Anda di halaman 1dari 9

14/3/2018 Similarity Report

3. Benzopyren Menginduksi Apoptosis Sel Paru pa... Similarity Index


By: MUHAMAD AGUS WIBOWO
As of: Jul 31, 2017 3:28:24 PM 13%
2,274 words - 31 matches - 28 sources

Mode: Similarity Report

paper text:

VETERINARIA Medika Vol. 3, No. 1, Pebruari 2010 Benzapyren Menginduksi Apoptosis Sel Paru pada Ratus norvegicus
Benzopyrene Induce Apoptosis of the Lung Cells in Ratus norvegicus 1Muhamad Agus Wibowo, 2Sofwan Anwari,
3Aulanni'am 1Fakultas MIPA, Universitas Tanjungpura 2Fakultas Kehutanan, Universitas Tanjungpura 3Fakultas MIPA,
Universitas Brawijaya Jl. Veteran, Malang Telp. 0341 575838 Email: aguso2@yahoo.com Abstract Apoptosis is importen

in physiologic and pathologic processes such as tumor regression, embryogenesis, and normal cell turnover. ROS is

molecule that importen to induce DNA damage and apoptosis of cell. Increasing of ROS expression can be induce by
carcinogenic compounds as benzopyrene. This research have been tested of inducing apoptosis by benzopyren that

mediated by ROS. The data of research indicating that benzopyrene can increasing apoptosis of lung cells and
increasing of ROS. Base on the data of this research, we understood that benzopyrene can induce apoptosis of lung

cells by ROS path ways. Keywords : Benzopyrene, Apoptosis, ROS Pendahuluan Apoptosis atau kematian sel terprogram

adalah suatu mekanisme kontrol yang mendorong sel mengalami kematian sebagai akibat adanya kerusakan DNA yang
tidak bisa diperbaiki. Apoptosis juga penting dalam mengontrol jumlah sel dan proliferasi sebagai bagian dari

pertumbuhan yang normal (Ghobrial et al., 2005). Mekanisme sel dalam menjalani apoptosis melibatkan teraktivkannya
gen p53, caspase, dan protein-protein proapoptosis (Los & Walczak, 2002; Ghobrial et al., 2005). Adanya disregulasi

apoptosis pada beberapa sel yang mengalami kerusakan DNA akan berakibat pada tingginya resiko terjadinya kanker
(Janne

et al., 2005; Karakas et al., 2006; Riely et al., 2009). 1

Reactive oxygen species (ROS) merupakan molekul yang dihasilkan akibat adanya respon dari kerusakan jaringan akibat
berbagai macam penyakit dan senyawa karsinogen (Sugiyama et al., 1996). Beberapa peneliti menyebutkan bahwa

molekul ini berperan dalam menginduksi terjadinya apotosis pada berbagai macam jenis sel (Sugiyama et al., 1996).

Kemampuan ROS dalam menginduksi terjadinya apoptosis karena mengakibatkan terjadinya kerusakan DNA (Palackal,

N.T., 2002; Belous,A.R., 2007; Ariese, F., 1996; Leavitt,S.A., 2008).Adanya kerusakan DNA akan mengakibatkan
terakumulasinya gen p53. Gen p53 akan mengtifkan gen p21 yang berakibat terhentinya siklus sel. Gen p53 juga

mengaktivkan PUMA (p53 up-regulated modulator of apoptosis) dan Bax sehingga diregulasi terjadinya apoptosis (Yu et

al., 2003). Benzapyren merupakan salah satu senyawa mayor dalam asap rokok yang dapat menginduksi terjadinya

kanker paru (Lin et al., 2003; Aoki et al., 2007). Kemampuan benzapyren dalam menginduksi terjadinya kanker paru

karena benzapyren mampu menginduksi terjadinya peningkatan ROS (Ji & Shen, 2008). ROS akan mengoksidasi DNA
sehingga mengakibatkan terjadinya kerusakan DNA yang diikuti mutasi genetik pada gen-gen vital pengontrol siklus sel

sehingga sel-sel paru didorong untuk berproliferasi dan menekan terjadinya apoptosis (Ambs et al., 1997; Palackal, N.T.,

https://app.ithenticate.com/en_us/report/30404122/similarity 1/9
14/3/2018 Similarity Report

2002; Belous,A.R., 2007; Ariese, F., 1996; Leavitt,S.A., 2008). Induksi benzapyrene juga berpotensi medorong
diregulasinya apoptosis pada sel-sel paru yang terpapar benzapyrene secara in-vivo. Hal ini didasari kenyataan bahwa

adanya paparan benzapyren akan meningkatkan produksi ROS dan meningkatkan terjadinya kerusakan DNA (Ji & Shen,

2008). Beberapa penelitian juga menunjukkan adanya kemampuan benzapyren dalam menginduksi apoptosis sel-sel

coba secara in-vitro (Kim et al., 2007). Materi dan Metoda Penelitian Uji secara in-vivo. Dipilh tikus putih (Ratus

norvegicus) jantan galur Wistar yang berumur 2-3 bulan dengan kisaran berat badan 200-250 gram dan diadaptasi
selama 7 hari. Hewan percobaan dikelompokkan menjadi 2 kelompok perlakuan yaitu kelompok T0 (tikus kontrol sehat)

dan T1 (tikus terpapar benzapyren). Kelompok T0 adalah klompok hewan coba sehat (tanpa perlakuan), tikus hanya

diberi akuades. Kelompok hewan coba T1 dipapar benzapyren (B1760) secara intraperitonial dengan doses 200mg/kg

berat badan selama 4 kali berselang 1 hari dan diinkubasi selama 30 hari. Pada akhir 65 Muhamad Agus dkk.

Benzapyren Menginduksi Apoptosis ... perlakuan, semua tikus percobaan dikorbankan secara secara dislocatio
cervicalis, lalu dibedah bagian dada dandilakukankoleksiorganparu. Pengukuran Malondialdehyde (MDA). Dibuat

homogean terhadap 0,45 g jaringan paru dan di tambah terhadapnya 1mL NaCl dingin 0,9%, dihomogenkan, dan
disentrifugasi pada kecepatan 8000 rpm selama 20 menit hingga diperoleh supernatan. Terhadap supernatan yang

diperoleh selanjutnya diambil sebanyak 100µLdandimasukkan kedalam tabung reaksi kecil dan ditambahkan secara

berturut-turut 550µLaquades, 100µLTCA (trichloroacetic acid) kemudian dihomogenkan. Kedalam campuran selanjutnya

ditambah 250µLHCl dan 100µLNa-thiobarbiturat dan selanjutnya dihomogenkan. Setelah campuran homogen maka

selanjutnya disentrifugasi dengan kecepatan 500 rpm selama 10 menit hingga diperoleh supernatan. Supernatan yang

diperoleh kemudiandinkubasi dalam penangas air pada suhu 100oC selama 30 menit. Hasil yang diperoleh kemudian

disentrifugasi dengan kecepatan 500 rpm selama 10 menit hingga diperoleh supernatan. Supernatan yang diperoleh

selanjutnya diukur absorbansinya dengan spektrofotometer pada panjanggelombang(λmaks=533nm). Uji Apoptosis.

Terhadap organ paru yang diperoleh dibuat preparat histologis dengan ketebalan pemotongan 6 µyangdiikuti dengan

pemeriksaan adanya apoptosis secara immunhistokimia menggunakan pewarnaan TUNEL, dengan menggunakan kit
Apo-BrdU-IHC (K403-50). Kemudian diamati dibawah mikroskop cahaya dengan perbesaran 400x. Adanya peristiwa

apoptosis dari sel- sel paru ditandai dengan terbentuknya warna coklat, yangmenandakanterjadinyafragmentasiDNA.

Analisis data. Hasil pengamatan mikroskopis jaringa paru dianalisis secara deskriptif dengan membandingkan antara

kedua kelompok perlakuan tikus: T0 (tikus kontrol sehat) dan T1 (tikus perlakuan benzapyren). Hasil dan Pembahasan P

ada

peng uk urankonse nt rasi 4

malondialdehyde (MDA) diperoleh data seperti terlihat pada gambar 1. Hasil uji MDA pada organ paru menunjukkan

bahwa hewan coba yang diinduksi dengan bensapiren secara intraperitonial (T1) memiliki kadar MDA lebih besar

dibandingkan dengan hewan coba kontrol (T0). Hal ini terjadi karena benzapyren yang masuk kejaringan paru akan

mengalami reaksi oksidasi yang terkatalisis oleh enzim-enzim CYPs (cytochrome P450s) menjadi

BP-7,8-epoxide; BP-7,8- 6

https://app.ithenticate.com/en_us/report/30404122/similarity 2/9
14/3/2018 Similarity Report

diol((-)-

benza py rene -7,8- di ol); B PD E 1

(()benzapyrene

-r-7,t-8- dihidrodiol t-9,10-epoxide); 5

dan radikal kation (Shimada, T., 2006). Dimana molekul-molekul tersebut mendorong meningkatnya ROS yang ditandai

dengan meningkatnya kadar MDA dalam organ paru. Analisis apoptosis sel-sel paru akibat paparan benzapyren dengan

menggunakan pewarnaan TUNEL memberikan hasil seperti terlihat pada gambar 2 dan gambar 3. Hasil pada gambar 2.

memperlihatkan bahwa akibat pemberian benzapyren meningkatkan terjadinya apoptosis dari sel-sel organ paru, yang

ditandai dengan terbentuknya noda warna coklat. Dengan mengkuantisasikan hasil analisis didapat data indek

apoptosis seperti terlihat pada gambar 3. data indek apoptosis menunjukkan bahwa akibat paparan benzapyren

meningkatkan terjadinya apoptosis pada sel-sel paru, hal ini bisa dilihat bahwa pada hewan coba kelompok T1 (tikus
terpapar benzapyren) memiliki indek apoptosis sebesar 7 sedangkan pada kelompok T0 (tikus control) memiliki indek

apoptosis sebesar 3. Hasil yang terdapat pada Gambar 3 menunjukkan bahwa paparan benzapyren terhadap hewan

coba secara intraperitonial mengakibatkan terjadinya peningkatan apoptosis pada sel-sel paru. Peningkatan apoptosis

sel-sel paru yang terjadi akibat paparan benzapyren berkorelasi positip dengan meningkatnya ROS jaringan paru. Hal ini

terjadi karena adanya paparan benzapiren yang masuk 7 Kelompok hewan coba 6 5.878 5 4.171 4 3 2 1 0 T0 T1

Konsentrasi (ppm) Gambar 1. Gra k konsentrasi MDA masing-masing kelompok hewan coba 66 VETERINARIA Medika

Vol. 3, No. 1, Pebruari 2010 T0 T1 Gambar 2. Apoptosis sel-sel paru pada hewan coba menggunakan pewarnaan TUNEL

(400x). 8 Jumlah sel yang mengalami 7 7 6 apoptosis 5 4 3 3 2 1 0 T0 T1 Kelompok hewan coba Gambar 3. Gra k indek
apoptosis kelompok hewan coba kedalam tubuh akan mengaktifkan AhR. AhR yang teraktifasi akan membentuk

komplek dengan ARNT (AhR nuclear translocator) dan DRE (dioxine response elements) untuk selanjutnya
mengaktifkan RNApol II (RNA poliymerase II) untuk mensintesis mRNA yang selanjutnya akan diproduksi

CYP1A1 (cytochrome P450 1A1) dan CYP1B1(cytochrome P450 1B1) 17

yang berfungsi mengoksidasi dari senyawa bensapiren (Sissung., 2006; Xu, 2005; Nakata, 2006; Magesh, 2007; Aklillu,

2005; Kushman, 2007 Wenzlaff, 2005). Dengan dirilisnya CYP1A1 dan CYP1B1, benzapiren akan reaksi oksidasi menjadi
BP-7,8- epoxide; BP

-7,8-diol ((-)-benzapyrene -7,8- diol); BPDE (()benzapyrene -r-7,t-8- dihidrodiol t-9, 10

https://app.ithenticate.com/en_us/report/30404122/similarity 3/9
14/3/2018 Similarity Report

10- epoxide); dan radikal kation (Shimada, 2006). Spesies

BP-7,8-epoxide; BP-7,8-diol; 6

BPDE dan radikal kation, sehingga meningkatkan produksi ROS dalam organ paru. Meningkatnya produksi ROS akan

mengakibatkan terjadinya kerusakan DNA (DNA damage) (Palackal

et al., 2002; Belous et al., 2007; Ariese et al., 1996; Leavitt et al., 2008). 12

Adanya kerusakan DNA akan mengakibatkan diregulasinya apoptosis dari sel-sel paru baik secara internal melalui
aktivasi gen p53 maupun secara eksternal melalui jalur induksi Fas/FasL. Kesimpulan Dari hasil pembahasan pada

penelitian diatas dapat disimpulkan bahwa paparan benzapyren terhadap jaringan paru dapat meningkatkan terjadinya
apoposis sel-paru tikus putih Ratus norvegicus melalui jalur ROS menginduksi apoptosis.

Ucapan Terimakasih Ucapan terima kasih kami sampaikan kepada 22

Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi yang telah membiayai penelitian ini lewat hibah Penelitian Hibah Bersaing (PHB)

tahun anggaran 2008/2009 dengan nomor kontrak: 152b/H22.9/PL/2009 tanggal 15 April 2009. Daftar Pustaka Aklillu,
E., S.

Øvrebø, I.V. Botnen, C. Otter, & M. 5

Ingelman-Sundberg, 2005, Characterization of Common CYP1B1 Variants with Different Capacity for Benzo[a]pyrene-7,8-

Dihydrodiol Epoxide Formation from Benzo[a]pyrene, Cancer Res, 65(12): 5105-5111.

Ambs, S., S. F. Hussain, C.C. Harris, 1997, Interactive 16

Effects of Nitric Oxide and the p53 Tumor Supressor Gene in Carcinogenesis and Tumor Progression, FASEB J., 11: 443-

448. 67 Muhamad Agus dkk. Benzapyren Menginduksi Apoptosis ...

Aoki, Y., A.H. Hashimoto, K. Amanuma, M. 28

https://app.ithenticate.com/en_us/report/30404122/similarity 4/9
14/3/2018 Similarity Report

Matsumoto, K. Hiyoshi, H. Takano, K. Masumura, K. Itoh, T. Nohmi, & M. Yamamoto, 2007. Enhanced Spontaneous and
Benzo(a)pyrene-Induced Mutations in the Lung of Nrf2-De cient gpt Delta Mice, Cancer Res, 67(12): 5643–5648.

Ariese, F., G.J.Small & R.Jankowiak, 1996, 20

Conformational studies of depurinating DNA adducts from syn-dibenzo[a,r|pyreiie diolepoxide, Carcinogenesis, 17(4):

829-837.

Belous,A.R., D.L. Hachey, S. Dawling, N. Roodi, 13

& F.F. Parl, 2007, Cytochrome P450 1B1–Mediated Estrogen Metabolism Results in Estrogen-Deoxyribonucleoside

Adduct Formation, Cancer Res, 67(2):812–817.

Ghobrial, I.M., T.E. Witzig, A.A. Adjei, 2005, Targeting Apoptosis Pathways in Cancer Therapy, 3
CACancer J. Clin., 55: 178-194 Holme, J.A., M.

Gorria, V.M. Arlt, S. Ovrebo, A. Solhaug, X. Tekpli, N.E. Landvik, L. Huc, O. Fardel, & D. Lagadic- 15
Gossmann, 2007, Different mechanisms involved in apoptosis following exposure to benzo[a]pyrene in
F258 and Hepa1c1c7 cells, Chem. Biol. Interact., 167(1): 41-55 Janne,P .A., J.A.

Engelman, & B.E. Johnson, 2005. Epidermal Growth Factor Receptor Mutations in Non–Small-Cell Lung Cancer:

Implications for Treatment and Tumor Biology, J. Clin. Oncol., 23: 3227-3234. Ji,

H-F. & L. Shen, 2008, Mechanisms of reactive 26

oxygen species photogeneration by benzo[a]pyrene: A DFT study, THEOCHEM, 893: 6-8.

Karakas, B., K.E. Bachman, & B.H. Park, 2006. Mutation of the PIK3CA oncogene in human cancers, 2
British J. Cancer, 94: 455 – 459.

Kim,

https://app.ithenticate.com/en_us/report/30404122/similarity 5/9
14/3/2018 Similarity Report

J.Y., J-Y. Chung, J-E. Park, S.G. Lee, Y-J. Kim, 7

M-S. Cha, M.S. Han, H-J. Lee, Y.H. Yoo, & J- M. Kim, 2007, Benzopyrene InducesApoptosis in RL95-2 Human Endometrial
Cancer Cells by Cytochrome P450 1A1 Activation, Endocrinology, doi:10.1210/en.2007-0096 Kushman

,M.E., S .L. Kabler1, M.H.Fleming, S. 24

Ravoori, R.C.Gupta, J. Doehmer5, C. S.Morrow, &A.J.Townsend, 2007, Expression of human glutathione S-transferase P1
confers r e s i s t a n c e t o b e n z o [ a ] p y r e n e o r benzo[a]pyrene-7,8-dihydrodiol mutagenesis, macromolecular

alkylation and formation of stable N2-Gua-BPDE adducts in stably transfected V79MZ cells co-expressing hCYP1A1,

Carcinogenesis, 28(1): 207–214 Leavitt,S.A.,

M.H. George, T. Moore & J.A. Ross, 18

2008, Mutations induced by benzo[a]pyrene and dibenzo[a,l]pyrene in lacI transgenic B6C3F1 mouse lung result from

stable DNA adducts, Mutagenesis, 23(6): 445–450.

Lin, P., H. Chang, W-T. Tsai, M- S. Wu, Y-S. Liao, J-T. 8

Chen, & J-M. Su, 2003a. Overexpression of Aryl Hydrocarbon Receptor in Human Lung Carcinomas, Toxicologic
Pathology, 31(22): 22-30 Los, M. & H. Walczak, 2002, Caspases- The Role in Cell Death and Cell Survival, Kluwe

Academic/ Plenum Publishers, New York. Magesh, V., R. Venugopal, K.D. Bhavani, & D. Sakthisekaran, 2007; Effect of

Crocetin on Benzo(a) Pyrene Induced Lung Carcinogenesis in Swiss Albino Mice, Int. J. Cancer Res., 3(3): 143-150

Nakata, K., Y. Tanaka, T. Nakano, T. Adachi, H. Tanaka, 14

T. Kaminuma, & T. Ishikawa, 2006, Nuclear Receptor-Mediated Transcriptional Regulation in Phase I, II, and III Xenobiotic

Metabolizing Systems, Drug Metab. Pharmacokinet., 21(6): 437-457. Palackal,

N.T., S .H. Lee, R.G. Harvey, I. A. Blair, T.M. 9

Penning, 2002, Activation of Polycyclic Aromatic Hydrocarbon trans-Dihydrodiol Proximate Carcinogens by Human Aldo-

keto Reductase (AKR1C) Enzymes and Their Functional Overexpression in Human Lung Carcinoma (A549) Cells, J. Bio.

https://app.ithenticate.com/en_us/report/30404122/similarity 6/9
14/3/2018 Similarity Report

Chem., 277(27): 24799–24808. Riely, G.J., J. Marks, & W. Pao, 2009. KRAS

Mutations in Non–Small Cell Lung Cancer, 25

Proc. Am. Thorac. Soc., 6: 201–205.

Shimada, T., 2006, Xenobiotic-Metabolizing Enzymes 27

involved in Activation and Detoxi cation of C a r c i n o g e n i c P o l i c y c l i c A r o m a t i c Hydrocarbons, Drug Metab.

Pharmacokinet., 21(4): 257-276. Sissung., T.M., D.K. Price, A. Sparreboom, and W.D. Figg, 2006, Pharmacogenetics and
Regulation of Human Cytochrome P450 1B1: Implications in Hormone-Mediated TumorMetabolism and a Novel Target

forTherapeutic Intervention, Mol Cancer Res,4(3): 135–150

Sugiyama, H. N. Kashihara, H. Makino, Y. Yamasaki, 21

& Zensuke Ota, 1996, Reactive Oxygen Species Induce Apoptosis in Cultured Human Mesangial Cells, J. Am. Soc.
Nephrol., 7: 2357- 2363

Wenzlaff, A.S., M.L. Cote, C.H. Bock, S .J. 23

Land, S.K. Santer, D.R. Schwartz & A.G.Schwartz, 2005, CYP1A1 and CYP1B1 polymorphisms and risk of lung cancer

among never smokers: a population-based study, Carcinogenesis, 26(12): 2207–2212.

Xu, C., C .Y-T. Li, & A-N.T. Kong, 2005, Induction of Phase I, II and III Drug 11
Metabolism/Transport by Xenobiotics, Arch Pharm Res , 28(3): 249- 268 Yu, J.,

Z. Wang, K. W. Kinzler, B. Vogelstein, & L. 19

Zhang, 2003, PUMA Mediates the Apoptotic Response to p53 in Colorectal Cancer Cells, PNAS, 100(4): 1931–1936. 68

sources:

1 22 words / 1% - Internet from 29-Jul-2016 12:00AM


es.scribd.com
https://app.ithenticate.com/en_us/report/30404122/similarity 7/9
14/3/2018 Similarity Report

2 22 words / 1% - Internet from 28-Jul-2012 12:00AM


liu.diva-portal.org

3 22 words / 1% - Internet from 29-Sep-2016 12:00AM


open.library.ubc.ca

4 17 words / 1% - Internet from 15-Apr-2014 12:00AM


es.slideshare.net

5 15 words / 1% - Internet from 27-Apr-2010 12:00AM


carcin.oxfordjournals.org

6 15 words / 1% - Crossref
Slaga, T.J.. "Skin tumor initiating ability of benzo(a)pyrene 4,5- 7,8- and 7,8-diol-9,10-epoxides and
7,8-diol", Cancer Letters, 197611

7 14 words / 1% - Internet from 30-Sep-2008 12:00AM


dmd.aspetjournals.org

8 14 words / 1% - Internet from 23-Sep-2008 12:00AM


bioscience.org

9 12 words / 1% - Internet
cancerres.aacrjournals.org

10 12 words / 1% - Crossref
Jiang, Hao, Daljit K. Vudathala, Ian A. Blair, and Trevor M. Penning. "Competing Roles of Aldo-Keto
Reductase 1A1 and Cytochrome P4501B1 in Benzo[<i>a</i>]pyrene-7,8-diol Activation in Human
Bronchoalveolar H358 Cells: Role of AKRs in P4501B1 Induction", Chemical Research in
Toxicology, 2006.

11 12 words / 1% - Crossref
Stefanie D. Krämer. "The Biochemistry of Drug Metabolism - An Introduction : Part 7. Intra-
Individual Factors Affecting Drug Metabolism", Chemistry & Biodiversity, 10/2009

12 11 words / < 1% match - Internet from 24-Jul-2016 12:00AM


issuu.com

13 10 words / < 1% match - Internet from 21-Aug-2014 12:00AM


ww5.komen.org

14 10 words / < 1% match - Internet from 16-Nov-2016 12:00AM


edoc.unibas.ch

15 10 words / < 1% match - Crossref

https://app.ithenticate.com/en_us/report/30404122/similarity 8/9
14/3/2018 Similarity Report

Jiang, Y.. "Benzo(a)pyrene-induced mitochondrial dysfunction and cell death in p53-null Hep3B
cells", Mut.Res.-Genetic Toxicology and Environmental Mutagenesis, 20111127

16 9 words / < 1% match - Internet from 17-Apr-2009 12:00AM


www.jimmunol.org

17 8 words / < 1% match - Internet from 07-Apr-2010 12:00AM


intl-cancerres.aacrjournals.org

18 8 words / < 1% match - Internet from 17-May-2010 12:00AM


carcin.oxfordjournals.org

19 8 words / < 1% match - Internet from 31-Mar-2008 12:00AM


www.jem.org

20 8 words / < 1% match - Internet


130.37.129.100

21 8 words / < 1% match - Internet


www.jci.org

22 8 words / < 1% match - Internet from 23-Mar-2011 12:00AM


nurul.blog.uns.ac.id

23 8 words / < 1% match - Internet from 14-Jun-2017 12:00AM


www.healthyhomescoalition.org

24 7 words / < 1% match - Internet from 22-Aug-2007 12:00AM


intl.crbmb.com

25 7 words / < 1% match - Crossref


A Baum. "BIBW2992, an irreversible EGFR/HER2 inhibitor highly effective in preclinical lung cancer
models", Oncogene, 08/07/2008

26 7 words / < 1% match - Crossref


Wessel, N.. "Genotoxic and enzymatic effects of uoranthene in microsomes and freshly isolated
hepatocytes from sole (Solea solea)", Aquatic Toxicology, 201202

27 6 words / < 1% match - Internet from 30-May-2014 12:00AM


epublications.uef.

28 6 words / < 1% match - Internet from 07-Jun-2014 12:00AM


www.aseanfood.info

https://app.ithenticate.com/en_us/report/30404122/similarity 9/9