Operator asimtomatik dari Plasmodium spp.

sebagai Sumber Infeksi untuk Malaria

Vektor Malaria di Amazon Brasil

ABSTRAK
Kami telah menggambarkan keberadaan pembawa tanpa gejala Plasmodium vivax
dan infeksi Plasmodium falciparum pada populasi asli Amazon. Sebagian besar dari
mereka memiliki parasitemia rendah, hanya dideteksi oleh polymerase chain reaction
(PCR). Karena mereka tetap tanpa gejala dan tidak diobati, kami ingin menentukan
apakah mereka dapat menginfeksi Anopheles darlingi Root, vektor utama Brasil, dan
bertindak sebagai waduk penyakit. Lima belas pasien asimtomatik dewasa (PCR positif
saja) dipilih, dan infeksi eksperimental nyamuk dilakukan dengan makan langsung dan
dengan sistem membran-makan. Tujuh belas pasien simptomatik dewasa dengan
parasitemia tinggi digunakan sebagai kontrol. Kami menemukan tingkat infeksi di An.
darlingi sebesar 1,2% untuk operator tanpa gejala dan 22% untuk operator simtomatik.
Meskipun kelompok nyamuk yang tidak bergejala terinfeksi pada tingkat yang jauh lebih
rendah, pasien ini tetap infektif lebih lama daripada yang diobati, pasien yang bergejala.
Juga, prevalensi infeksi asimtomatik adalah 4 hingga 5 kali lebih tinggi daripada infeksi
simptomatik di kalangan penduduk asli. Hasil ini memiliki implikasi untuk program
pengendalian malaria di Brasil, yang pada dasarnya berfokus pada pengobatan pasien
yang bergejala.

KATA KUNCI
malaria, infeksi tanpa gejala, makan nyamuk, Anopheles darlingi

MALARIA EPIDEMIKA DI Negara Bagian Rondonia, Amazon Brasil, selalu dikaitkan

dengan imigrasi besar-besaran (Cruz 1910, Deane 1988, Tauil 1992,
Sawyer 1993). Epidemi terakhir dan utama dimulai pada tahun 1970-an ketika para
migran dari negara-negara bagian selatan datang untuk menetap di tanah yang
dialokasikan oleh pemerintah. Dalam 20 tahun, jumlah total kasus malaria di Rondoˆnia
meningkat dari 5.848 menjadi 278.408 (1970Ð1988, Malaria Historical Series, National
Health Foundation, FUNASA, Kementerian Kesehatan Brasil). Malaria terutama
menyerang laki-laki dewasa dan sering berhubungan dengan pekerjaan (Sawyer 1993,
Camargo et al. 1994). Karena dianggap secara historis bahwa semua infeksi plasmodia
menyebabkan penyakit simtomatik, program pengendalian malaria difokuskan pada
diagnosis mikroskopis dan pengobatan kasus simtomatik ditambah penyemprotan
insektisida di dalam ruangan di permukiman migran. Nonmigrant, penduduk asli sungai
tampaknya terhindar dari epidemi dan akibatnya tidak ditargetkan oleh tindakan
pengendalian khusus.

Hanya baru-baru ini telah ditunjukkan, dengan diagnosis polymerase chain reaction
(PCR), bahwa ada prevalensi infeksi Plasmodium yang sangat tinggi.
populasi asli (Alves et al. 2002). Mungkin melalui infeksi berulang dari masa kanak-
kanak, penduduk asli mengembangkan tingkat resistensi tertentu terhadap malaria (Alves
et al. 2002). Sebagian besar infeksi pada pasien tidak menunjukkan gejala dengan
parasitemia yang sangat rendah, sehingga mereka tidak terdeteksi oleh layanan
pengendalian malaria. Individu yang tidak terdiagnosis dan tidak diobati ini dapat
bertindak sebagai reservoir plasmodia untuk mi-grants nonimmune, kadang-kadang
menyebabkan epidemi eksplosif di antara yang terakhir (Camargo et al. 1999).
Namun, tidak masuk akal seperti kelihatannya, hipotesis ini memiliki kaitan yang lemah.
Itu belum dipastikan untuk tanggal apakah plasmodia darah atipikal dan langka dari
individu asimtomatik dapat menginfeksi Anopheles darlingi Root, vektor malaria utama
di Amazon Brasil (Deane et al.1988). Tujuan artikel ini adalah untuk memverifikasi
kemungkinan ini.

Bahan dan metode

Pasien dan metode. Studi ini dilakukan di Portuchuelo, sebuah pemukiman sungai, yang
populasi dan epidemiologi malaria telah menjadi objek dari laporan yang didekati
(Camargo et al. 1999, Alves et al. 2002). Selama penelitian ini, tiga petugas kesehatan
masyarakat tersedia setiap hari untuk bantuan dan pengumpulan baur tebal, dan tim medis
mengunjungi komunitas tersebut tiga kali seminggu. Diagnosis asimtomatik Plasmodium
spp. Infeksi dilakukan oleh PCR (Snou-nou 1996) dalam survei terhadap seluruh populasi
pada bulan April 2000. Semua 15 plasmodia dewasa pembawa termasuk dalam penelitian
ini adalah negatif mikroskopis tetapi PCR positif untuk Plasmodium spp. Setelah 2 bulan
follow-up, 15 pasien ini tetap asimtomatik dan diundang untuk berpartisipasi dalam
infeksi eksperimental. Setelah izin etis dari protokol eksperimental oleh Dewan Negara
Medis Rondonia, informed consent tertulis diperoleh dari individu yang berpartisipasi.

Pengendalian Nyamuk dan Infeksi Eksperimental.

Nyamuk anopheles dewasa dikumpulkan di atas bagian kaki bekas rekan penulis artikel
ini di pemukiman Riverine di Portuchuelo. Sebuah. darlingi fe-males diinduksi untuk
oviposit. Progeni F1 dibesarkan seperti yang dijelaskan oleh Klein et al. (1991a) pada
27C dan 70% RH. Betina F1 yang dibesarkan dewasa disimpan di kandang tertutup
dengan kasa steril (20 nyamuk perampasan). Ke 15 pasien yang dipilih dibawa ke
laboratorium kami untuk infeksi eksperimental. Untuk memberi makan nyamuk, satu
kandang terikat erat pada lengan bawah setiap pasien selama 15 menit.

Untuk pemberian makan nyamuk, 4 ml darah heparin dari masing-masing pasien

dipindahkan ke sistem He-motek di mana nyamuk diberi makan selama 20 menit melalui
membran (Rutledge et al. 1964). Sebagai kontrol, pemberian makan pada darah dari 17
pasien bergejala dengan parasitemia paten mulai dari 1.803 hingga 12.260 parasit per
mikroliter juga dilakukan. Setelah percobaan semua pasien dirawat karena malaria sesuai
dengan protokol standar Yayasan Kesehatan Nasional Brasil.

Setelah diberi makan dengan metode apa pun, betina yang membesar dipelihara dengan
diet sukrosa 10% selama 7 hari. Setelah itu, mereka dibedah dan midguts mereka secara
mikroskopis diperiksa untuk kehadiran oocysts. Setelah pemeriksaan mikro-scopic dan
penghitungan oocyst, preparat disimpan dalam nitrogen cair untuk pengujian PCR.
Tes PCR. PCR persiapan midgut dilakukan setelah lisis sampel dengan SDS / proteinase
K, diikuti oleh ekstraksi fenol / kloroform dan precipation DNA dengan etanol dan
natrium asetat. PCR ampliÞcations dilakukan sesuai dengan protokol yang sama yang
digunakan untuk sampel darah (Snounou 1996).
Hasil
Spesies Plasmodium dari 15 individu yang tidak bergejala adalah P. vivax, 11; P.
falciparum, tiga; dan satu infeksi campuran. Seratus tujuh puluh satu nyamuk dari 314
yang diberi makan pada pasien ini bertahan selama 1 minggu dan kemudian dibedah. Dua
nyamuk mengirimkan satu oocyst masing-masing di midguts mereka, memberikan
tingkat infeksi 1,2% dan rata-rata satu oocyst per nyamuk yang terinfeksi. PCR-
ampliÞcation oocyst rDNA mengungkapkan bahwa kedua oocysts adalah P. vivax. Tak
satu pun dari nyamuk yang dibedah memiliki oocyst yang diidentifikasi sebagai P.
falciparum. Namun, jumlah A. darlingi yang memberi makan pada tiga pasien P.
falciparum dan selamat (32 dari 171) terlalu kecil untuk mewakili hasil statistik yang
relevan. Seratus dua puluh tiga mos-quitoes yang diberi membran artritis dibedah dan
ditemukan negatif. Nyamuk yang diberi makan pasien symp-tomatic dengan parasitemia
paten menunjukkan tingkat infeksi yang lebih tinggi (31 dari 141 nyamuk, 22%),
meskipun hanya pemberian makanan biasa yang digunakan. Jumlah rata-rata ookista per
nyamuk yang terinfeksi adalah 19,5, mulai dari 1 hingga 88.

Diskusi
Hasil jelas menunjukkan bahwa, meskipun pada tingkat yang lebih rendah, pasien tanpa
gejala dengan parasitemia di bawah ambang deteksi mikroskopis memang menginfeksi
mos-quitoes.

Eksperimen telah didorong ke tingkat tertinggi. Pasien yang direkrut PCR-di-hidung-

hidung ke pelabuhan plasmodia 2 mo sebelum percobaan. Mereka tetap tanpa gejala
sampai eksperimen dilakukan. Menurut pengamatan kami sebelumnya, 40% pasien
asimtomatik menjadi PCR negatif setelah 2 bulan (F.P.A., data yang tidak
dipublikasikan). Dengan demikian, parasitemia pasien kami harus sangat
rendah, cenderung nol pada saat percobaan. Namun demikian, nyamuk menjadi terinfeksi
saat menyusui pada pasien ini. Observasi ini menunjukkan bahwa pasien tanpa gejala
memang merupakan sumber infeksi permanen pada nyamuk dan mungkin bagi manusia.
Namun, kapasitas mereka untuk menginfeksi nyamuk jauh lebih rendah daripada pasien
gejala parasitemia yang tinggi. Pada malaria vivax, gametosit terjadi dalam darah pada
siklus pertama parasit, tetapi setelah 24 jam pengobatan dengan klorokuin, infektivitas
berkurang dan tidak ada setelah 36 jam (Klein et al. 1991b). Pada malaria falciparum,
gametocytes biasanya hanya terjadi 10 hari setelah timbulnya gejala, dan setelah
pengobatan 24 jam dengan primaquine (dosis tunggal diberikan untuk malaria falciparum
di Brasil), pasien tidak lagi infektif terhadap nyamuk (Klein et al. 1991c). Dengan
demikian, meskipun pasien simtomatik segera diobati dan tetap infektif terhadap nyamuk
hanya selama beberapa hari, pasien tanpa gejala yang tidak dikenali dapat kembali
infektif utama untuk periode yang lebih lama, yang mungkin pulihkan untuk tingkat
infektivitas rendah. Selain itu, penelitian kami di Portuchuelo dan di wilayah sungai
lainnya menunjukkan bahwa prevalensi infeksi tanpa gejala adalah 4 hingga 5 kali lebih
tinggi daripada gejala infeksi (Alves et al. 2002). Dengan demikian, individu tanpa gejala
membawa plasmodia untuk jangka waktu lama dapat menjamin siklus permanen
penularan malaria di antara populasi sungai.

Apa implikasi dari temuan ini untuk program pengendalian malaria di Amazon Brasil?
Langkah-langkah kontrol yang digunakan di daerah di mana vektor malaria adalah
domisiliary tidak berfungsi di pemukiman Amazon. Di sungai Amazonia, vektor adalah
sylvatic, yang membuat sia-sia penggunaan insektisida domisiliar. Layar jendela tidak
masuk akal untuk rumah-rumah di mana dinding kayu sengaja dibuat untuk aerasi. Untuk
membuat penggunaan kelambu tempat tidur sebagai profilaksis yang efektif, orang-orang
harus tinggal di tempat tidur dari 1700 hingga 0600 jam. Jadi, satu-satunya tindakan
pengendalian yang layak adalah perawatan pasien. Namun, sejauh ini, pengobatan telah
disediakan untuk pasien yang mengalami gejala, karena individu tanpa gejala tidak dapat
didiagnosis. Kami menyarankan bahwa dengan mengobati pembawa asimtomatik, jumlah
reservoir plasmodia dapat dikurangi secara efektif, yang dapat memberikan alat tambahan
untuk program pengendalian malaria di Amazonia.