LABORATORIO DE BIOLOGÍA

ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS

DAMARIS LIZBET LANCACHO LANCACHO

MARIA JOSE PULGARIN URIBE

DOCENTE

SANDRA LILIANA VERA VELASQUEZ

UNIVERSIDAD DE PAMPLONA

FACULTAD DE INGENIERÍAS Y
ARQUITECTURAS

PRIMER SEMESTRE

PAMPLONA- NORTE DE SANTANDER

2018
1. TÍTULO DE LA PRÁCTICA: ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS

2. OBJETIVOS

 Determinar la presencia de la enzima catalasa en tejidos animales y vegetales

 Observar el efecto de diferentes factores sobre la actividad enzimática
 Comprobar la acción hidrolítica de la amilasa

3. INTRODUCCIÓN

El término cinética enzimática implica el estudio de la velocidad de una reacción

catalizada por una enzima y los efectos que pueden tener factores como los inhibidores.
Uno de los principales estudios que se realizan en una enzima es medir el efecto en la
velocidad de la reacción cuando se modifican las concentraciones del sustrato y se
mantienen constantes la concentración de enzima, el pH, la fuerza iónica del medio, la
temperatura, entre otros.

Determinar los intermediarios en una reacción y el papel que juegan en la reacción

enzimática, es decir, para predecir mecanismos de reacción. Es esencial entender estos
mecanismos para desarrollar nuevas herramientas moleculares. También es usual medir
la actividad enzimática con diferentes sustratos para entender su especificidad o bien,
medir la actividad de la enzima de diferentes tejidos u organismos para entender cómo
las diferencias en actividad están relacionadas con la función o la fisiología del organismo
que proceden.

4. MARCO TEORICO

Las enzimas constituyen la clase más numerosas y especializada de proteínas y catalizan

toda la interminable serie de reacciones químicas que conforman el metabolismo celular.
Son en fin, los catalizadores biológicos. Como todas las proteínas, son elaboradas por las
células y tienen una única misión dentro de este mecanismo celular.

Las enzimas actúan como cualquier otro catalizador químico, excepto en dos diferencias:

1. Son muy específicas. Cada enzima cataliza un tipo particular de reacción, mientras
que un catalizador no biológico cataliza gran variedad de reacciones. Este
mecanismo de acción enzimática, tan especifico, lo realizan interactuando junto con
las moléculas con que reaccionan, formando un complejo transitorio llamado
Enzima-sustrato, el cuál es libremente reversible. Esta reversión es rápida, de tal
manera que la enzima queda libre sin alterarse y puede una vez recuperada,
combinarse con otra molécula de sustrato.
2. Todas son de constitución proteica, Lo cual determina una estructura espacial dada,
permitiendo su especificidad como catalizadores. Esta especialidad varía de una
enzima a otra. Por esta segunda cualidad, son extremadamente sensibles al calor,
debido a la desnaturalización de sus componentes. También son afectadas por el pH,
mostrando mayor actividad a un pH determinado; por encima o debajo de este nivel
óptimo, la actividad enzimática disminuye o desaparece.
 Existen enzimas cuya actividad depende exclusivamente de su estructura como
proteínas. Otras enzimas, sin embargo, están formadas por dos componentes: uno
proteico, llamado coenzima y otro orgánico, no proteico, llamado coenzima que son,
ambos, fundamentales para la acción enzimática. Su disociación da lugar a una
pérdida de actividad en este sentido.

ENZIMA REACCIÓN QUE CATALIZA

A. Oxidorreductoras Reacciones de oxido
B. Transferasas Transferencia de grupos funcionales
C. Hidrolasas Reacciones de hidrólisis
D. Liasas Adición a los dobles enlaces
E. Isomerasas Reacciones de isomerización
F. Ligasas Formación de enlaces con ruptura de ATP

5. MATERIALES, INSUMOS O EQUIPOS

 MATERIALES: 2 gradillas, 1 beaker de 50 ml, 1 mechero, churrasco para tubos,

15 Tubos de ensayos, 2 Pipetas de 10ml, 1 Pinza de madera, Fruta madura, cinta
de enmascarar, guantes, bolsa negra, trozos de hígado, trozos de tomate.
 REACTIVOS: 2ml Benedict, 2ml de Lugol, 6ml de agua oxigenada, 2ml Buffers
fosfato 0.1m a pH de 3, 7,11.
 SOLUCIONES: 20ml de solución de almidón 1%.

6. PROCEDIMIENTO

Reconocimiento de la catalasa en tejidos animales

 Coloque un tubo de ensayo unos trozos

pequeños de hígado
 Añada 2 mililitros de agua oxigenada
¿Qué observa? ¿Según la reacción 1 que
sucede? Interprete los resultados

En el tubo pusimos el hígado, al agregar el

peróxido de hidrógeno se vio un burbujeo
abundante que se da por la descomposición
del peróxido por medio de la catalasa, lo
cual libera oxígeno, con abundante
producción de burbujas de oxígeno, se
obtiene una mayor concentración de
catalasa por lo cual la actividad enzimática
es mayor.
Figura 1. Agua oxigenada e higado
 Reconocimiento de la catalasa en tejidos vegetales

 Haga el mismo reconocimiento

anterior, con trozos de tomate para
observar la acción de la catalasa
sobre los tejidos vegetales.
 ¿Qué observa? Interprete los
resultados

Figura 2. Agua oxigenada y tomate

Desnaturalización de la catalasa

Coloquen en un tubo de ensayo unos

trozos pequeños de hígado

Añada agua, hierva la muestra durante

unos minutos

Después de este tiempo retire el agua

sobrenadante

Añada agua oxigenada hasta cubrir los

trozos de hígado.
 HIDRÓLISIS DEL ALMIDON

Se toman 6 tubos Se añade a cada A los tubos 3, 4 y 5,

de ensayo, tubo 2ml de una 6 se añade una
numerados del 1 solución diluida de pequeña cantidad
al 6 almidón de saliva.

TUBO 1 TUBO 2

Se realiza la Reacción de Lugol Se realiza la Reacción de Benedict

TUBO 3 Y 4

PONEMOS EN UN CONTROLAMOS LA
VASO DE TEMPERATURA A 37
contiene almidon y saliva PRESIPITACION A ºC dEJAMOS POR
BAÑO MARIA UNOS 10 MINUTOS

TUBO 5 Y 6

PONEMOS EN UN CONTROLAMOS LA
contiene almidon y saliva VASO DE TEMPERATURA A 37
diluida hervida PRESIPITACION A ºC dEJAMOS POR
BAÑO MARIA UNOS 15 MINUTOS

A continuación se realiza las siguientes reacciones:

Tubo 3 y 5 Prueba de Lugol

Tubo 4 y 6 Reacción de Benedict.

 La influencia del pH en la actividad enzimática

En tres tubos de ensayo enumerados respectivamente añadimos 2 ml de saliva sin diluir

a cada uno, más 2 ml de Buffer fosfato 0.1 M a pH 3, pH 7, pH 11.

Tubo N° 1: 2 ml de saliva ± 2 ml Buffer fosfato 0.1 M a pH 3.

Tubo N° 2: 2 ml de saliva ±2 ml Buffer fosfato 0.1 M a pH 7.

Tubo N° 3: 2 ml de saliva ±2 ml Buffer fosfato 0.1 M a pH 11.

Y luego adicionamos 2 ml de almidón al 1 % y una gota de lugol a cada tubo. Pudimos

observar como el color fue desapareciendo en algunos tubos.

7. OBSERVACIONES

Reconocimiento de la catalasa en tejidos animales

 Al añadir al hígado agua oxigenada se desprende del oxígeno e hidrogeno

 En el hígado existía la presencia de catalasa ya que las burbujas nos indicaron la
presencia de oxígeno.
 La catalasa se encuentra en el hígado

Reconocimiento de la catalasa en tejidos vegetales

Desnaturalización de la catalasa

Ausencia de catalasa (se inactiva la catalasa)

Hidrólisis del almidón
En el tubo 1, la Reacción de Lugol da positiva por su color negro.
En el tubo 2, la Reacción de Benedict da negativa por que no existe cambio de colores

En el tubo 3, la Prueba de Lugol, da negativo, no se produjo cambio de coloración. Se

queda del color del lugol mismo

En el tubo 4, la Reacción de Benedict, da positiva y su coloración cambia de azul a un

verde medio amarillo

En el tubo 5, la Prueba de Lugol, da positivo, por su color negro

En el tubo 6, la Reacción de Benedict, da positiva y su coloración cambia de azul a un

verde medio amarillo
 La influencia del pH en la actividad enzimática

Primero despareció todo en el tubo N° 2 porque la enzima amilasa presente en la saliva

por su pH optimo esta entre 6,9 Y 7 y este tubo tenia pH 7 por lo cual pudo actuar sobre
el almidón en maltosa más rápido.

El tubo N° 1 presentaba un pH de 3 y es demasiado acido para la amilasa y no pudo actuar

sobre el almidón en maltosa.

El tuno N° 3 presentaba un pH de 11 y es demasiado básico para la amilasa pero pudimos

ver que se desvaneció el color pero mucho más lento, pero al final pudo actuar sobre todo
el almidón.

La amilasa tiene un pH óptimo que está entre 6,7 y 7,2.

El pH de la saliva es aproximadamente entre 6,5 y 7.

pH 3 → Acido

pH 7 → Neutro

pH 11 → Básico

Figura 1. pH3, pH7, pH11

8. CONCLUSIONES

Como resultado del análisis en cuanto a los resultados de los experimentos realizados en
el laboratorio se pueden extraer las siguientes conclusiones:

•La temperatura es un "actor determinante en las reacciones enzimáticas porque acelera

o retarda la acción de las enzimas lo que se evidencia con la producción de burbujas

•Para que la catalasa mencione correctamente debe tener un pH neutro y temperatura

ambiente
9. RECOMENDACIONES

10. ANEXO
1. Describa el efecto de la temperatura en la acción enzimática
2. ¿A qué valores de pH y temperatura es estable la actividad enzimática de la catalasa?
3. ¿A qué pH teórico es más activa la amilasa? Compare este valor con el obtenido en el
laboratorio
4. Qué diferencia hay entre una coenzima y una apoenzima
5. La pepsina es una enzima secretada por el estómago. Discuta el rango de pH en el
cual la enzima se encuentra activa y sugiera lo que probablemente le sucede
estructuralmente a la enzima cuando pasa del estómago al intestino.
6. Que otros factores, además de la temperatura y el pH influyen en la actividad de una
enzima
7. Cite cinco enzimas y los sustratos respectivos sobre los cuales actúan

1. describa el efecto de la temperatura en la actividad enzimática.

En general, la velocidad de la reacción se incrementa con la temperatura hasta que un

punto máximo es alcanzado. Este incremento se debe a que aumenta el número de
moléculas ricas en energía que pueden pasar la barrera energética de estado de transición,
para formar a los productos. Pero la elevación excesiva de la temperatura del medio que
contiene a las enzimas, resulta en un decremento de la velocidad como resultado de la
desnaturalización, es decir, la pérdida de la estructura tridimensional de las enzimas.

2. ¿A qué valores de pH y temperatura es estable la acción enzimática de la catalasa?

Catalasa humano funciona a una temperatura óptima de 37 ° C y el óptimo de pH para la

catalasa humana es de aproximadamente 7 para una estable acción enzimática.

3. ¿A qué pH teórico es más activa la amilasa? Compare este valor con el obtenido en el
laboratorio.

la amilasa tiene un pH óptimo que está entre 6,7 y 7,2 y comparado con el valor obtenido
en el laboratorio concuerda ya que su actividad fue mucho mejor en el tubo con pH 7 lo
cual fue óptimo para la actividad enzimática.

4. Qué diferencia hay entre una coenzima y una apoenzima.

una coenzima en un cofactor orgánico no proteicos que unidos a una apoenzima

constituyen la holoenzima o forma catalíticamente activa de la enzima. Por lo tanto una
holoenzima está formada por:

Apoenzima.

Cofactor.
El buen funcionamiento del organismo humano, se debe a la posibilidad de separación de
apoenzimas y coenzimas, para sus fines específicos.

Una apoenzima es la parte proteica de una enzima, desprovista de los cofactores o

coenzimas que puedan ser necesarios para que la enzima sea funcionalmente activa. La
apoenzima es catalíticamente inactiva; cuando se le une la coenzima o cofactor
adecuados, constituye la holoenzima.

11. BIBLIOGRAFÍA