Anda di halaman 1dari 38

Sintesis total 20-F4t-Neuroprostane

Penulis: Kurtis Michael Magee

Tautan persisten: http://hdl.handle.net/2345/2423

Karya ini diposting di eScholarship @ BC, Boston College


University Libraries.

Boston College Electronic Tesis atau Disertasi, 2011


Hak cipta dipegang oleh penulis, dengan semua hak dilindungi, kecuali
dinyatakan lain.
Boston College

Sekolah Pascasarjana Seni dan Sains

Departemen Kimia

TOTAL SYNTHESIS OF 20-F4t-NEUROPROSTANE

a thesis

by

KURTIS MICHAEL MAGEE

submitted in partial fulfillment of the requirements

for the degree of

Master of Science

December 2011
Sintesis total 20-F4t-Neuroprostane

Kurtis Michael Magee

Penasihat Tesis: Profesor Marc L. Snapper

Abstrak

Bab 1: Stres Oksidatif. Gambaran stres oksidatif dan dampaknya pada kesehatan manusia.
Berbagai spesies oksigen reaktif dan pertahanan antioksidan seluler juga diringkas.

Bab 2: Neuroplane. Setelah survei asam lemak dan nomenklatur,bab ini membahas peroksidasi
lipid sebagai salah satu konsekuensi paling signifikan dari stres oksidatif secara in vivo.
Metabolisme lipid yang berfungsi sebagai biomarker untuk penyakit manusia juga diperiksa.

Bab 3: Sintesis Total Pertama 20-F4t-Neuroprostane. Mulai dengan singkat tinjauan sintesis
neuroprostane sebelumnya dan pendekatan laboratorium Snapper pada isoprostane, bab terakhir
menyajikan sintesis total 20-F4t-neuroprostane. langkah-langkah kunci dalam sintesis
melibatkan cincin-pembukaan lintas-metatesis / silang yang dimodifikasi prosedur metatesis dan
olefinisasi Wittig ganda asimetris tunggal.
Bab 1: Stres Oksidatif

Sebagai atribut normal dari metabolisme aerobik,radikal bebas dihasilkan oleh produk dari
proses seluler biasa. Kerusakan struktural pada senyawa organik (misalnya,lipid, asam nukleat,
karbohidrat dan protein) karena kelebihan produksi radikal bebas menghasilkan stres oksidatif.
Meskipun bermacam-macam senyawa yang ditimbulkan, kerusakan oksidatif disebabkan oleh
jumlah spesies oksigen reaktif yang relatif sedikit (ROS).1

Pembentukan spesies oksigen reaktif umum

Sebagian besar oksigen molekuler (O2) yang dikonsumsi oleh sel yang bernafas
dikurangi menjadi air (2H2O) oleh cytochrome c oxidase dalam rantai transpor elektron
mitokondria (ETC) tanpa melepaskan intermediet yang berbahaya.2 Namun, ada enzim dan
proses spontan di dalam sel yang mengurangi O2 melalui donasi elektron tunggal untuk
membentuk O2 - atau superoksida - ROS paling sederhana. Pengurangan elektron tunggal kedua
menghasilkan ion peroksida, yang akan segera terprotonasi pada pH fisiologis untuk
menghasilkan hidrogen peroksida (H2O2).3,4 H2O2 dapat dengan mudah berdifusi melintasi
membran seluler5 untuk bereaksi dengan transisi logam (misalnya, Fe2+ dan Cu+) untuk
membentuk hidroksida (HO-) dan hidroksil radikal (HO-) melalui proses yang dikenal sebagai
reaksi Fenton.6 Yang paling reaktif di antara spesies ini, HO- hanya berdifusi beberapa angstrom
sebelum bereaksi dengan molekul biologis. Sebagai perbandingan, O2- jauh kurang reaktif dan
mungkin melintasi membran sel bertindak pada jarak dari bagian di mana ia dihasilkan.7
O2- juga bertindak sebagai prekursor kimia untuk pembentukan peracid endogen.4 In vivo
diproduksi oleh aksi sintase oksida nitrat pada L-arginine, nitric oxide (NO-)memainkan berbagai
peran biologis yang melibatkan vasodilatasi, pembentukan memori dan peradangan. NO-
bereaksi dengan cepat (~ 1010 M-1 s-1) dengan O2- untuk menghasilkan peroksinitrit (ONOO-),
oksidan seluler kuat.8 Ini menunjukkan cara lain yang dengannya O2- menyebabkan kerusakan
sel yang mengarah ke stres oksidatif.

Target oksidan endogen: lipid, asam nukleat, dan protein.

Diakui sejak jaman dahulu, oksidasi lipid yang mengarah ke rancidity telah menjadi
masalah dalam penyimpanan lemak dan minyak. Makanan kimia melakukan penelitian paling
awal reaksi berantai peroksidatif molekul biologis untuk memperhitungkan perubahan dalam
bau, rasa, warna, viskositas dan kelarutan lipid tidak jenuh setelah paparan yang terlalu lama
terhadap udara.9 Namun, pentingnya peroksidasi lipid dalam biologi dan obat-obatan tidak
dieksplorasi sampai tahun 1950.10 Penelitian selanjutnya menunjukkan kerusakan oksidatif oleh
ROS menyebabkan perubahan dalam sifat biologis dari membran lipid, yang dapat menyebabkan
peningkatan permeabilitas jaringan dan perubahan fungsi seluler.
Lebih khusus lagi, peroksidasi lipid mitokondria memiliki efek merusak produksi ATP, aktivitas
enzim, dan inisiasi apoptosis.11,12
Bersama dengan lipid, asam nukleat termasuk makromolekul biologis ditargetkan oleh
oksidan endogen. DNA sangat rentan terhadap katalis besi oksidasi, seperti reaksi Fenton, karena
besi mengikat langsung ke fosfodiester tulang punggung DNA.13 Dengan demikian, radikal
hidroksil (HO-) adalah ROS primer yang bertanggung jawab untuk kerusakan DNA oksidatif,
yang dapat menghasilkan satu atau dua untai DNA yang mengarah pada istirahat kromosom.14 Di
antara sindrom yang dikembangkan dari istirahat kromosom seperti itu termasuk sindrom
Bloom15 dan anemia Fanconi.16
Terakhir, oksidasi protein menjadi perhatian serius mengingat peran vital mereka dalam
mengatur struktur sel, sinyal sel dan berbagai proses enzimatik. ROS dapat langsung
dimodifikasi ikatan peptida dan rantai samping asam amino, terutama yang terdiri dari aromatik
dan tiol.17 Tidak seperti lipid dan asam nukleat, protein menawarkan target yang sangat
beragam18 untuk kerusakan oksidatif yang dapat menghasilkan banyak hasil yang berbeda seperti
misfolding, modifikasi aktivitas enzim,19 modifikasi untuk transfer sinyal, perubahan kalsium
dan kalium interseluler,20 dan meningkatkan kerentanan terhadap degradasi dan pemindahan.

Pertahanan antioksidan seluler

Selain peningkatan generasi radikal bebas endogen, oksidatif stres juga terjadi melalui
penurunan pertahanan sel antioksidan. Umum antioksidan berkisar dari senyawa seperti vitamin
C dan vitamin E hingga enzim termasuk katalase, peroksidase, dan superoksida dismutase
(SODs).1

GAMBAR 1.1. Struktur Vitamin C & E

Mikronutrien, seperti vitamin C dan vitamin E (GAMBAR 1.1), mainkan peran penting dalam
pencegahan kerusakan oksidatif seluler dengan memulung ROS. Vitamin C dikenal sebagai zat
pereduksi dalam lingkungan berair dan bekerja bersinergi dengan antioksidan yang larut dalam
lemak seperti vitamin E.21 Misalnya, α-tocopherol, yang paling bentuk aktif vitamin E,
melindungi terhadap peroksidasi lipid dengan menyumbangkan atom hidrogen (H-) ke radikal
lipid (R-) atau lipid peroxyl radikal (ROO-). Secara komparatif α-tocopherol radikal jinak dan
stabil kemudian dikurangi kembali ke α -tokoferol, antara spesies lain, vitamin C.22 penelitian
biomedis tambahan telah membentuk hubungan antara perkembangan penyakit dan kadar plasma
rendah vitamin C dan E dalam berbagai pasien sakit kritis dan cedera.23

Enzim, khususnya SODs, adalah antioksidan intraseluler yang paling efektif. Di


manusia, tiga kelas utama SODs dengan lipatan protein yang berbeda dan ion logam katalitik
telah berevolusi: Cu, Zn-SOD (SOD1), mitokondria Mn-SOD (SOD2), dan Cu ekstraseluler, Zn-
SOD (SOD3) .1 Setiap SOD mengkatalisis disproporsionasi O2- ke O2 dan H2O2. H2O2
kemudian dikonversi menjadi H2O dan O2 oleh katalase, atau dikurangi menjadi H2O oleh
peroksidase.2
Katalis, yang sebagian besar terletak di dalam sel di peroksisom, memiliki beberapa
tingkat turnover tertinggi di antara semua enzim. Pada tahun 2001, Young dan Woodside
mengamati bahwa a molekul tunggal katalase menguraikan jutaan molekul H2O2 setiap detik
tanpa menghasilkan radikal bebas.24 Sebagai tetramer porfirin berbasis FeIII, 25 katalase
beroperasi dengan pertama bereaksi dengan H2O2 untuk menghasilkan radikal kation oksoferi
porfirin (Por+ - FeIV = O) dan H2O. Besi intermediet valent tinggi ini kemudian bereaksi cepat
(sangat reaksi eksotermik) dengan molekul kedua H2O2 untuk menghasilkan O2 dan H2O.26

Satu keluarga penting dari peroksidase dalam sel manusia adalah peroksidase
glutathione(GPx). Dalam proses mengurangi H2O2 hingga H2O, GPx secara bersamaan
mengoksidasi monomeric glutathione (GSH) menjadi glutathione disulfide (GS-SG).27 Rasio
seluler dari GS-SG / GSH dianggap sebagai pengukuran sensitif terhadap stres oksidatif karena
peningkatan rasio ini merupakan indikasi aktivitas GPx yang tinggi.28

Penyakit manusia terkait dengan stres oksidatif

Pada tahun 1956, Denham Harman mendalilkan “penyakit penuaan dan degeneratif
terkait yang pada dasarnya dikaitkan dengan serangan sisi merusak dari radikal bebas konstituen
sel dan pada jaringan ikat. ”Sebuah studi 1954 sebelumnya menggunakan spektroskopi resonansi
paramagnetik untuk mendeteksi radikal bebas dalam materi hidup30 menyebabkan Harman
berhipotesis bahwa generasi radikal bebas endogen terjadi sebagai produk sampingan dari
enzimatik kimia redoks dan bahwa prinsip-prinsip reaksi berantai peroksidatif adalah analog
dengan orang-orang dari kimia polimer in vitro. Teori ini, sekarang dikenal sebagai Teori
Radikal Bebas dari Penuaan, memperoleh kredibilitas dengan penemuan SODs31 tahun 1969 dan
terus mendorong upaya penelitian yang menghubungkan stres oksidatif dengan patogenesis
sejumlah penyakit manusia,32 termasuk penyakit vaskular, kondisi peradangan, kanker,dan
gangguan neurodegeneratif.
Selama tiga dasawarsa terakhir, kultur sel dan penelitian hewan telah memberikan
kejelasan bukti korelasi langsung antara stres oksidatif dan perkembangan penyakit vaskular.33
Pembentukan spesies ROS telah menunjukkan peningkatan cepat dan mendalam pada jantung
pasca-iskemik, dan berfungsi sebagai mekanisme utama untuk kerusakan post-iskemik.
Dengan demikian, sementara reperfusi langsung dari miokardium iskemik sangat penting untuk
mencegah lebih lanjut cedera miokard, reperfusi sering menghasilkan bentuk unik dari kerusakan
miokardial yang ditimbulkan oleh ROS. Upaya yang berkelanjutan dalam penelitian
kardiovaskular bertujuan untuk menemukan scavager radikal yang efektif, seperti enzim35 atau
molekul kecil, 36 untuk menyelamatkan otot jantung yang berisiko pada sindrom koroner akut. 37
Stres oksidatif terjadi pada pasien dengan kondisi peradangan, seperti rheumatoid arthritis (RA),
dan memainkan peran penting dalam peradangan dan penghancuran tulang rawan dan tulang. 38
Thioredoxin (TRX), redoks-aktif di mana-mana protein, adalah biomarker kuantitatif yang
digunakan untuk mengakses stres oksidatif pada pasien RA dan dapat memberikan pemahaman
baru untuk penyakit sendi inflamasi kronis yang tidak dapat diobati.39
Kerusakan oksidatif langsung pada DNA oleh ROS, terutama HO-, telah dikaitkan
karsinogenesis dengan mempengaruhi berbagai proses seluler termasuk proliferasi sel, penuaan,
dan metastasis.40 Perubahan hasil proliferasi sel dari modulasi berbagai protein siklus sel, seperti
p53 dan ATM (ataxia telangiectasia bermutasi), oleh tingkat tinggi ROS endogen.41,42 Dalam hal
penuaan sel, kemampuan mitokondria Protein AIF (apoptosis inducing factor) untuk
mengoksidasi NADH dan akibatnya menghasilkan ROS berkontribusi terhadap kelangsungan
hidup sel karsinoma sel yang dipilih.43 Terakhir, penelitian yang meneliti hasil akhir peroksidasi
menunjukkan bahwa sel tumor manusia metastasis menghasilkan lebih besar tingkat ROS dari
sel ganas primer, yang sebenarnya dapat mengurangi metastasis dengan memicu peningkatan
pertahanan antioksidan sel.44,45
Meskipun memiliki massa yang relatif kecil, otak menyumbang sekitar 20% dari total
konsumsi oksigen basal tubuh. 46 Asupan oksigen yang tinggi ini tidak proporsional
menyebabkan paparan sel-sel otak ke lingkungan dengan ROS yang cukup besar dibandingkan
ke area lain dari tubuh. Dengan demikian, bukti telah muncul menunjukkan bahwa kerusakan
oksidatif memainkan peran patogen kunci dalam gangguan neurodegeneratif. Misalnya, post-
mortem pemeriksaan pasien Parkinson telah menunjukkan tingkat penurunan yang signifikan
antioksidan dan enzim antioksidan, dan tingkat peroksidasi lipid yang sangat meningkat adisi,
oksidasi protein, kerusakan DNA oksidatif, serta tanda-tanda lain dari cedera oksidatif.
Peningkatan kadar stres oksidatif juga ditemukan pada cairan serebrospinal. Pasien yang
menderita amyotrophic lateral sclerosis (ALS) dan bagian infarcted otak korban stroke.48,49
Terakhir, disregulasi dari homeostasis ion logam transisi dan stres oksidatif di sel-sel otak secara
substansial berdampak pada akumulasi deposit amyloid β plak - faktor putatif dalam patogenesis
penyakit Alzheimer.50
Kesimpulan
Stres oksidatif terjadi baik oleh peningkatan produksi endogen ROS, penurunan pertahanan
antioksidan sel, atau kombinasi keduanya. Puluhan tahun Bukti menunjukkan hubungan
langsung antara stres oksidatif dan perkembangan yang luas berbagai penyakit manusia. Namun,
peran stres oksidatif yang tepat pada manusia patofisiologi tidak sepenuhnya dipahami.

Bab 2: Neuroplane

Sel-sel otak sangat rentan terhadap efek merugikan dari stres oksidatif ke tingkat metabolisme
mereka yang tinggi, tingkat antioksidan yang rendah, kemampuan regeneratif yang buruk, tinggi
konsentrasi intraseluler logam transisi mampu mengkatalisis pembentukan ROS, dan komposisi
kaya asam lemak tak jenuh ganda (PUFA) rentan terhadap peroksidasi. Produk akhir dari
peroksidasi lipid sering menggunakan aktivitas biologis yang kuat dan dianggap sebagai
biomarker sensitif untuk stres oksidatif. Neuroprostanes mewakili kelas unik produk peroksidasi
lipid ini.

Asam lemak

Asam lemak esensial (EFA) adalah asam lemak yang dibutuhkan untuk kesehatan yang baik
tetapi harus diperoleh melalui diet karena mereka tidak dapat disintesis oleh tubuh. EFA sangat
penting untuk pertumbuhan dan perkembangan normal, dan fungsi optimal dari beberapa sistem
organ utama.52
Mereka terutama berfungsi sebagai prekursor diet untuk pembentukan berbagai sinyal molekul
(misalnya, eicosanoids klasik) yang mempengaruhi banyak proses biologis termasuk peradangan,
tekanan darah, kontraksi uterus, konstriksi bronkus, kesehatan retina, dan fungsi otak.53

Satu-satunya dua EFA yang diketahui untuk manusia adalah "α-linolenic acid (ALA, C18: 3,∞3)
dan asam linoleat (LA, C18: 2,∞ -6) (GAMBAR 2.1).
GAMBAR 2.1. Struktur "asam -linolenat dan asam linoleat.

Menurut aturan nomenklatur asam lemak omega-x, EFA diberi nama berdasarkan pada lokasi
ikatan ganda pertama dalam rantai dari gugus metil terminal. Selain itu, asam lemak lebih jarang
dinamai oleh nomor lipid (C: D) di mana C mewakili jumlah total karbon sedangkan D adalah
jumlah alkena yang ada dalam rantai alifatik.

Sebagai asam lemak induk dari kelas ∞ -6, asam linoleat memanjang dan desaturated melalui
langkah enzimatik berurutan untuk membentuk asam arakidonat (AA, C20: 4, ∞ -6).Demikian
pula, α-linolenic acid, induk asam lemak dari kelas ∞ -3, mengalami pemanjangan dan desaturasi
oleh enzim yang sama untuk membentuk asam eicosapentaenoic (EPA, C20: 5, $ 3) .54
Pemanjangan enzim lebih lanjut dan desaturasi EPA memberikan asam docosahexaenoic (DHA,
C22: 6, ∞ -3) (GAMBAR 2.2).55

GAMBAR 2.2. Struktur arachidonic, eicosapentaenoic, dan docosahexaenoic


asam

Baik EPA dan DHA mewakili anggota yang paling penting secara fisiologis Kelas asam lemak
∞-3. Penelitian, bagaimanapun, telah menunjukkan bahwa konversi "α-linolenic acid ke dalam
derivatif rantai panjangnya lambat dan tidak efisien pada manusia dewasa.56 Bukti menunjukkan
bahwa suplementasi diet dengan makanan kaya asam lemak ∞ 3, seperti kelautan minyak ikan,
mungkin merupakan metode terbaik untuk meningkatkan sel manusia dan tingkat jaringan EPA
dan DHA.57

Produk peroksidasi lipid

Seperti disebutkan sebelumnya, salah satu konsekuensi paling penting dari oksidatif stres adalah
peroksidasi lipid. Selama penyelidikan 1988 dari efek stres oksidatif pada plasma manusia,
Roberts et al. menemukan jumlah metabolit lipid yang signifikan dihasilkan dari peroksidasi
non-enzimatik, radikal bebas yang disebabkan peroxidation asam arakidonat, asam lemak ∞ -6 di
mana-mana di membran fosfolipid di seluruh tubuh.Studi selanjutnya pada produk oksidasi lipid
ini, sekarang disebut sebagai isoprostane (GAMBAR 2.3), menyebabkan isolasi, karakterisasi,
dan deteksi in vivo. Isoprostane saat ini berfungsi sebagai biomarker terbaik yang tersedia untuk
menilai stres oksidatif yang terkait dengan berbagai gangguan manusia59 seperti penyakit
kardiovaskular,60 diabetes,61 kanker,62 dan penyakit paru obstruktif kronik (PPOK).63 Mungkin
sama pentingnya, beberapa isoprostane mengerahkan aktivitas biologis yang kuat.

GAMBAR 2.3. Isoprostanes: metabolit lipid yang berasal dari asam arakidonat.

Pada tahun 1998, dua penelitian65,66 mengungkapkan kelas baru senyawa seperti isoprostana
berasal dari peroksidasi radikal bebas yang disebabkan DHA, asam lemak ∞ 3 yang dibutuhkan
untuk fungsi dan perkembangan otak yang sehat. Jaringan otak sebagian besar terdiri dari sel
glial atau glia, dan neuron. Glia, yang berarti "lem" dalam bahasa Yunani, terutama bertanggung
jawab untuk menyediakan dukungan fisik untuk neuron, mempertahankan homeostasis, dan
memasok sekitarnya sel dengan oksigen dan nutrisi. Neuron adalah sel yang diketahui memiliki
dan mengirimkan informasi ke seluruh tubuh melalui eksitasi listrik dan pensinyalan kimiawi.

Herculano-Houzel dan perusahaan menggunakan metode fraksiator isotropik baru mereka67 ke


memperkirakan bahwa rasio sel glial terhadap neuron adalah ~ 1: 1 di seluruh otak manusia dan
~ 3: 2 dalam materi abu-abu otak.68 Jaringan otak, materi abu-abu pada khususnya, sangat
diperkaya dengan DHA di mana itu terdiri dari ~ 40% dari total populasi PUFA, dan hampir
50% dari berat membran neuronal.69
Gambar 2.4. Neuroprostanes: metabolit lipid berasal dari docosahexaenoic acid.66
Mengingat tingginya konsentrasi DHA dalam jaringan saraf, kuantifikasi senyawa seperti
isoprostana berasal dari DHA, Roberts66 et al. Disebut neuroprostanes (GAMBAR 2.4),
memberikan biomarker unik dari stres oksidatif di sistem syaraf pusat. Sementara
neuroprostanes, seperti metabolit lipid lainnya, diyakini untuk memainkan peran aktif dalam
tubuh manusia, aktivitas biologis dari berbagai regio isomer neuroprostane belum dijelaskan.

Nomenclature/Tata nama

Penemuan isoprostane menciptakan kebutuhan yang mendesak untuk ringkas nomenklatur


metabolit lipid. Dua sistem secara bersamaan dirancang oleh Rokach et al.71,72 pada tahun 1996
(kemudian direvisi pada tahun 1997), dan oleh Taber, Morrow, dan Roberts73 pada tahun 1997.
Sebuah fitur yang berguna dari nomenklatur Rokach adalah bahwa jalur formasi dari metabolit
dikodekan dalam nama oleh angka romawi. Namun, sistem Taber / Roberts lebih mudah, dan
disetujui oleh IUPAC; jadi itu akan digunakan di seluruh tesis ini.

Dalam sistem nomenklatur Taber / Roberts, angka pertama menunjukkan posisi dari alkohol
alilik pada rantai samping, dengan C1 menjadi kelompok karboksil (GAMBAR 2.4).Huruf
kapital menunjukkan tingkat metabolit lipid dan / atau lokasi oksidasi, yang ditunjukkan dalam
GAMBAR 2.5.
Gambar 2.5. Klasifikasi sesuai tingkat dan lokasi oksidasi.

Untuk lebih menjelaskan sistem nomenklatur Taber / Roberts, GAMBAR 2.6 mengilustrasikan
lengkap, perpustakaan 20-F4-neuroprostane stereodefined.

Gambar 2.6. Memprediksi isomer 20-F4-neuroprostane.

Angka langganan (4, dalam hal ini) menunjukkan jumlah total karbon-karbon ikatan ganda
dalam molekul dan huruf kecil subscript menandakan hubungan antara diol syn-1,3 dan rantai
alkil syn-1,2 baik sebagai trans (t) atau cis (c). Konfigurasi default ditampilkan sebagai 20-F4t-
neuroprostane dan 20-F4c neuroprostan. Pembalikan alkohol alilikil dilambangkan dengan
awalan “karbon number-epi- ”sementara enansiomer struktur default ditugaskan" ent- "sebagai
awalan.
Hubungan Syn dari rantai alkil

Dengan tidak adanya enzim, peroksidasi lipid radikal bebas diinduksi beroperasi dengan
selektivitas tinggi terhadap pembentukan produk yang mengandung rantai alkil syn (seperti yang
diperkirakan untuk 20-F4-neuroprolana ditunjukkan pada GAMBAR 2.6). Porter dan Funk74
dulu mengamati fenomena ini sambil mereaksikan metil "-linolenate dengan oksigen dalam
benzena tetapi konfigurasi senyawa ini tidak ditetapkan dengan tegas. O’Connor et al.75
kemudian menyelidiki perilaku siklisasi asam hidroperoksida linolenat setelahnya reaksi dengan
oksigen dalam karbon tetraklorida untuk mengidentifikasi secara pasti syn preferensial
diastereoselectivity rantai alkil (GAMBAR 2,7).

Gambar 2.7. Hubungan Syn yang disukai dari rantai alkil yang diamati dalam peroksidasi
lipid.

Stereokimia relatif untuk endoperoxides bisiklik didirikan dengan reduksi ke triols yang sesuai
dan menghubungkan spektra 1H dan 13C NMR ke preseden literatur.76

Beckwith dan Schiesser77 menggunakan perhitungan medan gaya untuk memeriksa cis dialkil
selektivitas diamati untuk 5-exo-trig cyclizations dari radikal 5-hexenyl tersubstitusi. Spellmeyer
dan Houk78 memperluas studi teoritis ini dengan masuknya struktur transisi yang digunakan
untuk memprediksi regio- dan stereoselektivitas radikal siklisasi. Bersama-sama, kedua
kelompok merancang model negara transisi Beckwith-Houk digunakan untuk menjelaskan
pembentukan syn-1,2 dialkyl chains (GAMBAR 2.8).

Gambar 2.8. 20-F4-neuroprostanes: Beckwith-Houk menyukai geometri untuk 5-exo-


trigon siklisasi radikal.
Perlu dicatat bahwa kedua keadaan transisi menempatkan substituen alkil dalam bentuk semu
posisi khatulistiwa, kredit penulis sebagai sumber dari selektivitas syn-1,2. Juga, keadaan transisi
kursi-khatulistiwa mengarah ke hubungan cis antara syn-1,3 diol dan syn-1,2 dialkyl chains
sementara status transisi perahu-ekuator mengarah ke hubungan trans.

Penyakit Alzheimer dan neuroprostan

Penyakit Alzheimer (AD), bentuk paling umum dari demensia, tidak dapat disembuhkan,
gangguan neurodegeneratif progresif. AD mempengaruhi sekitar 20 juta orang di seluruh dunia
dengan tingkat insiden yang berlipat ganda setiap lima tahun di luar usia 65.79 Perkiraan
menyarankan prevalensi akan meningkat empat kali lipat pada tahun 2050, memperkirakan
bahwa 1 dari 85 orang di seluruh dunia akan hidup dengan penyakit ini.80 Diagnosis AD sering
tidak tepat: ahli saraf terutama menggunakan kriteria klinis yang membutuhkan gangguan
memori dan gangguan baik dalam fungsi sosial atau kegiatan kehidupan sehari-hari, didukung
oleh penyelidikan laboratorium dan analisis neuroimaging.81 Meskipun upaya luar biasa dalam
biomedis penelitian, diagnosis definitif sering hanya dicapai setelah pemeriksaan postmortem.
Dengan demikian, masih ada kebutuhan besar untuk mengidentifikasi biomarker neuropatologis
dari DA meningkatkan diagnosis dini serta menilai perkembangan penyakit dan tanggapan
pengobatan.

Beberapa penelitian telah melaporkan peningkatan stres oksidatif di daerah-daerah tertentu dari
otak pada pasien dengan AD.82,83 Morrow et al. mampu mendeteksi peningkatan level F4
neuroprostanes di jaringan otak dan cairan serebrospinal pasien yang menderita DA bila
dibandingkan dengan kontrol yang sesuai usia.66 Bahkan, tingkat F4-neuroprostane dalam pos
jaringan lobus temporal dari pasien AD adalah 2,1 kali lebih tinggi dari tingkat yang diamati
dalam jaringan kontrol. Upaya-upaya terbaru telah dilakukan untuk mensintesis standar internal,
seperti stereoscific isotope-dilabel neuroprostanes (GAMBAR 2.9), untuk secara akurat
mengukur tingkat neuroprostan yang dihasilkan di vivo.84,85

GAMBAR 2.9. Sintesis jaringan Neuroprostanes.84,85


Biosintesis dari Neuroprostanes
Neuroprostanes terbentuk non-enzimatik in vivo dengan serangan oksidatif
membebaskan ROS pada DHA. Meskipun mekanisme oksidasi DHA lebih kompleks daripada
asam arachidonic, mekanisme radikal bebas yang sama dapat diterapkan untuk memprediksi
regioisomer neuroprostana kelimpahan relative mereka86. Gambar 2.10 mengilistrasikan dua
mekanisme yang diusukan untuk pembentukan 20-F4-neuroprostane.

Mekanisme endoperoksida yang dipicu oleh atom hydrogen pada C18 yang berfungsi
untuk memberikan resonasi yang stabil secara stabil radikal allylic ganda. Oksigen molekuler
menambahkan pada posisi c16 untuk membentuk radikal peroksi yang mengalami 5-exo-trigon
berturut-turutsiklisasi diikuti dengan menjebak molekul oksigen kain untuk memberikan bisiklik
peroksida. Enxim reductase mengurangi peroksida untuk memberikan allylic alcohol pada
akhirnya pada produk akhir.
Mekanisme dioksiltane juga dimulai dengan atom-atom hydrogen pada c18 posisi DHA
namun O2 menambahkan dari ujung berlawanan dari resonasi pentahexyl yang stabil (posisi
C20). Sebuah siklisasi 4-exo-trigonum selanjutnya membentuk 1,2-dioxetane seperti
intermediate, yang terperangkap oleh molekul oksigen tambahan untuk membentuk peroksida
yang radikal. Dua siklisasi 5-exo-trigon bertutut-turut diikuti dengan pembukaan dioxentane 20-
F4-neuroprostane.
Corey dan wang87 pertama kali mengusulkan mekanisme dioxentane untuk biosintesis
isoiane, setelah melewati produk sampingan yang tak terduga saat menganalisis sistesis
biomimetika dari progstaglandins. Rokach et al88. Membuat mekanisme dioksiltane sebagai
alternative yang layak untuk menjelaskan pembentukan berbagai resimen isoiisomer. Akan
tetapi, morrow dan porter89 menunjukan bahwa hanya endoperoxode yang beroprasi setelah
mereka menganalisis kiralitas produk isoprostan yang terbentuk dari radikal peroksil optik
murni. Karena peroksidasi yang diinduksi oleh ROS bersifat kimia dan non-enzimatik,
mekanisme biologis terus menjadi topik perdebatan.
Menurut mekanisme endoperoksida, delapan kemungkinan neuroprostana regioisometrik
( Gambar 2.11) dapat dibentuk dari 5 bis yang berbeda (C6, C9, C12, C15, C18) pada DNA.
Penting untuk dicatat bahwa abstraksi atom hidrogen pada posisi C9, C12, atau C15 DHA
mengarah pada seri neuroprostane seri 7/11, 10/14-series, atau 13/17-series, masing-masing.
Masing-masing radikal pentadienyl ini akhirnya mengarah ke dua yang berbeda regioisomer
neuroprostana. Namun, abstraksi hidrogen pada posisi C6 atau C18 masing-masing mengarah ke
seri-4 atau 20-seri. Morrow dan perusahaannya berpendapat bahwa hanya satu, lawan dua,
regioisomer neoprostane dihasilkan karena radikal prekursor yang mengarah ke dua
neuroprostane seri 4 dan 20 ini tidak dapat dilanjutkan siklisasi untuk membentuk zat antara 1,2-
dioxolane. Jadi, baik seri 4 dan 20 seri neuroprostanes dihasilkan dalam jumlah yang lebih besar
dibandingkan dengan regioisomer lainnya. Analisis jumlah neuroprostan yang terbentuk baik in
vivo dan in vitro mendukung hipotesis bahwa 4-series dan 20-series pada kenyataannya istimewa
dihasilkan86.

Kesimpulan

Penelitian selama dua dekade terakhir menunjukkan bahwa PUFA dalam jaringan otak
sangat tinggi rentan terhadap kerusakan oksidatif oleh ROS endogen. Produk peroksidasi lipid,
seperti sebagai neuroprostanes, adalah biomarker yang peka terhadap stress oksidatif dan percaya
untuk memainkannya peran aktif dalam tubuh manusia. Sebagaimana prevalensi
neurodegenerative yang berkaitan dengan gangguan usia yang terus meningkat, kuantifikasi
neuroprostan yang ditemukan in vivo dapat memberikan dokter metode yang tepat untuk
diagnosis dini, perkembangan penyakit, dan pengobatan lanjutan.

Bab 3: Sintesis Total Pertama 20-F4t-Neuroprostane

Penemuan regioselectivity dalam pembentukan neuroprostanes memungkinkan studi


biologi untuk fokus pada isomer yang paling banyak dihasilkan (4-series dan 20-seri) untuk
menentukan peran mereka dalam proses patofisiologis yang terkait dengan DHA peroksidasi dan
stres oksidatif. Sintesis kimia dari neuroprostanes sangat penting untuk menjelaskan aktivitas
biologis dan peran fungsional dari metabolit lemak. Karena 20-seri belum pernah disintesis
sebelumnya dan menjadi menarik bagi para ahli kimia sintetis, kami memutuskan untuk
memfokuskan upaya kami pada enantioselective sintesis total 20-F4t-neuroprostane. Sintesis
kimia masa lalu dari neuroprostanes Pada tahun 2000, Durand dkk. 90 menyelesaikan sintesis
total neuroprostana pertama di 18 langkah-langkah (GAMBAR 3.1). Pendekatan mereka dimulai
dengan mengakses siklopentana yang dilindungi silil inti dari diacetone-D-glukosa dalam 9
langkah.

Kedua sisi rantai ditambahkan ke dalam inti cyclopentane melalui penggunaan “wittig
olefination (modifikasi Horner-Wadswordth-Emmons menghasilkan E-alkena)
Bab 3: Sintesis Total Pertama20-F4t Neuroprostane
Penemuan regioselectivitas dalam pembentukan neuroprostanes memungkinkan
studi biologi untuk fokus pada isomer yang dihasilkan paling banyak (4-series dan 20-
series) untuk menentukan peran mereka dalam proses patofisiologis yang terkait Dengan DHA
peroksidasi dan stres oksidatif. Sintesis kimia dari neuroprostanes penting untuk sepenuhnya
menjelaskan aktivitas biologis dan peran fungsional dari metabolit lipid ini. Karena seri-20
belum pernah disintesis sebelumnya dan menarik tantangan bagi ahli kimia sintetis, kami
memutuskan untuk memfokuskan upaya kami pada sintesis enantioselektif total 20-F4t
neuroprostane.

Sintesis kimia dari neuroprostanes


Pada tahun 2000, Durand et al.90 menyelesaikan sintesis total neuroprostana pertama dalam 18
langkah (GAMBAR 3.1). Pendekatan mereka dimulai dengan mengakses cyclopentane yang
dilindungi silil inti dari diaceton-D-glukosa dalam 9 langkah.

Gambar 3.1. Sintesis total 4 (RS) -F4t-neuroprostane methyl ester.


Kedua rantai samping ditambahkan ke inti siklopentana melalui penggunaan Wittig Olefinations
(modifikasi Horner-Wadsworth-Emmons menghasilkan E-alkena). Durand dan perusahaan91
kemudian menerapkan pendekatan yang sama dengan memvariasikan reagen Wittig mereka
untuk mensintesis 4-F3t-neuroprostane dan 4-epimer-nya (GAMBAR 3.2) dalam 17 langkah.
Kedua diastereomer neuroprostan akhirnya dipisahkan pada akhir sintesis mereka dengan
kolom kromatografi (sekitar 30% fraksi campuran).

Gambar 3.2. 4-F3t-neuroprostane dan 4-epimer-nya.


Baru-baru ini, Durand dan Galano85 mensintesis sebuah berlabel deuterium 4-F4t-neuroprostane
dalam 20 langkah. Cincin siklopentana inti diakses mulai dari 1,3-siklooktadiena
dan lagi rantai samping yang mengandung E-olefin didirikan menggunakan reagen Horner
-Wadsworth-Emmons. Reaksi selanjutnya dengan pereaksi Wittig yang tidak distabilkan
memberikan rantai samping vinil yang dilewati, yang direduksi secara selektif (cis deuterated)
oleh katalis brown. 92

Gambar 3.3. Dilewati pendekatan diyne untuk neuroprostane bertanda massa.


Katalis Brown92 berbasis nikel terbukti mampu menyelesaikan semi-stereoselektif deuterasi dari
dial-sonom yang dilompati secara lebih efektif daripada beberapa metode lain, seperti
katalis Lindlar.
Pada tahun 2002, Quan dan Cha93 menerbitkan sintesis 19-langkah 17-F4c-neuroprostane
sebagaimana dirangkum dalam GAMBAR 3.4.

Gambar 3.4. Pendekatan Cha terhadap sintesis total 17-F4c-neuroprostane.


Langkah kunci dalam pendekatan mereka dimanfaatkan intramolekul paladium-katalis yang
melibatkan Pd (OAc)2, dppp, Et3N, dan H2O di DMF pada 80 ° C untuk menghasilkan
produk bisiklik yield 55%. Diena yang dilewati melalui tahap akhir reaksi Wittig, yang, setelah
deproteksi, menyelesaikan sintesis pertama17-seri neuroprostana.
Dalam laporan 2007, Taber et al.94 disintesis keempat enansiomer murni 13-F4t-
neuroprostanes di 21 setiap langkah. Para penulis mengusulkan bahwa strategi sintetis mereka
dapat mudah disesuaikan dengan 13-F4c-neuroprostanes (seri cis) juga. Seperti yang
diilustrasikan dalam Gambar 3.5, stereokimia cis-dialkil dari siklopentana dibentuk
menggunakan reaksi Aler ene termediasi-termal.
Gambar 3.5. Taber 21 langkah rute sintetis neuroprostane seri 13 trans.
Langkah penting lainnya melibatkan reaksi penggandengan silang Sonogashira antara terminal
Alkuna dan alkil bromida. Reduksi selanjutnya dengan berbasis nikel Brown katalis, 92
deproteksi, dan saponifikasi berhasil menghasilkan 13-F4t-neuroprostane. Pemisahan
diastereomer sepanjang rute sintetis mereka memungkinkan tiga trans lainnya Stereoisomer
disintesis dengan kemurnian enansiomerik yang tinggi.
Juga pada tahun 2007, Zanoni dan Vidari95 menggambarkan pendekatan enansio selektif
pertama untuk sintesis cyclopentenone, atau A-ring, neuroprostanes. Mereka melaporkan 14
tahap sintesis konvergen 14-A4t-neuroprostane (dirangkum dalam GAMBAR 3.6).

Gambar 3.6 . Sintesis Zanoni dan Vidari yang konvergen dari 14-A4t-neuroprostane.
Strategi sintetis mereka menampilkan olefination Julia-Kocienki untuk memasang rantai
samping yang mengandung alkohol allylic. Selanjutnya, tahap akhir Olefinasi Wittig dan
beberapa manipulasi kelompok fungsi dilakukan untuk melengkapi 14-A4t-neuroprostane yang
Diinginkan.
Sintesis isoprostana sebelumnya dari Snapper Lab
Research di laboratorium Snapper telah menunjukkan bahwa cyclobutenes yang difungsikan
merupakan yang prekursor sangat serbaguna dan berguna untuk sintesis berorientasi target.
Sebagai bagian dari upaya di bidang ini, Schrader dan Snapper96 menyelesaikan sintesis
stereodivergent dari semua delapan isomer dari 15-F2-isoprostanes (SCHEME 3.1). Kunci
cyclobutenes 3.02 dan 3.03 disintesis dari [2 + 2] photocycloaddition antara cyclopentenone 3.01
dan acetylene. Ring-opening cross-metathesis (ROCM), dipromosikan oleh kedua Grubbs
katalis generasi, dari cyclobutenes 3.02 dan 3.03 dengan kelebihan oct-1-ene-3-ol memberikan
campuran diastereomer dan isomer olefin.

Skema 3.1. Stereodiver sintesis dari semua delapan 15-F isomer-isoprostana.


Stereoisomer ini kemudian diselesaikan untuk menghasilkan rasemik enon 3.04 dan 3.05.
Pengurangan asimetrik berikutnya dan pemisahan diastereomer menyebabkan sintesis empat cis
dan empat trans 15-F2-isoprostane diperkaya secara enansiomerik. Sintesis 15-langkah
(terpanjang urutan linier) ditandai pendekatan stereodivergent pertama yang semua delapan
isomer dari setiap kelas regiochemical dari isoprostane.
Untuk masing-masing delapan 15-F2-isoprostane isomer, platelet darah agregasi seluruh Tes
penghambatan dilakukan untuk mendapatkan pemahaman yang lebih baik tentang Aktivitas
biologis mereka.Hanya dua dari delapan isomer menunjukkan penghambatan darah lengkap
agregasi trombosit dan, pada konsentrasi yang lebih rendah, ent-15-epi-F2t-isoprostane secara
signifikan lebih aktif daripada inhibitor yang dikenal 15-F2t-isoprostane (GAMBAR 3.7) .97

Gambar 3.7. Hasil dari uji penghambatan agregasi platelet darah keseluruhan dari
15-F2-isoprostanes.

Kegiatan antiaggregatory baru ini ditemukan oleh studi biologi awal terinspirasi Shizuka dan
Snapper98 untuk memodifikasi rute ke 15-F2-isoprostanes untuk selektif mensintesis ent-15-epi-
F2t-isoprostane dan D4-labeled analog (SKEMA 3.2 ).
Skema-isoprostane 3.2. Selektif sintesis biologis aktif dari 15-F2 isomer dan turunan
tetradeuterated.
Keseluruhan sintesis selektif 14-langkah mereka dimulai dengan desymmetrization enzimatik
meso-diol 3.06 diikuti oleh manipulasi kelompok fungsional untuk menghasilkan enoneomer
murni enone 3.01. Fotokimia fotokimia [2 + 2] antara siklopentenon 3,01 dan acetylene
membentuk sikluten difungsional yang direduksi secara selektif dengan DIBAL-H untuk
menghasilkan 1,3-diol 3,07 yang terlindungi oleh mono. ROCM di bawah atmosfir ethylene
menghasilkan senyawa divinyl 3.08. Dengan menggunakan ok -1-en-3-one atau turunan
tetradeuterated sebagai pasangan silang, enones 3.09 dan 3.10 dilengkapi oleh katalis silang-
dikatalisis ruthenium (CM). Beberapa langkah-langkah tambahan yang diperlukan untuk
menginstal kedua sisi-rantai dan menyelesaikan sintesis selektif ent-15-epi-F2t-isoprostane dan
yang D4-labeled analog.
Dengan kedua senyawa di tangan, studi biologi kemudian dilakukan untuk menentukan apakah
15-F2-isoprostan tertentu diproduksi pada manusia selama stres oksidatif. Isomer isoprostana
yang terkontrasisasi digunakan sebagai standar internal dalam alat tes GC / MS untuk
mendeteksi isoprostan pada urin manusia. Data dari penelitian ini pada akhirnya menyarankan
bahwa ent-15-epi-F2t-isoprostane, atau enansiomer yang, sebenarnya diproduksi in vivo.99
Lawson dan coworkers100 telah membuktikan bahwa 5-F2-isoprostanes yang paling banyak F2-
isoprostane ditemukan dalam urin manusia. Hal Ini, bersama dengan sintesis stereodivergent
dari15-F2 sebelumnya, mendorong Pandya dan Snapper101 untuk mengembangkan strategi yang
dimodifikasi untuk menyiapkan semua delapan 5-F2-isoprostane. Seperti yang digambarkan
dalam Skema 3.3, pendekatan mereka menampilkan ROCM tunggal cyclobutenes 3.12 dan 3.07
dengan ethylene diikuti oleh CM dengan metil 5-oxohept-6-enoate untuk menghasilkan produk
mono-lintas masing-masing 3.13 dan 3.14,.
Skema rute sintetis ke perpustakaan stereodiverse 5-F2-isoprostane
Setelah beberapa langkah tambahan, termasuk strategi pengurangan / resolusi selektif untuk
menghasilkan stereoisomer yang diperkaya secara enansiomer dan Protokol oksidasi / olefinasi
untuk memperkenalkan rantai samping alifatik, semua delapan 5-F2-isoprostane regio isomer
masing-masing disintesis dalam sepuluh langkah (linear terpanjang) dari 4-hidroksi-2-
siklopentenon yang tersedia secara komersial (3,11).
Analisis retrosintetik
Terinspirasi oleh keberhasilan sintesis lab kami dari isoprostane, kami memutuskan untuk
menyesuaikan strategi ini untuk mensintesis 20-F4t-neuroprostane secara enantioselektif.
GAMBAR 3.8 mengilustrasikan analisis retrosintetik kami dari 20-F4t-neuroprostane.

Gambar 3.8. Analisis retrosintetik dari 20-F4t-neuroprostane.

Kami membayangkan bahwa rantai samping triena yang dilewati dapat dipasang oleh Olefinasi
Wittig dan bahwa inti siklopentana dapat diakses melalui rute ROCM / CM yang dimodifikasi
menggunakan etil vinil keton sebagai pasangan silang. Mengadopsi pengurangan / resolusi yang
serupa protokol dapat memungkinkan untuk persiapan produk yang diperkaya enansiomer.
Strategi sintetik ini berpotensi menawarkan rute yang ringkas dan stereodiver ke semua delapan
20-F4-neuroprostanes (GAMBAR 2.6).
Kami kemudian menyusun olefinasi ganda-asimetris sebagai langkah kunci yang mungkin dari
sintesis kami (GAMBAR 3.9). Persiapan satu pot dari dilewati diena yang melalui penggunaan
bis (fosfonium) garam pertama kali dilaporkan102 oleh Wittig sendiri pada tahun 1958. Bestmann
et al. memodifikasi strategi ini untuk mensintesis disimetrik bis (alkena) feromon Lepidoptera
dengan menggunakan dua aldehida yang berbeda.103

Gambar 3.9. Langkah kunci yang diajukan: asymmetric single-pot, double-Wittig


olefination.
Kami merancang strategi yang dimodifikasi untuk menyiapkan metilena melewatkan triena
melalui satu-alkenilasi ganda,pot yang melibatkan aldehida yang sangat sensitif,%-tak jenuh.

Sintesis total 20-F4t-neuroprostane


Seperti yang digunakan dalam persiapan15-F2-isoprostan, sintesis total kami mulai dengan
mengakses yang difungsikan 3,16 dalam empat langkah dari furfuryl alcohol (3,15). Prosedur
yang dikenal ini104,96 (SCHEME 3.4) secara teknis sederhana dan membutuhkan bahan awal yang
murah, yang memungkinkan untuk persiapan mudah multi-gram kuantitascyclobutene 3.16

Skema 3.4. Sintesis empat langkah dari cyclobutene 3.16.104,96

Seperti digambarkan di SKEMA 3.5, divinil antara 3,18 dihasilkan oleh ROCM dari 3.16 di
benzena menggunakan katalis generasi 1 Grubbs' (3.17) di bawah etilen atmosphere.98

Skema 3.5. Persiapan divinyl intermediate 3.18 oleh ROCM.


Pengenceran (0,1 M) diperlukan untuk menghindari polimerisasi metatesis pembukaan cincin
(ROMP) dari bahan awal (3,16).
Menggunakan katalis generasi ke-2 Hovedya-Grubbs (3.19), senyawa divinil 3.18
menjalani CM dengan keton etil vinil dalam CH2Cl2 pada suhu kamar (SKEMA 3.6).

Skema 3.6. Protokol lintas-metatesis untuk sintesis enone 3.20.

Kondisi reaksi ini menghasilkan produk mono-CM yang diinginkan 3,20 dalam tinggi Regio
selektivitas (tidak ada produk mono-CM yang tidak diinginkan terbentuk) sementara hanya jejak
Jumlah dari produk CM ganda yang diamati. Lebih lanjut, dalam enon diinginkan produk yang
diperoleh secara eksklusif sebagai E-stereoisomer tanpa pembentukan Z-alkena. Regio
selektivitas tinggi dikaitkan dengan kemungkinan koordinasi antara katalis ruthenium 3.19 dan
gugus hidroksil bebas pada cincin siklopentana (3.18). Mungkin halangan sterik dari kelompok
pelindung TBS juga mempengaruhi selektivitas CM.99
Penting untuk dicatat bahwa kami memilih untuk menggunakan prosedur ROCM / CM dua
langkah daripada mencoba ROCM 3.16 dengan keton etil vinil secara langsung. Shizuka dan
Snapper98 menemukan ROCM cyclobutene 3.16 dengan oct-1-en-3-one menggunakan katalis
generasi ke-2 Hovedya-Grubbs (3.19) gagal; mereka terutama mengamati ROMP cyclobutene
3.16. Selanjutnya, menggantikan katalis generasi 1 Grubbs (3,17) memberikan hanya bahan awal
yang tidak bereaksi. Mengingat preseden 99 bahwa kedua metatheses dilakukan secara optimal di
bawah kondisi reaksi yang berbeda, kami memutuskan untuk melakukan transformasi dalam dua
langkah.

Skema 3.7. Reduksi asimetrik (±) -3,20 menyebabkan pemisahan diastereomer.


Selanjutnya dalam sintesis kami, seperti yang ditunjukkan dalam SCHEME 3.7, perlindungan
TBS dari enone (±) -3,20 diikuti oleh reduksi katalitik asimetris menggunakan (R) - (+) - 2-
metil-CBS-oxazaborolidine katalis (3,21) dan catecholborane dalam toluena memberi sepasang
diastereomer. Setelah pemisahan diastereomer menggunakan Ag + kromatografi silika gel yang
diresapi, alkohol alillik yang diperkaya enansiomerik yang diinginkan 3,22 diperoleh
dengan hasil tinggi.
allylic alkohol 3.22 menjalani lain TBS-perlindungan untuk mempersiapkan hidroborasi
selektif dari olefin yang disubstitusi mono dengan 9-BBN diikuti oleh oksidatif kerja untuk
memberikan alkohol primer 3,23 (diuraikan dalam SKEMA 3,8).

Skema 3.8. Sintesis aldehid 3.24: Wittig prekursor olefinisasi.


Oksidasi selanjutnya dengan Dess-Martin periodinane (DMP) menghasilkan aldehid 3.24 dan
menyelesaikan sintesis prekursor Wittig olefination utama kami.
Kami kemudian memfokuskan perhatian kami pada persiapan sangat sensitif,% -
aldehida yangtak jenuh yang disebut dalam GAMBAR 3.9. Untuk mencapai tujuan ini, kami
membayangkan oksidasi alkohol homoallik 3,26, yang disiapkan dari 3-butin-1-ol (3,25) dengan
prosedur yang dikenal dalam enam langkah (Skema 3.9) .105

Skema 3.9. Sintesis enam langkah alkohol homoallik 3.26.105


Kami menemukan bahwa Dess-Martin periodinane secara efisien mengoksidasi alkohol utama
3.26 ke aldehida β,γ tak-jenuh 3.27 (ditunjukkan dalam SKEMA 3.10). kondisi oksidasi Lainnya,
seperti oksidasi Swern dan TPAP / NMO, menghasilkan isomerisasi, "aldehida tak jenuh
daripada produk yang diinginkan.
Skema 3.10 Oksidasi DMP untuk mempersiapkan β,γ - aldehida tak jenuh 3.27
Langkah kunci dari sintesis kami melibatkan olefinasi tunggal-pot, dobel-Wittig untuk
menghasilkan tris (TBS-protected) neuroprostane methyl ester 3.30 (diilustrasikan dalam
SCHEME 3.11) Pendekatan Wittig dissymmetric double kami dimulai dengan deprotonasi bis
komersial (garam fosfonium) 3,28 dengan satu ekuivalen n-BuLi pada -78° C. Kami berasumsi
bahwa, pada suhu rendah, campuran statistik dari mono- ylide yang diinginkan dan bis yang
tidak diinginkan (ylide) harus dibentuk, dengan membiarkan campuran reaksi menghangatkan
suhu kamar dan diaduk untuk waktu tambahan, kita mengira bis (ylide) diubah menjadi mono-
lide dengan bereaksi dengan sisa bis (garam fosfonium) 3.28 Larutan mono-lide didinginkan
kembali sebelum aldehida 3,24 ditambahkan dan dibiarkan mengaduk selama 9 jam. Teknik ini
diulangi untuk olefinasi Wittig kedua yang melibatkan aldehid 3.27 untuk melengkapi tris (TBS-
dilindungi) neuroprostane methyl ester 3.30 dalam keseluruhan 35% hasil dari 3.28 (sebanding
dengan hasil dari olefinations ganda-Wittig yang serupa106,107).

Skema 3.11. Reaksi Double Wittig untuk menghasilkan tris (TBS-protected) neuroprostane
methyl ester (3.30).

Deproteksi yang dimediasi fluorida dari ketiga kelompok silil dan saponifikasi metil ester
menghasilkan 20-F4t-neuroprostane yang diinginkan dan secara efektif menyelesaikan sintesis
total pertama dari setiap 20-seri neuroprostane (digambarkan dalam SCHEME 3.12).
Skema 3.12. Penyempurnaan 20-F4t-neuroprostane.

Kesimpulan
Singkatnya, kami mencapai sintesis total pertama 20-F4t-neuroprostane melalui modifikasi
urutan ROCM / CM dan olefinasi Wittig ganda asimetris tunggal. Protokol 13 langkah yang
dimulai dari furfuril alkohol ini dapat disesuaikan untuk menyiapkan semua delapan anggota
famili 20-F4-neuroprostane secara enansiomerik yang diperkaya. Terakhir, sintesis total kami
mengilustrasikan sifat yang sangat efektif dan mudah beradaptasi dari rute Snapper Lab menuju
persiapan berbagai metabolit lipid.

Percobaan

Informasi Umum

Bahan awal dan reagen dibeli dari pemasok komersial dan digunakan tanpa pemurnian lebih
lanjut kecuali dinyatakan lain. Dichloromethane, dietil eter, benzena, dan toluena dikeringkan
pada kolom alumina menggunakan sistem pelarutan pelarut. Tetrahidrofuran disuling di atas
logam natrium / benzofenon, dan metanol adalah suling atas magnesium metoksida. Hexanes
disuling melalui kalsium hidrida.

Semua reaksi dilakukan di oven (150 0c, > 4 h) atau glass-dried Yang dikeringkan di bawah
atmosfer senyawa kering. Udara/kelembaban sensitif terhadap reagen Yang diambil dari diambil
di glovebox atau diambil oleh syringe Dan ditambahkan ke dalam reaksi flasks melalui karet
septa. Semua reaksi Yang diperbolehkan untuk melaju dengan teflon Yang menutupi barkeep.
Pelarut konsentrasi atau penghapusan pada vakum kemudian dicapai dengan menggunakan alat
Yang evaporator buchi. Kolom kolom kromatografi dilakukan menggunakan 60 a silica gel (230-
400 mesh astm). Phosphomolybdic asam Dan cerium ammonium molybtanggal digunakan
sebagai agen penelitian untuk TLC1.

Spektrum H NMR diukur pada instrumen Varian Gemini-500 (500 MHz). Pergeseran kimia
dilaporkan dalam ppm downfield dari tetramethylsilane dengan pelarut referensi sebagai standar
internal (CHCl3: & 7,26 ppm atau CD3OD: & 3,34 ppm). Data adalah dilaporkan sebagai
berikut: pergeseran kimia, integrasi, multiplisitas (s = singlet, d = doublet, t = triplet, q = quartet,
qt = quintet, dt = doublet triplet, m = multiplet, br = luas), konstanta kopling (Hz)13.

Spektrum C NMR dicatat pada instrumen Varian Gemini-500 (125 MHz) dengan decoupling
proton lengkap. Pergeseran kimia dilaporkan dalam ppm downfield dari tetramethylsilane
dengan referensi pelarut sebagai standar internal (CHCl3: & 77,23 ppm atau CD3OD: & 49,86
ppm).

Spektrum inframerah (FTIR) diukur pada Mattson Galaxy Series FTIR 5000 dan dilaporkan
dalam bilangan gelombang (cm-1). Band dicirikan sebagai luas (br), kuat (s), sedang (m), atau
lemah (w).

Spektrometri massa resolusi tinggi (HRMS) dilakukan oleh Marek Domin di Pusat
Spektrometri Massa di Boston College.

Prosedur Eksperimen
Dalam labu roundbottom 100 mL dengan pengaduk, senyawa divinil (±) -3.18 (864 mg,

3,22 mmol) dan etil vinil keton (0,320 mL, 3,22 mmol) dilarutkan dalam CH2Cl2 (32,2 mL).
Katalis generasi kedua Hoveyda-Grubbs (101 mg, 0,161 mmol) adalah ditambahkan dan
campuran reaksi hijau dibiarkan mengaduk di bawah atmosfer nitrogen pada suhu kamar selama
3 jam. Etil vinil eter (4,0 mL) ditambahkan dan diaduk selama 5 menit. Gel silika (4,0 g)
kemudian ditambahkan, dan campuran hitam dibiarkan tercampur selama 15 menit. Pelarut
dihilangkan dalam vakum, dan residunya dimurnikan dengan silika gel kromatografi (Heksana:
EtOAc, 6: 1) untuk membeli (±) -3,20 sebagai minyak coklat muda (471 mg, 1,45 mmol, hasil
45%). 1 H NMR (CDCl3, 500 MHz): & 6.67 (1H, dd, J = 15.8, 9.3 Hz), 6.18 (1H, dd, J = 16.0,
1.0 Hz), 5.52-5.44 (1H, m), 5.07-5.03 (2H, m), 4.12-4.09 (1H, m), 4,07-4,04 (1H, m), 3,01-2,97
(1H, m), 2,85-2,82 (1H, m), 2,55-2,51 (2H, m), 2,41-2,36 (2H, m), 1,72 (1H, dt, J = 14,5, 3 Hz),
1,07 (3H, t, J = 7,3 Hz), 0,87 (9H, s), 0,04 (6H, s).

13C NMR (CDCl3, 125 MHz): & 200,9, 145,4, 136,0, 131,0, 117,6, 76,9, 75,7, 56,6, 53,6, 43,4,
33,7, 25,9, 18,0, 8,1, -4,6, -4,7. IR (film tipis, KBr): 3492 (b), 2957 (s), 2884 (s), 2863 (s), 1669
(m), 1627 (m) cm-1 HRMS (ESI+): calcd untuk C18H33O3Si [M + H]: 325.2199, ditemukan:
325.2203.
Dalam 25 ml [5 ml] dari flask, Dan dengan bahan dasar laut, ditempatkan di bawah air
nitrogen Dan membuat sequentially dengan alkohol (c.) 320 (561 mg, 1.73 mmol), ch2cl2 (6.9
ml), triethylamine (1.21 ml, 8.65 mmol), TBSCL (522 mg, 3.46 mmol), Dan dfolder (106 mg,
0.87 mmol). Campuran reaksi kuning memungkinkan untuk mendorong suhu di suhu di bawah
n2 (monitored oleh TLC). Setelah 18 jam, campuran reaksi dikalkan dengan ch2cl2 (50 ml) Dan
hilang dengan 1 m HCL (50 ml) kemudian brine (50 ml). Fase akuatik diekstraksi dengan ch2cl2
Dan gabungan lapisan organik Yang dikeringkan atas mgso4, disdisasi, terkonsentrasi di vakum,
dan dimurnikan dengan kromatografi silika gel (heksana: etil asetat, 20: 1) untuk memperoleh
enon bis (yang dilindungi TBS) (699 mg, 1,59 mmol, 92% hasil) sebagai minyak jernih. Labu
roundbottom 25 mL yang dikeringkan dengan api stir bar dilengkapi dengan septum, dibersihkan
dengan nitrogen, dan diisi dengan bis (TBS - protected) enone (699 mg, 1,59 mmol) dan toluene
(6,3 mL) kemudian dibiarkan mengaduk. Itu larutan tak berwarna didinginkan hingga -78 ° C
dan (R) - (+) - 2-methyl-CBS-oxazaborolidine katalis (1 M dalam toluena, 796 µL, 0,796 mmol)
ditambahkan diikuti oleh penambahan tetes demi tetes catecholborane (1,53 g larutan 50% b / b
dalam toluena, 6,37 mmol). Campuran reaksi kuning yang memungkinkan untuk mengangkut -
780c selama 18 jam. Methanol (2.0 ml) ditambahkan untuk quench reaksi, Dan campuran itu
diizinkan untuk perlahan-lahan hangat pada 230c. Larutan Yang diiri dengan etyl acetate (50 ml)
Dan telah hilang sequensial dengan 1 m naoh (2 x 50 ml), 1 m HCL (1 x 50 ml), Dan brine (1 x
50 ml). Lapisan organik biasanya dikeringkan atas mgso4, disdisasi, terkonsentrasi, Dan murni
(pemisahan dari Yang dibintang) oleh ag + - doped silica gel kromatografi (10% agno3)
menggunakan hexanes:diethyl ether (5:1 untuk 3:1 untuk 0:1) sebagai eluen. Setelah konsentrasi
Dan filtration melalui sebuah pad pendek (1 cm) dari silika gel dengan diethyl eter, 332 mg
(0753 mmol, 95% yield berdasarkan bahan dasar bahan awal resemat) dari alkohol dari alilik 322
dapat ditemukan sebagai minyak kuning. H NMR (CDCl3, 500 MHz): & 5.62- 5,43 (3H, m),
5,06-5,04 (1H, m), 5,03-5,01 (1H, m), 3,99 (1H, q, J = 6,5 Hz), 3,95-3,90 (2H, m), 2.74-2.67
(2H, m), 2.36 (1H, dt, J = 13.5, 6.5 Hz), 1.62-1.50 (3H, m), 1.36 (1H, bs), 0,91 (3H, t, J = 7 Hz)
0,87 (18H, s), 0,018 (6H, s), 0,013 (3H, s), 0,005 (3H, s). 13C NMR (CDCl3, 125 MHz): &
137,6, 135,2, 130,8, 116,8, 76,2, 76,0, 74,5, 55,5, 53,6, 44,5, 30,3, 26,0, 18,3, 18,2, 9,9, -4,3, -
4,35, -4,4. IR (film tipis, KBr): 3347 (b), 3070 (w), 2956 (s), 2882 (s), 2863 (s), 1635 (w), 1471
(m), 1463 (m), 1255 (s), 1101 (b), 1064 (b), 836 (b) cm-1. HRMS (ESI+): calcd untuk
C24H49O3Si2 [M + H]: 441.3220, ditemukan: 441.3229.
dalam 25 ml [5 ml] dari flask, Dan dengan bahan dasar laut, ditempatkan di bawah air
nitrogen Dan membuat sequentially dengan alkohol 3,22 (156 mg, 0,354 mmol), CH2Cl2 (1,4
mL), trietilamina (0,25 mL, 1,77 mmol), TBSCl (107 mg, 0,780 mmol), dan DMAP (21,6 mg,
0,177 mmol). Campuran reaksi kuning dibiarkan mengaduk di kamar suhu di bawah N2
(dimonitor oleh TLC). Setelah 24 jam, campuran reaksi itu diencerkan dengan CH2Cl2 (10 mL)
dan dicuci dengan 1 M HCl (10 mL) kemudian air garam (10 mL). Fase berair diekstraksi
dengan CH2Cl2 dan lapisan organik gabungan dikeringkan diatas MgSO4, disaring, dipekatkan
dalam vakum, dan dimurnikan dengan silika gel kromatografi (heksana: etil asetat, 16: 1) untuk
memperoleh tris (TBS-dilindungi) diena 3.31(195 mg, 0,351 mmol, 99% hasil) sebagai minyak
bening1. H NMR (CDCl3, 500 MHz): & 5.64-5.57(1H, m), 5.46-5.34 (2H, m), 5.07-5.01 (2H,
m), 3.99-3.89 (3H, m), 2.73-2.65 (2H, m),

2,36 (1H, dt, J = 13,5, 6,5 Hz), 1,62-1,57 (1H, m), 1,51-1,44 (2H, m), 0,89 (9H, s), 0,88 (9H, s),
0,87 (9H, s), 0,86 (3H, t, J = 7,5 Hz), 0,042 (3H, s), 0,021 (9H, s), 0,017 (3H, s), 0,011 (3H, s).
13C NMR (CDCl3, 125 MHz): & 137,8, 135,8, 129,0, 116,7, 76,3, 76,1, 75.1, 55.4, 53.9, 44.6,
31.5, 26.2, 26.1, 18.5, 18.32, 18.27, 9.9, -4.0, -4.315, -4.322, -4.36, -4,38, -4,5. IR (film tipis,
KBr): 3024 (s), 2957 (b), 2928 (s), 2916 (s), 2885 (b), 2862 (b), 1634 (w), 1472 (m), 1463 (m),
1254 (s), 1097 (b), 1065 (b), 1006 (s), 837 (b), 778 (b) cm-1. HRMS (ESI+): calcd untuk
C30H63O3Si3 [M + H]: 555.4085, ditemukan: 555.4064.
Di dalam glovebox, satu tabung vial yang dikeringkan dengan oven dengan batang pengaduk
diisi dengan 9-borabicyclo [3.3.1] nonane dimer (145 mg, 0.595 mmol), dan THF kering /
degassed (1,2 mL). Botol itu disegel dengan septum karet, dikeluarkan dari glovebox, dan isinya
diizinkan untuk mengaduk. Setelah penambahan saluran masuk N2, suspensi didinginkan hingga
00C, dan diene 3,31 (150 mg, 0,270 mmol) ditambahkan. Setelah 5 menit, campuran reaksi itu
dibiarkan hangat hingga 220C dan diaduk selama 3 jam. Campuran reaksi dibuka ke udara dan
diencerkan dengan etil asetat (1,8 mL). Solusinya didinginkan hingga 00C dan diisiberturut-turut
dengan 3 M natrium hidroksida (0,64 mL) dan 30% hidrogen peroksida (0,53mL). Setelah 5
menit, campuran reaksi dibiarkan memanas sampai 220C dan diaduk untuk satu jam tambahan.
Campuran diekstraksi dengan etil asetat (3 x 5 mL), dan gabungan lapisan organik dicuci secara
berurutan dengan NaHCO3 berair jenuh (10 mL) dan air asin (10 mL), kemudian dikeringkan
(MgSO4), disaring, dan dipekatkan di bawah dan dikurangi tekanan. Pemurnian dengan
kromatografi silika gel (heksana: dietil eter, 7: 1 hingga 5: 1) diberikan 3,23 (151 mg, 0,263
mmol, hasil 98%) sebagai minyak yang tidak berwarna1. HRMS (ESI+): calcd for C30H64O4NaSi3
[M+Na]: 595.4005, found: 595.4022.

Dalam satu botol dram dengan pengaduk magnet disegel dengan septum, ditempatkan di bawah

N2, dan diisi dengan alkohol primer 3,23 (30,0 mg, 52,3 µmol) dan CH2Cl2 kering (296

µL). Solusi yang jelas diizinkan untuk mengaduk, didinginkan hingga 00C, dan Dess-Martin
Periodinane (0,30 M dalam CH2Cl2, 227 μL, 68,1 μmol) ditambahkan. Setelah 5 menit,
campuran reaksi dibiarkan hangat hingga 220C dan aduk selama 1,5 jam. Campuran lalu reaksi
didinginkan sampai 00C dan dicuci dengan larutan berair jenuh (600 µL) NaHCO3 / Na2S2O3
(1:1).Setelah dekantasi, lapisan berair dicuci dengan CH2Cl2 (3 x 5 mL). Gabungan lapisan
organik dikeringkan di atas MgSO4, disaring, dipekatkan dalam vakum, dan dimurnikan
kromatografi silika gel (heksana: Et2O, 9: 1) menghasilkan 3.24 murni sebagai minyak kuning
yang tebal (28,1 mg, 49,2 µmol, 94% hasil)1. H NMR (CDCl3, 500 MHz): & 9.74 (1H, t, J = 2.0
Hz), 5.44 (1H, dd, J = 15.5, 5.5 Hz), 5.25 (1H, ddd, J = 15.5, 9.5, 1.0 Hz), 3.99, 1H, dq, J= 6.0,
1.0 Hz), 3.90-3.87 (1H, m), 3.78 (1H, q, J = 8.0 Hz), 2.69-2.64 (2H, m), 2.38-2.30 (3H, m), 1.58-
1.53 (1H, m), 1.49-1.43 (2H, m), 0.89 (9H, s), 0.872 (9H, s), 0.870 (9H, s), 0,84 (3H, t, J = 7,5
Hz), 0,04 (3H, s), 0,03 (3H, s), 0,023 (3H, s), 0,018 (6H, s), 0,01 (3H,s). 13C NMR (CDCl3, 125
MHz): & 202,6, 136,7, 127,3, 76,4, 76,2, 74,2, 52,7, 44,3, 44,2, 43,9, 31,4, 26,1, 26,0, 18,5, 18,2,
18,1, 9,8, -3,8, -4,1, -4,2, -4,4, -4,47, -4,51, -4,7. IR (film tipis, KBr): 2957 (s), 2890 (s), 2863
(s), 2711 (w), 1729 (w), 1471 (m), 1463 (m), 1388 (w), 1362 (w), 1254 (s), 1090 (b), 1024 (w),
1007 (m), 836 (b), 779 (m) cm-1.HRMS (ESI+): calcd untuk C30H66NO4Si3 [M + NH4]:
588.42996, ditemukan 588.42976.

Homoallylic alcohol 3.26 disiapkan dalam enam langkah sesuai dengan literatur.105 1H NMR
(CDCl3, 500 MHz): & 5.55-5.43 (2H, m), 3.67 (3H, s), 3.65 (2H, t, J = 6.0 Hz), 2.32-2.24 (6H,
m), 1.68 (1H, bs). 13C NMR (CDCl3, 125 MHz): & 173,9, 130,9, 127,4, 62,3, 51,8, 34,0, 30,1,
22,9. IR (film tipis, KBr): 3424 (b), 3022 (m), 2983 (b), 2925 (m), 2910 (m), 2896 (m), 2877
(m), 1739 (s), 1656 (w), 1460 (b), 1371 (s), 1342 (b), 1268 (m), 1160 (b), 1113 (s), 984 (m), 951
(s), 675 (m) cm-1. HRMS (ESI+): calcd for C8H15O3 [M + H]: 159,1021, ditemukan 159,1024.

Dalam Satu botol dram dengan pengaduk magnet disegel dengan septum, ditempatkan di
bawah N2, dan diisi dengan alkohol homoallylic 3,26 (30,0 mg, 190 µmol) dan CH2Cl2 kering
(1,2

mL). Solusi yang jelas diizinkan untuk mengaduk, didinginkan hingga 00C, dan Dess-Martin
Periodinane (0,30 M dalam CH2Cl2, 760 µL, 228 μmol) ditambahkan. Setelah 5 menit, campuran
reaksi dibiarkan hangat sampai 220C dan aduk selama 1 jam. Campuran reaksi didinginkan
hingga 00C dan dicuci dengan larutan berair jenuh (3 mL) NaHCO3 / Na2S2O3 (1: 1). Setelah
dekantasi, lapisan berair dicuci dengan CH2Cl2 (3 x 5 mL). Gabungan lapisan organik
dikeringkan selama MgSO4 (2 menit), disaring, dan terkonsentrasi di bawah mengurangi
tekanan. Penambahan benzena anhidrat diikuti dengan pengangkatan dalam vakum memberi
kering 3.27 sebagai minyak kuning pucat, yang langsung ditambahkan ke larutan ylid pada
langkah berikutnya.

Untuk satu tabung vial oven-kering dengan aduk magnet di glovebox ditambahkan
trimethylenebis (triphenylphosphonium bromide) (42,0 mg, 57,9 µmol) dan THF (579 µL, 0,10
M). Botol itu disegel dengan septum, dikeluarkan dari glovebox, dan didinginkan-780C di
bawah aliran nitrogen positif, dan n-BuLi (1,60 M dalam heksana, 36,0 μL, 57,9 µmol)
ditambahkan secara perlahan. Setelah 5 menit, campuran reaksi kuning / oranye adalah dibiarkan
hangat hingga 22 0C dan aduk selama 30 menit kemudian didinginkan kembali (-780C). Larutan
aldehid pertama 3,24 (33,0 mg, 57,9 µmol) dalam THF (58,0 µL, 0,10 M) adalah menambahkan
setetes demi setetes ke solusi merah ylid. Setelah 10 menit, reaksi kuning / oranye campuran
dibiarkan hangat sampai 220C dan aduk selama 9 jam tambahan. Selama ini waktu, alkohol
homoallik 3,26 mengalami oksidasi DMP yang dijelaskan di atas. Itu campuran reaksi kuning
didinginkan ulang (-780C), dan n-BuLi (1,60 M dalam heksana, 36,0 µL, 57,9 µmol)
ditambahkan tetes demi tetes. Setelah 5 menit, campuran reaksi oranye adalah dibiarkan hangat
hingga 220C dan aduk selama 30 menit kemudian didinginkan kembali (-780C). Larutan aldehid
kedua 3.27 (12.0 mg, 76.9 µmol) dalam THF (77.0 µL, 0.10 M) ditambahkan setetes demi
setetes ke solusi merah ylid. Setelah 10 menit, kuning / oranye. Campuran reaksi dibiarkan
memanas sampai 220C dan diaduk selama 15 jam tambahan. Reaksi kuning diencerkan dengan
Et2O (10 mL) dan dicuci dengan air jenuh amonium klorida (10 mL). Lapisan dipisahkan, dan
fase berair diekstraksi dengan Et2O (3 x 5 mL). Organik gabungan dikeringkan di atas MgSO4,
disaring, terkonsentrasi di bawah tekanan berkurang, dan dimurnikan oleh Ag+ gel silika yang
diresapi (10%) kromatografi (heksana: Et2O, 8: 1) untuk memberikan tris yang sedikit tidak
murni (dilindungi TBS) -neuroprostane methyl ester 3.30 (14.9 mg, 20.3 µmol, 35% hasil). 1H
NMR (CDCl3, 500 MHz): & 5.46 (1H, dd, J = 16.0, 6.0 Hz), 5.44-5.30 (7H, m), 3.99 (1H, q, J =
6.0 Hz), 3.90 (1H, m), 3.80 (1H, q, J = 6.0 Hz), 3.67 (3H, s), 2.84-2.74 (4H, m), 2.64-2.59 (1H,
m), 2,41-2,29 (4H, m), 2,17-1,90 (4H, m), 1,56-1,47 (3H, m), 0,89 (9H, s), 0,88 (9H, s), 0,863
(9H, s), 0,857 (3H, t, J = 7,5 Hz), 0,044 (3H, s), 0,030 (3H, s), 0,025 (3H, s), 0,02 (3H, s), 0,011
(3H, s), 0,007 (3H, s). 13C NMR (CDCl3, 125 MHz): & 173,7, 135,8, 129,6, 129,3, 128,7,
128,5, 128,4, 128,3, 128,1, 76,4, 76,3, 74,8, 52,5, 51,8, 50,2, 44,6, 34,5, 34,3, 31,5, 30,5, 29,9,
26,4, 26,10, 26,09, 26,07, 25,9, 25,8, 23,0, 18,5, 18,3, 18,2, 9,9, -4,1, -4,2, -4,4, -4,5. IR (film
tipis, KBr): 3013 (m), 2961 (b), 2883 (b), 2867 (s), 2842 (m), 1733 (s), 1664 (b), 1471 (s), 1463
(s), 1404 (m), 1388 (s), 1362 (s), 1254 (b), 1088 (b), 1007 (m), 973 (m), 835 (b), 781 (s) cm-1.
HRMS (ESI+): calcd for

C41H78O5NaSi3 [M + Na]: 757.5055, ditemukan: 757.5034.

Dalam satu botol dram yang disegel dengan pengaduk magnet di bawah aliran nitrogen
positif

diisi dengan tris (TBS-protected) neuroprostane methyl ester 3.30 (7,0 mg, 9,52 µmol) dan
TBAF (1,00 M dalam THF, 105 µL, 105 µmol). Reaksi kuning / oranye Campuran dibiarkan
mengaduk pada 220C semalam. Setelah 24 jam, reaksi coklat campuran diencerkan dengan etil
asetat (10 mL) dan dicuci dengan air jenuh amonium klorida (3 x 5 mL). Lapisan berair
gabungan diekstraksi dengan etil acetate (4 x 10 mL). Lapisan organik digabungkan, dikeringkan
(MgSO4), disaring,

dipekatkan dan dimurnikan dengan kromatografi silika gel (8% MeOH dalam CH2Cl2) untuk
diberikan metil ester neuroprostana sebagai minyak sedikit kuning (3,6 mg, 9,17 μmol, 97%
hasil). Untuk satu botol dram tertutup dengan pengaduk magnet di bawah aliran positif nitrogen
menambahkan metil ester neuroprostana (3,6 mg, 9,17 umol) dan metanol (26,0 µL). Itu larutan
dibiarkan mengaduk, didinginkan hingga 00C , dan larutan LiOH berair (1,42 M, 9,0 µL)
ditambahkan tetes demi tetes. Setelah 5 menit, campuran reaksi dibiarkan mengaduk untuk
tambahan 4 jam pada 220C . Campuran reaksi didinginkan ulang (00C ) dan 2% HCl aqueous
ditambahkan tetes demi tetes sampai pH 2 tercapai. Campuran itu diekstraksi dengan etil asetat
(5 x 5 mL), dan lapisan organik gabungan dikeringkan MgSO4, disaring, dan terkonsentrasi di
vakum. Residu kuning dimurnikan dengan silika kromatografi gel (75% etil asetat dalam heksan
menjadi 100% etil asetat sampai 0,01% AcOH dan 5% MeOH dalam etil asetat) untuk
memberikan 20-F4t-neuroprostana murni sebagai minyak kuning pucat (2,5 mg, 6,61 µmol, hasil
72%). 1H NMR (CD3OD, 500 MHz): & 5.55-5.54 (2H, m), 5.45-5.35 (6H, m), 3.99-3.94 (2H,
m), 3.88 (1 H, q, J = 8 Hz), 2.87-2.82 (3H, m), 2.71- 2.68 (1H, m), 2.49 (1H, quintet, J = 7.5 Hz),
2.38-2.32 (4H, m), 2.19-2.06 (4H, m), 1.56- 1,49 (3H, m), 0,91 (3H, t, J = 7,5 Hz). 13C NMR
(CD3OD, 125 MHz): & 136,6, 130,4, 130.2, 130.0, 129.7, 129.5, 129.4, 129.2, 76.4, 76.3, 75.0,
53.7, 51.5, 43.8, 31.4, 27.5,

26,9, 26,7, 24,1, 10,4. IR (film tipis, KBr): 3384 (b), 3330 (b), 3249 (b), 3059 (w), 3031 (w),
3015 (b), 2960 (s), 2926 (w), 2896 (m), 2884 (s), 2873 (s), 1722 (s), 1712 (b), 1667 (m), 1462
(m), 1435 (m), 1413 (m), 1379 (w), 1260 (s), 1090 (b), 1062 (s), 1024 (m), 974 (w), 800 (b), 746
(m), 701 (m) cm-1. HRMS (ESI+ ): calcd untuk C22H34O5Na [M + Na]: 401.2304, ditemukan:
401.2289.