones esféricos (PE) en la región del
parénquima adyacente a los haces vasculares (HV). b) Proembriones esféricos con una disposición radial de las células internas y
rodeados por una epidermis continua.

Análisis estadístico

Los resultados obtenidos en este estudio fueron anali-

zados estadísticamente, mediante la prueba paramétrica
ANOVAR, con el fin de determinar el grado de significan-
cia entre los tratamientos aplicados. Los datos porcen-
tuales fueron analizados luego de hacer una conversión
angular [arcosen (%/100)] ya que con los datos originales
no se cumple el supuesto de homogeniedad de varianza.
Dichas pruebas están incluidas en el paquete estadístico
"Statistica for Window", versión 5.0.

RESULTADOS Y DISCUSION

Anatomía y morfología de la iniciación de la embriogénesis
somática
Luego de una semana de iniciado el cultivo de ápices me-
ristemáticos del clon de banano ’Gran enano’ en medio
líquido, los explantes presentaron cambios morfológicos
perdiendo su organización como ápices. Los primordios
foliares se engrosaron marcadamente, y luego de 5 a 6
semanas de cultivo, aparecieron embriones globulares de
color blanquecino sobre la superficie de la hoja.
El análisis de alícuotas del medio líquido a los 15 días
de cultivo, evidenció la presencia de células grandes y
alargadas con características típicas de células no embrio-
génicas, así como células pequeñas, redondeadas, con ci-
toplasma denso, las cuales son características de células
embriogénicas. También se observaron células en divi-
Figura 2. Embrión es estado alargado del clon de Musa (AAA)
’Gran enano’, con una clara diferenciación entre el extremo api-
cal y basal.
sión y estructuras proembriónicas (resultados no mostra-
dos). Estos hallazgos podrían reforzar el origen unicelular
de los embriones somáticos en el clon de banano ’Gran
enano’.
El estudio histológico de secciones de primordios folia-
res del clon de banano ’Gran enano’ a los 30 días de culti-
vo, muestran proembriones esféricos y células meristemá-
ticas en la región del parénquima adyacente a los haces
vasculares del explante (Figura 1a). Estas células meris-
temáticas se originaron directamente, sin la formación de
callo, a partir de células del parénquima perivascular de
Anatomía y morfología de la embriogénesis somática en Musa sp.
las hojas. Las células meristemáticas se caracterizan por
ser pequeñas, redondeadas y con contenido citoplasmá-
tico denso. Estas células son competentes para la em-
briogénesis, y por tanto, sólo requieren de reguladores de
crecimiento o de condiciones favorables para ser determi-
nadas como células embriogénicas30 . Resultados simila-
res han sido obtenidos por otros autores, tanto en banano
como en otras especies, donde señalan que las células
embriogénicas se derivan directamente de células de la
región perivascular del explante5 , mientras que en la em-
briogénesis somática indirecta, donde está involucrado el
parénquima perivascular, son las células del callo las que
se originan a partir de este tejido9;10;13;21 . Las subsecuen-
tes divisiones de éstas células meristemáticas del parén-
quima adyacente al tejido vascular, conduce a la forma-
ción de embriones globulares.
Algunos reportes hacen referencia de la activación pre-
ferencial inducida por las auxinas de las células perivas-
culares. Este evento ha sido relacionado, con la presencia
de altos niveles de reguladores de crecimiento y nutrien-
tes en las células de este tejido29 . Otra posible explicación
de la iniciación de la actividad meristemática de las célu-
las del parénquima perivascular, aún en especies mono-
cotiledóneas, es su relativamente bajo grado de especia-
lización fisiológica y morfológica6 . También se ha señala-
do, que las células del parénquima perivascular de la hoja
poseen alta actividad mitótica, la cual puede favorecer la
producción de embriones somáticos, ya que las células en
división continua, poseen una mayor capacidad para dedi-
ferenciarse y redeterminarse en células embriogénicas21 .
Son pocas las publicaciones que han descrito el pro-
ceso de embriogénesis somática en Musa sp. basado
sobre el análisis histológico12 . La comparación morfoló-
gica e histológica de los embriones somáticos obtenidos
en esta investigación, revelan similitudes con los obteni-
dos previamente en Musa accuminata, M. balbisiana, y los
clones ’Bluggoe’ y ’Grand Nain’5;8;14 . El análisis histológi-
co de los eventos del proceso de embriogénesis somáti-
ca directa en el clon de banano ’Gran enano’ muestra la
presencia de una epidermis que rodea completamente al
embrión, lo cual ha sido considerado un paso importante
en la embriogénesis somática5 . Secciones histológicas de
los embriones globulares revelaron una disposición radial
de las células, lo cual ha sido anteriormente reportado por
Swennen27 en Musa sp. (Figura 1b).
Inducción de la germinación de embriones somáticos
La regeneración de plantas funcionales a partir del culti-
vo de células o tejidos, es el principal paso limitante en
la aplicación de métodos biotecnológicos para el mejo-
ramiento de los cultivos14 . En nuestra investigación, los
tratamientos con citocininas (medios G3 y G4) fueron los
que permitieron promover el desarrollo de mayor núme-
ro de embriones somáticos en estado globular, hasta al-
canzar el estado alargado (Tabla 2). En estos embriones,
se pudo observar una clara diferenciación entre el extre-
mo apical y basal (Figura 2) y la presencia de tejidos fo-
81
Tabla 2. Efecto de la composición del medio de germinación (G)
sobre el desarrollo de embriones somáticos en estado globular
del clon de Musa (AAA) ’Gran enano’.
% de embriones somáticos en los
diferentes estados de desarrollo a las
4 semanas de cultivo
Tratamiento Globular Globular con Alargado
invaginación
G1 90.83 5.77 3.40 a
(control)
G2 46.22 37.22 16.56 a
G3 11.45 26.42 62.13 b
G4 5.04 2.4 92.56 c
G5 86.41 8.15 5.44 a
G6 78.23 15.35 6.42 a
Valores de Porcentajes seguidos por diferentes letras difieren significativamente (P
< 0,05) de acuerdo con la prueba de Rango Múltiple de Duncan. Se utilizaron 20
embriones globulares por tratamiento aplicado.
tosintéticamente activos. En esta investigación también
encontramos que algunos embriones permanecieron en
estado globular por un período de 4 semanas, con lige-
ros signos de agrandamiento, mientras que otros lograron
desarrollarse hasta el estado de embrión globular con in-
vaginación. Los resultados muestran que ninguno de los
tratamientos probados fueron efectivos para lograr que los
embriones somáticos en estado alargado se desarrollaran
hacia plantas completas. Tratamientos adicionales, como
es el someter a los embriones a un "shock osmótico" (con
la adición de 80 g/l de sacarosa), el uso de GA3 o de BA (1
M) fueron también probados sin éxito. No tenemos una
explicación para los resultados obtenidos, pero se podría
especular que estos tratamientos, además de no tener una
composición y concentración de las sustancias utilizadas
adecuadas para la germinación de los embriones de Mu-
sa sp., puede que no hayan sido aplicados en el estado
apropiado de desarrollo del embrión somático para que
pudieran ser efectivos.
La obtención de estructuras similares que nunca se de-
sarrollaron hacia plantas completas ha sido previamente
reportado tanto en Musa4;14;20 como en otras especies2 .
En Ipomea batatas, Chée y Cantlife2 encontraron una di-
versidad de estados embrionarios, de los cuales solo algu-
nos de ellos fueron capaces de desarrollarse hacia plan-
tas completas; los embriones incompletos tenían forma re-
dondeada y se caracterizaron por tener el extremo apical
cerrado, sin la presencia de una hendidura o invaginación
que indique la iniciación cotiledonar; estos autores plan-
tean que estos embriones posiblemente crezcan median-
te alargamiento del estado globular reteniendo un estado
primitivo de desarrollo, posiblemente como resultado de
un establecimiento retardado de la polaridad. Otra posi-
ble causa de la falla en la conversión de embriones somá-
ticos a plantas, puede ser la inhibición del desarrollo de un
meristemo funcional en el vástago11 .
El fracaso en lograr la germinación de embriones somá-
82
ticos con el uso de reguladores de crecimiento convencio-
nales, sugiere que el bloqueo del proceso puede tener su
origen en etapas tempranas del desarrollo3 . El balance
hormonal en cada estado del proceso, es un factor im-
portante que controla el crecimiento, la diferenciación y el
desarrollo del embrión11 . Por ejemplo, el papel de las au-
xinas en la inducción de la embriogénesis somática y el
posterior desarrollo de los embriones globulares, no está
completamente establecido, pero se ha demostrado que el
uso de inhibidores del transporte de auxinas son capaces
de bloquear la capacidad de los embriones somáticos de
sufrir la transición morfogenética hacia los subsecuentes
estados de desarrollo: por ejemplo, los embriones globu-
lares sufren una expansión esférica persistente sin elon-
gación del eje, mientras que en los embriones en estado
intermedio se produce una continua elongación del eje, sin
iniciación del desarrollo cotiledonar25 .
Por otro lado, se ha evidenciado que la presencia de
macromoléculas extracelulares en el medio de cultivo de
embriones somáticos, están involucradas en el bloqueo de
los embriones en el estado de corazón en Vitis sp.3 . Por lo
expuesto anteriormente, sugerimos que se deben realizar
experimentos adicionales, como lo son estudios histológi-
cos y bioquímicos en estados tempranos, intermedios y
tardíos de la embriogénesis somática de Musa sp., para
REFERENCIAS
1. Banerjee, N., Schoofs, J., Hollevoet, S., Dumortier, F.
and De Langhe, E. Aspects and prospects of somatic embr-
yogenesis in Musa, ABB, cv. Bluggoe. Acta Hort. 212: 727-
731, 1987.
2. Chée, R. P. and Cantlifee, D. J. Somatic embryonic pat-
terns and plant regeneration in Ipomea batatas Poir. In Vitro
Cell. Dev. Biol. 24(9): 955-958, 1988.
3. Coutos-Thevenot, P., Goebel-Tourand, I., Mauro, M.
C., Jouanneau, J. P., Boulay, M., Deloire, A. and
Guern, J. Somatic embryogenesis from grapevine cells. I-
Improvement of embryo development by changes in culture
conditions. Plant Cell Tiss. Org. Cult. 29: 125-133, 1992.
4. Cronauer-Mitra, S. S. and Krikorian, A. D. Multiplication of
Musa from excised stem tips. Ann. Bot. 53: 321-328, 1984.
5. Dhed’a, D., Dumortier, F., Panis, B., Vuylsteke, D. and De
Langhe, E. Plant regeneration in cell suspension cultures of
the cooking banana c.v. "Bluggoe" (Musa spp. ABB group).
Fruits 46(2): 125-135, 1991.
6. Esau, K. Plant Anatomy. New York. Jonh Wiley & Sons,
1965, p. 767.
7. Escalant, J. V., Tapia, A. y Sandoval, J. Inducción de ca-
llos, suspensión de células y posibilidades de regeneración
en Musa sp previa presión de selección. En: Memorias de
la IX Reunión de ACORBAT, Mérida, Venezuela, 1989, pp.
35-42.
8. Escalant, J. V. and Teisson, C. Somatic embryogenesis
and plant from immature zygotic embryos of the species
Vidal, Vargas y García
tratar de entender en que momento y porque, son inte-
rrumpidos los procesos fisiológicos normales del desarro-
llo del embrión.
La embriogénesis somática directa es considerada co-
mo un sistema conveniente para la propagación de plan-
tas elites, debido a que es un proceso que no involucra
una fase de callo, y por ende, se evita una fuente impor-
tante de variación genética. Por tal motivo, el cultivo de
embriones somáticos de Musa en medio líquido, obteni-
dos por la vía directa a partir de primordios foliares, puede
ser considerado como un sistema opcional para el cultivo
de plantas con características agronómicas sobresalien-
tes. Aún cuando, con la metodología empleada en esta
investigación, sólo se logró la obtención de embriones en
sus diferentes etapas de desarrollo, estos hallazgos abren
el camino para futuras investigaciones relacionadas con
el mejoramiento del proceso de embriogénesis somática
directa en Musa sp.
AGRADECIMIENTOS
Al Programa Nuevas Tecnologías, BID-CONICIT quien
subvencionó esta investigación a través del proyecto BTA-
03. Al Lic. Luis Hermoso por su colaboración en el proce-
samiento de las muestras para el estudio histológico.
Musa acuminata and Musa balbisiana. Plant Cell Report
7: 665-668, 1989.
9. Escalant, J. V., Teisson, C. and Cote, F. Amplified soma-
tic embryogenesis from male flowers of triploid banana and
plantain cultivars (Musa spp.). In Vitro Cell. Dev. Biol. 30:
181-186, 1994.
10. García, E. y Menéndez, A. Embriogénesis somática a partir
de explantes foliares de cafeto "Catimor". Café Cacao Thé,
Vol. XXXI, n Æ 1, janv.-mars, 1987.
11. Goebel-Tourand, I., Mauro, M. C., Sossountzov, L., Mi-
giniac, E. and Deloire, A. Arrest of somatic embryo deve-
lopment in grapevine: histological characterization and the
effect of ABA, BAP and zeatin in stimulating plantlet deve-
lopment. Plant Cell, Tissue and Culture 33: 91-103, 1993.
12. Grapin, A., Schwendiman, J., and Teisson, C. Somatic
embryogenesis in plantain banana. In Vitro Cell. Dev. Biol.:
32: 66-71, 1996.
13. Guiderdoni, E. and Demarly, Y. Histology of somatic embr-
yogenesis in cultured leaf segments of sugarcane plantlets.
Plant Cell, Tissue and Organ Culture 14: 71-88, 1988.
14. Lee, K. S., Zapata-Arias, F. J., Brunner, H. and Afza, R.
Histology of somatic embryo initiation and organogenesis
from rhizome explants of Musa spp. Plant Cell, Tissue and
Organ Culture 51: 1-8, 1997.
Anatomía y morfología de la embriogénesis somática en Musa sp.
15. Marroquin, C. G., Paduscheck, C., Escalant, J. V. and
Teisson, C. Somatic embryogenesis and plant regeneration
through cell suspensions in Musa acuminata. In Vitro Cell
Dev. Biol. 29: 43-46, 1993.
16. Megia, R., Haïcour, R., Rossignol, L. and Sihachakr, D.
Callus Formation from Culture Protoplasts of Banana (Musa
sp.). Plant Science 85: 91-98, 1992.
17. Megia, R., Haïcour, R., Tizroutine, S., Bui Trang, V., Ros-
signol, L., Sihachakr, D. and Schwendiman, J. Plant re-
generation from cultured protoplasts of the cooking banana
cv. Bluggoe (Musa spp., ABB group). Plant Cell Reports 13:
41-44, 1993.
18. Murashige, T. and Skoog, F. A revised medium for a rapid
growth and bioassays with tobacco tissue cultures. Physiol.
Plant 15: 473-497, 1962.
19. Novak, F. J. Musa (Bananas and Platains). In: Biotechno-
logy of perennial fruit crops. Hammerschlag, F.A. and Litz,
R. (Eds.), C.A.B. Intern, Wallington, Oxon. 1992, pp. 449-
488.
20. Novak, F. J., Afza, R., Van Duren, M., Perea-Dallos, M.,
Conger, B. V. and Tang Xiaolang Somatic embryogene-
sis and plant regeneration in suspension cultures of des-
sert (AA and AAA) and cooking (ABB) bananas (Musa spp.).
Biotechnology 7: 154-159, 1989.
21. Oropeza, M. Caracterización de variantes somaclonales de
caña de azúcar (híbrido interespecífico de Saccharum spp.)
resistentes a las razas A y B del virus del mosaico de la ca-
ña de azúcar. Tesis doctoral. Centro de Botánica Tropical,
Universidad Central de Venezuela, 1994, p. 113.
22. Panis, B., Wauwe, A. V. and Swennen, R. Plant regenera-
tion through direct somatic embryogenesis from protoplasts
of banana (Musa spp.) Plant Cell Report 12: 403-407, 1993.
83
23. Perea-Dallos, M. y Novak, F. J. Resultados promisorios en
el mejoramiento genético a través de mutagénesis y rege-
neración de plantas de Musa spp vía embriogénesis somá-
tica. ACEVIV NÆ 3: 29-32, 1988.
24. Sannasgala, K., Dumortier, F. M. and De Langhe, E. A. L.
Somatic embryogenesis from Musa proliferating shoot tips:
Histological details. In: In vitro mutation breeding of bana-
nas and plantains. Vienna, Austria, 1990, pp 24-28.
25. Schiavone, F. M. and Cooke, T. J. Unusual patterns of so-
matic embryogenesis in the dosmeticated carrot: Develop-
mental effects of exogenous auxins and transport inhibitors.
Cell Differ. 21: 53-62, 1987.
26. Suhasini, K., Sagare, A. P. and Krishnamurthy, K. V.
Study of aberrant morphologies and lack of conversion of
somatic embryos of chikpea (Cicer arietinum L.). In Vitro
Cell. Dev. Biol. 32: 6-10, 1996.
27. Schoofs, H. The origin of embryogenic cells in Musa. Hilde
SCHOOFS. Tesis doctoral. Universidad Católica de Leuven,
1997, pp. 121-122.
28. Trujillo, I. and García E. Somatic embryogenesis on " in vi-
tro " different Musa clons. INFOMUSA Vol. 64, 1999.
29. Vasil, I. K. Developing cell and tissue culture systems for
the improvement of cereal and grass crops. Journal of plant
physiology 128: 193-218, 1987.
30. Williams, E. G. and Maheswaran, G. Somatic embryoge-
nesis: Factors influencing coordinated behavior of cell as
embryogenic group. Ann. Bot. 57: 443-462, 1986.