INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA
MATERIA: MICROBILOGÍA
CURSO: BIOTECNOLOGÍA A1
SEMESTRE: 2 NIVEL
AÑO: 2019
Objetivos:
Objetivos específicos:
Materiales y Métodos
Materiales
Reactivos
Agar PDA
Hipoclorito de sodio a 5 %
Lactofenol
Equipos
Autoclave
Microscopio
Métodos
Los frutos de la naranja (Citrus sinensis) cultivar blanca sulistiana en estado de madurez
fisiológica fueron recolectadas de plantaciones de la provincia del Guayas, Milagro, Ecuador.
Los frutos presentaban lesiones como pudriciones, moho superficial entre otras.
Partimos obteniendo frutos con síntomas de daño fúngico, procedemos a realizar un corte
cuadrado de aproximadamente 5 mm2, se coloca de manera directa en medio PDA acidificado,
los cultivos fueron incubados a temperatura ambiente por 5 días y reaislados hasta obtener un
cultivo monospórico en el mismo medio (Suárez-‐Quiroz, 2013).
Muestreo
El muestreo se realizó en el cantón Simón Bolívar en el reciento las Huaijas, específicamente en la finca "
los morenos".
La recolección fue directamente de las naranjas tipo: Blanca Sullistiana que yacen en las ramas y que a la
vista denotaba putrefacción, pero sólo en algunas de ellas.
Se recolecto 1 naranja por mata en forma aleatoria, que cuando fueron recogidas, mostraron a su
alrededor un color opaco y se pudo definir que la fruta estaba en estado de putrefacción.
Se observó que la zona en donde fueron recolectados los frutos tenían condiciones específicas para el
desarrollo del hongo (Monroy & Lizarazo, 2010).
Procedimiento
Área de estudio:
Colector:
Fecha de recolección:
Lugar:
Procedencia: Árbol Suelo
Peso del fruto:
Traslado de muestras:
5. Colocar las muestras en recipientes previamente esterilizados de boca ancha de tapa
de rosca para mantenerlas frescas.
6. Trasladar las muestras al laboratorio en un periodo máximo de 24 horas.
13. Colocar la colonia del hongo en un tubo con 10ml de agua destilada y agitar durante
dos minutos con movimientos circulares.
14. Decantar la suspensión y adicionar cuatro gotas de lactofenol. Agitar el tubo y dejar
reposar durante cinco minutos. Agitar el tubo de nuevo durante dos minutos.
15. Con ayuda de una pipeta de dilución colectar 2 ml de la suspensión, y agitar durante
dos minutos.
16. Descartar las tres primeras gotas y colocar la cuarta en la rendija de la cámara de
Neubauer.
17. Dejar quieta la cámara por un minuto para que las colonias se sedimenten.
18. Observar en el microscopio, utilizando el objetivo 10X.
19. Contar todas las células en todas las áreas de los cuatro milímetros cuadrados de las
esquinas y del centro.
20. En el caso de que haya células sobre las líneas límites, se deberán contar aquellas que
se encuentres depositadas sobre los límites de abajo y de la derecha.
21. Registrar el número de células en cada milímetro cuadra, de los dos lugares de conteo
de la cámara.
22. Realizar el cálculo del número de células/ml de suspensión con la siguiente formula:
23. No total de células= (No células X dilución X 104) / N0 áreas mm2 contadas
Observaciones:
1
2
Crecimiento:
Crecimiento de colonias
Muestra 24 H 48 H 72 H
Si No Si No Si No
A
1
B
A
2
B
3 A
B
A
4
B
Días
Muestra
1 2 3
A
1
B
A
2
B
A
3
B
A
4
B
Morfología
Aspecto de Crecimiento
Muestra Bacteriano Fúngico Indeterminado
Si No Si No Si No
A
1
B
A
2
B
A
3
B
A
4
B