Instituto de Ciência e Tecnologia

Curso: Engenharia Química

Unidade Curricular: Engenharia Biotecnológica
Profª. Grazielle Santos Silva Andrade

1ª Lista de exercícios
Cinética Enzimática, Inibição Enzimática e Estabilidade Térmica

1) Para uma enzima que exibe a cinética de Michaelis-Menten, qual é a velocidade

da reação, V (como porcentagem de Vmáx), observada em:
a) [S] = Km
b) [S] = 0,5 Km
c) [S] = 2 Km
d) [S] = 10 Km

2) Sejam os seguintes dados para uma reação enzimática genérica S→ P:

S (M) V (mM/min)
6,25 x 10-6 15,00
7,50 x 10-5 56,25
1,00 x 10-4 60,00
1,00 x 10-3 74,90
1,00 x 10-2 75,00

a) Calcular Km e Vmax
b) Qual seria a V quando (S) = 2,5x10-5M e (S) = 5,0x10-5M?
c) Qual seria a V quando (S) = 5,0x10-5M, se a concentração de enzima fosse o
dobro?

3) Enzimas que catalisam a reação S  P são isoladas de duas espécies de bactérias.

As enzimas possuem mesma Vmáx, mas diferentes valores de Km para o
substrato S. A enzima A tem Km = 2μM e a enzima B tem Km = 0,5μM. O gráfico
abaixo mostra as cinéticas das reações catalisadas pela mesma concentração de
cada uma das enzimas e com [S] = 1μM. Qual curva corresponde a cada uma das
enzimas?
V

S
4) Os seguintes dados foram obtidos em experimentos feitos durante um estudo
sobre a atividade da invertase sobre o substrato sacarose:

S V
(mM) (μmol/Lmin)
20 0,0131
40 0,0170
50 0,0181
80 0,0200
100 0,0207
120 0,0211
292 0,0267

Determine o Km e Vmáx da invertase

5) Durante danos consideráveis no fígado, uma enzima (EA) é liberada na corrente

sanguínea. Após exercícios internos, uma enzima do músculo (EB), que catalisa a
mesma reação, é liberada na corrente sanguínea. EA e EB podem ser
diferenciadas porque possuem Km diferentes. O valor de Km da enzima do
musculo é igual a 2x10-5 M. Uma determinação numa amostra de sangue de um
paciente apresentou os resultados da tabela abaixo. O paciente sofre de uma
doença do fígado ou simplesmente tem se exercitado violentamente?

S V
(M) (mmol/mL soro min)
5x10-5 43
7x10-5 57
1x10-4 75
1,5x10-4 100
2x10-4 120
3x10-4 150
6x10-4 200

6) O Km de uma certa enzima que segue a cinética de Michaelis-Menten é igual a

1x10-5 M. Numa concentração de substrato igual a 0,1 M, a velocidade inicial
experimental foi igual a 37 μM/min para uma certa concentração da enzima. No
entanto, diminuindo a concentração do substrato para 0,01 M observou-se que
a velocidade de reação permaneceu sendo igual a 37 μM/min. A partir desses
dados, faça uma curva de Michaelis Menten e responda porque uma redução
de 10 vezes na concentração de substrato não produziu nenhuma variação
perceptível na velocidade da reação?
7) Ache uma expressão para a velocidade de reação V em termos de S, Vmáx, Km e
Ki para uma reação enzimática com inibição pelo substrato. (Nota: assumir k5
muito pequeno em relação a k1, k2, k3 e k4).

k1 k3
E + S  ES  EP
k2 +
S
k5  k4
ESS

8) Um certo pesticida inibe a atividade de uma determinada enzima A, que pode

portanto, ser utilizada como forma de detectar o pesticida numa amostra
desconhecida. Baseando-se nos dados abaixo responda:

V (μmol/Lmin)
S (mM)
Sem inibidor Com 0,3 mM de inibidor
0,33 56 37
0,50 71 47
0,67 88 65
1,65 129 103
2,21 149 125

a) O inibidor é competitivo ou não competitivo? Determine Km, Vmáx e Ki.

b) Misturando-se 50 mL da mesma solução enzimática com 50 mL de solução
de substrato a 0,8 mM e 25 mL de amostra desconhecida, a velocidade inicial
de reação observada foi 43 μmol/Lmin. Qual é a concentração do pesticida
na amostra?

9) Um inibidor competitivo com concentração igual a 3,7x10-4 M provoca inibição

em uma enzima que atua em um substrato de concentração 1,5x10-3 M, com Km
= 2,9x10-4 M e Ki = 2x10-5 M. A que valor devemos elevar a concentração do
substrato para restabelecer o valor original (não inibido) da velocidade de
reação?

10) O etanol no corpo humano é oxidado a acetaldeído pela enzima álcool

desidrogenase no fígado. Outros álcoois também são oxidados por essa enzima.
Por exemplo, o metanol que é moderadamento tóxico, é oxidado a formaldeído,
muito mais tóxico. Os efeitos tóxicos do metanol podem ser diminuídos pela
administração de etanol. O etanol age competindo com o metanol deslocando-
o do sítio ativo na álcool desidrogenase. Se um indivíduo ingeriu 100 mL de
metanol (cachaça baiana – pode ser letal) que corresponde a uma concentração
de 0,0617 M no corpo humano ele deve ingerir cerca de 630 mL de uísque
escocês de fabricação paraguaia (50% em etanol) para reduzir a atividade da
 álcool desidrogenase com o metanol a 5% de sua atividade original. Que
concentração corresponde essa quantidade de etanol no corpo humano? O Km
da álcool desidrogenase para o metanol é igual a 1x10-2 M. O Km (nesse caso
considerado como Ki) para o etanol é de 1x10-3 M.

11) A anidrase carbônica é fortemente inibida pela droga acetazolamida, que é

utilizada como diurético epara diminuir a pressão alta no olho no glaucoma. A
curva experimental da velocidade inicial (como % de Vmáx) dessa reação de
anidrase carbônica versus substrato está ilustrado abaixo. Quando o
experimento é repetido na presença da acetazolamida, e obtida a curva inferior.
A partir d inspeção das curvas e do seu conhecimento das propriedades cinéticas
de inibidores, determine a natureza da inibição por acetazolamida. Explique.

100

50

[S]

12) Calcular Ki, Km e Vmax a partir da figura abaixo.

120

100

80
V (umol/Lmin)

60

40

20

0
0,00 0,01 0,02 0,03 0,04 0,05 0,06 0,07 0,08
S (mol/L)

13) A cinética de uma reação enzimática foi medida em função da concentração de

substrato na presença de um inibidor IA = 2 μM, na presença do inibidor IB = 1
 μM e na ausência de inibidor. Os resultados estão apresentados na tabela
abaixo:

V (μmol/Lmin)
S (μmol/Lmin)
Sem inibidor Com inibidor IA Com inibidor IB
3 10,4 4,1 2,1
5 14,5 6,4 2,9
10 22,5 11,3 4,5
30 33,8 22,6 6,8
90 40,5 33,8 8,1

a) Calcular os valores de Km e Vmáx e identificar o tipo de inibição em cada

caso.
b) Calcular Ki para cada caso.

14) Foram recolhidas periodicamente amostras de uma enzima que estava sendo
usada num reator contínuo e a sua atividade foi medida, sempre nas mesmas
condições. Os resultados são os apresentados na tabela abaixo:

t Atividade
(dias) (U/mg)
0 100,8
2 84,3
4 73,4
7 58,0
9 48,3
11 41,0
14 32,1

a) Determinar a constante de desnaturação e o tempo de meia vida da enzima.

b) Durante quanto tempo pode operar o reator se for tolerável que a enzima
perca até 40% da atividade inicial?
15) A enzima β-galactosidase tem sido utilizada na indústria de alimentos devido ao
seu potencial de transgalactosilação, que é a incorporação de moléculas de
galactose em polímeros de lactose, agregando propriedades funcionais aos
alimentos. Em um estudo de estabilidade térmica dessa enzima foram
encontradas as constantes de desnaturação (kd), conforme os dados
apresentados na tabela abaixo:

T kd
(°C) (min-1)
60 0,9695
55 0,4628
50 0,0833
45 0,0296
40 0,0038
35 0,0008
30 0,0003

a) Estime a energia de ativação de desnaturação (Ed) para o processo.