Aktivitas Antibakteri dan Antioksidan Saponin dari Abutilon Indicum

Daun-daun

LOKESH RAVI *, MANASVI V, PRAVEENA LAKSHMI B

Divisi Ilmu Biomedis, Sekolah Biosains dan Teknologi, Universitas VIT, Vellore, Tamil
Nadu, India. Email: lokesh.ravi@vit.
ac.in
Diterima: 05 September 2016, Direvisi dan Diterima: 19 September 2016
ABSTRAK
Tujuan: Tujuan penelitian ini adalah untuk menganalisis potensi antibakteri dan antioksidan
ekstrak saponin mentah (CSE) dari daun Abutilon indicum.
Metode: CSE menjadi sasaran analisis spektrometri-kromatografi massa gas (GC-MS) untuk
mengidentifikasi komponen-komponennya. Potensi antibakteri
dianalisis menggunakan metode difusi agar-agar dan konsentrasi hambat minimum (MIC)
dideteksi menggunakan metode 96-well plate, terhadap
Staphylococcus aureus (MTCC: 3160) dan Escherichia coli (MTCC: 443). Studi kerusakan
DNA dilakukan dengan menggunakan uji komet. Kemampuan antioksidannya
dipelajari menggunakan 2,2-difenil-1-picrylhydrazyl scavenging assay.
Hasil: Analisis GC-MS menyarankan pertandingan perpustakaan dengan benzena-1-4-bis
(phenylmethyl), dengan berat molekul 258 g / mol menjadi mayor
komponen dalam CSE di 21,25 RT. CSE menunjukkan 96,16% aktivitas radikal bebas pada
konsentrasi 2,5 mg / ml. CSE ditunjukkan
aktivitas antibakteri yang signifikan dalam uji difusi sumur, S. aureus 17 mm dan E. coli 15
mm, dengan nilai MIC 1,11 mg / ml. Uji Komet
menunjukkan tidak ada kerusakan DNA.
Kesimpulan: Hasil ini menyimpulkan bahwa CSE daun A. indicum memiliki potensi
antibakteri dan antioksidan yang menjanjikan.
Kata kunci: Abutilon indicum, Saponin, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, 2,2-difenil-
1-pikrilhidrazil, uji antibakteri.
PENGANTAR
Tanaman obat digunakan sejak lama sebagai obat untuk penyakit manusia
karena mengandung banyak phytochemical dengan nilai terapeutik yang tinggi
dan dianggap lebih alami dan aman jika dibandingkan
obat sintetik [1]. Salah satu tanaman obat yang paling bermanfaat adalah Abutilon
indicum. A. indicum milik keluarga Malvaceae, yang umumnya
disebut sebagai negara mallow (bahasa Inggris), Kanghi (Hindi), dan Atibala
(Sansekerta) [2]. Tanaman ini banyak ditanam di India, Pakistan, dan
Bangladesh [3]. Analisis fitokimia daun A. indicum memiliki
menunjukkan adanya asam amino, glukosa, fruktosa, dan galaktosa [4].
Tumbuhan ini memiliki metabolit sekunder aktif secara biologis yang berimplikasi
sifat farmakologis dan obat yang signifikan untuk tanaman ini [5].
Tumbuhan ini digunakan sebagai pengobatan untuk penyakit gangguan farmasi
untuk penyembuhan luka, antioksidan, antitumor, antidiabetes, antijamur,
dan sifat antibakteri [5].
Di antara berbagai metabolit sekunder seperti fenol, alkaloid,
dan flavonoid yang ditemukan di pabrik ini, saponin sangat besar
signifikansi dalam industri farmasi. Saponin biasanya
nonvolatile, dan mereka adalah senyawa aktif permukaan yang luas
didistribusikan di alam [5].
Saponin adalah metabolit sekunder yang didistribusikan sepanjang
kerajaan tumbuhan. Saponin bertindak sebagai penghalang kimia atau seperti perisai
dalam sistem pertahanan tanaman untuk menghadapi patogen. Saponin adalah
ditemukan di jaringan tanaman yang sebagian besar rentan terhadap jamur atau bakteri
serang [6]. Saponin berbahaya tetapi larut dalam air [7]. Mereka
mengandung aglikone polisiklik yang merupakan steroid kolin atau
triterpenoid melekat melalui ikatan C3 dan eter ke rantai samping gula.
Aglikone disebut sebagai saponin sapogenin dan steroid
disebut saraponin [8]. Saponin kaya akan sifat-sifat farmasi
dan baru-baru ini banyak penelitian yang fokus pada kemampuan saponin untuk
meningkatkan kekebalan tubuh
tanggapan. Mereka banyak sifat lain seperti antibakteri,
antioksidan, antikanker, antidiabetes, dan antiobesitas [7]. Karena
sifat surfaktan mereka, saponin juga digunakan secara industri, di pertambangan dan
pemisahan bijih, emulsi untuk film fotografi dan
produk kosmetik seperti lipstik dan sampo, di mana antijamur mereka
dan sifat antibakteri penting sebagai tambahan untuk emolien mereka
efek [9]. Saponin triterpenoid memiliki aktivitas hormonal yang rendah. Mereka
sering ekspektoran dan akan membantu penyerapan nutrisi [10].
Aplikasi senyawa antibakteri dalam industri makanan,
senyawa antimikroba memiliki potensi untuk digunakan sebagai biopreservatif
dan bioinsektisida dan juga mereka memiliki potensi untuk berkembang
tanaman tanaman rekayasa genetika dengan peningkatan resistensi penyakit.
Aplikasi senyawa antimikroba tanaman untuk mengendalikan pertumbuhan
untuk patogen bawaan makanan memiliki kisaran aktivitas melawan
mikroorganisme [11]. Agen antibakteri tergantung pada penggunaannya dan
efektivitasnya. Administrasi Makanan dan Obat-obatan AS mengatur
sabun antibakteri dan zat antibakteri [12].
METODE
Ekstraksi saponin
A. indicum daun dikumpulkan dari distrik Vellore. Daun-daun itu
dicuci dengan air suling sekitar dua hingga tiga kali, dan
kemudian, dipotong kecil-kecil dan teduh kering selama beberapa hari. Daun ditanahkan
menggunakan motor dan alu dan disimpan dalam kedap udara
wadah. Daun bertenaga dicampur dalam metanol dan aseton dalam
rasio 1: 5 (V / V) untuk mengekstrak saponin. 10 ml pelarut ditambahkan
untuk 1 g kekuatan dan itu diizinkan untuk merendam dalam pelarut selama sekitar
24 jam. Kemudian, campuran itu menjadi sasaran sentrifugasi pada 2000 rpm
selama 10 menit pada 4 ° C. Campuran disaring menggunakan kata steril Whatman
saring kertas nomor 1, dan kemudian, pelarut disaring lagi menggunakan jarum suntik
filter yang mengandung 0,2 μ selulosa asetat membran [13].
Analisis gas chromatography-mass spectrometry (GS-MS)
GC dilakukan di lab analitik canggih VIT. 5 mg minyak mentah
Ekstrak saponin (CSE) dilarutkan dalam 1 ml metanol dan
dianalisis dalam GC-MS. Instrumen yang digunakan adalah GC-MS JEOL (GCMATE II
GC-MS, Agilent Technologies 6890N Sistem GC Jaringan untuk GC). Itu
Artikel Penelitian
© 2016 Para Penulis. Diterbitkan oleh Innovare Academic Sciences Pvt Ltd. Ini adalah
artikel akses terbuka di bawah lisensi CC BY (http: // creativecommons.
org / lisensi / oleh / 4. 0 /) DOI: http://dx.doi.org/10.22159/ajpcr.2016.v9s3.15064
Asian J Pharm Clin Res, Vol 9, Suppl. 3, 2016, 344-347
Ravi dkk.
345
kolom (HP5) menyatu silika 50 mx 0,25 mm. Kondisi analisis adalah 20 menit pada 100 ° C,
3 menit pada 235 ° C untuk suhu kolom, 240 ° C untuk suhu injektor, helium adalah gas
pembawa dan rasio split adalah 5: 4. Sampel (1 μl) diuapkan dalam sebuah injector tak
terpecah pada 300 ° C. Waktu berjalan adalah 30 menit. Senyawa diidentifikasi oleh GC
digabungkan dengan MS. Berat molekul dan struktur senyawa dipastikan dengan
mencocokkan dengan senyawa referensi yang tersedia di Institut Standar dan Teknologi
Nasional [14].
Agar juga difusi assay (uji kerentanan antimikroba)
Aktivitas antimikroba sampel ditentukan dengan menggunakan metode difusi agar. 20 ml
kaldu nutrisi steril disiapkan dan dibagikan ke dalam empat tabung reaksi yang berbeda,
sehingga masing-masing mengandung 5 ml kaldu. Untuk masing-masing tabung uji, 0,1 ml
empat strain berbeda-Staphylococcus aureus (MTCC: 3160) dan Escherichia coli (MTCC:
443) diinokulasi dan diinkubasi semalam. Sementara itu, 150 ml Mueller-Hilton Agar
disiapkan dan itu dengan hati-hati dituangkan ke dalam empat pelat Petri yang berbeda.
Setelah pemadatan, empat budaya patogen yang berbeda secara seragam menyebar
menggunakan kapas (budaya rumput). Sumur berdiameter sekitar 6 mm dilubangi
menggunakan penggerek cork. Kemudian, sumur dimuat dengan 100 μl ekstrak (yang
diresuspensi dalam pelarut dimetil sulfoksida [DMSO]). DMSO digunakan sebagai kontrol
negatif dan streptomisin digunakan sebagai kontrol positif. Pelat yang diinokulasi kemudian
diinkubasi pada 37 ° C selama 24 jam. Lempeng lebih lanjut diamati untuk keberadaan zona
pembersihan di sekitar sumur. Ukuran zona yang diperoleh diukur dan aktivitas antimikroba
yang diperoleh diukur dalam hal diameter rata-rata zona inhibisi dalam milimeter. Ini
memungkinkan untuk membandingkan dengan antibiotik standar [15].
Konsentrasi hambat minimum (MIC)
MIC dari CSE diidentifikasi menggunakan metode plat 96-well. Mikroba patogen tumbuh di
96-baik ELISA piring dan dirawat dengan CSE serial diencerkan. Pertumbuhan
mikroorganisme diamati pada pembaca ELISA dengan memeriksa kekeruhan.
Mikroorganisme yang digunakan dalam penelitian ini adalah E. coli (MTCC: 443) dan S.
aureus (MTCC: 3160).
Pengurangan 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH)
Solusi DPPH dari 1 mg / ml konsentrasi dilarutkan dalam metanol digunakan untuk
penelitian ini. 200 μl larutan DPPH ditambahkan ke semua tabung uji. 100 ml metanol
digunakan sebagai kosong. 100 μl asam askorbat (1 mg / ml) digunakan sebagai standar, 100
μl CSE pada berbagai konsentrasi (0,25 mg / 0,1 ml sampai 2,5 mg / 0,1 ml) digunakan
sebagai tes. Tabung-tabung ini diinkubasi kemudian diinkubasi di daerah gelap selama sekitar
30 menit. Kemudian, absorbansi diamati dalam spektrofotometer ultraviolet pada 517 nm.
Aktivitas pembilasan radikal (penghambatan DPPH radikal bebas dalam persen) dihitung
menggunakan rumus berikut:% inhibition = ([Ac-At] / Ac) * 100. Dimana Ac: Penyerapan
sampel kosong; Di: Absorpsi sampel uji. Persentase konsentrasi inhibisi dihitung dari grafik
penghambatan konsentrasi plot terhadap konsentrasi ekstrak [16].
Uji Komet
Sekitar 0,5% agarose disiapkan dan disebar merata pada kaca geser dan dibiarkan
membentuk gel pada suhu 4 ° C. 40 μl suspensi bakteri dicampur dengan 40 μl 0,1% agarose
leleh rendah. Campuran itu dimuat ke dalam gel yang tertusuk dengan baik dalam slide kaca.
Lisis dilakukan dalam 2,5 M NaCl, 10 mM Na2EDTA (ph 8), 10 mM Tris-HCl (ph 8), 1%
garam natrium N-lauroylsarcosine, 1% Triton X-100, dan 10% DMSO untuk 5 menit.
Elektroforesis dilakukan. Slide kemudian didehidrasi dengan 70% etanol selama 5 menit dan
dikeringkan pada suhu kamar.
HASIL
GC-MS
Hasil analisis GC-MS ditabulasikan pada Tabel 1. Total 11 komponen yang berbeda dideteksi
dan tabul.

Konsentrasi penghambatan minimal (MIC)

CSE menunjukkan MIC signifikan sebesar 1,11 mg / ml konsentrasi terhadap S. aureus dan
E. coli.
Antioksidan assay (pengurangan DPPH assay)
CSE menunjukkan peningkatan persentase aktivitas antioksidan, dengan penghambatan
terendah 15,7% pada konsentrasi 0,25 mg / ml, hingga maksimum 96,17% inhibisi pada
konsentrasi 2,5 mg / ml. Gambar. 2 menunjukkan representasi grafis dari hasil uji DPPH.
Uji Komet
Uji Komet menunjukkan tidak ada pembentukan komet ekor, menunjukkan bahwa CSE tidak
menyebabkan kerusakan DNA pada konsentrasi MIC (1,11 mg / ml). Gambar. 3
menunjukkan citra gel uji komet untuk kontrol dan kelompok uji.
KESIMPULAN
Berdasarkan hasil yang diperoleh dari pekerjaan ini, jelas bahwa CSE dari A. daun indicum
memiliki potensi untuk aplikasi biologis sebagai agen antibakteri dan juga sebagai agen
antioksidan. Meskipun studi in vivo lebih lanjut dan studi toksisitas diperlukan untuk
mengkonfirmasi laporan ini, aktivitas antibakteri yang signifikan mirip dengan antibiotik
standar, dengan nilai MIC yang signifikan pada 1,11 mg / ml, dan juga aktivitas antioksidan
yang sangat baik pada konsentrasi 2,5 mg / ml. adalah bukti kuat dari aktivitas biologisnya
CSE dari A. indicum daun