PRÁCTICA #2

FECHA
TEMA Punción venosa

Preparación del
material Con la torunda
Con el dedo índice
• Tener a la mano palpar la vena a alcoholada hacer
torundas, jeringas y puncionar asepcia de el área
agujas de punción

Con los dedos

pulgar, índice, Colocar el bizel de Colocar el
medio y anular la aguja hacia torniquete en el
sujetar la jeringa/ arriba brazo del paciente

Introducir la aguja
de 1/3 a 1/2
Con el dedo trayecto Fijar bien la
meñique hacer jeringa/vacutainer
apoyo sobre el • Recordar que se para evitar salirnos
brazo del paciente introduce la aguja de la vena
DIAGRAMA 1/4" del área
seleccionada

colocar una Jalar el émbolo o

Soltar el introducir el tubo y
torunda seca sobre torniquete
la zona de punción dejar que se llene
hasta la marca

retirar la aguja
haciendo presión
sobre la torunda
!

METODOLOGÍA
 Las venas transportan en su interior la sangre, y al ser éstas tubos
FUNDAMENTO huecos podemos introducir la aguja sin que las paredes colapsen
sobre ella y podamos extraer la sangre.

BIBLIOGRAFÍA
 PRÁCTICA #3
FECHA
TEMA Frotis sanguíneo

Preparación del
material Desengrasar el Con ayuda de un
• Recordar que para portaobjetos con u aplicador, dejar
realizar el frotis hay trozo de papel caer una gota de
que usar sangre con absorbente 2mm ø
EDTA

Introducir la aguja
de 1/3 a 1/2
trayecto Con el dedo Con el canto de un
meñique hacer portaobjetos
• Recordar que se apoyo sobre el arrastrar 5 mm
introduce la aguja brazo del paciente hacia atras la
1/4" del área
seleccionada

Fijar bien la Jalar el émbolo o

jeringa/vacutainer introducir el tubo y Soltar el
para evitar salirnos dejar que se llene torniquete
DIAGRAMA de la vena hasta la marca

retirar la aguja colocar una

haciendo presión torunda seca sobre
sobre la torunda la zona de punción
!

METODOLOGÍA
 Las venas transportan en su interior la sangre, y al ser éstas tubos
FUNDAMENTO huecos podemos introducir la aguja sin que las paredes colapsen
sobre ella y podamos extraer la sangre.
Flebotomía; Jesus Barajas Cruz, IMSS, 2008
BIBLIOGRAFÍA
PRÁCTICA #5
FECHA
TEMA Fórmula blanca

Una vez realizado el

recuento leucocitario Tomar la pipeta de
pasar al recuento de Thoma de perla
blancos blanca

Aspirar diluyente Aspirar sangre con

de Türk hasta la EDTA hasta la
marca de 101 marca de 0.5

Llevar al agitador Colocar el cubre

de pipetas y dejar hematímetro en la
DIAGRAMA agitando por dos cámara de
minutos neubauer

La quinta gota debe

caer justo en la Dejas caer las
comisura de la primeras 4 gotas de
cámara preparado en agua

Observar a 40x y Hacer la sumatoria

contar los cuatro de los leucocitos en
cuadrantes
externos de la los cuatro
cuadrantes
cámara
!
 El ácido acético que contiene el diliuyente de Türk causa la lisis de
los eritrocitos dejando intactos los leucocitos mientras que la mínima
FUNDAMENTO
cantidad de azul de metileno hace que se observen de mejor manera
bajo el microscopio.
Recuento de leucocitos manuales; David Klaüs, universidad de
BIBLIOGRAFÍA Chicago, 2014
 PRÁCTICA #6
FECHA
TEMA Recuento de plaquetas

Con la pipeta de Completar la

Thoma de grano aspiración hasta
rojo aspirar sangre 121 con el
hasta la marca de diluyente de
0.5 Oxalato de amonio

Desechar las Colocar la pipeta

primeras 5 gotas de en el agitador por
dilución 10-12 minutos

La 6ª gota colocarla Colocar la cámara

en la comisura de en ambiente
DIAGRAMA la cámara de húmedo por 10
neubauer minutos

Simultáneamente Contar las

contar 10 campos plaquetas en los
de plaquetas en un
frotis teñido con dos cuadrantes
diagonales externos
wright

Calcular con los

datos obtenidos la
cantidad de
plaquetas por
microlitro
!

Ficha técnica, Reactido de oxalato de amonio 1%; LabSAR, agosto

BIBLIOGRAFÍA
de 2010
PRÁCTICA #7
 FECHA
TEMA Fórmula roja y hemoglobina

Para el recuento de
eritrocitos, aspirar Aspirar hasta la
sangre hasta la marca marca de 121 con
de 0.5 con la pipoeta diluyente de Hayem
de thoma de grano

Una vez agitada,

dejar caer las Colocar en el
primeras 4 gotas de agitador por cuatro
mezcla y la 5ª dejarla minutos
caer en la comisura

Colocar en el
Dejar reposar en microscopio y contar
DIAGRAMA cámara húmeda por los cinco recuadros
tres minutos pequeños centrales
de la cámara

Realizar las mezclas Para cuantificar la

según la tabla hemoglobina:
adjunta

Reposar de 3 a 5 Leer absrobancias a

minutos 540 nm

!
 Las sales presentes en la solución de Hayem ejerse una isotonicidad
para que los eritrocitos no se lisen pero la presencia de mercurio en la
FUNDAMENTO
solución causa la lisis de plaquetas y leucocitos, permitiendo que los
eritrocitos sean visibles al microscopio.

Recuento de leucocitos manuales; David Klaüs, universidad de

BIBLIOGRAFÍA
Chicago, 2014

Tubos de 12x75 Blanco Patrón Muestra

Reactivo de Hb (Drabkin) 2.5
2.5 2.5
ml
Sangre total (muestra) µl ----- ----- 0.01
Patrón (calibrador) µl ----- 0.01 -----
PRÁCTICA #8
FECHA
TEMA Reticulocitos

En un tubo de Dos gotas de sangre

ensayo agregar: completa

Agitar e incubar
Dos gotas de azul
por 15 - 20 minutos cresil brillante
a 37º c

DIAGRAMA

Revisar al
Realizar un frotis microscopio con
con la preparación objetivo de
imersión una vez

Los reticulocitos
Revisar 1000 deben lucir unas
eritrocitos formas dendríticas
al centro
!
 El colorante Azul de cresil brillante colorea los residuos de RNA,
ribosomas y mitocondrias presentes en los eritrocitos. El uso de
FUNDAMENTO
sangre de toma reciente se debe a que los eritrocitos maduran aún “in
vitro”.

BIBLIOGRAFÍA Reticulocitos; Felipe Maluenda Bravo, 2015

 PRÁCTICA #9
FECHA
TEMA Velocidad de Sedimentación Glomerular (VSG)

Tomar el tubo de
Con una pipeta
Wintrobe y pasteur de vástago
mantenerlo de forma
largo aspirar sangre
vertical

Llenar con sangre el Introducir hasta el

tubo de Wintrobe fondo la pipeta y
hasta la marca de soltar la sangre
1.0 o 10 lentamente

DIAGRAMA

Colocar en un
Procurar no manchar soporte o en una
las paredes del tubo pared bien iluminada
con sangre el tubo y dejar
reposar una hora

Pasado el tiempo,
leer a contra luz y de
forma inversa
!

La velocidad de sedimentación indica un amplio rango de patologías

FUNDAMENTO de cualquier índole y nos da un rápido enfoque a las cualidades de la
sangre y por lo que el paciente esta pasando.
BIBLIOGRAFÍA Velocidad de sedimentación glomerular; Gio Saenz, 2015
PRÁCTICA # 10
FECHA
TEMA Tiempos de trombina, protrombina y fibrinógeno

FIBRINÓGENO MUESTRA TAMPÓN IMIDAZOL (R2) R3

R1 (Cronometrar)
PREPARACIÓN 50 µl 450 µl 20 µl 100 µl
TROMBOPLASTINA MUESTRA R1
PREPARACIÓN 100 µl / 1 vol. 200 µl / 2 vol.
APTT MUESTRA R1 R2
PREPARACIÓN 100 µL100 µL100 µL

DIAGRAMA

1. DEBEMOS RECORDAR QUE TODAS LAS DETERMINACIONES

SE DEBEN HACER A 37ºC
2. UNA VEZ AGREGADO EL REACTIVO DE COLOR OSCURO, SE
DEBE CRONOMETRAR EL TIEMPO
 Los tiempos de protrombina y trombina calculan el tiempo en que la
FUNDAMENT porción líquida de la sangre tarda en coagular, mientras que el tiempo
O de fibrinógeno calcula el tiempo que tardan las proteínas de fibrina en
formar el coágulo.

BIBLIOGRAFÍ
Pruebas de coagulación; Mediline Plus, 2018
A
PRÁCTICA # 11
FECHA
TEMA Determinación cuantitativa de glucosa

Realizar las Incubar: 10 min

diluciones a 37º o 20 min a
correspondient temp ambiente

Leer la
Realizar los
absorbancia a
cálculos
505 nm
!

DIAGRAMA

BLANCO PATRÓN MUESTRA

R 1 ml 1 ml 1 ml
Patrón - 10 µl -
Suero - - 10 µl
 La técnica de determinación de glucosa se basa en la aparición de
color debido a la reacción entre la glucosa y la glucosa oxidasa, los
FUNDAMENTO
cuales se evidencían por la cantidad de glucosa en la muestra, lo cual
aumenta la coloración de la mezcla

BIBLIOGRAFÍA Glucosa, Spinreact, 2005

PRÁCTICA # 12
FECHA
TEMA Urea y nitrogeno ureico en sangre

Realizar las Mezcmar y leer

dilucioens las muestras a 340
correspodnientes nm

Leer las
absorbancias a los
0, 30 y 90
segundos
!

DIAGRAMA
UREA-LQBLANCO PATRÓN MUESTRA
R 1 ml 1 ml 1 ml
Patrón - 10 µl -
Suero - - 10 µl

NITRÓGENO BLANCO PATRÓN MUESTRA

R 1 ml 1 ml 1 ml
Patrón - 25 µl -
Suero - - 25 µl
 El cetoglutarato en conjunto de la ureasa reacciónan con el grupo
C=O de la urea transformándolo a a moniaco y este a su vez
FUNDAMENTO reacciona con el alfa cetoglutarato para formar L-glutamato el cual
interacciona con el TRIS ph 7.8 para formar un complejo de color que
es el que se mide al espectrofotómetro.

UREA-LQ, SIPINREACT, 2016

BIBLIOGRAFÍA
UREA-UV, SPINREACT, 2013
PRÁCTICA # 13
FECHA
TEMA Determinación de creatinina en sangre y depiuración en orina

Ajustar el fotómetro a Mezclar las soluciones

492 nm

Una vez mezcladas

Leer las absorbancias ponCorrer el
de las muestras a los cronómetro una vez
30 y a los 90 segundos agregada la última
solucióner
!

DIAGRAMA
CREATININA BLANCO PATRÓN MUESTRA
R 1 ml 1 ml 1 ml
Patrón - 100 µl -
Suero - - 100 µl
 El ÁCIDO PÍCRICO REACCIONA CON LA CREATININA EN
MEDIO ALCALINO PARTA FORMAR UN COMPLEJO DE
FUNDAMENTO
COLOR ROJO-ANARANJADO A LONGITUDES DE ONDA
510-520 NM.

UREA-LQ, SIPINREACT, 2016

BIBLIOGRAFÍA
UREA-UV, SPINREACT, 2013
PRÁCTICA # 14
FECHA
TEMA ÁCIDO ÚRICO EN SANGRE

Ajustar el
Mezclar las
espectro a 520 muestras
nm

Leer las Incubar por 10

absorbancias minutos a
inmediatament temp.
!

DIAGRAMA

ÁCIDO ÚRICO BLANCO PATRÓN MUESTRA

R 1 ml 1 ml 1 ml
Patrón - 25 µl -
Suero - - 25 µl
 El ácido urico al reaccionar con la enzima uricasa forma alantoína
mas peróxido de hidrógeno, el cual a su vez interactúa con el DCPS y
FUNDAMENTO
la 4-aminofenazona para formar quinonaimina, un complejo de color
rojo que es proporcional a la cantidad de ácido úrico en la muestra.

Ácido úrico-LQ, SIPINREACT, 2016

BIBLIOGRAFÍA
PRÁCTICA # 15
FECHA
TEMA Proteínas totales y Albúmina

Mezclar e incubar
Ajustar el 10 minutos a
Para albúmina: fotómetro a 630 temperatura
nm ambiente

Se ajusta el Leer absorbancias

fotómetro a 540 Para proteínas: frente a blanco de
nm reactivo

Se mezclan y se Se leen las

incuban las absorbancias
muestras a temp. frente a blanco de
ambiente por 10 reactivo
"

DIAGRAMA Albúmina BLANCO PATRÓN MUESTRA

R 1 ml 1 ml 1 ml
Patrón - 5 µl -
Suero - - 5 µl

Proteínas totales BLANCO PATRÓN MUESTRA

R 1 ml 1 ml 1 ml
Patrón - 25 µl -
Suero - - 25 µl
 La albúmina se combina con el verde de bromocresol a pH
ligeramente ácido, produciéndose un cambio de color del indicador, de
amarillo verdoso a verde azulado proporcional a la concentración de
albúmina ensayada.
En medio alcalino, las proteínas dan un intenso color violeta azulado
FUNDAMENTO en presencia de sales de cobre; contiene yoduro como antioxidante.
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de
proteína total en la muestra ensayada

Albúmina, SIPINREACT, 2016

BIBLIOGRAFÍA Proteínas totales, SPINREACT, 2016
PRÁCTICA # 16
FECHA
TEMA Bilirrubina total y directa

Procesar la Ajustar el
muestra para espectrofotómetr
obtener suero o a 555 nm

realizar las
mezclas según la blanquear frente
tambla continua a agua

DIAGRAMA Incubar Leer las

absorbancias lo
exactamente 5
minutos mas pronto
posible
"

Blanco B. Total Blanco B. Directa

R 1 (D) -- -- 1,5 ml 1,5 ml
R 2 (T) 1,5 ml 1,5 ml -- --
R3 -- 50 µl -- 50 µl
Muestra 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl
 La bilirrubina se convierte en azobilirrubina mediante el ácido sulfanílico
diazotado midiéndose fotométricamente. De las dos fracciones presentes
en suero, bilirrubin-glucurónido y bilirrubina libre ligada a la albúmina,
sólo la primera reacciona en medio acuoso (bilirrubina directa) precisando
FUNDAMENTO la segunda la solubilización con dimetilsulfóxido (DMSO) para que
reaccione (bilirrubina indirecta). En la determinación de la bilirrubina
indirecta se determina también la directa, correspondiendo el resultado a
la bilirrubina total. La intensidad del color formado es proporcional a la
concentración de bilirrubina presente en la muestra ensayada.

BIBLIOGRAFÍA Bilirrubina T y D, SIPINREACT, 2016

PRÁCTICA #17, 18 y 19
FECHA
TEMA Colesterol total en sangre

Procesar la Ajustar el
muestra para espectrofotómetr
obtener suero o a 505 nm

realizar las
Blanquear ante mezclas
agua destilada correspondientes

DIAGRAMA Incubar las Leer las muestras

muestras 10 antes de los 60
minutos a temp. minutos
ambiente siguientes
"

Blanco Patron Muestra

R1 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml
Patrón – 10 µl –
Suero – – 10 µl
 El colesterol presente en la muestra origina un compuesto coloreado según la reacción
siguiente:
CHE

Ésteres colesterol + H O ⎯⎯⎯→ Colesterol + Ácidos grasos
2

CHOD

Colesterol + O ⎯⎯⎯⎯→ 4-Colestenona + H O
FUNDAMENTO 2 2 2

POD

2 H O +Fenol + 4-Aminofenazona ⎯⎯⎯→ Quinonimina + 4H O
2 2 2

La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de colesterol presente en la

muestra ensayada

BIBLIOGRAFÍA Colesterol LQ, SIPINREACT, 2015

PRÁCTICA # 20
FECHA
TEMA HDL

Realizar la mezcla Agitar y

centrifugar a 4000
de 100 µl de R +
1.0 ml de suero rpm por 20
minutos

Del sobrenadante
tomar y procesar
como el colesterol
en suero
"

DIAGRAMA

Blanco Patron Muestra

R1 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml
Patrón – 10 µl –
Suero procesado – – 10 µl
 Las lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) y baja densidad (LDL) del suero o plasma, se
precipitan con fosfotungstato en presencia de iones magnesio. Tras la centrifugación, el
sobrenadante contiene lipoproteínas de alta densidad (HDL). La fracción de HDL colesterol se
determina utilizando el reactivo enzimático de colesterol total.
El colesterol presente en la muestra origina un compuesto coloreado según la reacción
siguiente:
CHE

Ésteres colesterol + H O ⎯⎯⎯→ Colesterol + Ácidos grasos
2
FUNDAMENTO CHOD

Colesterol + O ⎯⎯⎯⎯→ 4-Colestenona + H O
2 2 2
POD

2 H O +Fenol + 4-Aminofenazona ⎯⎯⎯→ Quinonimina + 4H O
2 2 2
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de colesterol presente en la
muestra ensayada

Colesterol LQ, SIPINREACT, 2015

BIBLIOGRAFÍA
HDL colesterol P, SPINREACT, 2016
PRÁCTICA # 21
FECHA
TEMA Aspartato Amino Transferasa (AST/TGO)

Ajustar el Llevar a cero frente a

espectrofotómetro a
agua destilada
340 nm

Incubar por 1 minuto Pipetear: 1.0 ml RT +

a temp. ambiente 100 µl suero

DIAGRAMA

Leer las Calcular el promedio

absorbancoias a 0, de variación entre
30, 60, 120 y 180 cada medición
segundos

Repetir el mismo
procedimiento con
las mismas dilución
de muestra para
realizar GPT
"
 La aspartato aminotransferasa (AST) inicialmente llamada transaminasa glutamato oxaloacética
(GOT) cataliza la transferencia reversible de un grupo amino del aspartato al α-cetoglutarato con
formación de glutamato y oxalacetato. El oxalacetato producido es reducido a malato en
presencia de malato deshidrogenasa (MDH) y NADH:
AST

L-Aspartato + α-Cetoglutarato ⎯⎯⎯→ Glutamato + Oxalacetato

+MDH + Oxalacetato + NADH + H ⎯⎯⎯→ Malato + NAD

La velocidad de disminución de la concentración de NADH en el medio, determinada

fotométricamente, es proporcional a la concentración catalítica de AST en la muestra ensayada.
FUNDAMENTO
La alanina aminotrasferasa (ALT) inicialmente llamada transaminasa glutámico pirúvica (GPT)
cataliza la transferencia reversible de un grupo amino de la alanina al α-cetoglutarato con
formación de glutamato y piruvato. El piruvato producido es reducido a lactato en presencia de
lactato deshidrogenasa (LDH) y NADH:
ALT

L-Alanina + α-Cetoglutarato ⎯⎯⎯→ Glutamato + Piruvato

+LDH + Piruvato + NADH + H ⎯⎯⎯→ Lactato + NAD

La velocidad de disminución de la concentración de NADH en el medio, determinado
fotometricamente, es proporcional a la concentración catalítica de ALT en la muestra ensayada.

GPT, SIPINREACT, 2016

BIBLIOGRAFÍA
GOT, SPINREACT, 2016
PRÁCTICA # 22
FECHA
TEMA Lactato deshidrogenasa y Creatin kinasa

Ajustar el Llevar a cero Pipetear: 3.0 ml RT

espectrofotómetro frente a agua + 100 µl suero
a 340 nm destilada

Calcular el Leer las

promedio absorbancoias a 0, Incubar por 1
devariación entre 60, 120 y 180 minuto a temp.
cada medición segundos ambiente

Leer la absorbancia
Para la CK, Incubar por 2 a 340 nm y frente
pipetear: 1.0 ml de minutos a temp. a blanco de agua
RT + 40 µl de suero ambiente destilada

DIAGRAMA
Calcular el
promedio de las Medir a los 0, 60,
diferencias de 120 y 180 segundos
absorbancia
"
 La creatina quinasa (CK) cataliza la transferencia reversible de un grupo fosfato de la
fosfocreatina al ADP. Esta reacción se acopla con otras catalizadas por la hexoquinasa (HK) y
por la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6F-DH):
CK

Fosfocreatina + ADP ⎯⎯⎯→ Creatina + ATP
HK

ATP+Glucosa ⎯⎯⎯→ ADP+Glucosa-6-fosfato
G6F−DH

+ +
Glucosa-6-fosfato + NADP ⎯⎯⎯⎯⎯→ 6-Fosfogluconato + NADPH + H

FUNDAMENTO La velocidad de formación de NADPH, determinado fotometricamente, es proporcional a la

concentración catalítica de CK en la muestra ensayada.
La lactato deshidrogenasa (LDH) cataliza la reducción del piruvato por el NADH, según la
siguiente reacción:
LDH

+ +
Piruvato + NADH + H ⎯⎯⎯→ L-lactato + NAD
La velocidad de disminución de la concentración de NADH en el medio determinado
fotometricamente, es proporcional a la concentración catalítica de LDH en la muestra ensayada.

LDH-LQ, SIPINREACT, 2015

BIBLIOGRAFÍA
Creatina quinasa, SPINREACT, 2015