Kerusakan Oksidatif pada Stroke Iskemik yang Diungkap Menggunakan Multiple

Biomarker

Raymond C.S. Seet, MRCP; Chung-Yung J. Lee, PhD; Bernard P.L. Chan, MRCP;

Vijay K. Sharma, MRCP; Hock-Luen Teoh, MRCP; Narayanaswamy Venketasubramanian, FRCP;

Erle C.H. Lim, FRCP; Wan-Ling Chong, RN; Woan-Foon Looi, BSc; Shan-Hong Huang, MSc;
Benjamin K.C. Ong, FRCP; Barry Halliwell, DSc

Latar Belakang dan Tujuan — Kami menyelidiki tentang perubahan yang terjadi pada
kerusakan oksidatif setelah stroke iskemik menggunakan beberapa biomarker.

Metode- Sampel darah dan urin dari subjek pasien stroke iskemik dan subjek kontrol yang
disesuaikan dengan usia yang diuji untuk F2-isoprostanes, produk asam
hydroxyeicosatetraenoic, F4-neuroprostanes, 24-hydroxycholesterol, allantoin, dan asam urat.

Hasil — Enam puluh enam subjek stroke (usia rata-rata, 65 tahun; median Skala Stroke
Kesehatan Nasional skala 17) dan 132 subjek kontrol diambil. Perubahan pola bimodal
diamati dalam plasma dan urin F2-isoprostanes dan plasma 24-hydroxycholesterol. Kenaikan
produk asam hidroksieicosatetraenoic dalam plasma, F 4 -neuroprostanes, dan allantoin
tertinggi 6 sampai 12 jam setelah onset stroke, sedangkan asam urat dalam plasma secara
signifikan lebih rendah daripada kontrol Hari 1 hingga 3. Setelah disesuaikan dengan usia dan
garis dasar Skala Stroke Skala Kesehatan Nasional, baseline plasma yang diesterifikasi
produk asam hydroxyeicosatetraenoic (OR, 1,01; 95% CI, 1,01-1,02), urat plasma (1,01;
1,00-1,01), dan plasma free F 4 -neuroprostanes (2.73; 1.76 hingga 3.93) dikaitkan dengan
tahap pemulihan fungsional yang baik selama 90 hari (modified Rankin Skala 1).

Kesimpulan -Beberapa penanda kerusakan oksidatif meningkat segera setelah stroke dan
tetap meningkat dalam beberapa hari. Perubahan secara temporal ini dapat membantu
merancang uji coba pengobatan antioksidan yang lebih baik untuk stroke iskemik akut.
(Stroke . 2011; 42: 2326-2329.)

Kata Kunci: F 2 -isoprostane F 4 -neuroprostanes 24-hydroxycholesterol allantoin produk

asam hydroxyeicosatetraenoic

Penjelasan mengenai studi biomarker, menggabungkan beberapa poin waktu selama

kejadian awal dan waktu pemulihan stroke, diperlukan untuk mengevaluasi kontribusi
kerusakan oksidatif pada stroke. Penelitian sebelumnya yang memeriksa biomarker
kerusakan oksidatif dan tingkat antioksidan cenderung dibatasi oleh durasi follow up yang
singkat, kurangnya subyek kontrol yang sesuai, poin waktu yang tidak memadai, dan pilihan
suboptimal atau analisis biomarker (Supplemental Tabel I; http://stroke.ahajournals.org).
Kami secara prospektif menyelidiki perubahan dalam beberapa penanda kerusakan oksidatif
setelah stroke iskemik dibandingkan dengan subjek kontrol yang sesuai usia.

Material dan metode

Pasien yang mengalami stroke iskemik secara berurutan dalam 6 jam onset gejala di
National University Hospital, Singapura, dimasukkan. Informasi tentang demografi, risiko
faktor vaskular, keparahan stroke dan subtipe secara prospektif dikumpulkan. Subjek kontrol
sangat cocok dengan karakteristik stroke kohor dalam rasio 2 kontrol untuk setiap subjek
stroke. Untuk perhitungan, dilakukan apriori pada variabel utama dari penelitian kami,
menunjukkan bahwa ukuran sampel minimal 60 diperlukan untuk menilai perbedaan penanda
kerusakan oksidatif antara subyek stroke dan subjek kontrol. Protokol penelitian
telahdisetujui oleh Dewan Review Domain Khusus, National Health- Grup perawatan,
Singapura, dan semua pasien (atau keluarga terdekat) diberikan informed consent tertulis.
Sampel darah dan urin perifer, diperoleh segera (sebelum perawatan trombolitik) dan
serial 6 jam, 12 jam, 18 jam, dan Hari 1 sampai 4 dan 7 dan 14 setelah onset stroke, yang
diuji untuk F 2 -isoprostanes, produk asam hydroxyeicosatetraenoic (HETEs), F 4 -
neuroprostanes, 24-hydroxycholesterol, allantoin (a produk kerusakan oksidatif urat), urat,
fosfolipase A 2 , dan aktivitas acetylhydrolase faktor aktivasi-trombosit. Ambang batas untuk
signifikansi disesuaikan dalam beberapa perbandingan (dengan metode Bon-ferroni).

Hasil

Tabel. Perbandingan Antara Marker Kerusakan Oksidatif Segera Setelah Onset Stroke
dan Kontrol

Comparison Between Markers of Oxidative Damage Immediately After Stroke Onset

Table and Controls

Cases (n Controls (n
Markers of Oxidative Damage 66) 132) P OR (95% CI)*

Plasma arachidonate, mg/mL 85.25 (31.44) 87.48 (22.96) 0.277 0.99 (0.98 –1.01)
Plasma F2-isoprostanes
Esterified, ng/mL† 0.80 (0.33) 0.58 (0.37) 0.037 1.55 (1.01–2.76)
Free, ng/mL† 0.11 (0.07) 0.07 (0.02) 0.001 2.45 (1.52–3.32)
Plasma HETEs
Esterified, ng/mL† 42.32 (31.26) 25.95 (11.60) 0.001 1.05 (1.03–1.08)
Free, ng/mL† 4.09 (3.10) 2.16 (1.62) 0.001 1.42 (1.18–1.69)
Plasma DHA, mg/mL 22.06 (8.88) 18.88 (6.76) 0.114 1.04 (0.99–1.10)
Plasma neuroprostanes
Esterified, ng/mL† 0.92 (0.28) 0.54 (0.34) 0.001 4.84 (2.66–10.57)
Free, ng/mL† 0.20 (0.15) 0.04 (0.04) 0.001 20.94 (5.78–35.85)
Urinary F2-isoprostanes, ng/mg
creatinine
8-iso-F2-isoprostanes† 14.88 (1.37) 5.65 (0.43) 0.001 5.49 (2.91–10.35)
2,3-dinor-F2-isoprostanes† 1.03 (0.75) 2.98 (2.18) 0.003 0.33 (0.16–0.68)
2,3-dinor-5,6-dihydro-F2-
isoprostanes† 14.37 (7.47) 5.02 (2.78) 0.001 1.33 (1.13–1.58)
Urinary HETEs, ng/mg
creatinine† 31.48 (22.40) 14.42 (13.04) 0.002 1.06 (1.02–1.10)
Total cholesterol, mmol/L 5.40 (1.34) 5.32 (1.13) 0.547 1.09 (0.83–1.42)
24-hydroxycholesterol, ng/mL† 51.88 (35.75) 17.70 (9.45) 0.001 1.04 (1.01–1.07)
Enzymatic activities,
nmol/min/mL
PLA2 activity 8.30 (9.11) 6.66 (1.40) 0.069 1.07 (0.99–1.16)
PAF-AH activity 12.60 (5.12) 14.21 (4.61) 0.228 0.95 (0.88–1.03)
Plasma urate, mM 332 (148) 348 (147) 0.908 1.00 (0.99–1.00)
Plasma allantoin, mM† 2.94 (1.47) 1.88 (0.80) 0.001 2.73 (1.68–4.45)
Data diringkas sebagai rata-rata (standar deviasi) atau median (kisaran interkuartil). HETEs
menunjukkan produk asam hydroxyeicosatetraenoic; DHA, asam docosahexaenoic; PLA 2 ,
fosfolipase A 2 ; PAF-AH, mengaktifkan faktor platelet-acetylhydrolases; ATAU, rasio odds;
CI, interval kepercayaan. * ATAU (95% CI) disesuaikan dengan adanya fibrilasi atrium. † P
0,05 ketika variabel individual dibandingkan antara kasus dan kontrol.

66 pasien dengan stroke iskemik dan 132 usia-cocok untuk subjek kontrol
dimasukkan; karakteristik subjek di Supplemental Tabel II. Lima puluh (76%) pasien
menerima trombolisis intravena dan pengumpulan waktu pertengahan untuk sampel darah
dan urin awal adalah 171 menit (kisaran, 122 hingga 245 menit) dari onset stroke. Plasma F 2
-isoprostanes, HETE, F 4 -neuroprostanes, 24-hydroxycho- Tingkat kolesterol, dan alantoin
meningkat secara signifikan sampel awal (Tabel). Level Biomarker tidak berbeda antara
subtipe stroke dan status rekanalisasi oklusi arteri (data tidak ditampilkan). Status inflamasi
(mea- sured menggunakan protein C-reaktif high-sensitivity) tidak berbeda antara fibrilasi
atrium dan pasien fibrilasi nonatrial.
Isoprostane adalah biomarker lipid terbaik dari lipid peroksidase. Plasma esterified F
2 -isoprostanes cenderung lebih tinggi dari kontrol di semua titik waktu dan ini sangat
signifikan pada hari ke 3 setelah onset stroke, dimana plasma bebas F 2 -isoprostane
meningkat sampai hari ke 7 (Gambar 1A – B). F 2 -isoprostane bebas dapat dioksidasi
menjadi 2,3- dinor-F 2 -isoprostanes, yang kemudian dikurangi menjadi 2,3- dinor-5,6-
dihidro-F 2 -isoprostanes, semuanya diekskresikan dalam urine. Pola perubahan bimodal
serupa diamati dalam F 2 -isoprostane urin, level yang muncul 2 hingga 3 hari setelah onset
stroke. Tingkat 8-iso- dan 2,3-dinor-F 2 –isoprostanes pada urine meningkat, sedangkan
tingkat dari 2,3-dinor-5,6-dihidro-F 2 -isoprostane urin menurun pada subyek stroke (Gambar
2A – D).
Bentuk HETE plasma yang diesterifikasi dan bebas (an inflamasi biomarker) secara
signifikan lebih cepat dan selama tahapan stroke berikutnya, meningkat menjadi tertinggi 6
hingga 12 jam setelah onset stroke (Gambar 1C – D). Tingkat HETE pada urine secara
signifikan lebih tinggi segera pada Hari 1 hingga 2 setelah serangan stroke (Gambar 2D).
Tingkat esterifikasi dan F 4 – neuroprostanes bebas dalam plasma secara signifikan
lebih tinggi dengan segera dan selama tahapan stroke selanjutnya dibandingkan dengan
kontrol. Kenaikan plasma F 4 -neuroprostanes adalah yang tertinggi sekitar 12 jam setelah
onset stroke (Supplemen- Gambar IA – B).
Plasma 24-hydroxycholesterol secara signifikan lebih tinggi pada Hari 1 hingga 7
setelah onset stroke (Supple- mental Gambar IIA). Allantoin plasma secara signifikan lebih
tinggi segera 6 jam setelah onset stroke (Supple- mental Gambar IIB), sedangkan asam urat
secara signifikan lebih rendah Hari 1 hingga 3 (Gambar Tambahan IIC). Menggunakan
analisis regresi logistik (disesuaikan untuk usia dan baseline National Institutes of Health
Stroke Scale), baseline HETE teresterifikasi plasma (OR, 1,01; 95% CI, 1,01 hingga 1,02),
plasma urat (1,01; 1,00-1,01), dan plasma F bebas 4 - neuroprostanes (2,73; 1,76-3,93)
dikaitkan dengan pemulihan fungsional yang baik (modified Rankin Scale l).
Gambar 1. Perubahan plasma F 2 -isoprostanes dan produk asam hydroxyeicosatetraenoic
setelah onset stroke (bar kesalahan menunjukkan 95% CI; * P 0,05 dibandingkan dengan
kontrol, Student t test). CI menunjukkan interval kepercayaan; HETE, produk asam
hydroxyeicosatetraenoic.
Gambar 2. Perubahan F 2 -isoprostanes dan produk asam hydroxyeicosatetraenoic setelah
stroke onset (bar error menunjukkan 95% CI; * P 0,05 dibandingkan dengan kontrol, Student
t test). CI menunjukkan interval kepercayaan; HETE, produk asam hydroxyeicosatetraenoic.

Diskusi
Beberapa penanda kerusakan oksidatif yang dapat digunakan diamati untuk ditingkatkan
setelah stroke iskemik dan perubahan bervariasi sesuai dengan durasi stroke. Pengakuan
tentang perubahan secara temporal ini dapat membantu memilih waktu yang optimal dan
durasi uji coba pengobatan antioksidan untuk pengelolaan stroke akut. Penelitian ini juga
memberikan data yang mendukung manfaat menyelidiki oksidasi lipid dan terkait produk
seperti F 2 -isoprostanes, HETE, dan docosa- hexaenoate pada stroke. Data kami
menunjukkan bahwa urat dan F 4 - neuroprostanes bisa menjadi faktor menguntungkan
dalam hasil stroke.

Sumber Pendanaan
Kami mendapat dukungan dari National Medical Research Council, Singapore (Grant NMRC
/ 1157/2008).
Pengungkapan
Tidak ada.
Referensi

1. Lee CY, Seet RC, Huang SH, Long LH, Halliwell B. Different patterns of oxidized lipid
products in plasma and urine of dengue fever, stroke, and Parkinson’s disease patients:
cautions in the use of biomarkers of oxidative stress. Antioxid Redox Signal. 2009;11:407–
420.