Materiales que deben llevar los estudiantes: 1 unidad de: papa, fruta cítrica, banano, tomate, cebolla; 5 unidades de filtros para café y fósforos. Se trae entre todos los del grupo. Reactivos: reactivo de Molisch, reactivo de Benedict, reactivo de Barfoed, reactivo de Bial, reactivo de Seliwanoff, lugol, ácido sulfúrico concentrado, HCl diluido, HCl concentrado, NaOH al 35%, agua destilada, papel filtro. Vidriería: embudos, beaker de 200 mL, beaker de 20 mL, beaker 500 mL, tubos de ensayo, probetas, gradilla para tubo de ensayo, pipetas graduadas de 5 mL, pipetas graduadas de 2 mL, pinza para tubo de ensayo. Equipos: placa calefactora, mechero bunsen. Prelaboratorio (aspectos a considerar para el informe) ¿Cuál es el objetivo de la práctica? ¿En qué se basan los procesos experimentales? ¿Qué antecedentes hay de las fases experimentales? ¿Qué resultados se espera(n) encontrar en la práctica? ¿Qué valores teóricos existen en la literatura, con los que se pueda comparar los resultados obtenidos? (llevar estos datos el día de la práctica). Procedimiento1 Obtención de extractos • Lave los vegetales a utilizar. Licúelos por separado en 200 mL de agua destilada. • Filtre a través del filtro para café, conserve los filtrados en vasos de precipitado, previamente marcados. Pruebas Cada grupo se encarga de 1 vegetal. No obstante, el informe de laboratorio debe incluir todos los productos. En todos, observe la coloración producida. • Molisch: tome 1 mL de extracto en un tubo de ensayo. Agregue 5 gotas de reactivo de Molisch y agite. Luego, por la pared del tubo, y sin agitar, agregue
1 Referencia: Míguez J. Prácticas de Bioquímica. UPTC. 1997.
1 mL de ácido sulfúrico concentrado, de manera que este vaya al fondo del
tubo. Revise la interfase de los líquidos. • Prueba para almidón: agite el extracto y tome 2 mL. Agregue 1 gota de HCl diluido y 2 gotas de lugol. • Hidrólisis: Agite y tome 9 mL de extracto. Agregue 1 mL de HCl concentrado. Agite y caliente en agua hirviendo, durante 20 minutos. Luego, alcalinice la solución con NaOH. Agregue a cada tubo 2 mL de reactivo de Benedict. Agite y continúe calentando en agua hirviendo por 5 minutos más. Para las siguientes pruebas, filtre 10 mL de extracto, a través de papel filtro. • Benedict: tome 1 mL de filtrado y agregue 2 mL de reactivo de Benedict. Agite y caliente a ebullición, en agua hirviendo, durante 5 minutos. • Barfoed: tome 1 mL de filtrado y agregue 2 mL de reactivo de Barfoed. Agite y caliente a ebullición, durante 5 minutos. • Bial: tome 1 mL de filtrado y agregue 2.5 mL de reactivo de Bial. Caliente a ebullición durante 5 minutos. • Seliwanoff: tome 1 mL de filtrado. Agregue 2 mL de reactivo de Seliwanoff y caliente en agua hirviendo, durante 10 minutos. Descripción de resultados Se sugiere tener en cuenta los tipos de coloración que puede dar cada una de las pruebas y su respuesta para un determinado tipo o grupo de carbohidratos. Se sugiere crear una tabla donde en las columnas se ponga el tipo de vegetal y en las filas el tipo de prueba, marcando “+” o “-”, de acuerdo con la coloración que se espera encontrar y, a partir de ahí, hacer la interpretación de los resultados y discusión. Poner fotos que contrasten la coloración para cada uno de los vegetales.