PEMBUATAN TISSUE PLASMINOGEN ACTIVATOR

(TPA)
1.1 Pengenalan tentang tPA
Tissue Plasminogen Aktivator (disingkat tPA atau PLAT) merupakan protein
yang bertanggung jawab pada pemecahan bekuan darah. Protein ini
merupakan serine protease yang terdapat dalam sel endotel, sel yang mengelilingi
pembuluh darah. Sebagai sebuah enzim, tPA mengkatalisis
perubahan plasminogen menjadi plasmin, enzim yang memecah bekuan darah.
Karena enzim ini bekerja pada sistem pembekuan darah, sehingga sering digunakan
dalam pengobatan stroke trombogenik atau embolik, tetapi dikontraindikasikan
pada stroke hemoragik. Obat ini adalah obat intravena atau IV yang biasanya
diberikan melalui kateter yang dimasukkan ke pembuluh darah di lengan.

Gambar 1.1 Cara kerja tPA

Dalam pembuatan obat-obatan, mempertimbangkan produksi aktivator
plasminogen, yang merupakan enzim yang kuat yang memicu proteolitik atau
kelompok enzim yang mampu memecah rantai panjang molekul protein menjadi
molekul-molekul yang lebih kecil disebut peptida (peptides) dan bahkan sampai
menjadi komponen-komponen terkecil penyusun protein yang disebut Asam
Amino (Amino Acid), degradasi pembekuan darah yang menyebabkan stroke dan
serangan jantung.
Sejak pertengahan 1980-an, Genentech, perusahaan AS, telah diproduksi
aktivator plasminogen jaringan (TPA), yang mereka dijual seharga $2.000 per dosis
100 mg pada awal tahun 2000, dengan penjualan tahunan sebesar $ 300 MM / yr
dosis 100 mg pada awal tahun 2000, dengan penjualan tahunan sebesar $ 300 MM
/ yr dosis 100 mg pada awal tahun 2000, dengan penjualan tahunan sebesar $ 300
MM / yr (MM dalam satuan rekayasa Amerika adalah ribu-ribu, atau 1 juta).
Mengingat bahwa paten mereka ditetapkan untuk berakhir pada tahun 2003,
Genentech mengembangkan generasi berikutnya, Food and Drug Administration
(FDA) yang disetujui, plasminogen activator disebut TNK-tPA, yang lebih mudah
dan lebih aman bagi dokter untuk menggunakan. Dengan pasar yang berkembang
pesat, muncul pertanyaan apakah kesempatan ada untuk perusahaan lain untuk
memproduksi generik (yaitu, tanpa merek) bentuk tPA yang bisa bersaing baik
dengan TNK-tPA. Untuk menguji kemungkinan ini, tim desain mengidentifikasi
dua alternatif potensial :
1. Alternatif pertama
Generik tPA yang dibuat mungkin kurang dapat bersaing dengan TNK-tPA
di Amerika Serikat, memiliki harga jual yang rendah yaitu hanya dengan $200 /
dosis, tetapi dapat mengakibatkan peningkatan risiko pendarahan. Analisis pasar
menyarankan bahwa tingkat produksi meningkat hingga 80 kg/tahun untuk
memenuhi kebutuhan lima tahun ke depan.
2. Alternatif kedua
Adanya kemungkinan bahwa penggantian biaya perawatan kesehatan yang
lebih rendah, akan diterima oleh rumah sakit di Amerika Serikat, maka mungkin
masuk akal untuk mengembangkan proses serupa yang bersaing secara
menguntungkan dengan TNK-tPA di Amerika Serikat.
Namun, seiring perkembangan penelitian terhadap pembuatan tPA, bukan
tidak mungkin alternatif lainnya dapat muncul. (tPA) adalah protein terapi
rekombinan yang terdiri dari 562 asam amino. Berikut strukturnya :
 Gambar 1.2 Skema tPA

Gambar 1.3 Struktur kimia tPA

Untuk menghilangkan bekuan darah, tPA mengaktifkan plasminogen

menjadi plasmin, suatu enzim, yang melarutkan formasi fibrin yang menahan
bekuan darah di tempatnya. Dengan cara ini, aliran darah dibangun kembali setelah
penyumbatan gumpalan larut, efek penting bagi pasien yang menderita serangan
jantung (infark mikro) atau stroke. Contoh ini menunjukkan langkah-langkah dalam
mensintesis proses untuk mengatasi tantangan yang ditimbulkan oleh peluang yang
disarankan dalam alternatif 1: yaitu, untuk memproduksi bentuk-bentuk tPA yang
lebih murah yang dapat dijual seharga $200 per dosis 100 mg. Perhatikan bahwa
ini mengarah ke proses batch yang melibatkan banyak proses kecil yang harus
dijadwalkan untuk pembuatan tPA, daripada proses kontinu skala besar seperti
untuk pembuatan vinil klorida.
1.2 Proses Sintesis tPA
tPA diproduksi menggunakan sel mamalia [mis., Ovarium hamster Cina
(CHO)] yang memiliki tPA-DNA sebagai bagian dari konten genetik (genom)
mereka. Dalam operasi bioreaksi aerob, sel tPA-CHO tumbuh dalam media nutrisi,
HyQ PF-CHO— Hyclonemedia, ablendofnutrients, garam (termasuk NaHCO3),
asam amino, insulin, faktor pertumbuhan, dan transferrin, khusus untuk
pertumbuhan sel CHO.Bahan lainnya termasuk air steril, udara, dan CO2. Selain
tPA, endotoksin dapat menjadi kontaminan produk, yang harus dihilangkan karena
menimbulkan berbagai respons inflamasi pada hewan. Produk sampingan lainnya
termasuk debris sel, air limbah, dan emisi gas, terutama N2 dari udara, O2 yang
tidak dikonsumsi dari udara, dan CO2, yang mengatur pH. Sumber data penting,
selain yang diambil di laboratorium biokimia, adalah paten A.S., yang diajukan oleh
Genentech (Goeddeletal., 1988), yang memberikan informasi kualitatif dan
kuantitatif yang cukup besar. Lihat juga laporan desain oleh Audette et al. (2000).

Langkah Pertama : Hilangkan Perbedaan Jenis Molekuler

Dalam pembuatan makromolekul seperti tPA melalui pertumbuhan sel,
serangkaian reaksi kimia yang kompleks sering digunakan, daripada reaksi yang
didefinisikan dengan baik untuk pembuatan monomer sederhana, seperti vinil
klorida. Umumnya, untuk membuat tPA, dua jalur reaksi utama disediakan oleh
ahli biokimia, sebagai berikut :
1. Sel mamalia
Ke dalam sel CHO, urutan tPA-DNA harus dimasukkan dan diekspresikan.
Sel-sel tPA-CHO yang dihasilkan adalah sel-sel CHO yang dipilih secara khusus
dengan banyak salinan tPA-DNA yang dimasukkan ke dalam genomnya, dan yang
menghasilkan tPA tingkat tinggi. Langkah penyisipan tPA-DNA ini diringkas
dalam reaksi :
tPA−DNA sequence + CHO cells → selected high-expressing tPA −
CHO cells
Produk nya berupa setumpuk sel-TPA, yang disiapkan untuk laboratorium dan
disimpan dalam wadah pada suhu -70∘ dilakukan dengan okulasi untuk bioreaksi :
tPA−CHO cells + HyQPF−CHO media + O2 → peningkatan jumlah sel
 Seperti sel-sel tumbuh dalam budidaya aerobik ini pada tingkat 0,39 × 106 sel
/ ( ml-hari), oksigen dari udara dikonsumsi pada tingkat 0,2 x 1012 mol O 2 / ( sel-
hr) dan tPA diproduksi pada tingkat 50 picogram tPA / ( sel-hari). Yang terakhir ini
disekresikan secara bertahap ke dalam larutan media yang cair.

Gambar 1.4 Operasi reaksi menggunakan sel mamalia

2. Sel bakteri
Adalah dengan memasukkan urutan tPA-DNA ke dalam genom Escherichia
coli (E. coli) sel, seperti yang dirangkum oleh reaksi:
tPA - urutan DNA + E.coli seltPA - urutan DNA → selected
high−expressing tPA − E. coli cells
Kemudian, tPA E. coli sel bakteri, yang tumbuh di laboratorium, dibekukan di
dalam wadah pada suhu -70∘C untuk digunakan sebagai inokulum untuk reaksi
fermentasi:

tPA - E. coli sel + Media bubuktPA + HAI 2 → peningkatan jumlah sel

Sebuah fermentasi batch tPA E. coli dapat menghasilkan 5-50 mg tPA / L-

kaldu. Escherichia coli mungkin saja terdapat kesulitan untuk melepaskan tPA,
yang kemudian lebih sulit untuk memisahkan dan harus melalui proses sintesis.
Tidak seperti sel CHO, E. coli tidak menambahkan kelompok gula (glikosilasi) ke
TPA. Seperti sel-sel CHO, tPA E. coli Sel-sel yang diproduksi, beku selama
penelitian dan pengembangan fase.
Langkah Kedua : Distribusi Kimia
Pada langkah ini, sumber-sumber dan media untuk setiap spesies pada
Gambar 1.4 dilakukan perhitungan sehingga laju aliran massa input reaksi sama
dengan laju aliran massa keluar. Hal ini sering memerlukan pengenalan operasi
pencampuran, seperti digambarkan dalam contoh sebelumnya untuk vinil klorida.
Operasi pencampuran yang dapat digunakan yaitu, di mana media bubuk HyQ PF-
CHO dicampur dengan air, seperti yang ditunjukkan pada Gambar 1.5.

Gambar 1.5 Flowsheet menunjukkan distribusi bahan kimia untuk proses tPA

Langkah Ketiga : Mengeliminasi Komposisi yang berbeda

Untuk sebagian besar distribusi bahan kimia, perbedaan komposisi ada di
antara aliran yang keluaran sebagai produk dari hasil reaksi. Pada Gambar 1.5,
limbah dari pertumbuhan sel produksi tPA harus dipisahkan. Ada banyak
kemungkinan sistem pemisahan, dengan satunya yaitu pada Gambar 1.6. Perhatikan
bahwa karena protein kehilangan aktivitasnya pada suhu di atas ∼0∘C, proses
centrifuge, dan semua operasi persiapan lainnya, dioperasikan pada suhu 4oC.
 Gambar 1.6 Flowsheet operasi pemisahan untuk proses produksi tPA

Langkah Keempat : Mengeliminasi perbedaan suhu, tekanan dan fasa

Dalam pembuatan tPA, bahan diasumsikan untuk tersedia pada 20∘C, air
dicampur dengan media bubuk HYQ PF-CHO di 4∘C, budidaya (operasi produksi
sel) terjadi pada 37∘C, dan pemisahan terjadi pada 4∘C. Panas eksotermik dari
kultivasi dihilangkan pada suhu 37∘C. Hanya tekanan kecil yang dapat berubah dan
dapat diproyeksikan pada tahap sintesis proses ini. Demikian pula, tidak ada operasi
perubahan fase yang ditambahkan ke lembar alur. Oleh karena itu, hanya beberapa
operasi perubahan suhu yang ditambahkan pada Gambar 1.6, dengan flowsheet
yang dihasilkan pada Gambar 1.7.

Gambar 1.7 Flowsheet dengan operasi perubahan suhu dalam proses tPA
Langkah Kelima : Task Integration
Pada tahap ini berbagai item peralatan dipilih, dengan menggabungkan dua
operasi yang berdekatan menjadi item peralatan tunggal; yaitu, dalam task
integration. Kondisi yang harus diperhatikan pertama adalah kondisi operasi,
apakah dalam mode kontinu atau batch. Untuk skala kecil, seperti 80 kg/tahun,
hampir selalu menggunakan metode batch. Pilihan ukuran batch dan peralatan, dan
waktu batch, biasanya didasarkan pada operasi yang paling lambat, biasanya proses
penanaman (atau fermentasi). Lebih lanjut, ditentukan dengan menggunakan
tingkat pertumbuhan eksperimental sel TPA-CHO [0,39 × 106sel ∕ (mL-hari)],
konsentrasi sel inlet dan outlet, dan tingkat eksperimental pertumbuhan tPA [50 pg
tPA ∕ (hari-sel)], di mana pg ≡ pikogram ≡ 10-12 g.

SUB-EXAMPLE 2.31 Menghitung Waktu Batch dan Ukuran Tangki

Hampir semua proses kultivasi sel membutuhkan banyak kultivator. Seperti yang
telah dijelaskan pada tahap 1, 1 liter inokulum dibiakkan dalam skala laboratorium,
kemudian diencerkan dan dibiakkan di tangki-tangki yang berukuran lebih besar
secara bertahap. Pada setiap tangki, sel-sel tersebut diencerkan hingga mencapai
konsentrasi yang diinginkan.
Pada perhitungan ini, kultivator terakhir digunakan sebagai basis perhitungan
untuk menentukan ukuran batch dan peralatan yang digunakan, serta waktu batch
yang dibutuhkan. Dengan batas konsentrasi :
𝑐𝑚𝑖𝑛 = 2 × 105 𝑐𝑒𝑙𝑙/𝑚𝐿
𝑐𝑚𝑎𝑥 = 3 × 106 𝑐𝑒𝑙𝑙/𝑚𝐿
waktu kultivasi diperkirakan :

𝑐𝑒𝑙𝑙 𝑐𝑒𝑙𝑙
3 × 106 𝑚𝐿 − 2 × 105 𝑚𝐿
= 7.2 𝑑𝑎𝑦𝑠 ≅ 7 𝑑𝑎𝑦𝑠
𝑐𝑒𝑙𝑙
0.39 × 106
𝑚𝐿. 𝑑𝑎𝑦

ditambah waktu untuk proses persiapan, pembersihan dan sterilisasi tangki, total
waktu yang dibutuhkan adalah 14 hari.
Asumsikan proses dilakukan sebanyak 50 batch per tahun, dimana setiap
batch proses menghabiskan waktu dua minggu. Proses dilakukan pada dua tangki
yang dioperasikan secara paralel, sehingga masing-masing tangki mengerjakan 25
batch per tahun. Untuk memproduksi 80 kg tPA/tahun ukuran batch yang
dibutuhkan adalah :

80 𝑘𝑔 𝑡𝑃𝐴 𝑘𝑔 𝑡𝑃𝐴
= 1.6
50 𝑏𝑎𝑡𝑐ℎ 𝑏𝑎𝑡𝑐ℎ

Sebelum memasuki tangki parallel, tPA hasil kultivasi akan melalui kolom
pemisah. Asumsikan bahwa pada kolom pemisah terjadi kehilangan tPA sebesar
40%. Sehingga jumlah tPA yang harus diproduksi pada tahap kultivasi adalah :
1.6 × 1.4 = 2.24 𝑘𝑔/𝑏𝑎𝑡𝑐ℎ
Dengan konsentrasi rata-rata :

(2 × 105 + 3 × 106 )
𝑐𝑒𝑙𝑙/𝑚𝐿 = 1.6 𝑐𝑒𝑙𝑙/𝑚𝐿
2

jumlah tPA yang dihasilkan per batch adalah :

𝑔 𝑡𝑃𝐴 𝑐𝑒𝑙𝑙 𝑝𝑔 𝑡𝑃𝐴 1 𝑔 𝑡𝑃𝐴

2.24 = 𝑉 × 1.6 × 106 × 50 × 12 × 7 𝑑𝑎𝑦𝑠
𝑏𝑎𝑡𝑐ℎ 𝑚𝐿 𝑐𝑒𝑙𝑙. 𝑑𝑎𝑦 10 𝑝𝑔 𝑡𝑃𝐴
dimana, V adalah volume batch kultivator ketiga. Dari perhitungan di atas
didapatkan 𝑉 = 4 × 106 𝑚𝐿/𝑏𝑎𝑡𝑐ℎ = 4000 𝐿/𝑏𝑎𝑡𝑐ℎ. Sehingga tangki
konvensional yang digunakan berukuran 5000 L.

Gambar 1.8 Flowsheet showing a task integration for the tPA process in reactor
section
 Dari diagram alir di atas, dapat dilihat proses kultivasi dimulai dari proses
kultivasi pada kultivator laboratorium berukuran 1 L. Sel tPA-CHO diumpankkan
dari cold storage pada suhu -70oC dan konsentrasi 2 x 106 sel/mL, sebanyak 1 mL
alikuot. Kemudian media HyQ PF-CHO, air, udara dan CO2 ditambahkan ke dalam
kultivator.

SUB-EXAMPLE 2.3.2 Pertumbuhan Inokulum dalam Laboratorium

Setelah dicairkan dan diumpankan ke dalam kultivator, sel tPA-CHO diencerkan
menjadi :

1 𝑚𝐿
× (2 × 106 𝑐𝑒𝑙𝑙/𝑚𝐿) = 2 × 103 𝑐𝑒𝑙𝑙/𝑚𝐿
1000 𝑚𝐿

Waktu untuk proses batch pada kultivator lab adalah :

𝑐𝑒𝑙𝑙 𝑐𝑒𝑙𝑙
2 × 106 𝑚𝐿 − 2 × 103 𝑚𝐿
= 5.12 𝑑𝑎𝑦𝑠 = 5 𝑑𝑎𝑦𝑠
𝑐𝑒𝑙𝑙
0.39 × 106
𝑚𝐿. 𝑑𝑎𝑦

dengan pertumbuhan tPA sebesar :

𝑔 𝑡𝑃𝐴 𝑐𝑒𝑙𝑙 𝑝𝑔 𝑡𝑃𝐴 1 𝑔 𝑡𝑃𝐴

0.25 = 1000 𝑚𝐿 × 106 × 50 × 12 × 5 𝑑𝑎𝑦𝑠
𝑏𝑎𝑡𝑐ℎ 𝑚𝐿 𝑐𝑒𝑙𝑙. 𝑑𝑎𝑦 10 𝑝𝑔 𝑡𝑃𝐴

Penambahan media HyQ PF-CHO yang diikuti dengan air ultra-pure, udara dan
CO2 untuk menghasilkan 1.2 kg/batch inokulum. Meski demikian, sebagian kecil
tPA tumbuh selam aproses kultivasi ini.
Inokulum yang dihasilkan kemudian diumpankan ke dalam kultivator pertama,
yang berukuran 40 L, untuk diencerkan dan menghasilkan 30 L batch.

SUB-EXAMPLE 2.3.3 Pertumbuhan di Kultivator 1

Setelah inokulum diumpankan dan diencerkan ke dalam kultivator 40 L,
konsentrasi sel menjadi :

1𝐿 𝑐𝑒𝑙𝑙 𝑐𝑒𝑙𝑙
× (2 × 106 ) = 6.7 × 104
30 𝐿 𝑚𝐿 𝑚𝐿
Dengan waktu pertumbuhan adalah selama :

𝑐𝑒𝑙𝑙 𝑐𝑒𝑙𝑙
2 × 106 𝑚𝐿 − 6.7 × 104 𝑚𝐿
= 4.96 𝑑𝑎𝑦𝑠 = 5 𝑑𝑎𝑦𝑠
𝑐𝑒𝑙𝑙
0.39 × 106
𝑚𝐿. 𝑑𝑎𝑦

ditambah waktu untuk proses persiapan, pembersihan dan sterilisasi tangki, total
waktu yang dibutuhkan untuk proses batch adalah 7 hari.
Dengan konsentrasi rata-rata 1.03 x 106 cell/mL, pertumbuhan tPA adalah
sebesar :

𝑔 𝑡𝑃𝐴 𝑐𝑒𝑙𝑙 𝑝𝑔 𝑡𝑃𝐴 1 𝑔 𝑡𝑃𝐴

7.72 = 30000 𝑚𝐿 × 1.03 × 106 × 50 × 12
𝑏𝑎𝑡𝑐ℎ 𝑚𝐿 𝑐𝑒𝑙𝑙. 𝑑𝑎𝑦 10 𝑝𝑔 𝑡𝑃𝐴
× 5 𝑑𝑎𝑦𝑠

dan O2 dikonsumsi, laju konsumsi 0.2 x 10-12 mol O2/sel.jam eksperimental adalah
sebesar :

𝑚𝑜𝑙 𝑂2 𝑐𝑒𝑙𝑙 𝑚𝑜𝑙 𝑂2 24 ℎ𝑟

0.742 = 30000 𝑚𝐿 × 1.03 × 106 × 0.2 × 10−12 ×
𝑏𝑎𝑡𝑐ℎ 𝑚𝐿 𝑐𝑒𝑙𝑙. ℎ𝑟 𝑑𝑎𝑦
× 5 𝑑𝑎𝑦𝑠

Fraksi berat O2 dalam udara adalah sebesar 0.233, yang memberikan 0.102 kg
udara/batch.

SUB-EXAMPLE 2.3.4 Pertumbuhan di Kultivator 2 dan 3

Kultivator 2
Kultivator kedua berukuran 400 L dengan pengenceran menjadi 300 L, untuk
mendapatkan konsentrasi sel sebesar :

30 𝐿 𝑐𝑒𝑙𝑙 𝑐𝑒𝑙𝑙
× (2 × 106 ) = 0.2 × 106
300 𝐿 𝑚𝐿 𝑚𝐿

Waktu pertumbuhannya adalah :

𝑐𝑒𝑙𝑙 𝑐𝑒𝑙𝑙
3 × 106 𝑚𝐿 − 0.2 × 106 𝑚𝐿
= 7.2 𝑑𝑎𝑦𝑠
6 𝑐𝑒𝑙𝑙
0.39 × 10
𝑚𝐿. 𝑑𝑎𝑦

Ditambah 2.3 hari untuk proses persiapan, pembersihan dan sterilisasi tangki, maka
total waktu untuk yang dibutuhkan untuk proses batch adalah sekitar 9.5 hari.
 Dengan konsentrasi rata-rata 1.6 x 106 cell/mL, pertumbuhan tPA adalah
sebesar :

𝑔 𝑡𝑃𝐴 𝑐𝑒𝑙𝑙 𝑝𝑔 𝑡𝑃𝐴 1 𝑔 𝑡𝑃𝐴

173 = 300000 𝑚𝐿 × 1.6 × 106 × 50 × 12
𝑏𝑎𝑡𝑐ℎ 𝑚𝐿 𝑐𝑒𝑙𝑙. 𝑑𝑎𝑦 10 𝑝𝑔 𝑡𝑃𝐴
× 7.2 𝑑𝑎𝑦𝑠

dan O2 dikonsumsi, laju konsumsi 0.2 x 10-12 mol O2/sel.jam eksperimental adalah
sebesar :

𝑚𝑜𝑙 𝑂2 𝑐𝑒𝑙𝑙 𝑚𝑜𝑙 𝑂2 24 ℎ𝑟

16.6 = 300000 𝑚𝐿 × 1.6 × 106 × 0.2 × 10−12 ×
𝑏𝑎𝑡𝑐ℎ 𝑚𝐿 𝑐𝑒𝑙𝑙. ℎ𝑟 𝑑𝑎𝑦
× 7.2 𝑑𝑎𝑦𝑠

Fraksi berat O2 dalam udara adalah sebesar 0.233, sehingga memberikan 2.28 kg
udara/batch.

Kultivator 3
Kultivator ketiga berukuran 5000 L dengan pengenceran menjadi 4000 L, untuk
mendapatkan konsentrasi sel sebesar :

300 𝐿 𝑐𝑒𝑙𝑙 𝑐𝑒𝑙𝑙

× (3 × 106 ) = 0.225 × 106
4000 𝐿 𝑚𝐿 𝑚𝐿

Waktu pertumbuhannya adalah :

𝑐𝑒𝑙𝑙 𝑐𝑒𝑙𝑙
3 × 106 𝑚𝐿 − 0.225 × 106 𝑚𝐿
= 7 𝑑𝑎𝑦𝑠
6 𝑐𝑒𝑙𝑙
0.39 × 10
𝑚𝐿. 𝑑𝑎𝑦

Ditambah 7 hari untuk proses persiapan, pembersihan dan sterilisasi tangki,

sehingga total waktu untuk yang dibutuhkan untuk proses batch adalah sekitar 14
hari.
Dengan konsentrasi rata-rata 1.61 x 106 cell/mL, pertumbuhan tPA adalah
sebesar :

𝑔 𝑡𝑃𝐴 𝑐𝑒𝑙𝑙 𝑝𝑔 𝑡𝑃𝐴 1 𝑔 𝑡𝑃𝐴

2254 = 4000000 𝑚𝐿 × 1.61 × 106 × 50 × 12
𝑏𝑎𝑡𝑐ℎ 𝑚𝐿 𝑐𝑒𝑙𝑙. 𝑑𝑎𝑦 10 𝑝𝑔 𝑡𝑃𝐴
× 7 𝑑𝑎𝑦𝑠
dan O2 dikonsumsi, laju konsumsi 0.2 x 10-12 mol O2/sel.jam eksperimental adalah
sebesar :

𝑚𝑜𝑙 𝑂2 𝑐𝑒𝑙𝑙 𝑚𝑜𝑙 𝑂2 24 ℎ𝑟

216.4 = 4000000 𝑚𝐿 × 1.61 × 106 × 0.2 × 10−12 ×
𝑏𝑎𝑡𝑐ℎ 𝑚𝐿 𝑐𝑒𝑙𝑙. ℎ𝑟 𝑑𝑎𝑦
× 7 𝑑𝑎𝑦𝑠

Fraksi berat O2 dalam udara adalah sebesar 0.233, sehingga memberikan 29.7 kg
udara/batch.
Total pertumbuhan tPA dari tahap awal pada laboratorium sampai kultivator ketiga
pada pabrik adalah sebesar :

0.25 + 7.72 + 173 + 2254 = 2.435 𝑘𝑔 𝑡𝑃𝐴/𝑏𝑎𝑡𝑐ℎ

Karena dalam setahun dilakukan proses batch sebanyak 50 kali, maka :

𝑘𝑔 𝑏𝑎𝑡𝑐ℎ 𝑘𝑔 𝑡𝑃𝐴
2.435 × 50 = 121.7
𝑏𝑎𝑡𝑐ℎ 𝑡𝑎ℎ𝑢𝑛 𝑡𝑎ℎ𝑢𝑛

Dimana jumlah tersebut melebihi hasil yang dibutuhkan sebanyak 52% dan harus
cukup menutupi losses yang diantisipasi pada kolom pemisah. Batasan konsentrasi
sel dan volume batch dapat disesuaikan, yang akan mempengaruhiwaktu batch dan
laju produksi tPA. Parameter-parameter ini dapat disesuaikan untuk
mengoptimalkan proses dan hasil yang didapatkan.
Total udara yang dibutuhkan untuk proses kultivasi di pabrik adalah sebesar :

𝑘𝑔 𝑏𝑎𝑡𝑐ℎ
0.102 + 2.28 + 29.7 = 32.1 | 50 = 1605 𝑘𝑔/𝑡𝑎ℎ𝑢𝑛
𝑏𝑎𝑡𝑐ℎ 𝑡𝑎ℎ𝑢𝑛

Dari gambar 1.8 dapat dilihat, bahwa untuk menyelesaikan tahap reaksi pada
proses ini, tangki pemisah emisi gas yang mengandung N2, O2 dan CO2 tidak
dibutuhkan, karena gas-gas tersebut sudah dilepaskan atau diventilasikan secara
kontinyu dari kultivator selama proses. Tangki pencampuran 5000 L dipasang
untuk memuat dan mencampur media bubuk dan air selama dua hari. Satu tangki
terakhir yang merupakan tangki penampung 5000 L, disediakan untuk menampung
muatan dari satu kultivator, jika sentrifus sedang offline untuk perbaikan.
 Gambar 1.9 Flowsheet showing a task integration for the tPA process in
separation section

Gambar di atas menunjukkan proses pada bagian kolom pemisah. Sentrifus

dirancang untuk menangani batch-batch kecil. Perhitungan fraksi recovery untuk
proses sintesis pada tahap ini, menggunakan heuristik dan data-data eksperimen jika
memungkinkan. Karena kontaminan endotoksin harus dihilangkan seluruhnya,
maka diasumsikan bahwa kontaminan tersebut direcovery secara sempurna (100%)
dalam keluaran mikrofilter.

Gambar 1.10 Flowsheet showing a task integration for the tPA process in
detailed separation section
 Gambar di atas memperlihatkan keluaran yang mengandung 95, 98, 100, dan
98% berat dari tPA, arginin, endotoksin, dan air yang diumpankan ke mikrofilter,
dimuat ke dalam kolom kromatografi afinitas 58-L, yang menyerap 100, 100, 2, dan
2% berat tPA, endotoksin, arginin, dan air. Sebagian besar tPA yang tealh
teradsorbsi kemudian dielusi dengan aliran yang mengandung glisin dan
diumpankan ke dalam tangki penampungan (holding tank) 5000 L. Campuran di
dalam tangki penampungan tersebut kemudian ditambahkan dengan campuran
NaOH dan sukrosa dan diumpankan ke dalam kolom pemisah endotoksin, untuk
menyerap dan memisahkan endotoksin dengan cara penyucian menggunakan
NaOH sisa.
Perlu diketahui bahwa ukuran batch yang digunakan dalam gambar 1.8; 1.9;
dan 1.10 bersifat representatif. Waktu dan ukuran tangki batch merupakan variabel
utama perancangan dalam penjadwalan dan optimalisasi proses batch.

SYNTHESIS TREE
Pada setiap langkah dalam proses sintesis yang tergambar dalam diagram alir,
alternatif yang dihasilkan mengisi pohon sintesis. Dalam perancangan proses
sintesis, insinyur berusaha mengidentifikasi alternatif yang paling menjanjikan dan
menghilangkan alternatif yang paling tidak menjanjikan dengan inspeksi sedapat
mungkin. Awalnya, aturan heuristik sudah cukup membantu untuk membuat
pilihan. Hingga akhirnya, metode algoritmik yang melibatkan optimasi dapat
diperkenalkan untuk memeriksa heuristik dan mengidentifikasi alternatif yang lebih
menjanjikan. Untuk obat-obatan mahal, jauh lebih penting untuk menjadi yang
pertama memasarkan daripada mencapai penghematan yang relatif kecil dalam
investasi modal atau biaya operasi untuk pabrik melalui optimasi desain. Gambar
1.11 memperlihatkan skema pohon sintesis untuk proses pembuatan tPA.
Gambar 1.11 Invented synthesis tree for the production of tPA