Edy

SKRINING FITOKIMIA DAN UJI AKTIVITAS
ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL SERTA FRAKSI-

FRAKSI BUNGA BELIMBING WULUH (Averrhoa bilimbi L.)
TERHADAP BAKTERI Staphylococcus aureus DAN
Klebsiella pneumoniae
SKRIPSI
OLEH:
NUR AZMI
NIM 091501027
PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2013
Universitas Sumatera Utara

PENGESAHAN SKRIPSI

OLEH:
NUR AZMI
NIM 091501027
Dipertahankan di hadapan Panitia Penguji Skripsi

Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara
Pada Tanggal: 19 Oktober 2013
Pembimbing I, Panitia Penguji,
Dra. Suwarti Aris, M.Si., Apt. Dr. Marline Nainggolan, M.S., Apt.
NIP 195107231982032001 NIP 195709091985112001
Pembimbing II, Dra. Suwarti Aris, M.Si., Apt.

NIP 195107231982032001
Dra. Aswita Hafni Lubis, M.Si., Apt. Drs. Awaluddin Saragih, M.Si., Apt.
NIP 195304031983032001 NIP 195008221974121002
Drs. Suryadi Achmad, M.Sc., Apt.

NIP 195109081985031002
Medan, 27 September 2013

Fakultas Farmasi
Dekan,
Prof. Dr. Sumadio Hadisahputra, Apt.

NIP 195311281983031002

SKRIPSI
Diajukan untuk melengkapi salah satu syarat untuk memperoleh

gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi
OLEH:
NUR AZMI
NIM 091501027
PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2013

KATA PENGANTAR
Puji dan syukur kehadirat Allah SWT, karena limpahan rahmat serta
karuniaNya, sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini yang berjudul:
Skrining Fitokimia dan Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Serta Fraksi-
Fraksi Bunga Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi L.) Terhadap Bakteri
Staphylococcus aureus dan Klebsiella pneumoniae. Skripsi ini diajukan
sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar sarjana farmasi dari Fakultas
Farmasi Universitas Sumatera Utara Medan.
Pada kesempatan ini penulis mengucapkan terimakasih yang tulus dan
ikhlas kepada Bapak Prof. Dr. Sumadio Hadisahputra, Apt., selaku Dekan
Fakultas Farmasi USU Medan yang telah memberikan fasilitas sehingga
penulis dapat menyelesaikan pendidikan sarjana farmasi. Ibu Dra. Suwarti
Aris, M.Si., Apt., dan Dra. Aswita Hafni Lubis, M.Si., Apt., selaku
pembimbing yang telah memberikan waktu, bimbingan dan nasehat selama
penelitian hingga penyusunan skripsi ini dapat diselesaikan. Ibu Dr. Marline
Nainggolan, M.S., Apt., Ibu Dra. Suwarti Aris, M.Si., Apt., Bapak Drs.
Awaluddin Saragih, M.Si., Apt., dan Bapak Drs. Suryadi Achmad, M.Sc., Apt.,
selaku dosen penguji yang telah memberikan kritik, saran dan arahan kepada
penulis dalam menyelesaikan skripsi ini. Bapak dan Ibu staf pengajar Fakultas
Farmasi USU Medan yang telah mendidik selama perkuliahan dan Ibu Dra.
Azizah Nasution, M.Sc., Apt., selaku penasehat akademis yang telah
memberikan bimbingan kepada penulis. Ibu kepala Laboratorium

Farmakognosi dan Ibu kepala Laboratorium Mikrobiologi yang telah
memberikan bantuan dan fasilitas selama penulis melakukan penelitian.
Penulis juga mengucapkan terimakasih dan penghargaan yang tiada
terhingga kepada Ayahanda Drs. Nazaruddin, Ibunda Zainar S.pd tercinta dan
adikku Azrul Ruddin, yang tiada hentinya berkorban dan berdoa dengan tulus
ikhlas bagi kesuksesan penulis, juga kepada Beasiswa Peduli Pendidikan
Angkasa Pura II yang telah memberikan bantuan biaya pendidikan selama
penulis menjalani kuliah sampai pada penyelesaian skripsi ini, serta kepada
teman-teman dan sahabat-sahabatku Devy Novitasari, Dzul Azmah, Ovalina
Sylvia, Khadijah Husna, Dita Hafsari, Khairunnisa Rambe, Asih Tria
Wulandari, Yusrina, Riza Maulidiya, Hetti Purnama, Nulika Fitria, Lita
Nelliyani, Syukria Rahmayani, Rina Sari Lubis, kak Nomita Sari Sagala, Kak
Vriezka, Fadlina Aulia, Fifie Primawati, Tri Rizki Wahyuni, Febbi Fenesia,
Putri Anggreini, Lyvana Istiarah, Indriani Kumala Dewi, Linda Marhama,
Ferra Zu’ami, Yusnawati dan Aji Muhiddin Lubis yang selalu setia memberi
doa dan motivasi selama penulis melakukan penelitian.
Penulis menyadari bahwa penulisan skripsi ini masih belum sempurna,
sehingga penulis mengharapkan kritik dan saran yang membangun untuk
penyempurnaannya. Harapan saya semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi
ilmu pengetahuan kefarmasian.
Medan, Oktober 2013

Penulis
Nur Azmi
NIM 091501027

SKRINING FITOKIMIA DAN UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI
EKSTRAK ETANOL SERTA FRAKSI-FRAKSI BUNGA
BELIMBING WULUH (Averrhoa bilimbi L.) TERHADAP
BAKTERI Staphylococcus aureus DAN
ABSTRAK
Belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi L.) merupakan salah satu tanaman
yang digunakan sebagai obat tradisional. Bagian dari belimbing wuluh yang
digunakan untuk pengobatan meliputi bunga, daun dan buah. Sejak zaman
dahulu masyarakat Desa Subur, Kecamatan Air Joman, Kabupaten Asahan
telah memanfaatkan untaian bunga belimbing wuluh sebagai obat batuk dan
sariawan pada anak-anak. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui
karaktersitik simplisia, golongan senyawa kimia dan uji aktivitas antibakteri
bunga belimbing wuluh terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Klebsiella
pneumoniae.
Simplisia diekstraksi secara perkolasi menggunakan pelarut etanol
kemudian difraksinasi dengan cara ekstraksi cair-cair menggunakan pelarut n-
heksana dan etilasetat. Selanjutnya dilakukan uji aktivitas antibakteri
menggunakan metode difusi agar dengan cara sumuran.
Hasil karakterisasi simplisia diperoleh kadar air sebesar 7,94%, kadar sari
yang larut dalam air sebesar 11,97%, kadar sari yang larut dalam etanol sebesar
2,39%, kadar abu total sebesar 8,24% dan kadar abu yang tidak larut dalam
asam sebesar 5,52%. Skrining fitokimia menunjukkan adanya golongan
senyawa kimia flavonoid, glikosida, tanin dan steroid/triterpenoid. Uji aktivitas
antibakteri menunjukkan bahwa ekstrak etanol memberikan daerah hambat
yang efektif terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus pada
konsentrasi 200 mg/ml yaitu 15,82 mm dan terhadap bakteri Klebsiella
pneumoniae pada konsentrasi 200 mg/ml yaitu 14,73 mm. Fraksi n-heksana
memberikan daerah hambat yang kurang efektif terhadap kedua bakteri.
Sedangkan fraksi etilasetat juga memberikan daerah hambat yang efektif
terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus pada konsentrasi 200
mg/ml yaitu 15,5 mm dan terhadap bakteri Klebsiella pneumoniae pada
konsentrasi 200 mg/ml yaitu 14,5 mm. Sedangkan fraksi air memberikan
daerah hambat yang kurang efektif terhadap kedua bakteri.
Kata kunci : bunga belimbing wuluh, Averrhoa bilimbi L., antibakteri

PHYTOCHEMICAL SCREENING AND ANTIBACTERIAL ACTIVITY
TEST OF ETHANOL EXTRACTS AND FRACTIONS OF
PICKLE FRUIT FLOWER (Averrhoa bilimbi L.)
AGAINST Staphylococcus aureus AND
ABSTRACT
Pickle fruit (Averrhoa bilimbi L.) is one of the plant used a
traditional medicine. Parts of the pickle fruit used for therapy are flowers,
leaves and fruits. Since in immemorial time people in Desa Subur, Kecamatan
Air Joman, Kabupaten Asahan have been using pickle fruit flower as cough
and thrush medicine for children. The purpose of this study was evaluated
simplicia characteristics, the chemical compounds and antibacterial activity of
pickle fruit flower against Staphylococcus aureus and Klebsiella pneumoniae.
Simplicia extracted by percolation using ethanol solvent and
fractionation of extract with liquid-liquid extraction method using n-hexane
and ethylacetate solvents. And continued to antibacterial activity test by using
pitting agar diffusion method.
The result of characterization simplicia retrieved the water content is
7.94%, the water soluble extract content is 11.97%, the ethanol soluble extract
content is 2.39%, the total ash content is 8.24% and the acid insoluble ash
content is 5.52%. Phytochemical screening showed the presence of chemical
compounds are flavonoid, glycoside, tannin and steroid/triterpenoid.
Antibacterial activity test showed that ethanol extract provide effective
inhibitory area to growth of the bacteria Staphylococcus aureus at a
concentration of 200 mg/ml is 15.82 mm and Klebsiella pneumoniae at a
concentration of 200 mg/ml is 14.73 mm. The n-hexane fraction give the
inhibitory area is less effective against both bacteria. While the ethylasetate
fraction also provide effective inhibitory area to growth of the bacteria
Staphylococcus aureus at a concentration of 200 mg/ml is 15.5 mm and
Klebsiella pneumoniae at a concentration of 200 mg/ml is 14.5 mm. While the
fraction of water also give the inhibitory area is less effective against both
bacteria.
Keywords: Pickle fruit flower, Averrhoa bilimbi L., antibacterial

DAFTAR ISI
Halaman
JUDUL ................................................................................................... i
HALAMAN JUDUL .............................................................................. ii
HALAMAN PENGESAHAN ................................................................ iii
KATA PENGANTAR ........................................................................... iv
ABSTRAK ............................................................................................. vi
ABSTRACT ........................................................................................... vii
DAFTAR ISI .......................................................................................... viii
DAFTAR TABEL .................................................................................. xii
DAFTAR LAMPIRAN .......................................................................... xiii
BAB I PENDAHULUAN .................................................................. 1
1.1 Latar Belakang ................................................................ 1
1.2 Perumusan Masalah ........................................................ 2
1.3 Hipotesis ......................................................................... 3
1.4 Tujuan Penelitian ............................................................ 3
1.5 Manfaat Penelitian .......................................................... 3
BAB II TINJAUAN PUSTAKA .......................................................... 4
2.1 Uraian Tumbuhan ........................................................... 4
2.1.1 Habitat ................................................................ 4
2.1.2 Morfologi ........................................................... 4
2.1.3 Sistematika tumbuhan ........................................ 5
2.1.4 Kandungan kimia ............................................... 6

2.1.5 Manfaat .............................................................. 6
2.2 Metode Ekstraksi ............................................................ 7
2.3 Sterilisasi ........................................................................ 8
2.4 Bakteri ............................................................................ 10
2.4.1 Morfologi sel bakteri ......................................... 11
2.4.2 Fase pertumbuhan mikroorganisme ................. 12
2.4.3 Pengaruh faktor lingkungan ............................. 12
2.4.4 Staphylococcus aureus ..................................... 16
2.4.5 Klebsiella pneumoniae ..................................... 16
2.5 Media Biakan Mikroba ................................................... 17
2.6 Pengujian Aktivitas Antimikroba ................................... 21
BAB III METODE PENELITIAN ...................................................... 24
3.1 Alat- alat ......................................................................... 24
3.2 Bahan-bahan ................................................................... 25
3.3 Penyiapan Bahan Tumbuhan .......................................... 25
3.3.1 Pengambilan bahan tumbuhan ............................ 25
3.3.2 Identifikasi tumbuhan ......................................... 26
3.3.3 Pembuatan simplisia ........................................... 26
3.4 Pembuatan Pereaksi ........................................................ 26
3.4.1 Pereaksi Mayer ................................................... 26
3.4.2 Pereaksi Dragendorff .......................................... 26
3.4.3 Pereaksi Bouchardat ........................................... 27
3.4.4 Pereaksi Molish .................................................. 27

3.4.5 Pereaksi Liebermann-Burchard .......................... 27
3.4.6 Pereaksi larutan besi (III) klorida 1% b/v ........... 27
3.4.7 Pereaksi larutan timbal (II) asetat 0,4 M ............ 27
3.4.8 Pereaksi larutan natrium hidroksida 2 N ............ 27
3.4.9 Larutan asam klorida 2 N ................................... 27
3.4.10 Pereaksi larutan asam sulfat 2 N ......................... 28
3.4.11 Larutan kloralhidrat ............................................ 28
3.5 Pemeriksaan Karakteristik Simplisia .............................. 28
3.5.1 Pemeriksaan makroskopik .................................. 28
3.5.2 Pemeriksaan mikroskopik ................................... 28
3.5.3 Penetapan kadar air ............................................. 28
3.5.4 Penetapan kadar sari larut dalam air ................... 29
3.5.5 Penetapan kadar sari larut dalam etanol ............. 30
3.5.6 Penetapan kadar abu total ................................... 30
3.5.7 Penetapan kadar abu tidak larut dalam asam ...... 30
3.6 Skrining Fitokimia .......................................................... 31
3.6.1 Pemeriksaan alkaloid .......................................... 31
3.6.2 Pemeriksaan flavonoid ........................................ 31
3.6.3 Pemeriksaan glikosida ........................................ 32
3.6.4 Pemeriksaan glikosida antrakinon ...................... 32
3.6.5 Pemeriksaan saponin .......................................... 33
3.6.6 Pemeriksaan tanin ............................................... 33
3.6.7 Pemeriksaan steroid/triterpenoid ........................ 33

3.7 Pembuatan Ekstrak ......................................................... 33
3.7.1 Pembuatan fraksi-fraksi dari ekstrak etanol ....... 34
3.8 Sterilisasi Alat ................................................................ 35
3.9 Pembuatan Media ........................................................... 35
3.10 Pembuatan Agar Miring ................................................. 36
3.11 Pembuatan Stok Kultur Bakteri ...................................... 37
3.12 Penyiapan Inokulum Bakteri .......................................... 37
3.13 Pembuatan Larutan Uji dengan Berbagai Konsentrasi ... 37
3.14 Pengujian Aktivitas Antibakteri Secara In Vitro ............. 38
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................... 39
4.1 Hasil Identifikasi Tumbuhan .......................................... 39
4.2 Hasil Karakterisasi Simplisia ......................................... 39
4.2.1 Pemeriksaan makroskopik ................................. 39
4.2.2 Pemeriksaan mikroskopik .................................. 39
4.2.3 Pemeriksaan karakteristik serbuk simplisia ....... 40
4.3 Hasil Ekstraksi dan Fraksinasi......................................... 41
4.4 Hasil Skrining Fitokimia ................................................ 41
4.5 Hasil Uji Aktivitas Antibakteri ....................................... 42
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ................................................. 47
5.1 Kesimpulan ..................................................................... 47
5.2 Saran ............................................................................... 48
DAFTAR PUSTAKA ............................................................................ 49
LAMPIRAN ........................................................................................... 52

DAFTAR TABEL
Tabel Halaman
4.1 Hasil skrining fitokimia simplisia, ekstrak etanol,

fraksi n-heksana, fraksi etilasetat, dan fraksi air bunga
belimbing wuluh ........................................................................ 41
4.2 Hasil pengukuran diameter daerah hambatan pertumbuhan

bakteri Staphylococcus aureus ................................................... 43
4.3 Hasil pengukuran diameter daerah hambatan pertumbuhan

bakteri Klebsiella pneumoniae ................................................... 43

DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran Halaman
1 Hasil identifikasi tumbuhan ................................................... 52
2 Gambar bunga belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi L.) ........ 53
3 Gambar simplisia bunga belimbing wuluh

(Averrhoa bilimbi L.) ............................................................. 54
4 Gambar serbuk simplisia bunga belimbing wuluh

(Averrhoa bilimbi L.) ............................................................. 55
5 Gambar mikroskopik serbuk simplisia bunga belimbing

wuluh (Averrhoa bilimbi L.) .................................................. 56
6 Bagan metode penelitian ........................................................ 57
7 Tabel hasil pemeriksaan karakteristik serbuk simplisia

bunga belimbing wuluh ......................................................... 60
8 Perhitungan penetapan kadar air simplisia

9 Perhitungan penetapan kadar sari larut dalam air simplisia

10 Perhitungan penetapan kadar sari larut dalam etanol

simplisia bunga belimbing wuluh .......................................... 63
11 Perhitungan penetapan kadar abu total simplisia

12 Perhitungan penetapan kadar abu tidak larut dalam asam

simplisia bunga belimbing wuluh .......................................... 65
13 Hasil pengukuran diameter daerah hambatan pertumbuhan

bakteri Staphylococcus aureus dan Klebsiella pneumoniae
pada ekstrak etanol bunga belimbing wuluh ......................... 66

pada fraksi n-heksana bunga belimbing wuluh ..................... 67

pada fraksi etilasetat bunga belimbing wuluh ....................... 68

pada fraksi air bunga belimbing wuluh ................................. 69
17 Gambar uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol

bunga belimbing wuluh terhadap bakteri
Staphylococcus aureus .......................................................... 70
18 Gambar uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol

Klebsiella pneumoniae .......................................................... 73
19 Gambar uji aktivitas antibakteri fraksi n-heksana

20 Gambar uji aktivitas antibakteri fraksi n-heksana

21 Gambar uji aktivitas antibakteri fraksi etilasetat

22 Gambar uji aktivitas antibakteri fraksi etilasetat

23 Gambar uji aktivitas antibakteri fraksi air

24 Gambar uji aktivitas antibakteri fraksi air


BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Sejak dahulu pengobatan tradisional sudah ada di Indonesia. Umumnya
yang digunakan sebagai obat tradisional berasal dari tumbuhan. Salah satu
tanaman yang sering digunakan sebagai obat tradisional adalah belimbing
wuluh (Averrhoa bilimbi L.). Hampir semua bagian dari tanaman belimbing
wuluh dapat digunakan untuk pengobatan meliputi daun, bunga dan buah
(Mario, 2011).
Untaian bunga belimbing wuluh sering dimanfaatkan sebagai obat
tradisional oleh masyarakat Desa Subur, Kecamatan Air Joman, Kabupaten
Asahan, Provinsi Sumatera Utara untuk mengobati batuk dan sariawan pada
anak-anak.
Ardananurdin (2004), telah melakukan penelitian uji efektivitas dekok
bunga belimbing wuluh sebagai antimikroba terhadap bakteri Salmonella thypi
secara in vitro menggunakan metode dilusi tabung dan dengan penggoresan
pada medium padat, dan diperoleh hasil bahwa bunga belimbing wuluh efektif
sebagai antimikroba terhadap bakteri Salmonella thypi.
Antibakteri adalah senyawa yang mengganggu pertumbuhan dan
metabolisme bakteri, sehingga senyawa tersebut dapat menghambat
pertumbuhan atau bahkan membunuh bakteri (Pelczar dan Chan, 1998).
Staphylococcus aureus merupakan bakteri gram positif yang berbentuk bulat
dan merupakan patogen utama pada manusia (Jawetz, et al., 2001). Kulit dan

membran mukosa merupakan barrier yang sangat baik terhadap invasi lokal
Staphylococcus aureus. Dapat menyebabkan infeksi lokal pada kulit, hidung,
uretra, saluran pernafasan dan saluran pencernaan (Harris, et al., 2002).
Klebsiella pneumoniae adalah bakteri gram negatif berbentuk batang yang
dapat menyebabkan infeksi pada saluran pernafasan seperti pneumonia
(Jawetz, et al., 2001). Klebsiella pneumoniae merupakan penghuni normal
traktus digestivus. Selain menginfeksi pernafasan juga dapat menyebabkan
infeksi saluran kemih dan infeksi nosokomial (Susilo, 2004).
Berdasarkan uraian diatas maka penulis melakukan penelitian untuk
mengetahui karakteristik simplisia, golongan senyawa kimia, serta aktivitas
antibakteri ekstrak etanol, fraksi n-heksana, fraksi etilasetat dan fraksi air
bunga belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi L.) terhadap bakteri Staphylococcus
aureus dan Klebsiella pneumoniae menggunakan metode difusi agar dengan
cara sumuran. Peneliti terlebih dahulu melakukan karakterisasi simplisia untuk
mengetahui kelayakan simplisia sebelum dibuat menjadi ekstrak dan digunakan
dalam pembuatan sediaan obat. Sedangkan fraksinasi secara ekstraksi cair-cair
bertujuan untuk menyari kembali senyawa metabolit sekunder berdasakan
tingkat kepolarannya.
1.2 Perumusan Masalah
1. Apakah karakteristik simplisia bunga belimbing wuluh memenuhi
persyaratan?
2. Apakah golongan senyawa kimia yang terdapat di dalam bunga
belimbing wuluh?

3. Apakah ekstrak etanol, fraksi n-heksana, fraksi etilasetat dan fraksi
air bunga belimbing wuluh memiliki aktivitas antibakteri terhadap
bakteri Staphylococcus aureus dan Klebsiella pneumoniae?
1.3 Hipotesis
1. Karakteristik simplisia bunga belimbing wuluh memenuhi
persyaratan.
2. Golongan senyawa kimia yang terdapat di dalam bunga belimbing
wuluh adalah saponin, flavonoid dan polifenol.
3. Ekstrak etanol, fraksi n-heksana, fraksi etilasetat dan fraksi air
bunga belimbing wuluh memiliki aktivitas antibakteri terhadap
bakteri Staphylococcus aureus dan Klebsiella pneumoniae.
1.4 Tujuan Penelitian
1. Untuk mengetahui karakteristik simplisia bunga belimbing wuluh
2. Untuk mengetahui golongan senyawa kimia yang terdapat di dalam
bunga belimbing wuluh.
3. Untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak etanol, fraksi n-
heksana, fraksi etilasetat dan fraksi air bunga belimbing wuluh
terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Klebsiella pneumoniae.
1.5 Manfaat Penelitian
Manfaat dari penelitian ini adalah sebagai informasi tentang
karakteristik simplisia, golongan senyawa kimia dan aktivitas antibakteri dari
ekstrak dan fraksi bunga belimbing wuluh.

BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Uraian Tanaman Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi L.)
Tanaman belimbing wuluh berupa pohon kecil dengan batang yang
tidak begitu besar dan mempunyai garis tengah 30 cm (Lathifah, 2008).
Tanaman ini mudah sekali tumbuh dan berkembangbiak melalui cangkok atau
persemaian biji. Jika ditanam lewat biji, pada usia 3-4 tahun sudah mulai
berbuah. Jumlah setahunnya bisa mencapai 1.500 buah (Mario, 2011).
2.1.1 Habitat
Belimbing wuluh disebut juga belimbing asam adalah sejenis pohon
yang diperkirakan berasal dari kepulauan Maluku. Tanaman ini tumbuh dengan
subur di Indonesia, Filipina, Sri Lanka, Myanmar dan Malaysia. Dapat ditemui
di tempat yang banyak terkena sinar matahari langsung tetapi cukup lembap.
Merupakan salah satu tanaman yang banyak tumbuh dipekarangan rumah atau
tumbuh secara liar di ladang dan hutan. Hidup pada ketinggian 5-500 m di atas
permukaan laut (Yuniarti, 2008).
2.1.2 Morfologi
Pohon belimbing bisa tumbuh dengan ketinggian mencapai 5-10 m.
Batang utamanya pendek, berbenjol-benjol, cabangnya rendah dan sedikit.
Batangnya bergelombang atau tidak rata (Masripah, 2009).
Bentuk daunnya majemuk menyirip ganjil dengan 21-45 pasang anak
daun. Anak daun bertangkai pendek, berbentuk bulat telur sampai jorong,

ujung runcing, pangkal membulat, tepi rata, panjang 2-10 cm, lebarnya 1-3 cm,
berwarna hijau, permukaan bawah hijau muda (Dalimartha, 2008).
Perbungaan berupa malai, bunganya kecil, berkelompok, keluar
langsung pada batang dan cabang-cabangnya dengan tangkai bunga berambut,
menggantung, panjang 5-20 cm, mahkota bunga biasanya berjumlah 5, panjang
kelopak bunga 5-7 mm; helaian mahkota bunga berbentuk elips; panjang
13-20 mm, berwarna ungu gelap dan bagian pangkalnya ungu muda; benang
sari semuanya subur (Masripah, 2009; Mario, 2011).
Buah belimbing wuluh berbentuk elips hingga seperti torpedo dengan
panjang 4-10 cm. Warna buah ketika muda hijau, dengan sisa kelopak bunga
menempel diujungnya. Jika masak buahnya berwarna kuning pucat. Daging
buahnya berair dan sangat asam. Kulit buah berkilap dan tipis. Bijinya kecil
(6 mm) berbentuk pipih dan berwarna coklat, serta tertutup lendir (Mario,
2011).
2.1.3 Sistematika tumbuhan
Sistematika tumbuhan belimbing wuluh (Heyne, 1987) sebagai berikut:
Divisi : Spermatophyta
Subdivisi : Angiospermae
Kelas : Dicotyledoneae
Bangsa : Geraniales
Suku : Oxalidaceae
Marga : Averrhoa
Spesies : Averrhoa bilimbi L.

2.1.4 Kandungan kimia
Kandungan kimia pada tanaman belimbing wuluh secara lebih rinci
yaitu pada daunnya mengandung tanin, sulfur, asam format, kalium sitrat dan
kalsium oksalat. Sedangkan ibu tangkai daunnya mengandung alkaloid dan
polifenol. Batang pada tanaman belimbing mengandung senyawa saponin,
tanin, glukosida, kalsium oksalat, sulfur, asam format, peroksidase, dan
buahnya mengandung senyawa flavonoid dan triterpenoid (Permadi, 2006).
Menurut Ardananurdin (2004), bunga belimbing wuluh mengandung golongan
senyawa kimia yang bersifat antibakteri seperi saponin, flavonoid dan
polifenol.
2.1.5 Manfaat
Bunga belimbing wuluh dimanfaatkan sebagai obat tradisional untuk
mengobati batuk, flu dan sariawan pada anak-anak (Heyne, 1987; Das, et al.,
2011). Untuk mengobati batuk pada anak-anak dapat dibuat ramuan dengan
cara, tim segenggam bunga belimbing wuluh, beberapa butir adas, gula
secukupnya dan 1 cangkir air selama setengah jam. Setelah dingin disaring,
kemudian bagi untuk 2 kali minum, pagi dan malam sewaktu perut kosong
(Dalimartha, 2008). Sedangkan untuk mengobati sariawan dibuat ramuan
dengan cara segenggam bunga belimbing wuluh, gula jawa secukupnya, dan 1
cangkir air. Direbus sampai kental, setelah dingin disaring. Dipakai untuk
membersihkan mulut dan dioleskan pada sariawan (Mario, 2011). Bunga
belimbing wuluh juga dapat digunakan untuk mengobati demam tifoid
(Ardananurdin, 2004).

2.2 Metode Ekstraksi
Ekstraksi merupakan penarikan senyawa kimia dari jaringan tumbuhan
ataupun hewan dengan menggunakan penyari tertentu. Cara ekstraksi yang
tepat tergantung pada bahan tumbuhan yang diekstraksi dan jenis senyawa
yang diisolasi (Ditjen POM, 2000). Ekstrak adalah sediaan kering, kental atau
cair dibuat dengan menyari simplisia nabati atau hewani menurut cara yang
cocok, di luar pengaruh cahaya matahari langsung, ekstrak kering harus mudah
digerus menjadi serbuk. Sebagai cairan penyari dapat digunakan air, eter atau
campuran etanol dan air (Ditjen POM, 1979).
Metode ekstraksi dapat dilakukan dengan berbagai cara, antara lain:
I. Cara dingin
a. Maserasi
Maserasi adalah proses penyarian dengan merendam simplisia dalam
pelarut yang sesuai dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan
pada temperatur ruangan dan terlindung dari cahaya (Depkes, 2000).
b. Perkolasi
Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru sampai
sempurna (exhaustive extraction) yang umumnya dilakukan pada
temperatur ruangan (Depkes, 2000).
II. Cara panas
a. Refluks
Refluks adalah proses penyarian simplisia dengan menggunakan pelarut
pada temperatur titik didihnya, selama waktu tertentu dan jumlah pelarut

terbatas yang relatif konstan dengan adanya pendingin balik (Depkes,
2000).
b. Sokletasi
Sokletasi adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang dipanaskan hingga
mendidih sehingga uap membasahi serbuk simplisia karena adanya
pendingin balik dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi kontinu
dengan jumlah pelarut relatif konstan (Ditjen POM, 2000).
c. Digesti
Digesti adalah maserasi kinetik (dengan pengadukan kontinu) pada
temperatur yang lebih tinggi dari temperatur ruangan, yaitu secara umum
dilakukan pada temperatur 40-50oC (Depkes, 2000).
d. Infus
Infus adalah sediaan cair yang dibuat dengan menyari simplisia dengan
air pada suhu 90oC selama 15 menit (Depkes, 1986).
e. Dekok
Dekok adalah penyarian dengan menggunakan air pada suhu 90oC
selama 30 menit (Goeswin, 2007).
2.3 Sterilisasi
Sterilisasi berarti membebaskan tiap benda atau substansi dari semua
kehidupan dalam bentuk apapun, tujuannya untuk mendapatkan keadaan yang
steril. Sterilisasi dapat dilakukan dengan tiga cara, yaitu: a) Sterilisasi
pemanasan basah dengan menggunakan uap atau air panas, b) Sterilisasi kering
dalam tanur, dan c) Pembakaran total (incineration).

Berdasarkan dari tiga cara tersebut, sterilisasi dapat dibagi menjadi:
I. Sterilisasi kering
Sterilisasi kering dapat dilakukan dengan cara sebagai berikut:
a. Pemijaran
Pemijaran digunakan untuk sterilisasi pada ose, ujung-ujung pinset,
dan sudip (spatula) logam.
b. Jilatan api (Flaming)
Jilatan api digunakan untuk sterilisasi pada skalpel, jarum, mulut
tabung biakan, kaca objek, dan kaca penutup. Benda-benda tersebut
dijilatkan pada api bunsen tanpa membiarkannya memijar.
c. Tanur uap panas (Hot-Air Oven)
Sebagian besar sterilisasi kering dilakukan dengan alat ini. Biasanya
digunakan suhu 160-165ºC selama 1 jam. Cara ini baik dilakukan
terhadap alat-alat kering terbuat dari kaca, seperti tabung reaksi,
cawan petri, labu, pipet, pinset, skalpel, gunting, kapas hapus
tenggorok, dan alat suntik dari kaca. Kadang-kadang dilakukan
sterilisasi pada suhu 170ºC selama 2 jam.
II. Sterilisasi basah
Sterilisasi basah dapat dilakukan dengan cara sebagai berikut:
a. Perebusan dalam air
Cara ini hanya cukup untuk mematikan mikroorganisme yang tidak
berspora. Memang ada spora yang tidak tahan perebusan, tetapi
endospora dari famili Bacillaceae ada yang tahan perebusan selama

1-3 jam. Efek pensterilan dengan perebusan dapat diperbaiki dengan
penambahan 2% natrium karbonat.
b. Uap mengalir
Uap mengalir bebas digunakan dalam tempat yang tidak tertutup
rapat, yang dapat menahan uap tanpa tekanan. Air mendidih dan uap
bebas tidak pernah mencapai suhu lebih dari 100ºC (212ºF). Uap
bebas ini kadang-kadang digunakan untuk melakukan sterilisasi
bertingkat atau tindalisasi. Cara ini dipelopori oleh John Tyndall
(1820-1893), adalah suatu proses sterilisasi dengan menggunakan uap
pada suhu 100ºC, yang dialirkan pada benda yang akan disterilkan
untuk beberapa menit berkali-kali (tiga sampai empat kali) dengan
selang waktu 24 jam.
c. Uap dalam tekanan
Pensterilan dengan uap dalam tekanan dilakukan dalam autoklaf.
Dalam autoklaf, sterilisasi dilakukan pada suhu 121ºC di bawah
tekanan 15 ib (2 atmosfer) selama 15-20 menit. Dalam suhu dan
waktu tersebut semua mikroorganisme, baik vegetatif maupun spora
dapat dimusnahkan (Irianto, 2006).
2.4 Bakteri
Bakteri merupakan suatu organisme prokariot yang berarti tidak
mempunyai inti sel sejati. Bakteri pada umumnya mempunyai ukuran sel 0,5-
1,0 µm kali 2,0-5,0 µm (Fardiaz, 1992). Berdasarkan proses pewarnaan gram,
bakteri dibagi menjadi dua golongan yaitu bakteri gram positif dan bakteri

gram negatif. Bakteri gram positif menyerap zat warna pertama yaitu kristal
violet yang menyebabkan warna ungu, sedangkan bakteri gram negatif
menyerap zat warna kedua yaitu safranin dan menyebabkannya berwarna
merah. Perbedaan hasil dalam pewarnaan gram disebabkan perbedaan struktur,
terutama dinding sel kedua bakteri tersebut (Waluyo, 2010).
2.4.1 Morfologi sel bakteri
Ada beberapa bentuk dasar sel bakteri menurut Fardiaz (1992), yaitu
bulat (tunggal: coccus, jamak: cocci), batang atau silinder (tunggal: bacillus,
jamak: bacilli), dan bentuk spiral.
a. Bentuk bulat (cocci)
Berdasarkan pengelompokkan selnya, bakteri berbentuk bulat dapat
dibedakan atas beberapa jenis, antara lain diplococci (sel yang
berpasangan atau dua sel), streptococci (rangkaian sel yang membentuk
rantai panjang atau pendek), tetrad (empat sel bulat yang membentuk
persegi empat), staphylococci (kumpulan sel yang tidak beraturan seperti
buah anggur), dan sarcina (kumpulan sel berbentuk kubus yang terdiri
dari 8 sel atau lebih).
b. Bentuk bacilli
Sebagian besar bacilli tampak sebagai batang tunggal. Terbagi dalam dua
bentuk yaitu diplobacilli (bentuk berpasangan) dan streptobacilli
(membentuk rantai).

c. Bentuk spiral
Bakteri berbentuk spiral (tunggal, spirilium; jamak, spirila) terdapat
secara terpisah-pisah (tunggal), tetapi masing-masing spesies berbeda
dalam panjang, jumlah, dan lekukan spiralnya. Bakteri yang ukurannya
pendek dengan spiral yang tidak lengkap disebut bakteri koma atau
vibrio.
2.4.2 Fase pertumbuhan mikroorganisme
Fase pertumbuhan mikroorganisme menurut Pratiwi (2008) terbagi
menjadi empat macam fase yaitu fase lag, fase log (fase eksponensial), fase
stasioner, dan fase kematian.
I. Fase lag (fase adaptasi), merupakan fase penyesuaian mikroorganisme
pada suatu lingkungan baru. Ciri fase lag adalah tidak adanya
peningkatan jumlah sel, yang ada hanyalah peningkatan ukuran sel. Lama
fase lag tergantung pada kondisi dan jumlah awal mikroorganisme dan
media pertumbuhan.
II. Fase log (fase eksponensial), merupakan fase dimana mikroorganisme
tumbuh dan membelah pada kecepatan maksimum, tergantung pada
genetika mikroorganisme, sifat media dan kondisi pertumbuhan. Sel baru
terbentuk dengan laju konstan dan massa yang bertambah secara
eksponensial.
III. Fase stasioner, merupakan fase dimana pertumbuhan mikroorganisme
berhenti dan terjadi keseimbangan antara jumlah sel yang membelah
dengan jumlah sel yang mati.

IV. Fase kematian, merupakan fase dimana jumlah sel yang mati meningkat.
Faktor penyebabnya adalah ketidaktersediaan nutrisi dan akumulasi
produk buangan yang toksik.
2.4.3 Pengaruh faktor lingkungan pada pertumbuhan
Faktor yang mempengaruhi pertumbuhan mikroorganisme dapat
dibedakan menjadi faktor fisik dan faktor kimia. Faktor fisik meliputi
temperatur, pH, dan tekanan osmosis. Faktor kimia meliputi karbon, oksigen,
trace element dan faktor-faktor pertumbuhan organik termasuk nutrisi yang
terdapat dalam media pertumbuhan (Pratiwi, 2008).
A. Pengaruh faktor fisik pada pertumbuhan
I. Temperatur
Temperatur menentukan aktivitas enzim yang terlibat dalam aktivitas
kimia. Peningkatan temperatur sebesar 10ºC dapat meningkatkan aktivitas
enzim sebesar dua kali lipat. Pada temperatur yang sangat tinggi dapat
menyebabkan denaturasi protein yang tidak dapat balik (irreversible)
sedangkan pada temperatur yang sangat rendah aktivitas enzim akan
berhenti. Pada temperatur pertumbuhan optimal akan terjadi kecepatan
pertumbuhan optimal dan dihasilkan jumlah sel yang maksimal.
Berdasarkan kisaran temperatur tumbuh, mikroorganisme dibagi atas
empat golongan:
a. Psikrofil, tumbuh pada temperatur maksimal 20oC dengan suhu
optimal 0 sampai 15oC.

b. Psikrofil fakultatif/ psikotrof, tumbuh pada temperatur maksimal 30ºC
dengan suhu optimal 20 sampai 30ºC, dapat tumbuh pada 0ºC.
c. Mesofil, tumbuh pada temperatur 15 sampai 45oC dengan suhu
d. Termofil, tumbuh pada temperatur 45 sampai 100oC dengan suhu
II. pH
pH merupakan indikasi konsentrasi ion hidrogen. Peningkatan dan
penurunan konsentrasi ion hidrogen dapat menyebabkan ionisasi gugus-
gugus dalam protein, amino dan karboksilat. Hal ini dapat menyebabkan
denaturasi protein yang mengganggu pertumbuhan sel. Kebanyakan
bakteri memiliki pH optimum terletak antara 6,5 dan 7,5.
III. Tekanan osmosis
Tekanan osmosis merupakan tekanan yang dihasilkan akibat adanya
proses osmosis. Osmosis merupakan perpindahan air melewati membran
semipermeabel karena ketidakseimbangan material terlarut dalam media.
Dalam larutan hipotonik air akan masuk ke dalam sel mikroorganisme,
sedangkan dalam larutan hipertonik air akan keluar dari dalam sel
mikroorganisme sehingga membran plasma mengerut dan lepas dari
dinding sel (plasmolisis), serta menyebabkan sel secara metabolik tidak
aktif (Pratiwi, 2008).

B. Pengaruh faktor kimia pada pertumbuhan
I. Nutrisi
Nutrisi merupakan substansi yang diperlukan untuk biosintesis dan
pembentukan energi. Berdasarkan kebutuhannya, nutrisi dibedakan
menjadi dua yaitu makroelemen, yaitu elemen yang diperlukan dalam
jumlah banyak dan mikroelemen yaitu elemen nutrisi yang diperlukan
dalam jumlah sedikit (Pratiwi, 2008).
II. Media kultur
Bahan nutrisi yang digunakan untuk pertumbuhan mikroorganisme
di laboratorium disebut media kultur.
III. Oksigen
Klasifikasi mikroorganisme berdasarkan kebutuhan oksigen dibagi
menjadi 4 golongan, yaitu:
a. Aerob mutlak, oksigen sebagai syarat utama metabolisme.
b. Anaerob mutlak, tidak mentoleransi adanya oksigen atau akan mati
bila ada oksigen.
c. Anaerob fakultatif, mampu tumbuh baik dalam suasana dengan
atau tanpa oksigen.
d. Mikroaerofilik, hanya tumbuh baik pada konsentrasi oksigen yang
rendah yaitu kurang dari 20%, pada konsentrasi oksigen yang
tinggi menyebabkan toksik (Pratiwi, 2008).

2.4.4 Staphylococcus aureus
Berikut sistematika Staphylococcus aureus (Dwidjoseputro, 1994):
Divisi : Protophyta
Kelas : Schizomycetes
Bangsa : Eubacteriales
Suku : Micrococaceae
Marga : Staphylococcus
Jenis : Staphylococcus aureus
Staphylococcus aureus adalah bakteri berbentuk bulat (kokus) dengan
diameter 0,7-0,9 µm yang terdapat dalam bentuk tunggal, berpasangan, tetrad,
atau berkelompok seperti buah anggur. Nama bakteri ini berasal dari bahasa
latin “staphele” yang berarti anggur. Staphylococcus aureus merupakan bakteri
gram positif, tumbuh secara anaerobik fakultatif, tumbuh dengan cepat pada
temperatur 37ºC namun pembentukan pigmen yang terbaik yaitu pada
temperatur kamar (25-30ºC), patogen utama pada manusia, biasanya
membentuk koloni abu-abu hingga kuning emas (Fardiaz, 1992; Jawetz, et al.,
2001).
2.4.5 Klebsiella pneumoniae
Berikut sistematika Klebsiella pneumoniae (Dwidjoseputro, 1994):
Divisi : Protophyta
Kelas : Schizomycetes
Bangsa : Enterobacteriales
Suku : Enterobacteriaceae

Marga : Klebsiella
Jenis : Klebsiella pneumoniae
Klebsiella pneumoniae merupakan salah satu jenis bakteri dari famili
enterobacteriaceae. Dengan ciri-ciri: basil, bergerak dengan flagel yang peritrik
atau tidak bergerak, gram negatif, memiliki kapsul polisakarida yang besar dan
memfermentasikan laktosa dengan menghasilkan gas. Klebsiella pneumoniae
berada dalam sistem pernafasan sehingga bakteri ini dapat menyebabkan
infeksi saluran pernafasan. Nama bakteri ini Klebsiella pneumoniae karena
dapat menyebabkan penyakit pneumonia. Klebsiella pneumoniae dapat dikultur
pada media lempeng agar darah dan media differensial seperti MacConkey
agar. Pada media lempeng agar darah, bakteri Klebsiella pneumoniae tidak
bersifat menghemolisis, sedangkan pada media MacConkey agar membentuk
koloni berwarna merah (Dwidjoseputro, 1994; Jawetz, et al., 2001; Tim
Mikrobiologi FK Unibraw, 2003; Yolanda, 2011).
2.5 Media Biakan Mikroba
Berdasarkan sifat keheterotrofan mikroba, media dapat digolongkan
menjadi beberapa kelompok besar, yaitu:
I. Media hidup
Media hidup pada umumnya dipakai dalam laboratorium virologi untuk
pembiakan berbagai virus, sedangkan dalam laboratorium bakteriologi
hanya beberapa kuman tertentu saja, dan terutama pada hewan
percobaan. Contoh media hidup adalah hewan percobaan, manusia, telur
berembrio dan biakan jaringan.

II. Media mati
Media mati disebut juga sebagai media sintetis. Media sintetis
merupakan media yang memiliki kandungan dan isi bahan yang telah
diketahui secara terperinci.
Berdasarkan konsistensinya, media mati terbagi menjadi beberapa
kelompok yakni:
a) Media padat
Media padat diperoleh dengan cara menambahkan agar-agar. Agar
berasal dari ganggang/ alga yang berfungsi sebagai bahan pemadat.
Media padat biasanya digunakan untuk mengamati penampilan
atau morfologi koloni dan untuk mengisolasi biakan murni.
b) Media setengah padat (semi solid medium)
Media setengah padat dibuat dengan bahan yang sama seperti
media padat, akan tetapi yang berbeda adalah komposisi agarnya.
Media ini digunakan untuk melihat gerak kuman secara
mikroskopik dan kemampuan fermentasi.
c) Media cair
Secara umum media cair adalah media berbentuk cair yang dapat
digunakan untuk berbagai tujuan seperti pembiakan mikroba dalam
jumlah besar, pengamatan fermentasi, dan berbagai macam uji.
Berdasarkan susunan kimianya, media mati dapat digolongkan
menjadi beberapa kelompok yakni:

a) Media non sintetik
Media non sintetik merupakan media yang susunan kimianya tidak
dapat ditentukan dengan pasti. Media ini banyak digunakan untuk
menumbuhkan dan mempelajari taksonomi mikroorganisme.
Misalnya kaldu nutrien, serum, plasma dan lain-lain.
b) Media sintetik
Media sintetik merupakan media yang susunan kimianya dapat
diketahui dengan pasti. Media ini biasanya digunakan untuk
mempelajari kebutuhan makanan mikroorganisme. Contohnya
cairan Hanks, Locke, Thyrode, Eagle.
c) Media semi sintetik
Media semi sintetik merupakan campuran media sintetik dengan
media non sintetik. Misalnya cairan Hanks yang ditambah serum.
Berdasarkan fungsinya, media mati dapat dibagi menjadi beberapa
kelompok yaitu:
a) Media selektif
Media ini ditambah zat kimia tertentu yang bersifat selektif untuk
mencegah pertumbuhan mikroba lainnya.
b) Media differensial
Media ini mengandung zat-zat kimia tertentu yang memungkinkan
membedakan berbagai macam tipe mikroba.

c) Media eksklusif
Merupakan media yang hanya memungkinkan tumbuhnya satu
jenis mikroba tertentu, sedangkan mikroba lainnya dihambat atau
dimatikan.
d) Media penguji
Merupakan media dengan susunan kimia tertentu yang digunakan
untuk pengujian vitamin, asam amino, antibiotika dan sebagainya.
e) Media diperkaya
Media ditambah zat-zat tertentu untuk menumbuhkan
mikroorganisme heterotrof tertentu. Zat-zat tertentu yang
ditambahkan seperti serum, darah, ekstrak tumbuh-tumbuhan.
f) Media khusus
Media ini untuk menentukan tipe pertumbuhan mikroorganisme
dan kemampuannya untuk mengadakan perubahan-perubahan
kimia tertentu.
g) Media persemaian
Media ini yang sangat kaya akan zat makanan dan mempunyai
susunan bahan sedemikian rupa sehingga hanya menyuburkan satu
jenis mikroba yang dicari saja.
h) Media serbaguna
Media ini merupakan media yang paling umum digunakan dalam
mikrobiologi (dapat menunjang pertumbuhan sebagian besar
mikroba) (Waluyo, 2010).

2.6 Pengujian Aktivitas Antimikroba
Komponen antimikroba dihasilkan oleh tumbuhan dan aktif terhadap
mikroorganisme yang bersifat patogenik terhadap tumbuhan maupun manusia
(Das, et al., 2011). Beberapa bahan antimikrobial tidak bersifat membunuh,
tetapi hanya menghambat pertumbuhan mikroorganisme. Bahan antimikrobial
bersifat menghambat apabila digunakan dalam konsentrasi kecil, namun bila
digunakan dalam konsentrasi tinggi dapat mematikan mikroorganisme.
Berdasarkan ini, perlu diketahui Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) yaitu
konsentrasi terendah bahan antimikrobial yang menghambat pertumbuhan dan
Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) bahan antimikrobial terhadap
mikroorganisme. KHM didefinisikan sebagai konsentrasi terendah bahan
antimikrobial yang menghambat pertumbuhan, sedangkan KBM adalah
konsentrasi terendah bahan antimikrobial yang mematikan (Lay, 1994).
Ada beberapa metode yang digunakan untuk uji aktivitas antimikroba,
antara lain:
a. Metode dilusi
Metode ini digunakan untuk menentukan KHM dan KBM dari zat
antimikroba. Metode dilusi dibedakan menjadi dua yaitu dilusi cair (broth
dilution) dan dilusi padat (solid dilution). Untuk metode dilusi cair yaitu
menggunakan satu seri tabung reaksi yang diisi dengan media cair dan
sejumlah tertentu mikroba yang diuji. Kemudian masing-masing tabung
diuji dengan zat antimikroba yang telah diencerkan secara serial. Seri
tabung diinkubasi pada suhu ± 36oC selama 18-24 jam dan diamati

terjadinya kekeruhan pada tabung. Selanjutnya biakan dari semua tabung
yang jernih diinokulasikan pada media agar padat, diinkubasikan pada suhu
± 36oC selama 18-24 jam. Lalu diamati ada tidaknya koloni bakteri yang
tumbuh (Pratiwi, 2008).
b. Metode difusi
Metode ini merupakan metode yang umum digunakan di laboratorium
dimana didapat kepekaan suatu organisme terhadap senyawa atau obat. Zat
yang akan diuji berdifusi dari pencadang (reservoir) kedalam medium agar
yang telah diinokulasikan dengan bakteri uji. Diinkubasi selama waktu
tertentu dan amati adanya hambatan pertumbuhan bakteri uji. Prinsip
penetapannya yaitu mengukur luas diameter daerah hambatan pertumbuhan
bakteri.
Sebagai cadangan larutan uji dapat digunakan:
a) Silinder gelas atau logam
Silinder yang dipakai terbuat dari gelas atau logam tahan karat
dengan diameter 6-8 milimeter. Keuntungannya jumlah larutan uji
dalam silinder dapat diperbanyak untuk menjamin ketersediaan
larutan uji dalam cadangan selama waktu inkubasi. Kerugiannya
adalah sukar mengatur kedalaman silinder secara manual, sehingga
difusi yang terjadi ada kemungkinan tidak homogen yang ditujukan
oleh diameter hambatan yang tidak berupa lingkaran.

b) Cakram kertas (Paper Disc)
Dengan menggunakan cakram kertas ini, jumlah larutan uji yang
diserap dapat diatur homogen sesuai dengan kapasitas dan daya
serap kertas yang tergantung pada diameter dan ketebalan cakram.
c) Cetak lubang
Dilakukan dengan cara melobangi medium agar dengan alat
penghisap agar atau pelobang gabus. Keuntungannya yaitu jumlah
larutan yang berdifusi dapat terukur jumlahnya dan medium yang
digunakan tidak terlalu tebal, namun bila mencetak lubang kurang
sempurna akan mempengaruhi difusi zat uji (Masripah, 2009).
c. Metode turbidimetri
Metode turbidimetri dilakukan berdasarkan hambatan pertumbuhan
mikroba dalam media cair yang mengandung zat antimikroba. Hambatan
pertumbuhan mikroba ditentukan dengan mengukur serapannya dengan
menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang 530 nm (Ditjen
POM, 1995).

BAB III
METODE PENELITIAN
Metode penelitian yang digunakan adalah metode eksperimental. Tahap
penelitian meliputi pengambilan bahan tumbuhan, identifikasi bahan
tumbuhan, pembuatan simplisia, karakterisasi simplisia, skrining fitokimia,
pembuatan ekstrak dan fraksi-fraksi, selanjutnya dilakukan uji aktivitas
antibakteri menggunakan metode difusi agar dengan cara sumuran. Parameter
yang diamati yaitu besarnya diameter daya hambat pertumbuhan bakteri.
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Farmakognosi dan Mikrobiologi
Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara Medan.
3.1 Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah alat-alat gelas
laboratorium, autoklaf (Fisons), blender (Miyako), bola karet, desikator, freeze
dryer (Modulio), hot plate (Fisons), inkubator (Fiber Scientific), jangka sorong,
jarum ose, kamera digital (Samsung), krus porselin, laminar air flow cabinet
(Astec HLF 1200L), lemari pendingin (Glacio), lumpang dan alu, mikroskop
(Olympus), neraca listrik (Mettler Tolledo), oven (Memmert), penangas air
(Yenaco), pinset, pipet mikro (Eppendorf), rotary evaporator (Haake D),
seperangkat alat penetapan kadar air, spektrofotometer visibel (Dynamica) dan
tanur (Nabertherm).

3.2 Bahan
Bahan yang digunakan adalah bunga belimbing wuluh (Averrhoa
bilimbi L.), nutrien agar (NA), nutrient broth (NB), mueller hinton agar
(MHA), bakteri Staphylococcus aureus (ATCC 29737) dan Klebsiella
pneumoniae (ATCC 10031), air suling. Bahan kimia yang digunakan
berkualitas pro analisis, kecuali dinyatakan lain yaitu dimetilsulfoksida
(DMSO), alfa naftol, amil alkohol, asam klorida pekat, asam asetat anhidrida,
asam nitrat, asam sulfat pekat, besi (III) klorida, bismuth (III) nitrat, etanol,
etilasetat, n-heksana, benzen, eter, iodium, isopropanol, kalium iodida,
kloralhidrat, kloroform, metanol, natrium hidroksida, natrium klorida, natrium
sulfat anhidrida, raksa (II) klorida, serbuk magnesium, serbuk zinkum, timbal
(II) asetat, dan toluena.
3.3 Penyiapan Bahan
Penyiapan bahan tumbuhan meliputi pengambilan bahan tumbuhan,
identifikasi bahan tumbuhan dan pembuatan simplisia bunga belimbing wuluh
(Averrhoa bilimbi L.).
3.3.1 Pengambilan bahan tumbuhan
Pengambilan bahan tumbuhan dilakukan secara purposif yaitu tanpa
membandingkan dengan tumbuhan yang sama dari daerah lain. Bahan
tumbuhan yang digunakan adalah untaian bunga segar belimbing wuluh
(Averrhoa bilimbi L.) yang diperoleh dari Desa Subur, Kecamatan Air Joman,
Kabupaten Asahan, Provinsi Sumatera Utara.

3.3.2 Identifikasi bahan tumbuhan
Identifikasi bahan tumbuhan dilakukan di “Herbarium Bogoriense”,
Bidang Botani Pusat Penelitian dan Pengembangan Biologi-LIPI, Cibinong
Bogor. Hasil identifikasi dapat dilihat pada Lampiran 1, Halaman 52.
3.3.3 Pembuatan simplisia
Pembuatan simplisia dilakukan dengan cara bunga belimbing wuluh
(Averrhoa bilimbi L.) segar yang telah dikumpulkan, dibersihkan dari pengotor
yang melekat, lalu dicuci dengan air sampai bersih dan ditiriskan. Bahan
tumbuhan dikeringkan dengan cara diangin-anginkan terlebih dahulu kemudian
dikeringkan di dalam lemari pengering sampai simplisia rapuh ketika diremas.
Selanjutnya diblender menjadi serbuk dan disimpan dalam wadah plastik yang
tertutup rapat. Bagan penelitian dapat dilihat pada Lampiran 6, Halaman 57.
3.4 Pembuatan Pereaksi
3.4.1 Pereaksi Mayer
Larutan raksa (II) klorida P 2,266% b/v sebanyak 60 ml dicampur
dengan 10 ml larutan kalium iodida P 50% b/v, kemudian ditambahkan air
secukupnya hingga 100 ml (Depkes, 1995).
3.4.2 Pereaksi Dragendorff
Larutan bismuth (III) nitrat P 40% b/v dalam asam nitrat P sebanyak
20 ml dicampur dengan 50 ml kalium iodida P 54,4% b/v, didiamkan sampai
memisah sempurna. Lalu diambil lapisan jernihnya dan diencerkan dengan air
secukupnya hingga 100 ml (Depkes, 1995).

3.4.3 Pereaksi Bouchardat
Sebanyak 4 g kalium iodida P dilarutkan dalam air suling secukupnya
kemudian ditambahkan 2 g iodida P sedikit demi sedikit, cukupkan dengan air
suling sampai 100 ml (Depkes, 1995).
3.4.4 Pereaksi Molish
Sebanyak 3 g α-naftol P dilarutkan dalam asam nitrat 0,5 N hingga
diperoleh larutan 100 ml (Depkes, 1995).
3.4.5 Pereaksi Liebermann-Burchard
Campurkan 5 ml asam sulfat pekat dengan 50 ml etanol. Tambahkan
hati-hati 5 ml asam asetat anhidrida ke dalam campuran tersebut (Depkes,
1995).
3.4.6 Pereaksi besi (III) klorida 1% b/v
Sebanyak 1 g besi (III) klorida dilarutkan dalam air suling sampai
100 ml (Depkes, 1980).
3.4.7 Pereaksi timbal (II) asetat 0,4 M
Sebanyak 15,17 g timbal (II) asetat P dilarutkan dalam air suling bebas
CO2 hingga 100 ml (Depkes, 1980).
3.4.8 Pereaksi asam klorida 2 N
Sebanyak 17 ml asam klorida pekat diencerkan dengan air suling
sampai 100 ml (Ditjen POM, 1979).
3.4.9 Pereaksi natrium hidroksida 2 N
Sebanyak 8,001 g natrium hidroksida ditimbang, kemudian dilarutkan
dalam air suling hingga 100 ml (Depkes, 1980).

3.4.10 Larutan asam sulfat 2 N
Larutan asam sulfat pekat sebanyak 9,8 ml ditambahan air suling
sampai 100 ml (Ditjen POM, 1979).
3.4.11 Larutan kloralhidrat
Sebanyak 50 g kristal kloralhidrat ditimbang lalu dilarutkan dalam
20 ml air suling (Depkes, 1979).
3.5 Pemeriksaan Karakteristik Simplisia
Pemeriksaan karakteristik simplisia meliputi pemeriksaan makroskopik,
mikroskopik, penetapan kadar air, penetapan kadar sari yang larut dalam air,
penetapan kadar sari yang larut dalam etanol, penetapan kadar abu total dan
penetapan kadar abu yang tidak larut dalam asam.
3.5.1 Pemeriksaan makroskopik
Pemeriksan makroskopik dilakukan dengan mengamati bentuk, ukuran,
bau, rasa, dan warna dari bunga belimbing wuluh.
3.5.2 Pemeriksaan mikroskopik
Pemeriksaan mikroskopik dilakukan terhadap serbuk simplisia bunga
belimbing wuluh. Serbuk simplisia ditaburkan diatas kaca objek yang telah
ditetesi dengan kloralhidrat dan ditutup dengan kaca penutup, kemudian dilihat
dibawah mikroskop. Gambar mikroskopik dapat dilihat pada Lampiran 5,
Halaman 56.
3.5.3 Penetapan kadar air
Penetapan kadar air dilakukan dengan metode Azeotropi (destilasi
toluena). Sebanyak 200 ml toluen dan 2 ml air suling dimasukkan ke dalam

labu alas bulat, dipasang alat penampung dan pendingin, kemudian didestilasi
selama 2 jam. Destilasi dihentikan dan dibiarkan dingin selama 30 menit,
kemudian volume air dalam tabung penerima dibaca dengan ketelitian 0,05 ml.
Kemudian ke dalam labu yang berisi toluen jenuh tersebut dimasukkan 5 g
serbuk simplisia yang telah ditimbang seksama, dipanaskan hati-hati selama
15 menit. Setelah toluen mendidih, kecepatan tetesan diatur lebih kurang
2 tetes tiap detik, hingga sebagian air tersuling, kemudian naikkan kecepatan
penyulingan hingga 4 tetes tiap detik. Setelah semua air tersuling, bagian
dalam pendingin dibilas dengan toluen. Penyulingan dilanjutkan selama
5 menit, kemudian tabung penerima dibiarkan mendingin sampai suhu kamar.
Setelah air dan toluen memisah sempurna, volume dibaca dengan ketelitian
0,05 ml. Selisih kedua volume air dibaca sesuai dengan kandungan air yang
terdapat dalam bahan yang diperiksa (WHO, 1998).
3.5.4 Penetapan kadar sari yang larut dalam air
Sebanyak 5 g serbuk simplisia, dimaserasi selama 24 jam dalam 100 ml
air-kloroform (2,5 ml kloroform dalam air suling sampai 1 liter) dalam labu
bersumbat sambil dikocok sesekali selama 6 jam pertama, kemudian dibiarkan
selama 18 jam, lalu disaring. Sejumlah 20 ml filtrat pertama diuapkan sampai
kering dalam cawan penguap yang berdasar rata yang telah ditara dan sisa
dipanaskan pada suhu 105oC sampai diperoleh bobot tetap. Kadar sari yang
larut dalam air dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes, 1995).

3.5.5 Penetapan kadar sari yang larut dalam etanol
Sebanyak 5 g serbuk simplisia, dimaserasi selama 24 jam dalam 100 ml
etanol 96% dalam labu bersumbat sambil dikocok sesekali selama 6 jam
pertama, kemudian dibiarkan selama 18 jam. Kemudian disaring cepat untuk
menghindari penguapan etanol. Sejumlah 20 ml filtrat diuapkan sampai kering
dalam cawan penguap yang berdasar rata yang telah dipanaskan dan ditara.
Sisa dipanaskan pada suhu 105oC sampai diperoleh bobot tetap. Kadar sari
yang larut dalam etanol 96% dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan
(Depkes, 1995).
3.5.6 Penetapan kadar abu total
Sebanyak 2 g serbuk yang telah digerus dan ditimbang seksama
dimasukkan dalam krus porselin yang telah dipijar dan ditara, kemudian
diratakan. Krus dipijar perlahan-lahan sampai arang habis, pijaran dilakukan
pada suhu 600oC selama 3 jam kemudian didinginkan dan ditimbang sampai
diperoleh bobot tetap. Kadar abu dihitung terhadap bahan yang telah
dikeringkan (Depkes, 1995).
3.5.7 Penetapan kadar abu tidak larut dalam asam
Abu yang diperoleh dalam penetapan kadar abu dididihkan dalam 25 ml
asam klorida encer selama 5 menit, bagian yang tidak larut dalam asam
dikumpulkan, disaring melalui kertas saring, dipijarkan, kemudian didinginkan
dan ditimbang sampai bobot tetap. Kadar abu yang tidak larut dalam asam
dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes, 1995).

3.6 Skrining Fitokimia
3.6.1 Pemeriksaan alkaloida
Serbuk simplisia ditimbang 0,5 g kemudian ditambahkan 1 ml asam
klorida 2 N dan 9 ml air suling, dipanaskan diatas penangas air selama 2 menit,
didinginkan dan disaring. Filtrat yang diperoleh dipakai untuk uji alkaloida
sebagai berikut:
a. Filtrat 3 tetes ditambah 2 tetes larutan pereaksi Mayer, maka akan
terbentuk endapan menggumpal berwarna putih atau putih kekuningan.
b. Filtrat 3 tetes ditambah 2 tetes larutan pereaksi Bouchardat, maka akan
terbentuk endapan berwarna coklat.
c. Filtrat 3 tetes ditambah 2 tetes larutan pereaksi Dragendorff, maka akan
terbentuk endapan warna merah atau jingga.
Alkaloida positif jika endapan atau kekeruhan paling sedikit dua dari
tiga percobaan diatas (Depkes, 1995).
3.6.2 Pemeriksaan flavonoida
Sebanyak 10 g serbuk simplisia ditambahkan 10 ml air panas,
dididihkan selama 5 menit dan disaring dalam keadaan panas, ke dalam 5 ml
filtrat ditambahkan 0,1 g serbuk magnesium dan 1 ml asam klorida pekat dan
2 ml amil alkohol, dikocok dan dibiarkan memisah. Flavonoida positif jika
terjadi warna merah atau kuning atau jingga pada lapisan amil alkohol
(Farnsworth, 1966).

3.6.3 Pemeriksaan glikosida
Sebanyak 3 g serbuk simplisia ditimbang, lalu disari dengan 30 ml
campuran dari 7 bagian etanol 95% dan 3 bagian air suling. Kemudian
ditambahkan 10 ml HCl 2 N dan direfluks selama 10 menit, didinginkan, lalu
disaring. Diambil 20 ml filtrat, ditambahkan 25 ml air suling dan 25 ml timbal
(II) asetat 0,4 M, dikocok, didiamkan 5 menit lalu disaring. Filtrat disari
dengan 20 ml campuran 2 bagian isopropanol dan 3 bagian kloroform,
perlakuan ini diulangi sebanyak 3 kali. Sari air dikumpulkan dan ditambahkan
Na2SO4 anhidrat, disaring kemudian diuapkan pada temperatur tidak lebih dari
50oC, sisanya dilarutkan dalam 2 ml metanol. Larutan sisa digunakan untuk
percobaan berikut: sepersepuluh ml larutan percobaan dimasukkan dalam
tabung reaksi, kemudian diuapkan di atas penangas air. Pada sisa ditambahkan
2 ml air dan 5 tetes larutan pereaksi Molish, lalu ditambahkan dengan hati-hati
2 ml asam sulfat pekat, terbentuk cincin ungu pada batas kedua cairan,
menunjukkan adanya ikatan gula (glikon) (Depkes, 1995).
3.6.4 Pemeriksaan glikosida antrakinon
Sebanyak 0,2 g serbuk simplisia ditimbang, kemudian ditambahkan
5 ml asam sulfat 2 N, dipanaskan sebentar, setelah dingin ditambahkan 10 ml
benzena, dikocok dan didiamkan. Lapisan benzena dipisahkan dan disaring,
kocok lapisan benzena dengan 2 ml NaOH 2 N, didiamkan. Lapisan air
berwarna merah dan lapisan benzena tidak berwarna menunjukan adanya
antrakinon (Depkes, 1995).

3.6.5 Pemeriksaan tanin
Sebanyak 0,5 g serbuk simplisia disari dengan 10 ml air suling lalu
disaring, filtratnya diencerkan dengan air sampai tidak berwarna. Larutan
diambil sebanyak 2 ml dan ditambahkan 1-2 tetes pereaksi besi (III) klorida
1 %. Jika terjadi warna biru atau kehitaman menunjukkan adanya tanin
(Depkes, 1989).
3.6.6 Pemeriksaan saponin
Sebanyak 0,5 g serbuk simplisia dimasukan ke dalam tabung reaksi,
lalu ditambahkan 10 ml air panas, dinginkan kemudian dikocok kuat-kuat
selama 10 detik. Jika terbentuk busa setinggi 1-10 cm yang stabil tidak kurang
dari 10 menit dan tidak hilang dengan penambahan 1 tetes asam klorida 2 N
menunjukan adanya saponin (Depkes, 1995).
3.6.7 Pemeriksaan steroid/triterpenoid
Sebanyak 1 g serbuk simplisia dimaserasi dengan 20 ml eter selama
2 jam, lalu disaring. Filtrat diuapkan dalam cawan penguap. Pada sisa
ditambahkan 20 tetes asam asetat anhidrida dan 1 tetes asam sulfat pekat
(pereaksi Liebermann-Burchard), diteteskan pada saat akan mereaksikan
sampel uji. Timbulnya warna biru atau biru hijau menunjukan adanya steroid,
sedangkan warna merah, merah muda atau ungu menunjukkan adanya
triterpenoid (Harborne, 1987).
3.7 Pembuatan Ekstrak Etanol Bunga Belimbing Wuluh
Pembuatan ekstrak dilakukan secara perkolasi. Sebanyak 200 g serbuk
simplisia dimasukkan kedalam wadah kaca yang bertutup, cairan penyari

dituangi sampai semua simplisia terendam, biarkan sekurang-kurangnya
selama 3 jam. Pindahkan massa sedikit demi sedikit ke dalam perkolator
sambil tiap kali di tekan hati-hati, tuangi cairan penyari secukupnya sampai
cairan mulai menetes dan di atas simplisia masih terdapat selapis cairan
penyari, perkolator ditutup dan dibiarkan selama 24 jam. Cairan dibiarkan
menetes dengan kecepatan 1 ml tiap menit, cairan penyari ditambahkan
berulang-ulang secukupnya hingga selalu terdapat selapis cairan penyari diatas
simplisia. Perkolasi dihentikan hingga 500 mg perkolat yang keluar terakhir
diuapkan tidak meninggalkan sisa. Perkolat yang diperoleh dipekatkan dengan
alat penguap rotary evaporator. Kemudian dikeringkan dengan freeze dryer
(Depkes, 1986).
3.7.1 Pembuatan fraksi-fraksi dari ekstrak etanol
Pembuatan fraksi-fraksi dilakukan secara ekstraksi cair-cair (ECC)
menggunakan pelarut n-heksana dan etilasetat. Sebanyak 5 g ekstrak etanol
ditambahkan etanol dan 10 ml air suling, lalu dimasukkan kedalam corong
pisah, kemudian ditambahkan 40 ml n-heksana, dikocok, didiamkan sampai
terdapat 2 lapisan yang terpisah, lapisan n-heksana (lapisan atas) diambil
dengan cara dekantasi, dan fraksinasi dilakukan sampai warna lapisan
n-heksana jernih, kemudian ditambahkan 50 ml etilasetat pada lapisan air,
dikocok, didiamkan sampai terdapat 2 lapisan yang terpisah, lapisan etilasetat
(lapisan atas) diambil dengan cara dekantasi, dan fraksinasi dilakukan sampai
warna lapisan etilasetat jernih, dan fraksi air (fraksi sisa) diambil dan semua

fraksi yang diperoleh diuapkan sampai diperoleh ekstrak kental. Masing-
masing fraksi yang diperoleh dilakukan uji aktivitas antibakteri.
3.8 Sterilisasi Alat
Alat-alat yang digunakan dalam uji aktivitas antibakteri ini, disterilkan
terlebih dahulu sebelum dipakai. Alat-alat gelas disterilkan didalam oven pada
suhu 170°C selama 1 jam. Media disterilkan di autoklaf pada suhu 121°C
selama 15 menit. Jarum ose dan pinset disterilkan dengan lampu bunsen (Lay,
1994).
3.9 Pembuatan Media
3.9.1 Media nutrient agar (NA)
Komposisi: Bacto beef extract 3,0 g
Bacto peptone 5,0 g
Bacto agar 15,0 g
Cara pembuatan:
Sebanyak 23 g nutrient agar dilarutkan dalam air suling steril sebanyak
1000 ml kemudian dipanaskan hingga semua larut, dalam keadaan panas
larutan tersebut kemudian dimasukkan dalam erlenmeyer. Lalu disterilkan di
autoklaf 121ºC selama 15 menit (Difco, 1997).
3.9.2 Media nutrient broth (NB)
Komposisi: Bacto beef extract 3,0 g
Bacto peptone 5,0 g

Cara pembuatan:
Sebanyak 8 g nutrient broth dilarutkan dalam air suling steril sebanyak
1000 ml kemudian dipanaskan hingga semua larut, dalam keadaan panas
larutan tersebut kemudian dimasukkan dalam erlenmeyer. Lalu disterilkan di
autoklaf 121ºC selama 15 menit (Difco, 1997).
3.9.3 Media Mueller Hinton agar (MHA)
Komposisi: Beef infusion from 300 g
Casein hydrolysate 17,5 g
Starch 1,50 g
Bacto-Agar 17,0 g
pH = 7,4
Cara pembuatan:
Ditimbang sebanyak 38 g serbuk MHA kemudian disuspensikan dalam
Erlenmeyer dengan air suling yang ditambahkan sedikit demi sedikit hingga
1000 ml, dipanaskan hingga mendidih sambil sekali-kali diaduk sampai bahan
larut sempurna dan jernih. Tutup erlenmeyer dengan kapas yang dilapisi
dengan alumunium foil. Lalu disterilkan di autoklaf 121ºC selama 15 menit
(Difco, 1997).
3.10 Pembuatan Media Agar Miring
Ke dalam tabung reaksi yang steril dimasukkan 3 ml media nutrient
agar steril yang sudah dicairkan, didiamkan pada temperatur kamar sampai
memadat pada posisi miring membentuk sudut 30-45º. Kemudian disimpan
dalam lemari pendingin pada suhu 5ºC.

3.11 Pembuatan Stok Kultur
Biakan bakteri Staphylococcus aureus dari strain utama diambil dengan
jarum ose steril lalu diinokulasikan pada permukaan media nutrient agar
miring dengan cara menggores, kemudian diinkubasi dalam inkubator pada
suhu 35 ± 2oC selama 18-24 jam (Ditjen POM, 1995). Hal yang sama juga
dilakukan pada biakan bakteri Klebsiella pneumoniae.
3.12 Penyiapan Inokulum Bakteri
Koloni bakteri Staphylococcus aureus diambil dari stok kultur
menggunakan jarum ose steril kemudian disuspensikan ke dalam 10 ml media
nutrient broth steril lalu diinkubasikan pada suhu 35 ± 2oC sampai didapat
kekeruhan dengan transmitan 25% menggunakan alat spektrofotometer UV
panjang gelombang 580 nm (Ditjen POM, 1995). Hal yang sama juga
dilakukan untuk koloni bakteri Klebsiella pneumoniae.
3.13 Pembuatan Larutan Uji Ekstrak Etanol, Fraksi n-Heksana, Fraksi

Etilasetat dan Fraksi Sisa Bunga Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi
L.) dengan Berbagai Konsentrasi
Ekstrak etanol, fraksi n-heksana, fraksi etilasetat dan fraksi sisa,
masing-masing ditimbang sebanyak 1 g, kemudian dilarutkan dalam
dimetilsulfoksida (DMSO) cukupkan hingga 5 ml. Konsentrasi ekstrak adalah
200 mg/ml. Kemudian dibuat pengenceran sampai diperoleh ekstrak dengan
konsentrasi 100 mg/ml, 90 mg/ml, 80 mg/ml, 70 mg/ml, 60 mg/ml, 50 mg/ml,
40 mg/ml, 30 mg/ml, 20 mg/ml dan 10 mg/ml.

3.14 Pengujian Aktivitas Antibakteri Secara In Vitro
Sebanyak 0,1 ml inokulum (106 CFU/ml) dimasukkan ke dalam cawan
petri steril, setelah itu dituang media Mueller Hinton agar (MHA) yang telah
dicairkan sebanyak 20 ml dengan suhu 45-50oC dihomogenkan sampai media
dan bakteri tercampur rata, kemudian dibiarkan sampai media memadat. Pada
media yang telah padat, dibuat lubang lalu ditetesi dengan 0,1 ml larutan uji
ekstrak etanol bunga belimbing wuluh dengan berbagai konsentrasi, kemudian
diinkubasi dalam inkubator pada suhu 35 ± 2oC selama 18-24 jam. Selanjutnya
diukur diameter daerah hambat di sekitar larutan penguji dengan menggunakan
jangka sorong. Hal yang sama dilakukan terhadap larutan uji fraksi n-heksana,
fraksi etilasetat dan fraksi sisa bunga belimbing wuluh. Percobaan ini
dilakukan sebanyak tiga kali (Ditjen POM, 1995).

BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil Identifikasi Tumbuhan
Hasil identifikasi tumbuhan yang dilakukan di “Herbarium Bogoriense”
Bidang Botani Pusat Penelitian dan Pengembangan Biologi–LIPI Bogor, di
Cibinong menunjukkan bahwa bahan tumbuhan adalah bunga belimbing
wuluh, jenis Averrhoa bilimbi L., suku Oxalidaceae.
4.2 Hasil Karakterisasi Simplisia
4.2.1 Pemeriksaan makroskopik
Hasil pemeriksaan makroskopik dari untaian bunga segar belimbing
wuluh yaitu bunganya kecil muncul langsung dari batang, mahkota bunga
berjumlah 5 berwarna merah lila dengan bagian dalam mahkota yang melekat
pada bakal buah berwarna putih, benang sari berjumlah 10 dan berwarna putih,
kelopak bunga berjumlah 5 dan berwarna lebih muda dari mahkota, panjang
bunga ± 2 cm, dan tangkai bunganya berbulu halus. Dalam keadaan segar
bunga berwarna merah lila, dan setelah kering bunga menjadi warna coklat tua.
Sedangkan serbuk simplisia bunga belimbing wuluh berwarna coklat tua.
4.2.2 Pemeriksaan mikroskopik
Hasil pemeriksaan mikroskopik dari serbuk simplisia bunga belimbing
wuluh (Averrhoa bilimbi L.) memperlihatkan adanya epidermis atas daun
mahkota, parenkim dan trakea, rambut penutup dari tangkai bunga, serbuk sari
dan trakea bentuk spiral.

4.2.3 Hasil pemeriksaan karakteristik serbuk simplisia
Hasil pemeriksaan karakteristik serbuk simplisia diperoleh kadar air
sebesar 7,94%, kadar sari yang larut dalam air sebesar 11,97%, kadar sari yang
larut dalam etanol sebesar 2,39%, kadar abu total sebesar 8,24% dan kadar abu
yang tidak larut dalam asam sebesar 5,52%.
Penetapan kadar air pada simplisia dilakukan untuk mengetahui jumlah
air yang terkandung dalam simplisia yang digunakan. Kadar air simplisia
ditetapkan untuk menjaga kualitas simplisia karena kadar air berkaitan dengan
kemungkinan pertumbuhan jamur/kapang (Depkes, 1986). Pada penetapan
kadar sari dapat dilihat bahwa kadar sari yang larut dalam air lebih tinggi
daripada kadar sari yang larut dalam etanol, hal ini menunjukkan bahwa
senyawa yang terlarut dalam air lebih besar daripada senyawa yang terlarut
dalam etanol. Senyawa-senyawa yang dapat larut dalam air adalah glikosida,
tanin, saponin dan flavonoid sedangkan senyawa-senyawa yang dapat larut
dalam etanol seperti glikosida, steroid, dan flavonoid (Depkes, 1986).
Penetapan kadar abu total dilakukan untuk mengetahui unsur mineral
dan zat anorganik yang terkandung dalam simplisia, sedangkan penetapan
kadar abu tidak larut dalam asam untuk mengetahui zat anorganik yang tidak
larut dalam asam. Dari hasil karakterisasi dapat dilihat bahwa kadar abu total
dan kadar abu yang tidak larut dalam asam pada bunga belimbing wuluh cukup
tinggi, hal ini dapat terjadi karena pada tanaman belimbing wuluh mengandung
unsur mineral dan zat anorganik yang cukup banyak seperti sulfur, kalsium dan
kalium (Mario, 2011).

4.3 Hasil Ekstraksi dan Fraksinasi
Sebanyak 200 g simplisia bunga belimbing wuluh diekstraksi dengan
cara perkolasi menggunakan pelarut etanol 96%, agar diharapkan senyawa-
senyawa aktif yang terkandung di dalamnya dapat tersari sempurna. Hasilnya
diperoleh ekstrak etanol bunga belimbing wuluh 15,67 g. Kemudian dilakukan
ekstraksi cair-cair secara berturut-turut menggunakan pelarut n-heksana dan
air, dari 10 g ekstrak diperoleh fraksi n-heksana 3,28 g, selanjutnya fraksi air di
fraksinasi dengan etilasetat sehingga diperoleh fraksi etilasetat 2,32 g dan
fraksi air 2,14 g.
4.4 Hasil Skrining Fitokimia
Hasil skrining fitokimia terhadap simplisia bunga belimbing wuluh
(Averrhoa bilimbi L.) dan ekstrak etanol, fraksi n-heksana, fraksi etilasetat dan
fraksi air dapat dilihat pada Tabel 4.1 sebagai berikut.
Tabel 4.1 Hasil skrining fitokimia simplisia, ekstrak etanol, fraksi n-heksana,
fraksi etilasetat dan fraksi air bunga belimbing wuluh
No. Skrining Serbuk Ekstrak Fraksi n- Fraksi Fraksi

Simplisia Etanol Heksana Etilasetat Air
1 Alkaloid - - - - -
2 Flavonoid + + - + +
3 Glikosida + + - + +
4 Glikosida - - - - -
antrakinon
5 Saponin - - - - -
6 Tanin + + - + -
7 Steroid/ + + + - -
Triterpenoid
Keterangan:
(+) positif : mengandung golongan senyawa
(-) negatif : tidak mengandung golongan senyawa

Pada serbuk simplisia bunga belimbing wuluh yang ditambahkan
serbuk Mg, asam klorida pekat dan amil alkohol, kemudian dibiarkan memisah
memberikan warna jingga kemerahan, menunjukkan adanya senyawa
flavonoid. Penambahan pereaksi Molish dan asam sulfat pekat akan terbentuk
cincin berwarna ungu pada batas cairan yang menunjukkan adanya glikosida.
Penambahan FeCl3 1% memberikan warna hijau kebiruan yang menunjukkan
adanya senyawa tanin. Penambahan pereaksi Liebermann-Burchard
memberikan warna merah ungu menunjukkan adanya steroid/triterpenoid.
4.5 Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol, Fraksi n-Heksana, Fraksi

Etilasetat dan Fraksi Air Bunga Belimbing Wuluh terhadap Bakteri
Staphylococcus aureus dan Klebsiella pneumoniae
Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol, fraksi n-heksana, fraksi
etilasetat dan fraksi air bunga belimbing wuluh dapat menghambat
pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dan Klebsiella pneumoniae.
Aktivitas suatu zat antibakteri dalam menghambat pertumbuhan atau
membunuh mikroorganisme tergantung pada konsentrasi dan jenis bahan
antimikroba tersebut (Tim Mikrobiologi FK Unibraw, 2003). Semakin tinggi
konsentrasi ekstrak maka semakin besar diameter daerah hambat, karena
semakin banyak zat aktif yang terkandung dalam ekstrak tersebut
(Dwijoseputro, 1994).
Hasil pengukuran diameter daerah hambat ekstrak etanol, fraksi n-
heksana, fraksi etilasetat dan fraksi air bunga belimbing wuluh terhadap bakteri
Staphylococcus aureus dan Klebsiella pneumoniae dapat dilihat pada Tabel 4.2
dan 4.3 berikut ini.

Tabel 4.2 Hasil pengukuran diameter daerah hambatan pertumbuhan bakteri
staphylococcus aureus
Konsentrasi Diameter Daerah Hambatan (mm)*

No. (mg/ml) Ekstrak Fraksi n- Fraksi Fraksi
Etanol heksana Etilasetat Air
1 200 15,82 10,72 15,5 11,81
2 100 12,32 9,84 13,07 11,25
3 90 11,71 9,46 12,58 10,34
4 80 11,21 9,04 12,16 -
5 70 10,63 9,02 11,48 -
6 60 10,31 8,79 11,13 -
7 50 9,81 8,61 10,81 -
8 40 9,62 8,58 10,71 -
9 30 9,41 8,3 10,46 -
10 20 9,22 - 10,17 -
11 10 - - - -
12 Blanko - - - -
Tabel 4.3 Hasil pengukuran diameter daerah hambatan pertumbuhan bakteri

Konsentrasi Diameter Daerah Hambatan (mm)*

No. (mg/ml) Ekstrak Fraksi n- Fraksi Fraksi
Etanol heksana Etilasetat Air
1 200 14,73 10,34 14,5 10,81
2 100 12,04 9,78 13,66 9,4
3 90 11,62 9,73 13,28 9,0
4 80 11,09 9,62 12,75 -
5 70 10,81 9,58 11,68 -
6 60 10,54 9,50 11,27 -
7 50 10,21 9,42 10,77 -
8 40 9,63 9,21 10,29 -
9 30 9,2 8,7 9,84 -
10 20 8,72 - 9,72 -
11 10 - - - -
12 Blanko - - - -
Keterangan:
(*) = Hasil rata-rata tiga kali pengukuran
(-) = Tidak ada hambatan
Blanko = DMSO
Berdasarkan Farmakope Indonesia (1995) batas daerah hambatan yang
efektif adalah dengan diameter lebih kurang dari 14 mm sampai 16 mm. Pada

Tabel 4.2 dan 4.3 di atas memperlihatkan bahwa ekstrak etanol memberikan
diameter daerah hambat yang efektif terhadap bakteri gram positif
Staphylococcus aureus yang diperoleh pada konsentrasi 200 mg/ml dengan
diameter 15,82 mm dan KHM pada konsentrasi 20 mg/ml (9,22 mm)
sedangkan pada bakteri gram negatif Klebsiella pneumoniae diameter daerah
hambat yang efektif pada konsentrasi 200 mg/ml dengan diameter 14,73 mm
dan KHM pada konsentrasi 20 mg/ml (8,72 mm). Fraksi n-heksana
memberikan hasil diameter daerah hambat pertumbuhan yang kurang efektif
terhadap bakteri gram positif Staphylococcus aureus yang diperoleh pada
konsentrasi 200 mg/ml dengan diameter 10,72 mm dan KHM pada konsentrasi
30 mg/ml (8,3 mm) sedangkan pada bakteri gram negatif Klebsiella
pneumoniae diperoleh pada konsentrasi 200 mg/ml dengan diameter
10,34 mm dan KHM pada konsentrasi 30 mg/ml (8,7 mm). Pada fraksi
etilasetat juga memberikan diameter daerah hambat yang efektif terhadap
bakteri gram positif Staphylococcus aureus yang diperoleh pada konsentrasi
200 mg/ml dengan diameter 15,5 mm dan KHM pada konsentrasi 20 mg/ml
(10,17 mm) sedangkan pada bakteri gram negatif Klebsiella pneumoniae
diameter daerah hambat yang efektif diperoleh pada konsentrasi 200 mg/ml
dengan diameter 14,5 mm dan KHM pada konsentrasi 20 mg/ml (9,72 mm).
Pada fraksi air juga memberikan hasil diameter daerah hambat yang kurang
efektif terhadap bakteri gram positif Staphylococcus aureus yang diperoleh
pada konsentrasi 200 mg/ml dengan diameter 11,81 mm dan KHM pada
konsentrasi 90 mg/ml (10,34 mm) sedangkan pada bakteri gram negatif

Klebsiella pneumoniae diperoleh pada konsentrasi 200 mg/ml dengan diameter
10,81 mm dan KHM pada konsentrasi 90 mg/ml (9,0 mm).
Ekstrak etanol menunjukkan aktivitas antibakteri yang paling efektif
dibandingkan dengan fraksi n-heksana, fraksi etilasetat dan fraksi air. Hal ini
sesuai dengan hasil penelitian Lathifah (2008), yang mengatakan bahwa pelarut
yang terbaik untuk memperoleh ekstrak kasar senyawa antibakteri adalah
etanol sehingga ekstrak kasar etanol memiliki aktivitas antibakteri yang lebih
besar daripada fraksi n-heksana, fraksi etilasetat dan fraksi air. Hal ini juga
dapat terjadi karena ekstrak n-heksana, etilasetat dan air diperoleh dari hasil
fraksinasi ekstrak kasar etanol sehingga senyawa aktif lebih banyak tersari
pada ekstrak etanol. Fraksi n-heksana memiliki aktivitas antibakteri karena
mengandung senyawa kimia steroid/triterpenoid. Senyawa steroid/triterpenoid
baik dalam bentuk terikat maupun dalam bentuk bebas memiliki aktivitas
antibakteri (Robinson, 1995).
Hasil skrining fitokimia menunjukkan bahwa serbuk simplisia bunga
belimbing wuluh mengandung golongan senyawa kimia berupa flavonoid,
glikosida, tanin dan steroid/triterpenoid. Senyawa flavonoid memiliki aktivitas
antibakteri karena flavonoid merupakan golongan senyawa fenol. Senyawa
steroid/triterpenoid menghambat pertumbuhan bakteri dengan mekanisme
penghambatan terhadap sintesis protein karena terakumulasi dan menyebabkan
perubahan komponen-komponen penyusun sel bakteri itu sendiri. Senyawa
terpenoid mudah larut dalam lipid, sifat inilah yang yang mengakibatkan
senyawa ini mudah menembus dinding sel bakteri gram positif dan sel bakteri

gram negatif (Ferawaty, dkk., 2012). Sedangkan tanin termasuk dalam
golongan senyawa polifenol sehingga tanin memiliki aktivitas antibakteri.
Senyawa fenol dan turunannya seperti flavonoid dan tanin merupakan salah
satu antibakteri yang bekerja dengan mengganggu fungsi membran sitoplasma.
Pada konsentrasi rendah senyawa fenol dapat merusak membran sitoplasma
yang menyebabkan bocornya metabolit penting yang menginaktifkan sistem
enzim bakteri, sedangkan pada konsentrasi tinggi mampu merusak membran
sitoplasma dan mengendapkan protein sel (Mario, 2011).

BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
Hasil penelitian yang dilakukan terhadap bunga belimbing wuluh
(Averrhoa bilimbi L.) diperoleh kesimpulan:
a. Hasil karakterisasi simplisia diperoleh kadar air sebesar 7,94%, kadar sari
yang larut dalam air sebesar 11,97%, kadar sari yang larut dalam etanol
sebesar 2,39%, kadar abu total sebesar 8,24% dan kadar abu yang tidak larut
dalam asam sebesar 5,52%.
b. Hasil skrining fitokimia menunjukkan bahwa simplisia bunga belimbing
wuluh mengandung golongan senyawa kimia flavonoid, glikosida, tanin dan
steroid/triterpenoid; ekstrak etanol mengandung senyawa flavonoid,
glikosida, tanin dan steroid/triterpenoid; fraksi n-heksana mengandung
senyawa steroid/triterpenoid; fraksi etilasetat mengandung senyawa
flavonoid, glikosida dan tanin; fraksi air mengandung senyawa flavonoid
dan glikosida.
c. Hasil uji aktivitas antibakteri menunjukkan bahwa ekstrak etanol
memberikan daerah hambat yang efektif terhadap pertumbuhan bakteri
Staphylococcus aureus pada konsentrasi 200 mg/ml dengan diameter
15,82 mm dan Klebsiella pneumoniae pada konsentrasi 200 mg/ml dengan
diameter 14,83 mm. Fraksi n-heksana memberikan daerah hambat yang
kurang efektif terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus pada
konsentrasi 200 mg/ml dengan diameter 10,72 mm dan pada bakteri

Klebsiella pneumoniae pada konsentrasi 200 mg/ml dengan diameter
10,34 mm. Fraksi etilasetat juga memberikan daerah hambat yang efektif
terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus pada konsentrasi
200 mg/ml dengan diameter 15,5 mm dan Klebsiella pneumoniae pada
konsentrasi 200 mg/ml dengan diameter 14,5 mm. Sedangkan fraksi air
memberikan daerah hambat yang kurang efektif terhadap pertumbuhan
bakteri Staphylococcus aureus pada konsentrasi 200 mg/ml dengan diameter
11,81 mm dan pada bakteri Klebsiella pneumoniae pada konsentrasi
200 mg/ml dengan diameter 10,81 mm.
5.2 Saran
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mengisolasi senyawa
kimia yang bertanggung jawab terhadap sifat antibakteri yang dimiliki oleh
bunga belimbing wuluh.

DAFTAR PUSTAKA
Ardananurdin, A. (2004). Uji Efektifitas Dekok Bunga Belimbing Wuluh

(Averrhoa bilimbi) Sebagai Antimikroba Terhadap Bakteri Salmonella
typhi Secara In Vitro. Jurnal Kedokteran Brawijaya. 20(1): 30-34.
Dalimartha, S. (2008). Atlas Tumbuhan Obat Indonesia. Jilid V. Jakarta:
Permata Bunda. Hal. 7-9.
Das, S.C., Sultana, S., Roy, S., dan Hasan, S.S. (2011). Antibacterial and
Cytotoxic Activities of Methanolic Extracts of Leaf and Fruit Parts of
The Plant Averrhoa bilimbi (Oxalidaceae). American Journal of
Scientific and Industrial Research. 2(4): 531-536.
Depkes. (1980). Materia Medika Indonesia. Jilid IV. Cetakan Pertama. Jakarta:
Direktorat Jenderal Pengawas Obat dan Makanan. Hal. 94-98.
Depkes. (1986). Sediaan Galenik. Jakarta: Depkes RI. Hal. 6-7, 12.
Depkes. (1989). Materia Medika Indonesia. Jilid V. Jakarta: Departemen
Kesehatan RI. Hal. 194-197.
Depkes. (1995). Materia Medika Indonesia. Jilid VI. Jakarta: Departemen
Kesehatan RI. Hal. 297-307, 321, 325, 333-336.
Depkes. (2000). Inventaris Tumbuhan Obat Indonesia. Jilid I. Jakarta: Depkes
RI. Halaman 79-80.
Ditjen POM. (2000). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat.

Jakarta: Depkes. Hal. 10-11.
DIFCO. (1977). Manual of Dehydrated Culture Media and Reagents for
Microbiology and Clinical Laboratory Procedures. Ninth Edition.
Detroit Michigan: Difco Laboratories Incorporated. Hal. 32-33.
Ditjen POM. (1979). Farmakope Indonesia. Edisi III. Jakarta: Departemen
Kesehatan Republik Indonesia. Hal. 9, 649, 696.
Ditjen POM. (1995). Farmakope Indonesia. Edisi IV. Jakarta: Departemen
Kesehatan Republik Indonesia. Hal. 855, 891-892, 896-898, 1033.
Dwidjoseputro, D. (1994). Dasar-dasar Mikrobiologi. Jakarta: Djambatan.
Hal. 17, 105, 117- 119.
Fardiaz, S. (1992). Mikrobiologi Pangan 1. Jakarta: PT. Gramedia Pustaka
Utama. Hal. 15, 143-146, 163.
Farnsworth, N.R. (1966). Biological and Phytochemical Screening of Plants.
Journal of Pharmaceutical Sciences. 55(3): 264.

Ferawaty, A.S., Agus, S., dan Delianis, P. (2012). Potensi Antibakteri Ekstrak
Rumput Laut Terhadap Bakteri Penyakit Kulit Pseudomonas
aeruginosa, Staphylococcus epidermidis, dan Micrococcus luteus.
Jurnal of Marine Research. 1(2): 152-160.
Goeswin, A. (2007). Teknologi Bahan Alam. Bandung: Penerbit ITB. Hal 8.
Harborne, J.B. (1987). Metode Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisis
Tumbuhan. Penerjemah: Kosasih Padmawinata dan Iwang Soediro.
Edisi Ketiga. Bandung: ITB Press. Hal. 147.
Harris, L.G., Foster, S.J., dan Richard, R.G. (2002). An Introduction to
Staphylococcus aureus, and TecHniques for Identifying and
Quantifying S. aureus Adhesins in Relation Adhesion To Biomaterials:
Review. European Cells and Materials. 4: 39-60.
Heyne, K. (1987). Tumbuhan Berguna Indonesia. Jilid II. Cetakan Pertama.
Jakarata: Badan Litbang Kehutanan. Hal. 1072-1073.
Irianto, K. (2006). Mikrobiologi Menguak Dunia Mikroorganisme. Jilid I.
Bandung: CV. Yrama Widya. Hal. 75, 85-87.
Jawetz, E., Menick, J.L., dan Adelberg, E.A. (2001). Mikrobiologi Kedokteran.
Alih Bahasa: Eddy Mudihardi, Kuntaman, Eddy Bagus Wasito, Ni
Made Mertaniasih, Setio Harsono, dan Lindawati Alimsardjono.
Jakarta: Penerbit Salemba Medika. Hal. 317-318, 352, 360.
Lathifah, Q.A. (2008). Uji Efektifitas Ekstrak Kasar Senyawa Antibakteri pada
Buah Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi L.) dengan Variasi Pelarut.
Skripsi. Malang: Universitas Islam Negeri Malang.
Lay, B.W. (1994). Analisis Mikroba di Laboratorium. Jakarta: PT. Raja

Grafindo Persada. Hal. 67, 72.
Mario, P. (2011). Khasiat Dan Manfaat Belimbing Wuluh. Surabaya: Stomata.

Hal. 65-68, 102-103.
Masripah. (2009). Aktivitas Antibakteri dari Ekstrak Etanol Daun Belimbing

Wuluh (Averrhoa bilimbi Linn) Terhadap Kultur Aktif Staphylococcus
aureus dan Escherichia coli. Skripsi. Jakarta: Universitas Islam Negeri
Syarif Hidayatullah Jakarta.
Pelczar, M.J., dan Chan, E.C.S. (1988). Elements of Microbiology. New York:
McGraw-Hill Companies Inc. Terjemahan: Ratna Siri Hadioetomo,
Teja Imas, Sutarmi Tjitrosomo dan Sri Lestari Angka. (1988). Dasar-
Dasar Mikrobiologi. Jakarta: Penerbit UI-Press. Hal. 145.

Permadi, A. (2006). Tanaman Obat Pelancar Air Seni. Jakarta: Penebar
Swadaya. Hal. 24.
Pratiwi, S.T. (2008). Mikrobiologi Farmasi. Jakarta: Penerbit Erlangga. Hal.

22-24, 106-108, 111-115, 188-191.
Robinson, T. (1991). The Organic Constituents Of High Plant. Edisi Keempat.
New York: University of Massachusetts. Terjemahan: Kosasih
Padmawinata. (1995). Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi. Edisi ke
VI. Bandung: ITB. Hal. 152-154, 156-158, 191.
Susilo, J., Teguh, R.S., dan Sumarno. (2004). Deteksi Bakteri Klebsiella
pneumoniae Pada Sputum Dengan Metode Imunositokimia
Menggunkan Anti Outer Membrane Protein Berat Molekul 40 KDA
Klebsiella pneumoniae Sebagai Antibodi. Jurnal Kedokteran
Brawijaya. 20(1): 12-18.
Tim Mikrobiologi FK Universitas Brawijaya. (2003). Bakteriologi Medik.
Cetakan Pertama. Malang: Bayumedia Publishing. Hal. 207.
Waluyo, L. (2010). Teknik Dasar Metode Mikrobiologi. Malang: UMM Press.
Hal. 105, 130-133.
WHO. (1998). Quality Control Methods for Medicinal Plant Materials.
Switzerland: Geneva Press. Hal. 31-33.
Yolanda, H. (2011). Uji Coba Penggunaan Limbah Air Kelapa Tua Sebagai
Bahan Dasar Media Isolasi. MKB. 43(3): 117-121.
Yuniarti, T. (2008). Ensiklopedia Tanaman Obat Tradisional. Yogyakarta:
Medpress. Hal. 46.

Lampiran 1. Hasil identifikasi tumbuhan

Lampiran 2. Gambar bunga belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi L.)

Lampiran 3. Gambar simplisia bunga belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi L.)

Lampiran 4. Gambar serbuk simplisia bunga belimbing wuluh (Averrhoa
bilimbi L.)

Lampiran 5. Gambar mikroskopik serbuk simplisia bunga belimbing wuluh
(Averrhoa bilimbi L.)
Keterangan: 1. Epidermis atas daun mahkota

2. Parenkim dan trakea
3. Serbuk sari
4. Rambut penutup dari tangkai bunga
5. Trakea bentuk spiral

Lampiran 6. Bagan metode penelitian
Bunga belimbing wuluh
Dicuci dari pengotor hingga bersih

Ditiriskan
Ditimbang
Dikeringkan di lemari pengering
Simplisia
Dilakukan makroskopik
Dihaluskan
Serbuk Simplisia
Karakterisasi Simplisia Skrining Fitokimia
1. Mikroskopik 1. Pemeriksaan alkaloida

2. Penetapan kadar air 2. Pemeriksaan flavonoida
3. Penetapan kadar sari 3. Pemeriksaan glikosida
yang larut air
4. Pemeriksaan glikosida
4. Penetapan kadar sari antrakinon
yang larut etanol
5. Pemeriksaan saponin
5. Penetapan kadar abu
total 6. Pemeriksaan tanin
6. Penetapan kadar abu 7. Pemeriksaan

yang tidak larut asam steroid/triterpenoid

Lampiran 6. Lanjutan (Pembuatan ekstrak etanol dan fraksi-fraksi bunga
belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi L.)
Serbuk simplisia
200 g
Diperkolasi dengan
etanol 96%
Perkolat
Diuapkan dengan
rotary evaporator
Dikeringkan dengan
freeze dryer
Ekstrak etanol kental
Dilarutkan dengan aquadest Uji aktivitas antibakteri

Difraksinasi dengan n-heksana
Fraksi Fraksi air

n-heksana
Difraksinasi dengan etilasetat
Dipekatkan
Fraksi n-heksana
Fraksi etilasetat Fraksi air (sisa)
kental
Dipekatkan Dipekatkan
Uji aktivitas
antibakteri Fraksi etilasetat kental Fraksi air kental
Uji aktivitas Uji aktivitas

antibakteri antibakteri

Lampiran 6. Lanjutan (Pengujian aktivitas antibakteri)
Biakan Murni
Bakteri
Diambil dengan jarum ose steril
Ditanam pada media NA miring
Diinkubasi pada suhu 35 ± 2ºC selama 18-24 jam
Stok Kultur Bakteri
Diambil 1 ose
Disuspensikan kedalam 10 ml nutrient broth
Diukur kekeruhan suspensi bakteri menggunakan

spektrofotometer pada panjang gelombang 580 nm sampai
diperoleh nilai transmitan 25%
Inokulum Bakteri
Dimasukkan 0,1 ml inokulum kedalam cawan petri
Dituang 20 ml media MHA steril ke dalam cawan petri

Dihomogenkan dan dibiarkan hingga memadat
Media Padat
Dibuat lubang/sumuran
Dimasukkan 0,1 ml ekstrak/fraksi dengan berbagai konsentrasi
dan pelarut DMSO sebagai blanko
Diinkubasi pada suhu 35 ± 2ºC selama 18-24 jam
Diukur diameter daerah hambat di sekitar larutan penguji
Hasil

Lampiran 7. Tabel hasil pemeriksaan karakteristik serbuk simplisia bunga
belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi L.)
No. Penetapan Kadar

(%)
1 Kadar air 7,94
2 Kadar sari larut dalam air 11,97
3 Kadar sari larut dalam etanol 2,39
4 Kadar abu total 8,24
5 Kadar abu tidak larut dalam asam 5,52

Lampiran 8. Perhitungan penetapan kadar air simplisia bunga belimbing
wuluh
Volume air (ml)

% Kadar air = × 100%
Berat sampel (g)
1. Berat sampel : 5,012 g
Volume air : 0,4 ml
0,4 ml
% Kadar air = × 100% = 7,98%
5,012 g
Volume air : 0,4 ml
0,4 ml
% Kadar air = × 100% = 7,85%
5,098 g
Volume air : 0,4 ml
0,4 ml
% Kadar air = × 100% = 7,99%
5,003 g
7,98%+7,85%+7,99%
% Kadar air rata-rata = = 7,94%
3

Lampiran 9. Perhitungan penetapan kadar sari larut dalam air simplisia bunga
belimbing wuluh
Berat Sari (g) 100

% Kadar sari larut air = × × 100%
Berat Sampel (g) 20
Berat sari : 0,129 g
0,005 g 100
% Kadar sari larut air = × × 100% = 12,10%
5,330g 20
0,116 g 100
5,110 g 20
0,127 g 100
5,095 g 20
12,10%+11,35%+12,46%
% Kadar sari larut air rata-rata = = 11,97%
3

Lampiran 10. Perhitungan penetapan kadar sari larut dalam etanol simplisia
bunga belimbing wuluh
Berat Sari (g) 100

% Kadar sari larut etanol = × × 100%
Berat Sampel (g) 20
0,024 g 100
% Kadar sari larut etanol = × × 100% = 2,38%
5,043g 20
0,024 g 100
5,003 g 20
0,024 g 100
5,095 g 20
2,38%+2,39%+2,39%
% Kadar sari larut etanol rata-rata = = 2,39%
3

Lampiran 11. Perhitungan penetapan kadar abu total simplisia bunga
belimbing wuluh
Berat Abu (g)

% Kadar abu total = × 100%
Berat sampel (g)
Berat abu : 0,170 g
0,170 g
% Kadar abu total = × 100% = 8,43%
2,017 g
Berat abu : 0,170 g
0,170 g
% Kadar abu total = × 100% = 8,19%
2,025 g
Berat abu : 0,163 g
0,163 g
% Kadar abu total = × 100% = 8,11%
2,010 g
8,43%+8,19%+8,11%
% Kadar abu total rata-rata = = 8,24%
3

Lampiran 12. Perhitungan penetapan kadar abu tidak larut dalam asam
simplisia bunga belimbing wuluh
Berat Abu (g)

% Kadar abu tidak larut asam = × 100%
Berat sampel (g)
Berat abu : 0,111 g
0,111 g
% Kadar abu tidak larut asam = × 100% = 5,50%
2,017 g
Berat abu : 0,113 g
0,113 g
2,025 g
Berat abu : 0,110 g
0,110 g
2,010 g
5,50 %+5,58 %+5,47 %

% Kadar abu tidak larut asam rata-rata = = 5,52%
3

Lampiran 13. Hasil pengukuran diameter daerah hambatan pertumbuhan
pada ekstrak etanol bunga belimbing wuluh
Konsentrasi Diameter Daerah Hambatan (mm)

(mg/ml)
Staphylococcus aureus Klebsiella pneumoniae
D1 D2 D3 D* D1 D2 D3 D*
200 15,8 15,8 15,86 15,82 14,75 14,73 14,7 14,73
100 12,3 12,32 12,35 12,32 12,1 12,05 11,98 12,04
90 11,7 11,73 11,7 11,71 11,6 11,6 11,67 11,62
80 11,2 11,24 11,2 11,21 11,1 11,12 11,05 11,09
70 10,6 10,64 10,66 10,63 10,8 10,8 10,82 10,81
60 10,3 10,33 10,3 10,31 10,5 10,55 10,56 10,54
50 9,8 9,79 9,83 9,81 10,2 10,23 10,2 10,21
40 9,6 9,6 9,65 9,62 9,6 9,67 9,63 9,63
30 9,4 9,4 9,43 9,41 9,2 9,2 9,19 9,2
20 9,2 9,25 9,21 9,22 8,7 8,75 8,7 8,72
10 - - - - - - - -
Blanko - - - - - - - -
Keterangan:
D1 : Diameter daerah hambatan pertumbuhan bakteri pada perlakuan I
D2 : Diameter daerah hambatan pertumbuhan bakteri pada perlakuan II
D3 : Diameter daerah hambatan pertumbuhan bakteri pada perlakuan III
D* : Rata-rata diameter daerah hambatan pertumbuhan bakteri
- : Tidak terdapat daerah hambatan pertumbuhan bakteri
Blanko : DMSO

pada fraksi n-heksana bunga belimbing wuluh

(mg/ml)
D1 D2 D3 D* D1 D2 D3 D*
200 10,7 10,76 10,7 10,72 10,3 10,37 10,35 10,34
100 9,8 9,86 9,85 9,84 9,78 9,79 9,78 9,78
90 9,4 9,52 9,47 9,46 9,7 9,7 9,78 9,73
80 9,1 8,96 9,05 9,04 9,61 9,66 9,59 9,62
70 9,1 8,97 9,0 9,02 9,58 9,57 9,58 9,58
60 8,8 8,75 8,81 8,79 9,50 9,51 9,49 9,50
50 8,6 8,59 8,63 8,61 9,4 9,45 9,42 9,42
40 8,6 8,55 8,59 8,58 9,3 9,35 8,98 9,21
30 8,3 8,35 8,26 8,3 8,7 8,69 8,7 8,7
20 - - - - - - - -
10 - - - - - - - -
Blanko - - - - - - - -
Keterangan:
Blanko : DMSO

pada fraksi etilasetat bunga belimbing wuluh

(mg/ml)
D1 D2 D3 D* D1 D2 D3 D*
200 15,5 15,7 15,3 15,5 14,5 14,53 14,48 14,5
100 13 13,3 12,9 13,07 13,6 13,7 13,69 13,66
90 12,5 12,6 12,65 12,58 13,4 13,49 12,96 13,28
80 12,3 12,28 11,89 12,16 12,7 12,8 12,76 12,75
70 11,4 11,47 11,56 11,48 11,6 11,75 11,68 11,68
60 11,2 11,25 10,95 11,13 11,4 10,92 11,48 11,27
50 10,8 10,86 10,78 10,81 10,7 10,84 10,76 10,77
40 10,7 10,79 10,68 10,72 10,3 10,23 10,33 10,29
30 10,4 10,45 10,53 10,46 9,8 9,83 9,89 9,84
20 10,3 10,2 10,0 10,17 9,6 9,58 9,67 9,72
10 - - - - - - - -
Blanko - - - - - - - -
Keterangan:
Blanko : DMSO

pada fraksi air bunga belimbing wuluh

(mg/ml)
Staphylococcus aureus Klabsiella pneumoniae
D1 D2 D3 D* D1 D2 D3 D*
200 11,8 11,85 11,78 11,81 10,8 10,8 10,83 10,81
100 11,2 11,25 11,3 11,25 9,4 9,37 9,42 9,4
90 10,3 10,38 10,35 10,34 9,1 8,9 8,8 8,93
80 - - - - - - - -
70 - - - - - - - -
60 - - - - - - - -
50 - - - - - - - -
40 - - - - - - - -
30 - - - - - - - -
20 - - - - - - - -
10 - - - - - - - -
Blanko - - - - - - - -
Keterangan:
Blanko : DMSO

Lampiran 17. Gambar hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol bunga
belimbing wuluh terhadap bakteri Staphylococcus aureus
Ekstrak etanol
400 500
300
Staphylococcus
aureus
Keterangan:
Konsentrasi ekstrak dalam satuan mg/ml
Ekstrak etanol
200 100
90
Staphylococcus
aureus
Keterangan:

Lampiran 17. (Lanjutan)
Ekstrak etanol
80 70
60
Staphylococcus
aureus
Keterangan:
Ekstrak etanol
50
40
30
Staphylococcus
aureus
Keterangan:

Ekstrak etanol
20 blanko
Staphylococcus
aureus
Keterangan:
Blanko = DMSO

Lampiran 18. Gambar hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol bunga
belimbing wuluh terhadap bakteri Klebsiella pneumoniae
Ekstrak etanol
400 500
300
Klebsiella
pneumoniae
Keterangan:
Ekstrak etanol
200 90
100
Klebsiella
pneumoniae
Keterangan:

Ekstrak etanol
90 100
80
Klebsiella
pneumoniae
Keterangan:
Ekstrak etanol
50 40
30
Klebsiella
pneumoniae
Keterangan:

Ekstrak etanol
20 blanko
Klebsiella
pneumoniae
Keterangan:
Konsentrasi fraksi dalam satuan mg/ml
Blanko = DMSO

Lampiran 19. Gambar hasil uji aktivitas antibakteri fraksi n-heksana bunga
Fraksi n-
heksana
500
400
300
Staphylococcus
aureus
Keterangan:
Fraksi n-
heksana
200 100
90
Staphylococcus
aureus
Keterangan:

Fraksi n-
heksana
70
80
60
Staphylococcus
aureus
Keterangan:
Fraksi n-
heksana
50
40
30
Staphylococcus
aureus
Keterangan:

Fraksi n-
heksana
20 blanko
Staphylococcus
aureus
Keterangan:
Blanko = DMSO

Lampiran 20. Gambar hasil uji aktivitas antibakteri fraksi n-heksana bunga
Fraksi n-
heksana
500 400
300
Klebsiella
pneumoniae
Keterangan:
Fraksi n-
heksana
100
200
90
Klebsiella
pneumoniae
Keterangan:

Fraksi n-
heksana
80
70
60
Klebsiella
pneumoniae
Keterangan:
Fraksi n-
heksana
50 40
30
Klebsiella
pneumoniae
Keterangan:

Fraksi n-
heksana
20 blanko
Klebsiella
pneumoniae
Keterangan:
Blanko = DMSO

Lampiran 21. Gambar hasil uji aktivitas antibakteri fraksi etilasetat bunga
Fraksi etilasetat
500 400
300
Staphylococcus
aureus
Keterangan:
Fraksi etilasetat
200
100
90
Staphylococcus
aureus
Keterangan:

Fraksi etilasetat
80 70
60
Staphylococcus
aureus
Keterangan:
Fraksi etilasetat
50
40
30
Staphylococcus
aureus
Keterangan:

Fraksi etilasetat
20 blanko
Staphylococcus
aureus
Keterangan:
Blanko = DMSO

Lampiran 22. Gambar hasil uji aktivitas antibakteri fraksi etilasetat bunga
Fraksi etilasetat
500 400
300
Klebsiella
pneumoniae
Keterangan:
Fraksi etilasetat
200 100
Klebsiella
pneumoniae
Keterangan:

Fraksi etilasetat
80
70
60
Klebsiella
pneumoniae
Keterangan:
Fraksi etilasetat
50 40
30
Klebsiella
pneumoniae
Keterangan:

Fraksi etilasetat
20
blanko
Klebsiella
pneumoniae
Keterangan:
Blanko = DMSO

Lampiran 23. Gambar hasil uji aktivitas antibakteri fraksi air bunga belimbing
wuluh terhadap bakteri Staphylococcus aureus
Keterangan:
Keterangan:
Blanko = DMSO

Lampiran 24. Gambar hasil uji aktivitas antibakteri fraksi air bunga belimbing
wuluh terhadap bakteri Klebsiella pneumoniae
Keterangan:
Keterangan:
Blanko = DMSO

Edy

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Edy

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

SKRINING FITOKIMIA DAN UJI AKTIVITAS

ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL SERTA FRAKSI-

PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

Universitas Sumatera Utara

SKRINING FITOKIMIA DAN UJI AKTIVITAS

Dipertahankan di hadapan Panitia Penguji Skripsi

Pembimbing I, Panitia Penguji,

Pembimbing II, Dra. Suwarti Aris, M.Si., Apt.

Drs. Suryadi Achmad, M.Sc., Apt.

Medan, 27 September 2013

Prof. Dr. Sumadio Hadisahputra, Apt.

Universitas Sumatera Utara

Diajukan untuk melengkapi salah satu syarat untuk memperoleh

PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

Universitas Sumatera Utara

karuniaNya, sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini yang berjudul:

Fraksi Bunga Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi L.) Terhadap Bakteri

Staphylococcus aureus dan Klebsiella pneumoniae. Skripsi ini diajukan

Farmasi Universitas Sumatera Utara Medan.

Pada kesempatan ini penulis mengucapkan terimakasih yang tulus dan

Fakultas Farmasi USU Medan yang telah memberikan fasilitas sehingga

penulis dapat menyelesaikan pendidikan sarjana farmasi. Ibu Dra. Suwarti

pembimbing yang telah memberikan waktu, bimbingan dan nasehat selama

Azizah Nasution, M.Sc., Apt., selaku penasehat akademis yang telah

memberikan bimbingan kepada penulis. Ibu kepala Laboratorium

Universitas Sumatera Utara

memberikan bantuan dan fasilitas selama penulis melakukan penelitian.

Penulis juga mengucapkan terimakasih dan penghargaan yang tiada

ikhlas bagi kesuksesan penulis, juga kepada Beasiswa Peduli Pendidikan

Angkasa Pura II yang telah memberikan bantuan biaya pendidikan selama

teman-teman dan sahabat-sahabatku Devy Novitasari, Dzul Azmah, Ovalina

Sylvia, Khadijah Husna, Dita Hafsari, Khairunnisa Rambe, Asih Tria

Wulandari, Yusrina, Riza Maulidiya, Hetti Purnama, Nulika Fitria, Lita

Putri Anggreini, Lyvana Istiarah, Indriani Kumala Dewi, Linda Marhama,

doa dan motivasi selama penulis melakukan penelitian.

Penulis menyadari bahwa penulisan skripsi ini masih belum sempurna,

sehingga penulis mengharapkan kritik dan saran yang membangun untuk

penyempurnaannya. Harapan saya semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi

ilmu pengetahuan kefarmasian.

Medan, Oktober 2013

Universitas Sumatera Utara

Kata kunci : bunga belimbing wuluh, Averrhoa bilimbi L., antibakteri

Universitas Sumatera Utara

Keywords: Pickle fruit flower, Averrhoa bilimbi L., antibacterial

Universitas Sumatera Utara

HALAMAN JUDUL .............................................................................. ii

HALAMAN PENGESAHAN ................................................................ iii

KATA PENGANTAR ........................................................................... iv

ABSTRACT ........................................................................................... vii

DAFTAR ISI .......................................................................................... viii

DAFTAR TABEL .................................................................................. xii

DAFTAR LAMPIRAN .......................................................................... xiii

BAB I PENDAHULUAN .................................................................. 1

1.1 Latar Belakang ................................................................ 1

1.2 Perumusan Masalah ........................................................ 2

1.3 Hipotesis ......................................................................... 3

1.4 Tujuan Penelitian ............................................................ 3

1.5 Manfaat Penelitian .......................................................... 3

BAB II TINJAUAN PUSTAKA .......................................................... 4

2.1 Uraian Tumbuhan ........................................................... 4

2.1.1 Habitat ................................................................ 4

2.1.2 Morfologi ........................................................... 4

2.1.3 Sistematika tumbuhan ........................................ 5