LUZ:
Num tratamento ondulatório, a luz consiste em um campo elétrico e um campo
magnético oscilantes e perpendiculares entre si.
Os parâmetros que caracterizam uma onda são:
Comprimento de onda – l
Amplitude – A
Frequência – n
A energia de uma onda eletromagnética é dada por:
E = hn = hc/l
Espectro eletromagnético
Determinação colorimétrica de Cloro
ativo em água de piscina
Interação da luz com a matéria
Quando um átomo ou uma molécula absorve
luz de comprimento de onda apropriado, ocorre
a promoção de 1 ou mais elétrons para níveis
eletrônicos de maior energia (estado excitado).
Para o caso de uma molécula, a parte
responsável pela absorção da luz é chamada de
“cromóforo”.
Uma amostra que absorve bem a luz amarela, apresentará
para o observador a sua cor complementar, i.e. o azul.
Uma amostra que absorve bem a luz azul, apresentará para o
observador a sua cor complementar, i.e. o amarelo.
Comprimento de onda l Cor Cor complementar
Definições:
Transmitância (T): Fração da luz transmitida
T = P/Po T% = T.100
Absorbância (A): não é a fração da luz absorvida. É uma
medida da luz absorvida, assim calculada:
A = -logT = log(1/T) (Lembrando: -1.logx=logx-1=log1/x)
Lei de Beer-Lambert
Beer mostrou que A Concentração da espécie absorvente
AC
CX C1 C2 C3 C4
A A1 A2 A3 A4
Y =aX + b
Células (cubetas):
De vidro ou plástico – para trabalhos na região do visível;
De quartzo ou sílica fundida – para trabalhos na região do UV
Instrumentação
Espectrofotômetro de feixe simples
Instrumentação
Espectrofotômetro de feixe duplo no tempo
Instrumentação
Espectrofotômetro de feixe duplo no espaço
Instrumentação
Espectrofotômetro com arranjo de diodos
(CESPE/2004) No que se refere às substâncias
apresentadas na figura 2, julgue o item que se segue:
N O CH3 O
H2C HN
HO NH Cl
O Na O O
H3C
(A) filtros
(B) cubetas
(C) células fotoelétricas
(D) prismas ou redes de difração
Os modernos espectrofotômetros para medidas de absorbância
nas regiões ultravioletas visíveis são constituídos dos seguintes
componentes, incluindo:
a. ( ) Uma fonte de radiofrequência; uma tocha; um seletor de
comprimentos de onda; um detector de radiação e uma unidade de
processamento e leitura do sinal.
b. ( ) Uma unidade de nebulização/combustão; uma tocha, um
seletor de comprimentos de onda e um ou mais detectores.
c. ( ) Uma fonte de energia radiante; um seletor de comprimentos
de onda; um ou mais recipientes para a amostra; um detector de
radiação e uma unidade de processamento e registro de sinal.
d. ( ) Um sistema de gás de arraste; um sistema de injeção da
amostra; configurações de colunas e fornos para as colunas e um
sistema de detecção.
e. ( ) Uma lâmpada de catodo oco; uma unidade de modulação da
fonte; uma unidade de nebulização/combustão; um detector de
radiação e uma unidade de processamento e leitura do sinal.
Análises espectrofotométricas na região
ultravioleta somente devem ser realizadas
empregando-se recipientes para conter as
amostras ou cubetas com janelas de:
a. ( ) Kbr.
b. ( ) NaCl.
c. ( ) Acrílico.
d. ( ) Vidro silicato.
e. ( ) Quartzo ou sílica fundida.
A espectrofotometria é uma técnica instrumental muito empregada tanto
em determinações quantitativas como em estudos cinéticos. Sobre os
fundamentos da espectrofotometria, é correto afirmar que
(A) os componentes básicos do espectrofotômetro são: uma fonte de luz
que atravessa a mostra, um monocromador posicionado entre a amostra e o
detector e um registrador dos dados.
(B) para a espectrofotometria nas regiões do visível e do ultravioleta, uma
amostra líquida é posicionada em uma célula de vidro com faces planas,
denominada cubeta, usualmente com caminho óptico de 1,00 cm.
(C) em um espectrofotômetro de feixe duplo, a luz passa alternadamente
pelas cubetas da amostra e de referência, proporcionando correção
automática para eventuais variações de intensidade da fonte de luz e da
sensibilidade do detector durante procedimento da análise.
(D) fluorescência e fosforescência são exemplos de luminescências; suas
medidas são inerentemente mais sensíveis que as de absorção, uma vez que
a radiação emitida pela amostra tem comprimento de onda menor do que o
da radiação absorvida no processo.
(E) quando existe mais de uma espécie absorvente em uma solução, o
espectrofotômetro registra a soma das absorbâncias, pois somam-se as
absortividades molares de cada espécie da amostra.
Se uma pequena porção de uma solução contendo albumina é adicionada a uma
solução de verde de bromocresol (VBC), essas moléculas se ligam para formar um
complexo que absorve intensamente a radiação eletromagnética em torno de 630nm.
Esse fenômeno é explorado em análises clínicas para determinação de albumina em
soro humano (método colorimétrico). A curva de calibração mostrada abaixo foi
obtida por um laboratorista que utilizou o método colorimétrico para analisar o soro
de um paciente adulto do sexo masculino. A absorvância medida em 630nm para uma
solução formada pela mistura da solução de VBC e soro foi de 0,600 (A630 = 0,600). As
concentrações de albumina aceitas como normais no soro de um indivíduo adulto do
sexo masculino variam na faixa de 3,5 g/dL a 5,0 g/dL.
Considerando o método em questão e as informações
fornecidas, julgue os itens que se seguem.